槲皮素通过抑制MIP-1α/CCR1/CCR5信号通路减轻大鼠带状疱疹后神经痛的机制

目的 探讨槲皮素(Que)对大鼠带状疱疹后神经痛(PHN)及趋化因子配体3(CCL3,即MIP-1α)/C-C趋化因子受体(CCR)1/CCR5信号通路的影响。方法 将60只大鼠分为对照组(Con组)、PHN组、L-Que组(30 mg/kg)、M-Que组(60 mg/kg)、H-Que组(120 mg/kg)以及H-Que+MIP-1α组(120 mg/kg Que+0.4μg/kg重组MIP-1α)。检测各组大鼠机械痛阈值(PWT)、热痛阈值(TWL);试剂盒检测外周组织液腺苷、腺嘌呤核糖核苷酸(AMP)、腺苷二磷酸(ADP)以及脊髓背角样本肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平;通过HE染色观察脊髓背角病理切片;免疫荧光染色检测脊髓背角小胶质细胞活化情况;Western blot检测MIP-1α/CCR1/CCR5信号通路蛋白表达。结果 PHN组脊髓背角组织出现破裂现象,神经束排列混乱,炎性细胞浸润、水肿,神经元轻微萎缩现象。与Con组相比,PHN组PWT值、腺苷、AMP、ADP水平降低(P<0.05),TWL值、TNF-α、IL-1β水平、Iba1阳性小胶质细胞数量以及MIP-1α、CCR1、CCR5蛋白水平均升高(P<0.05);Que治疗后,大鼠神经束排列杂乱现象有所改善,炎性细胞浸润减少,神经元萎缩现象减轻;与PHN组相比,L-Que组、M-Que组、H-Que组的PWT值、腺苷、AMP、ADP水平升高(P<0.05),TWL值、TNF-α、IL-1β水平、Iba1阳性小胶质细胞数量以及MIP-1α、CCR1、CCR5蛋白水平均降低(P<0.05),且Que作用效果呈剂量依赖性;与H-Que组相比,H-Que+MIP-1α组的PWT值、腺苷、AMP、ADP水平降低(P<0.05),TWL值、TNF-α、IL-1β水平、Iba1阳性小胶质细胞数量以及MIP-1α、CCR1、CCR5蛋白水平均升高(P<0.05)。结论 Que可能通过抑制MIP-1α/CCR1/CCR5信号通路减轻大鼠炎症反应,进而减轻PHN。

趋化因子受体CCR3、CCR5和CXCR3与自然流产的相关性

目的探讨外周血、脾脏、胸腺趋化因子受体CCR3、CCR5、CXCR3与自然流产的关系。方法用双标记流式细胞分析技术检测自然流产模型组小鼠(CBA/J×DBA/2,n=14)、正常妊娠模型组小鼠(CBA/J×BALB/c,n=13)和正常非孕组小鼠(CBA/J,n=11)外周血、脾脏以及胸腺中CD4+T细胞CCR3、CCR5和CXCR3这三类趋化因子受体的表达。结果自然流产模型组外周血CD4+T细胞CCR3的表达率低于正常妊娠模型组(P<0.01),CCR5和CXCR3高于正常妊娠模型组(P<0.05,P<0.01);但三个指标与正常非孕组相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。自然流产模型组脾脏CD4+T细胞CCR3的表达率低于正常妊娠模型组(P<0.01),高于正常非孕组(P<0.05);而CCR5和CXCR3高于正常妊娠模型组(P<0.05),但与正常非孕组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。自然流产模型组胸腺CD4+T细胞CCR3的表达率低于正常妊娠模型组(P<0.05),高于正常非孕组(P<0.01);而CXCR3的表达率高于正常妊娠模型组(P<0.05),但与正常非孕组相比,差异无统计学意义(P>0.05);CCR5与其他两组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论CD4+T细胞上CCR3、CCR5和CXCR3的表达异常可能在自然流产的发病中起作用。

