补阳还五汤对大鼠脑缺血后蛋白激酶B1和c—Jun氨基末端激酶1／2表达的影响

目的探讨补阳还五汤对脑缺血后大鼠蛋白激酶B1（AKT1）和c-Jun氨基末端激酶1/2（JNK1/2）的影响。方法将48只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、假手术组、模型组、补阳还五汤组，每组12只。采用大脑中动脉闭塞法（MCAO）建立右侧局灶性脑缺血大鼠模型。补阳还五汤组大鼠于术后2h起灌服补阳还五汤（主要由生黄芪120g、当归6g、赤芍4.5g、川芎3g、西红花3g、桃仁3g、广地龙3g组成）14.2 g/kg，每日1次，连续7 d。其他各组动物均给予等体积生理盐水。于第7日处死大鼠，取脑组织，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）测定AKT1 mRNA表达，采用免疫组化法检测JNK1/2蛋白表达。结果与正常对照组和假手术组比较，模型组AKT1 mRNA表达量〔吸光度（A）值〕明显降低（0.48±0.08比0.63±0.11、0.61±0.09，均P＜0.05），JNK1/2阳性细胞数（个/mm2）明显增多（34.13±4.57比16.15±1.09、16.23±2.05，均P＜0.05）；与模型组比较，补阳还五汤组脑组织中AKT1 mRNA表达（0.93±0.11）和JNK1/2阳性细胞数（45.04±5.68）明显增加，差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。结论补阳还五汤可上调缺血脑组织AKT1 mRNA和JNK1/2阳性细胞数表达，是其脑保护作用机制之一。

益气活血通络解毒方对肺缺血／再灌注损伤小鼠细胞凋亡及c—Jun氨基末端激酶通路的影响

目的观察益气活血通络解毒方（YHTJF）对小鼠肺缺血／再灌注（I／R）损伤（LIRI）的影响，并探讨c-Jun氨基末端激酶（JNK）是否参与其凋亡机制。方法选择雄性C57BL／6J小鼠70只，按随机数字表法分为正常对照组（C组）、羧甲基纤维素钠（CMC-Na）＋正常对照组（CMC-Na＋C组）、CMC-Na＋假手术组（CMC-Na＋S组）、CMC-Na＋I/R模型组和CMC-Na＋YHTJF低、中、高浓度干预组（CMC-Na＋YL组、CMC-Na＋YM组、CMC-Na＋YH组）。C组不进行任何处理；CMC-Na＋S组只开胸，不夹闭肺门；其余各组均开胸夹闭肺门30min，再松开动脉夹使左肺再灌注3h。术毕处死小鼠留取肺组织，光镜和电镜下观察肺组织形态学及超微结构改变，并观察肺泡损伤定量评估指标（IQA）的变化；用原位末端缺刻标记试验（TUNEL）检测肺组织细胞凋亡指数（AI）；用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）和反转录-聚酶链反应（RT-PCR）检测JNK、葡萄糖调节蛋白78（GRP78）的mRNA和蛋白表达；并分析肺组织AI与JNK、GRP78的mRNA和蛋白表达及IQA的相关性。结果CMC-Na＋I／R组IQA、AI及JNK和GRP78 mRNA和蛋白表达均较CMC-Na＋S组明显升高[IQA：（74．00±7．31）％比（7．00±1．23）％，AI：（64．40±11．97）％比（5．60±1．14）％，JNKmRNA（灰度值）：1．143±0．284比0．152±0．128，GRP78 mRNA（灰度值）：0．897±0．129比0．284±0．044，JNK蛋白（A值）：0．428±0．074比0．073±0．052，GRP78蛋白（A值）：1．075±0．145比0．589±0．060j，CMC-Na＋YL组、CMC-Na＋YM组、CMC-Na＋YH组IQA、AI、JNK mRNA和蛋白、GRP78mRNA表达均较CMC-Na＋I／R组明显下降，以CMC-Na＋YM组较CMC-Na＋YL和CMC-Na＋YH组下降程度更显著[IQA：（26．20±3．35）％比（34．00±5．34）％、（41．20±9．18）％，AI：（29．40±3．05）％比（48．20±3．83）％、（39．20±6．14）％，JNK mRNA（灰度值）：0．681±0．130比0．804±0．153、0．938±0．11，GRP78 mRNA（灰度值）：0．450±0．105比0．747±0．231、0．566±0．115，JNK赁白（A值）：0．188±0．049比0．261±0．065、0．209±0．063，均P〈0．01]，CMC-Na＋YH组、CMC-Na＋YL组和CMC-Na＋YM组GRP78蛋白表达较CMC-Na＋I／R组明显升高，以CMC-Na＋YH组升高程度较CMC-Na＋YL组和CMC-Na＋YM组更显著（A值：1．429±0．226比1．130±0．169、1．128±0．177，均P〈0．01）。光镜下可见各组细胞凋亡以肺血管内皮细胞、肺泡上皮细胞为主，棕色颗粒为阳性细胞。电镜下可见：CMC-Na＋I／R组细胞核固缩并边集在核膜下，胞质浓缩，板层体减少、排空增多，细胞膜上微绒毛减少或消失，线粒体肿胀，肺泡隔及毛细血管内炎性细胞附壁增多。与CMC-Na＋I／R组比较，CMC-Na＋YL组、CMC-Na＋YM组、CMC-Na＋YH组肺组织超微结构损伤减轻，肺泡结构超微结构清晰可辨，核染色质较均匀，胞质增多，Ⅱ型肺泡上皮细胞表面微绒毛较多，板层小体数量增多，线粒体肿胀减轻，以CMC-Na＋YM组减轻最明显。肺组织AI与JNK、GRP78的mRNA和蛋白表达、IQA均呈显著正相关性（r值分别为0．907、0．928、0．880、0．712、0．911，均P〈0．01）。结论YHTJF可有效减轻小鼠LIRI肺组织细胞的凋亡，其机制可能与抑制JNK通路有关。

