禽偏肺病毒Taqman荧光定量PCR方法的建立及应用

根据Gen Bank中a MPV-C P基因序列,设计出一对特异性引物和Taqman探针,建立了a MPV-CTaqman探针荧光定量PCR方法。对该反应体系进行优化,进行特异性、敏感性及重复性试验,并且建立标准曲线。结果表明,该方法只对a MPV-C检测为阳性,具有良好的特异性;能够检测到(3.63×102)拷贝数,具有良好的敏感性;建立的标准曲线斜率为-3.312,截距为44.66,相关系数为R2=0.999,循环阈值和模板拷贝数具有良好的相关性,组内及组间重复性好。采用a MPV-C Taqman探针荧光定量方法、普通PCR方法对来自广东、浙江地区25份番鸭疑似阳性a MPV-C的病料进行检测,其中前者23份阳性,后者18份阳性。这表明a MPV-C Taqman荧光定量PCR方法对样品的检测具有特异性和敏感性高的特点,更适合临床样品的检测。