趋化因子受体CCR5亲合短肽的筛选

趋化因子受体5(CCR5)是HIV-1与宿主细胞结合的辅助因子之一,其功能缺失或被CCR5拮抗剂封闭则会阻止HIV-1感染细胞.为得到与CCR5特异结合的肽类拮抗剂,采用噬菌体展示技术,以稳定表达CCR5的CHO细胞(CHO/CCR5)作为靶标,通过噬菌体随机12肽库筛选与CCR5特异结合的多肽;经过四轮筛选后,挑选20个阳性噬菌体克隆进行测序,从中得到11个含有AFDWTFVPSLIL序列的小分子肽.含该序列的噬菌体能与抗人CCR5单抗(2D7)竞争性结合CCR5,且合成肽AFDWTFVPSLIL对趋化因子RANTES与CHO/CCR5的结合具有明显的抑制作用,初步证明该小肽与CCR5具有特异性结合作用.

趋化因子受体CCR5的研究进展

CCR5为趋化因子CC受体家族成员,属7次跨膜G蛋白耦联受体,配体为CCL3(MIP-1α)、CCL4(MIP-1β)、CCL5(RANTES)。CCR5主要表达于单核/巨噬细胞和淋巴细胞,与其配体介导CCR5+免疫细胞的趋化、募集过程。因此,多种免疫性疾病的发生和发展过程均有CCR5参与。CCR5是人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)入侵时的重要辅助受体,而在肿瘤细胞和各类肿瘤相关间质细胞的表面也可见其表达,并介导肿瘤增殖、浸润等多种生物学过程。随着相关研究技术的发展,进一步加深了对CCR5的结构、功能、信号通路及其在相关疾病中的作用的认识。

糖皮质激素治疗对ITP患者外周血趋化因子受体CCR3、CCR5、CXCR3表达的影响

原发免疫性血小板减少症(primary immune thrombocytopenia,ITP)是临床最常见的自身免疫性出血性疾病[1-2]。研究证明,慢性ITP是一种以Th1细胞异常聚集为特征的Th1优势性自身免疫性疾病[3-4]。Th1和Th2细胞分别表达不同的趋化因子受体,并与不同的趋化因子结合,其中Th1细胞优势性表达CXCR3、CCR5,Th2细胞优势性表达CCR3,从而调控Th1和Th2细胞活化与极化[5]。在CD4+T淋巴细胞表面,以上趋化因子受体可作为区分Th1和Th2细胞的标志物[6]。尽管目前ITP发病机制的研究较多,但多数是基于混合淋巴细胞培养的研究,本文旨在研究CCR3、CCR5、CXCR3在ITP患者CD4+T淋巴细胞表面的表达情况及其临床意义。

IV-1协同受体CXCR4、CCR5及相关趋化因子SDF-1在胎盘的表达

目的 :研究HIV 1协同受体CXCR4、CCR5及CXCR4的特异性配体SDF 1在人胎盘组织的表达 ,探索HIV 1子宫内垂直传播的分子机制。方法 :半定量RT PCR检测早、中、晚孕期胎盘及早孕滋养细胞CXCR4、CCR5mRNA水平 ;免疫组化和免疫细胞化学检测早孕胎盘及原代培养滋养细胞CXCR4、CCR5蛋白表达 ;原位杂交及免疫组化分析SDF 1在早孕胎盘的表达 ;ELISA测定滋养细胞SDF 1的动态分泌水平。结果 :各孕期胎盘表达CXCR4及CCR5mRNA ;CXCR4蛋白定位于滋养细胞 ,而CCR5蛋白定位于绒毛基质中。滋养细胞可转录并翻译SDF 1,且能分泌可溶性SDF 1。结论 :滋养细胞同时表达CXCR4及SDF 1,SDF 1可能通过降调CXCR4而拮抗X4 HIV 1感染胎儿细胞 ;R5 HIV 1或许能通过滋养层裂隙感染CCR5 + 基质细胞和 或Hofbauer细胞 ,从而发生子宫内垂直传播。