热休克蛋白70抑制c—Jun氨基末端激酶通路对H2O2诱导心肌细胞凋亡的保护作用

目的 观察热休克蛋白70（HSP70）对H2O2诱导乳鼠心肌细胞凋亡的保护作用及其机制。方法培养大鼠心肌细胞，随机分为5组：对照组、H2O2组、热休克组、c—Jun氨基末端激酶（JNK）抑制剂组、热休克＋JNK抑制剂组。生化法测定各组细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）、肌酸激酶（CK）活性和丙二醛（MDA）水平．流式细胞仪分析心肌细胞凋亡，噻唑蓝（MTT）法测定心肌细胞相对活力，Western blot法检测JNK的表达。结果 H2O2组LDH、MDA水平和CK活性明显高于其他组（P〈0．01），而SOD活性则明显低于其他组（P〈0．01）。细胞凋亡率H2O2组明显高于其他各组（P〈0．01）。细胞活力H20：组明显低于对照组（P〈0．01）．而热休克组、JNK抑制剂组、热休克＋JNK抑制剂组的细胞活力明显高于H2O2组（P〈0．01）。JNK只在H2O2组有表达。结论 HSP70对H2O2诱导的心肌细胞凋亡具有保护作用，其机制可能是HSP70大量表达后抑制了JNK信号的转导。

导痰汤通过c—Jun氨基末端激酶信号通路抑制人脐静脉内皮细胞细胞间黏附分子-1表达的研究

目的通过体外实验研究导痰汤是否能通过调节c—Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路来干预细胞间黏附分子-1（ICAM—1）的表达，以揭示导痰汤治疗动脉粥样硬化的机制。方法培养人脐静脉内皮细胞（HuVEc），并随机分为7组。空白对照组：正常培养HUVEC24h；导痰汤对照组：用20％导痰汤含药血清预处理HUVEC6h；肿瘤坏死因子-a（TNF-a）诱导组：用200kU／L TNF—a培养HuVEC12h；5％、10％、20％导痰汤干预组及JNK阻滞组：TNF—a诱导前分别给予5％、10％、20％导痰汤含药血清或25umol／L JNK特异性阻滞剂SP600125预处理。采用聚合酶链反应（PCR）和蛋白质免疫印迹法（western blotting）检测HUVEC中ICAM-1mRNA和JNK蛋白的表达。结果TNF—a诱导组ICAM-1 mRNA和JNK蛋白表达显著高于空白对照组和导痰汤对照组（均P〈0．01）；用导痰汤含药血清或SP600125预处理，ICAM-1mRNA和JNK蛋白表达显著下降（P〈0．05或P〈0．01）。JNK蛋白与ICAM-1mRNA水平呈显著正相关（r=0．680，P〈0．01）。结论导痰汤可以有效抑制TNF—a刺激所致的HUVEC中ICAM-1的过度表达，这可能与导痰汤可抑制JNK信号通路有关。

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对大鼠肺成纤维细胞c—Jun氨基末端激酶通路活化的调节作用

目的：探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸（AcSDKP）对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号转导通路活化的调节作用.方法：培养新生大鼠肺成纤维细胞.激光扫描共聚焦显微镜观察phospho-JNK在细胞内定位与分布.免疫印迹法检测JNK/phospho-JNK蛋白的表达.结果：激光扫描共聚焦显微镜显示,与对照组比较,TGF-β1刺激后,胞质中phospho-JNK荧光强度变弱,而核浆比值明显增加.经AcSDKP干预作用后,胞质中phospho-JNK的荧光强度较TGF-β1刺激组增强,核浆比值明显减小.免疫印迹法显示,与对照组比较,TGF-β1刺激组phospho-JNK表达明显增加;而AcSDKP干预作用后,phospho-JNK蛋白表达较TGF-β1刺激组明显减少.结论： AcSDKP能阻断TGF-β1介导的肺成纤维细胞JNK通路的活化作用.

RARβ和c—Jun在维生素A缺乏大鼠气道上皮鳞状化生中的表达和作用

目的探讨气道上皮鳞状化生过程中RARβ和c—Jun的表达和作用。方法用维生素A缺乏的方法建立气道上皮鳞状化生的动物模型。免疫组化技术检测上皮RARβ和c—Jun蛋白表达。结果RARβ在实验组的表达均较对照组减低（P〈0．01），而c—Jnn在实验组表达高于对照组（P〈0．01）。结论在维生素A缺乏所致大鼠气道上皮鳞状化生过程中RARβ和c—Jun的表达呈反向变化，提示RARβ的表达减少，减弱了其对c—Jun的抑制，促进了上皮鳞状化生的形成。

青藤碱在JNK/c-Jun信号通路中对LPS诱导的肺上皮细胞凋亡和自噬的影响

目的:探究青藤碱(SIN)通过JNK/c-Jun信号通路对LPS诱导的肺上皮细胞凋亡和自噬的影响。方法:培养肺上皮细胞MLE-12,通过CCK-8检测SIN的毒性。流式细胞术检测细胞凋亡,免疫荧光检测自噬体形成数量,Western blot检测细胞中凋亡、自噬以及JNK/c-Jun信号通路相关蛋白表达水平。结果:LPS造模后,细胞凋亡率和自噬体数量升高,Cleaved caspase-3、Bax和Beclin-1蛋白水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-JNK/JNK和p-c-Jun/c-Jun均升高(P<0.05);Bcl-2、P62蛋白水平均降低(P<0.05)。SIN处理可明显改善LPS对细胞凋亡和自噬的影响,以及对JNK/c-Jun信号通路的调控(P<0.05)。细胞自噬抑制剂3-MA或JNK激动剂ANISO处理均可部分逆转SIN对LPS诱导的肺上皮细胞的保护作用(P<0.05)。结论:SIN可通过调控JNK/c-Jun信号通路相关蛋白提高细胞自噬,保护被LPS损伤的肺上皮细胞。

c-Jun氨基端激酶信号通路调控急性呼吸窘迫综合征中重要炎症介质表达机制的研究进展

急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是一种临床常见的危重症,其核心问题在于过度的炎症反应。c-Jun氨基端激酶(JNK)是促分裂原活化的蛋白质激酶(MAPK)家族最重要的成员之一,在调控细胞增殖、分化、凋亡、自噬及炎症等多个重要功能中发挥作用。JNK信号通路被过度激活时,会导致炎症反应的持续激活和炎症因子的过度生成,从而对机体造成严重损害。因此,明确JNK通过哪些信号通路参与炎症反应,对于控制ARDS的炎症进程和调节机体的免疫反应平衡具有重要意义。