趋化因子受体CcR5在结肠癌中的表达及临床意义

目的探究趋化因子受体CcR5在结肠癌中的表达及临床意义。方法收集经结肠癌根治术切除且经病理学检查证实为结肠癌组织标本94例,选取50例距离肿瘤边缘>5 cm,且经病理学检查为正常的癌旁组织作为对照,采用实时定量PCR和免疫组化的方法,分别检测结肠癌组织和正常癌旁组织中CcR5的mRNA表达水平及阳性表达率,分析其与结肠癌临床病理学特征的关系。结果结肠癌组织中CcR5 mRNA水平和阳性表达率明显高于正常癌旁组织的,差异具有统计学意义(P<0.05)。CcR5 mRNA表达水平和阳性表达率与肿瘤大小、淋巴结转移、肝转移、TNM分期均有关,肿瘤大小>5 cm、出现淋巴结转移和肝转移、Ⅲ~Ⅳ期结肠癌患者CcR5的mRNA表达水平和阳性表达率均相应高于肿瘤大小≤5 cm、未发生转移、Ⅰ~Ⅱ期患者(P<0.05)。LMVD与肿瘤大小、淋巴结转移、肝转移、TNM分期和分化程度有关。相关性分析结果显示,CcR5的mRNA表达水平与LMVD呈明显正相关(γ=0.9176,P=0.0099)。结论趋化因子受体CcR5的高表达与结肠癌发生、转移均有关,检测CcR5对于结肠癌的诊断和预测转移情况具有指导意义。

1型糖尿病患者及其一级亲属趋化因子受体CCR2和CCR5的基因多态性研究

目的 探讨趋化因子受体CCR2、CCR5基因多态性与 1型糖尿病 (T1DM)及其一级亲属之间的关系 ,并与T2DM及非DM对照进行比较。 方法 利用PCR方法检测 48例T1DM及其 5 7名一级亲属CCR5的基因多态性 ,利用BsaBI限制性内切酶的PCR RFLP方法检测T1DM及其一级亲属的CCR2基因多态性。 结果 T1DM组、T1DM一级亲属组、T2DM组分别与非DM对照组比较 ,CCR5Δ32突变的等位基因频率和基因型频率差异无显著意义。T1DM组CCR2 6 4I突变基因型及等位基因频率均高于非DM对照组 (P <0 .0 1) ;T2DM组CCR2 6 4I突变基因型及等位基因频率均低于T1DM组 (P <0 .0 1)。 结论 CCR5Δ32突变与T1DM无显著相关性。CCR2 6 4I突变与T1DM发病显著相关 ,CCR2基因可能是T1DM一个新的候选基因。

小鼠β趋化因子受体CCR_5基因的克隆

目的：克隆小鼠β趋化因子相关的受体并研究其表达。方法：使用共同引物用ＲＴ－ＰＣＲ方法，从ＢＡＬＢ／ｃ小鼠腹腔巨噬细胞的Ｐｏｌｙ（Ａ）＋ＲＮＡ中扩增出一０．５ｋｂｃＤＮＡ，再根据其序列，设计一特异引物，用ＭａｒａｔｈｏｎＰＣＲ法扩增得一２．８ｋｂｃＤＮＡ，用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ方法检测分析该基因，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ方法分析其表达。结果：成功克隆出小鼠ＣＣＲ５ｃＤＮＡ，其开放阅读框为１０６５ｂｐ，编码３５５个氨基酸，与人巨噬细胞炎性趋化蛋白５受体（ｈｕＭＩＰ－５Ｒ）同源性为８１％，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ结果显示该基因为单拷贝，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ结果显示小鼠巨噬细胞、脾脏等有表达。结论：克隆得到小鼠ＣＣＲ５基因，可作为研究ＨＩＶ－１感染机制及ＡＩＤＳ治疗有价值的实验模型。

趋化因子受体CCR5与艾滋病治疗

艾滋病（AIDS）是由人免疫缺陷病毒（human immunodeficency virus，HIV）感染而引起的传染性疾病，近20年来艾滋病在全球呈迅速蔓延趋势。到目前为止，还没有非常有效的治疗艾滋病的药物，因而寻找预防和治疗艾滋病药物的研究显得日益迫切。人趋化因子受体5（CCR5）作为HIV感染的辅助受体收到广泛的关注，本文对基于CCR5拮抗剂的艾滋病治疗作一综述。