广藿香酮通过JNK/c-Jun信号通路调控肺癌A549细胞凋亡及自噬

目的探讨广藿香酮对肺癌A549细胞增殖、凋亡、自噬和JNK/c-Jun信号通路的影响。方法采用0、10、20、40μmol/L广藿香酮处理肺癌A549细胞,将细胞随机分为4组:0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L和40μmol/L广藿香酮处理组,同时将5μmol/L顺铂处理后的肺癌A549细胞作为阳性对照组。EdU染色检测细胞增殖;Hoechst 33258染色检测细胞凋亡;Western blotting检测LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、Beclin-1、p62、JNK、p-JNK、c-Jun和p-c-Jun蛋白表达。10μmol/L JNK抑制剂SP600125与40μmol/L广藿香酮共处理A549细胞2 h及24 h,检测细胞增殖、凋亡及相关蛋白表达。结果与广藿香酮0μmol/L组比较,广藿香酮20、40μmol/L组EdU阳性细胞数降低,细胞凋亡率升高,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin-1蛋白表达升高,p62蛋白表达降低,LC3+含量升高,p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun比值升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,SP600125组p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、细胞凋亡率及Beclin-1蛋白表达显著降低,EdU阳性细胞数、p62蛋白表达显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与SP600125组比较,广藿香酮40μmol/L+SP600125组p-JNK/JNK、p-c-Jun/c-Jun、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值、细胞凋亡率及Beclin-1蛋白表达显著升高,EdU阳性细胞数、p62蛋白表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论广藿香酮通过JNK/c-Jun信号通路抑制肺癌A549细胞增殖,诱导细胞凋亡及自噬。

毛兰素通过JNK/c-Jun信号通路对2型糖尿病大鼠肝脏损伤的保护作用机制研究

目的基于c-Jun氨基末端激酶(JNK)/c-Jun信号通路对氧化应激反应的调控作用,研究毛兰素对2型糖尿病大鼠肝脏损伤的保护作用。方法于2021年10月至2022年2月腹腔注射链脲佐菌素构建糖尿病大鼠模型,将造模成功大鼠分为模型组、毛兰素低剂量组(10 mg/kg)、毛兰素高剂量组(40 mg/kg),及罗格列酮组(1.25 mg/kg)、毛兰素(40 mg/kg)+JNK激活组(5 mg/kg),每组10只,另取正常饲养大鼠10只作为对照组。连续给药6周后,通过血糖仪和胰岛素放射免疫分析试剂盒检测空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及胰岛素敏感指数(ISI);天平称取大鼠体质量和肝质量,计算肝脏指数;试剂盒检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量;HE染色观察肝脏组织病理学变化;western blotting法检测肝脏组织中JNK/c-Jun信号通路相关蛋白表达。结果与对照组相比,模型组肝脏指数[(4.26±0.12)g/100 g比(2.24±0.09)g/100 g]、FBG[(21.49±1.78)mmol/L比(5.14±0.45)mmol/L]、FINS[(80.17±6.38)mmol/L比(22.35±2.04)mmol/L]、HOMA-IR[(76.46±6.56)比(5.11±1.12)]、ALT[(138.71±10.21)U/L比(70.29±5.54)U/L]和AST活性[(77.21±5.08)U/L比(40.38±3.27)U/L]、MDA含量[(13.45±1.34)nmol/mg prot比(3.72±0.87)nmol/mg prot]、JNK/c-Jun信号通路相关蛋白表达均明显升高(P<0.05),体质量、ISI[(−7.45±0.18)比(−4.74±0.11)]、SOD[(100.79±11.22)U/mg prot比(223.46±19.86)U/mg prot]和GSH-Px活性[(24.42±1.74)U/mg prot比(56.79±3.18)U/mg prot]明显降低(P<0.05),且肝脏组织病理损伤较为严重;与模型组相比,毛兰素低剂量组、毛兰素高剂量组和罗格列酮组肝脏指数、FBG、FINS、HOMA-IR、ALT和AST活性、MDA含量、JNK/c-Jun信号通路相关蛋白表达均明显降低(P<0.05),体质量、ISI、SOD和GSH-Px活性明显升高(P<0.05),减轻肝脏损伤程度;与毛兰素高剂量组相比,毛兰素低剂量组、毛兰素+JNK激活组肝脏指数、FBG、FINS、HOMA-IR、ALT和AST活性、MDA含量、JNK/c-Jun信号通路相关蛋白表达均明显升高(P<0.05),体质量、ISI、SOD和GSH-Px活性明显降低(P<0.05),肝脏损伤恢复缓慢。结论毛兰素可通过调控JNK/c-Jun信号通路,抑制JNK/c-Jun通路蛋白表达,从而缓解氧化应激反应,改善糖尿病大鼠肝脏损伤。

基于c-Jun氨基末端激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路探讨阿魏酸钠对偏头痛大鼠炎症反应的抑制作用

目的 探讨阿魏酸钠(SF)通过调控JNK/p38 MAPK信号通路对偏头痛大鼠炎症反应的抑制作用。方法 腹腔注射硝酸甘油制备偏头痛大鼠模型,模型制作成功后随机分为模型组、SF低剂量(SF-L)组(50 mg/kg)、 SF高剂量(SF-H)组(100 mg/kg)、SF+JNK抑制剂(SF+SP600125)组(SF 100 mg/kg+SP600125 10 mg/kg)、 SF+JNK激活剂[SF+茴香霉素(AN)]组(SF 100 mg/kg+AN 5 mg/kg),每组12只,另取12只SD大鼠不做处理作为空白组。给药结束24 h后观察各组大鼠行为学变化,ELISA法检测血清中5-羟色胺(5-HT)、一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平,TUNEL染色观察脑组织神经元凋亡情况,免疫组织化学法检测脑组织中TNF-α、 IL-6、降钙素基因相关肽(CGRP)表达,Western blotting法检测脑组织中JNK/p38 MAPK通路相关蛋白的表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠挠头次数以及爬笼次数明显增加,神经元凋亡率显著升高;血清5-HT含量显著降低,NO、TNF-α和IL-6水平显著升高;脑组织中TNF-α、IL-6和CGRP表达以及磷酸化JNK(p-JNK)/JNK、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)/p38 MAPK比值均显著升高(均P<0.05)。与模型组比较,SF-L组、SF-H组大鼠挠头次数及爬笼次数显著减少,神经元凋亡率显著降低;血清中5-HT含量显著升高,NO、TNF-α和IL-6水平显著降低;脑组织中TNF-α、IL-6和CGRP表达以及p-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK比值均显著降低(均P<0.05)。与SF-H组比较,SF+SP600125组能够显著增强SF对偏头痛大鼠的保护作用;SF+AN组能够显著逆转SF对偏头痛大鼠的保护作用。结论 SF可能通过抑制JNK/p38 MAPK信号通路的表达,有效抑制偏头痛大鼠神经源性炎症反应,减少神经元凋亡,实现对偏头痛大鼠的保护作用。

c-Jun氨基末端激酶与首发精神分裂症患者认知功能及预后的相关性研究

目的探讨首发精神分裂症患者血清c-Jun氨基末端激酶(JNK)表达与认知功能及出院1年预后的相关性。方法对168例首发精神分裂症患者进行临床资料调查、认知功能评估和出院后随访。根据有无认知功能受损,168例患者被分为认知功能受损组65例和认知功能正常组103例。采用Pearson相关分析法分析患者血清JNK表达水平与认知功能[MATRICS共识认知成套测试(MCCB)得分]的相关性。采用Logistic回归分析探讨患者认知功能受损的影响因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清JNK表达水平等因素对患者认知功能受损的预测效能,采用Cox回归分析法对患者出院后1年的随访预后进行单因素和多因素分析。结果认知功能受损组血清JNK表达水平为(78.12±9.28)%,高于认知功能正常组的(59.38±6.17)%,差异有统计学意义(t=10.420,P<0.001)。首发精神分裂症患者血清JNK表达水平与MCCB得分呈显著负相关(r=-0.492,P<0.001)。血清JNK表达水平是首发精神分裂症患者认知功能受损的独立危险因素(OR=3.080,95%CI:1.864~12.157);血清JNK表达水平预测患者认知功能受损的曲线下面积(AUC)为0.756,最佳截断值为73.49,特异度为0.885,敏感度为0.913。出院后随访1年,高JNK水平患者的无病生存期短于低JNK水平患者,差异有统计学意义(P<0.05)。Cox回归分析显示,年龄、睡眠障碍、抑郁、焦虑、血清JNK表达水平均为首发精神分裂症患者出院后随访预后不良的独立影响因素(P<0.05)。结论首发精神分裂症患者血清JNK表达水平与认知功能、出院1年预后存在相关性,临床医务人员应密切监测患者血清JNK表达水平。