强直性脊柱炎患者外周血淋巴细胞趋化因子受体CCR5的表达

免疫细胞的定向迁移是机体免疫应答发生和完成的必须条件，趋化因子是控制细胞定向迁移的细胞因子。趋化因子受体通常表达于免疫细胞、内皮细胞等细胞膜上。趋化因子受体拮抗剂的研究发现，单个趋化因子的阻断就能明显的抑制炎症反应，提示阻断趋化因子受体的策略可能较目前使用的免疫抑制剂更具选择性和安全性。本实验研究强直性脊柱炎患者外周血淋巴细胞表面趋化因子受体CCR5的表达。

针对趋化因子受体CCR5的SPA-WGA药物筛选方法

目的建立针对趋化因子受体CCR5的药物筛选SPA-WGA法[35S]GTPγS结合实验方法。方法通过降低SPA-WGA小球用量和对其他各种因素进行优化,如细胞膜用量、GDP浓度、体系孵育时间和样品连续测量时间,建立了SPA-WGA法[35S]GTPγS结合实验方法。结果最后优化得到实验条件为:100μl反应体系,0.1 mg SPA-WGA小球,10μgCHO-CCR5细胞膜,10μmol.L-1GDP和0.3 nmo.lL-1[35S]GTPγS,室温孵育1.5 h并且在1 200 m in之内完成所有样品测量。该法与传统抽滤法比较,测量得到RANTES的EC50分别为:1.40 nmol.L-1和2.90 nmol.L-1,测量得到SCH-C的IC50分别为:2.95 nmo.lL-1和2.73 nmo.lL-1,测量结果相似,均呈现出较好的剂量效应关系。利用该法筛选54个化合物,筛到3个IC50在1~10 nmol.L-1的化合物。这3个化合物是否具有H IV-1进入抑制剂的潜在开发价值,还有待体外抗H IV-1实验的进一步验证和筛选。结论此方法操作简便,灵敏性和重现性好,且可高通量和自动化,该法适用于能与Gi家族蛋白偶联的GPCR的高通量药物筛选。

人趋化因子受体CCR5胞外片段的融合表达与纯化

目的对人趋化因子受体CCR5的N端胞外部分与第二个胞外环(extracellular loop-2,ECL-2)进行融合表达与纯化。方法分别扩增人趋化因子受体CCR5的胞外N-端部分与ECL-2部分相应的编码序列,通过重叠延伸拼接(Splicing byoverlapping extension,SOE)PCR实现两片段DNA的拼接后(命名为CCR5-N-E2)克隆入质粒pBlueScript M13中,同时构建原核表达载体pET-21b(+)-CCR5-N-E2,转入表达菌株BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白CCR5-N-E2,表达产物通过蛋白免疫印迹进行鉴定,并采用金属螯合层析法对重组表达产物进行纯化。结果经测序,构建的重组原核表达载体与预期完全一致,相对分子质量为8 500的目的蛋白在BL21(DE3)菌株中得到高效表达,表达量约占总蛋白的50%,表达产物以包涵体形式存在。蛋白免疫印迹实验表明该重组蛋白与抗CCR5 N-端序列的单克隆抗体发生特异性结合。通过Ni2+亲和层析,目的蛋白的纯度可达95%以上。结论实现CCR5-N-E2编码序列的拼接、融合蛋白的表达以及纯化,为广泛筛选以CCR5为靶点的临床治疗药物奠定了基础。

复方甘草酸苷对趋化因子受体CCR3、CCR5在过敏性紫癜患儿中的表达

目的测定治疗前后趋化因子受体CCR3、CCR5的变化,探讨复方甘草酸苷治疗过敏性紫癜(HSP)的疗效。方法HSP患儿分为对照组和治疗组2组,比较治疗组和对照组的疗效,并使用流式细胞仪测定治疗前后趋化因子受体CCR3、CCR5水平。结果治疗前后比较,治疗后CCR3降低,CCR5升高,治疗组差异大于对照组。治疗组与对照组比较,治疗时间,前者短于后者;治疗疗效,前者优于后者。结论复方甘草酸苷可以调节Th1/Th2失衡,从而治疗HSP,且疗效确切。