石菖蒲挥发油对炎性痛大鼠脊髓背角中胶质纤维酸性蛋白、c-Jun氨基末端蛋白激酶和肿瘤坏死因子α表达的影响

目的探讨石菖蒲挥发油(VOA)对炎性痛大鼠脊髓背角中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、c-Jun氨基末端蛋白激酶(JNK)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响。方法36只雄性SD大鼠随机分为:对照组(control)、假手术组(sham)、完全弗氏佐剂组(CFA)、5 g/(kg·d)低剂量VOA+CFA组(VOA-L+CFA)、10 g/(kg·d)中剂量VOA+CFA组(VOA-M+CFA)和20 g/(kg·d)高剂量VOA+CFA组(VOA-H+CFA),共6组,每组6只,于连续灌胃给药的第22天取材。利用免疫荧光染色和Western blotting技术检测各组大鼠脊髓背角中GFAP、JNK和TNF-α的表达情况。结果免疫荧光染色及Western blotting结果表明,与control和sham组相比,CFA组中大鼠脊髓背角中GFAP、JNK和TNF-α阳性表达均显著增多(P<0.01);与CFA组相比,不同剂量VOA处理组大鼠脊髓背角中GFAP、JNK和TNF-α阳性表达均减少,且VOA-H+CFA组大鼠脊髓背角中GFAP、JNK和TNF-α阳性表达减少更明显(P<0.05,P<0.01)。结论VOA可降低CFA诱导的炎性痛大鼠脊髓背角中GFAP、JNK和TNF-α的表达。

MicroRNA-21靶向PDCD4调控JNK/c-Jun信号通路促进胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探究MicroRNA-21 (miR-21)通过靶向PDCD4调控JNK/c-Jun信号通路对胶质瘤细胞的增殖和迁移的影响。方法 采用qRT-PCR和Western blot分别检测胶质瘤及瘤旁组织标本、人脑正常胶质细胞HEB、胶质瘤细胞U251、U87中miR-21和PDCD4的表达水平;将miR-21 inhibitor、inhibitor-NC、miR-21 mimics组、miR-NC组、PDCD4 siRNA、siRNA-NC分别转染至U87细胞中,记为miR-21 inhibitor组、inhibitor NC组、PDCD4 siRNA组和siRNA-NC组;将inhibitor-NC与siRNA-NC共转染至U87细胞,记为inhibitor NC+siRNA NC组;将miR-21 inhibitor分别与siRNA NC组和DCD4 siRNA组共转染,记为miR-21 inhibitor+siRNA-NC组、miR-21 inhibitor+PDCD4 siRNA组。采用qRT-PCR检测转染后细胞miR-21和PDCD4的表达;CCK-8检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验验证miR-21与PDCD4的靶向关系;Western blotting检测细胞p-JNK1/2、JNK1/2、p-cJun和c-Jun的蛋白表达量。结果 与癌旁组织和人脑正常胶质细胞HEB比较,miR-21在胶质瘤组织和U251、U87细胞中表达量显著升高(P<0.05),PDCD4表达水平显著降低(P<0.05);与Control组和miR-NC组比较,miR-21 inhibitor组miR-21表达和细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05),p-ERK1/2和p-c-Jun蛋白水平显著降低(P<0.05);与Control组和si-NC组比较,PDCD4 siRNA组PDCD4表达显著下降、细胞增殖、迁移和侵袭能力显著升高(P<0.05),p-ERK和p-c-Jun蛋白水平显著升高(P<0.05)。双荧光素报告实验结果表明,miR-21可调控PDCD4表达。此外,与Control组和miR-21 inhibitor+siRNA NC组比较,miR-21 inhibitor+PDCD4 siRNA组细胞PDCD4表达显著升高,细胞增殖、迁移和侵袭能力显著增加(P <0.05),p-ERK1/2和p-c-Jun蛋白水平显著升高(P <0.05)。结论 在胶质瘤细胞中,MicroRNA-21通过靶向PDCD4调控JNK/c-Jun信号通路影响细胞增殖、迁移和侵袭能力。

c-Jun和CBP在槲皮素抑制前列腺癌中的作用

目的探讨槲皮素抑制前列腺癌的作用机制。方法应用蛋白印迹技术检查槲皮素(quercetin)对雄激素受体(androgen receptor,AR)的辅调节因子c-Jun和cAMP应答元件结合蛋白的结合蛋白[cAMP response elem entb ind ing prote in(CREB)-b ind ing prote in,CBP]蛋白表达的影响;利用细胞转染技术检测c-Jun和CBP对AR功能的影响;免疫沉淀技术检验c-Jun与AR的蛋白-蛋白相互作用。结果槲皮素能够明显诱导c-Jun的高表达,高表达的c-Jun能够抑制AR的功能。槲皮素对CBP的蛋白表达水平无明显影响,而增加CBP的表达并不能逆转槲皮素对AR功能的抑制作用。免疫沉淀结果表明,c-Jun与AR存在蛋白-蛋白相互作用。结论槲皮素抑制前列腺癌的机制可能是通过c-Jun与AR的蛋白相互作用,而不是通过c-Jun竞争结合AR的辅激活因子CBP来实现的。

人参皂苷Rg1对MPTP所致亚急性帕金森病模型小鼠中脑黒质p-c-Jun与COX-2表达的影响

本文研究了人参皂苷Rg1(Ginsenoside Rg1,Rg1)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetra-hydropyridine,MPTP)所致亚急性Parkinson病(PD)模型小鼠中脑黒质磷酸化c-Jun(p-c-Jun)与环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)表达的影响,以期探讨Rg1保护PD中脑黑质多巴胺(DA)能神经元可能的分子机制。实验采用MPTP制备亚急性PD小鼠模型。通过行为学观察,免疫组织化学SP法和免疫蛋白印迹法,观察PD模型小鼠行为学变化,中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)、COX-2和p-c-Jun表达水平的变化,并观察给予人参皂苷Rg1对上述变化的影响。结果显示,模型小鼠出现典型PD样症状。与对照组小鼠相比,黑质区TH阳性神经元数下降约65%(P<0.001),TH表达水平显著降低约75%;黑质区COX-2阳性细胞明显增多,p-c-Jun特异性表达于黑质区细胞核内,且COX-2与p-c-Jun表达水平均明显升高。经Rg1(10mg/kg)处理后,模型小鼠PD样症状减轻,与对照组比较,在MPTP第5次注射后7d,TH阳性细胞数和TH表达水平仅下降约15%和20%;与模型组比较,黑质区COX-2阳性细胞明显减少,p-c-Jun主要表达于细胞浆,部分表达于细胞核,表达水平也明显降低。以上实验结果表明,人参皂苷Rg1对MPTP诱导的亚急性Parkinson病小鼠中脑黑质细胞的神经保护作用可能是通过阻抑p-c-Jun核内表达,从而减弱COX-2表达及其介导的黒质区炎症反应。