CC趋化因子受体5与炎症性肠病的研究进展

CC趋化因子受体5(CCR5)为CCR家族成员,属于7次跨膜G蛋白偶联受体(GPCR),与炎症和免疫反应关系密切。炎症性肠病(IBD)是一种慢性非特异性肠道炎性疾病,免疫反应异常为其重要特征。研究显示,CCR5在IBD的发生、发展中发挥重要作用。本文就CCR5与IBD的研究进展作一综述。

缺氧调控人趋化因子受体CCR5启动子区的表达分析

目的:分析人趋化因子受体5(CCR5)基因启动子区序列在缺氧条件下的表达。方法:构建CCR5基因启动子区萤光素酶报告基因载体,转染入MDA-MB-435细胞中,检测分析其双萤光素酶活性。结果:CCR5基因启动子区的pGL3重组质粒在缺氧条件下的MDA-MB-435细胞中能表现出明显的萤光素酶活性。结论:CCR5基因启动区序列中存在缺氧诱导CCR5基因转录的主要上调元件。

RANTES及趋化因子受体CCR5在特应性皮炎皮损中的表达及其意义

目的探讨调节正常T细胞表达和分泌活性因子(regulated on activation normal Tcell expressed and secreted,RANTES)及趋化因子受体CCR5在特应性皮炎皮损的表达及其意义。方法采用荧光定量聚合酶链反应法测定20例特应性皮炎患者皮损内及16例正常对照者皮肤内RANTESmRNA及CCR5mRNA的定量表达,采用SCORAD评分评估患者病情,分析特应性皮炎患者皮损内RANTESmRNA及CCR5mRNA的定量表达与SCORAD评分相关性。结果特应性皮炎患者皮损内RANTESmRNA及CCR5mRNA的表达明显高于正常对照组皮肤内的表达(t=10.2,P<0.001;t=2.32,P=0.0318);特应性皮炎患者皮损内RANTESmRNA及CCR5mRNA的定量表达与SCORAD评分均呈显著的正相关(r=0.78465,P<0.0001;r=0.72465,P=0.0003),RANTESmRNA与CCR5mRNA的定量表达呈显著的正相关(r=0.64838,P=0.0020)。结论皮损内RANTES及CCR5的过度表达可能在特应性皮炎的发病中起一定作用。

沉默CC型趋化因子受体5对人乳腺癌细胞黏附及迁移的影响

构建CC型趋化因子受体5(CCR5)基因shRNA的真核表达载体,探讨沉默CCR5对乳腺癌细胞黏附与迁移能力的影响。在多种人乳腺癌细胞中检测CCR5的基因表达,选择CCR5表达较高的MDA-MB-231细胞做为基因沉默的研究对象;设计并合成2对靶向人CCR5基因的RNA沉默序列,连入基因沉默载体pSilencer 2.1-U6中,构建沉默质粒shCCR5-1和shCCR5-2,定量PCR和蛋白印迹法检测CCR5基因沉默的效率;以细胞黏附实验和Transwell趋化小室实验分别检测沉默CCR5对MDA-MB-231细胞黏附和迁移能力的影响。结果表明,沉默CCR5可以抑制MDA-MB-231细胞的黏附能力,同时显著降低MDA-MB-231细胞的迁移和趋化。

CCR5趋化因子受体晶体结构的解析

2013年9月12日出版的《Science》杂志发表了中国科学院上海药物研究所吴蓓丽研究组的研究成果，成功解析了CCR5蛋白质分子的高分辨率三维结构，这些结构信息将帮助我们更加准确地理解艾滋病毒感染细胞的机制，并有助于研发出更为有效的抗艾滋病毒感染的新型药物。