丹参酮ⅡA对AngⅡ诱导的心肌肥大中c-fos、c-myc和c-jun mRNA表达的影响

目的在原代培养的新生大鼠心肌细胞上，观察丹参酮ⅡA（tanshinoneⅡ，TSN）对血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡA，AngⅡ）诱导的心肌细胞肥大的影响。方法实验用新生大鼠，差数贴壁法体外分离培养大鼠心肌细胞。用血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大，丹参酮ⅡA和缬沙坦（valsartan）进行干预；采用相差显微镜测量细胞大小；测定心肌细胞^3H-亮氨酸参入作为心肌细胞肥大的指标；用逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）检测心肌细胞原癌基因c—fos、c—myc和c-jun mRNA的表达；MTT法检测细胞活力。结果用MTT法检测发现，培养的心肌细胞中加入TSN（5～80μmol·L^-1），24h后会产生微弱的细胞毒性，但心肌细胞单层在TSN存在的情况下可以继续同步收缩。在AngⅡ持续作用7d后，血管紧张素Ⅱ组心肌细胞直径增大（28．5±3．8）μm，与对照组（19．8±1．9）μm相比差异有显著性（P〈0．05）；TSN抑制AngⅡ介导的心肌细胞直径增大（21．3±2．5）μm，与AngⅡ组相比差异有显著性（P〈0．05），AngⅡ作用24h后，心肌细胞合成速率AngⅡ组（1900±100）cpm较对照组（1205±129）cpm明显增加（P〈0．01），TSN和valsartan本身对心肌细胞蛋白质的合成没有影响，但均能抑制AngⅡ刺激的心肌细胞蛋白质合成速率的增加（P〈0．01）。在培养液中加入AngⅡ作用30min后，c-los、c-myc和c-jun mRNA的表达明显增强（P〈0．01），预先加入TSN或valsartan作用30min，可阻断AngⅡ的作用（P〈0．01），而TSN和valsartan本身对原癌基因c-los、c—myc和c-jun mRNA的表达无影响。结论TSN可以抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大，这可能与其抑制了原癌基因c—fos、c—myc和c-jun的表达有关。

增生性瘢痕中磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶和c-Jun蛋白的表达特征及其与瘢痕形成的关系

目的 观察磷酸化 P38丝裂原活化蛋白激酶 (P38MAPK)和 c- Jun蛋白在增生性瘢痕组织中的表达特征及其影响瘢痕形成和成熟的机制。 方法 取 16例住院的增生性瘢痕患者的瘢痕组织 ,并将其分为生长活跃期组(形成时间在 1年以内 ,含 1年者 )、生长稳定期组 ,每组各 8例 ;另取正常皮肤 8例。所有取材均未经任何治疗。用免疫组织化学方法和常规病理技术检测磷酸化 P38MAPK和 c- Jun两种蛋白 ,在增生性瘢痕组织和正常皮肤组织中的表达和分布规律。 结果 正常皮肤组织中 ,磷酸化 P38MAPK主要分布于表皮基底层细胞的胞浆和胞核内 ,c- Jun蛋白则主要定位于表皮细胞和内皮细胞中 ,两种蛋白的阳性细胞率分别为 2 1.3%± 3.6 %和 33.4 %± 3.5 %。在处于生长活跃期的增生性瘢痕组织中 ,磷酸化 P38MAPK和 c- Jun的阳性信号主要定位于表皮细胞和部分成纤维细胞内 ,阳性细胞率分别上升至 6 9.5 %± 3.3%和 5 9.6 %± 4 .3% ,明显高于正常皮肤组织 (P<0 .0 1) ;而在成熟稳定的增生性瘢痕中 ,两种蛋白表达有所下降 ,但仍高于正常皮肤组织。 结论 增生性瘢痕的形成和成熟可能与激活 P38MAPK信号传递通路 ,影响c- Jun蛋白表达有关。

c-Jun氨基末端激酶在慢性低O_2高CO_2大鼠海马损伤中的作用

目的:探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)在慢性低O2高CO2大鼠海马损伤中的作用。方法:采用慢性低O2高CO2肺动脉高压大鼠模型。30只SD大鼠随机分为正常对照(NC)组、低O2高CO22周(2WH)组和低O2高CO24周(4WH)组,每组10只。Morris水迷宫检测行为学,用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)动态观察海马p-JNKmRNA的转录情况,免疫组织化学法测定p-JNK在海马CA1/CA3区的变化,TUNEL法检测海马CA1/CA3区神经细胞凋亡。结果:与NC组相比,低O2高CO22WH、4WH组大鼠寻找站台的平均逃避潜伏期延长、游泳总距离增加(P<0.01或P<0.05),且4WH组比2WH组潜伏期延长及游泳总距离增加更加明显(P<0.05);NC组大鼠海马仅见少量JNKmRNA及蛋白表达,低O2高CO2各组较NC组JNK表达明显增加(P<0.01或P<0.05),且4WH组比2WH组增加更明显(P<0.05)。低O2高CO22WH、4WH组的TUNEL阳性细胞数均明显多于NC组(P<0.01或P<0.05),且4WH组比2WH组增多明显(P<0.01)。结论:低O2高CO2能导致大鼠学习记忆障碍,可能与激活海马神经细胞内JNK有关。