研究白细胞计数联合C反应蛋白及降钙素原检验在上呼吸道感染中的诊断价值

分析研究白细胞计数联合C反应蛋白及降钙素原检验在上呼吸道感染中的诊断价值。方法 将2022年1月至2023年12月期间,在我院接受治疗的106名上呼吸道感染儿童纳入本次研究作为感染组。同期选择在医院接受体检的100名健康儿童作为健康组,通过体检、病史问询以及血常规检测等手段进行筛选。对比诊断结果。结果 感染群体中的白细胞计数(WBC)、C反应蛋白(CRP)以及降钙素原(PCT)指标数值高于健康对照群体(P<0.05)。在具体分类上,细菌性感染群体的WBC、CRP、PCT水平高于病毒性感染群体(P<0.05)。重症患者的WBC、CRP、PCT水平显著高于轻症患者(P<0.05)。结论 WBC、CRP和PCT可以作为上呼吸道感染的诊断指标,相关指标在区分细菌感染与病毒感染、评估儿童病情的严重程度方面显示出显著差异,为感染类型鉴别及病情评估提供了重要依据。

剑尾鱼卵黄蛋白原C(Vg C)全长cDNA的克隆及表达

利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增(RACE)等方法,克隆获得剑尾鱼卵黄蛋白原C(Vg C)基因的全长cDNA序列。剑尾鱼Vg C基因cDNA序列全长4 011 bp,其5'非编码区包含12 bp和3'非编码区包含246 bp;含有一个3 753 bp的开放阅读框(ORF),编码1 250个氨基酸,推测其编码氨基酸分子量大小为141.7 ku,编码氨基酸序列与其他鱼类卵黄白原C编码氨基酸序列相似性在44%～85%。荧光定量PCR结果显示,Vg C在剑尾鱼肝脏中表达量最高,脾、肾、卵巢中有微量表达,脑、肌肉、鳃中几乎没有检测到表达;对不同时间暴露在雌激素中剑尾鱼肝脏进行实时荧光定量PCR表达分析的结果表明,Vg C在剑尾鱼肝脏中第5天表达量最高,随后降低,第9天后维持相对较低的表达量。研究首次克隆了剑尾鱼Vg C基因全长cDNA序列,并对Vg C在剑尾鱼体内表达组织器官分布及雌激素诱导后不同时间表达谱进行了初步研究,为剑尾鱼生殖生理及环境污染物监测应用等不同领域研究打下重要基础。

重组羧肽酶B在胰岛素原C肽制备工艺中的应用

用RT-PCR方法克隆了大鼠羧肽酶原B的cDNA编码序列,将其重组到原核表达质粒pT7-473中,并在大肠杆菌中以包涵体方式获得高表达。SDS-PAGE电泳及灰度扫描显示表达量达菌体总蛋白的35%,表达产物融合了表达质粒上的6His。在变性条件下,经Ni-NTA柱纯化,得到羧肽酶原B,在复性液中进行稀释复性后,胰蛋白酶切得具酶活性的羧肽酶B,然后经DEAE-FF分离纯化获得较纯的羧肽酶B(28.5mg/L),比活为13.5u/mg。用RP-HPLC分析胰蛋白酶+羧肽酶B酶解胰岛素原C肽三聚体的酶解产物,证明该重组的羧肽酶B可替代提取的羧肽酶B应用于胰岛素原C肽的制备工艺中。

胃癌高系家族成员胃蛋白酶原C基因多态性及其诊断意义的探讨

采用限制性酶切片段长度多态性分析法，检测在胃癌高发区庄河检出的１９例胃癌高系家族成员胃蛋白酶原Ｃ基因多态性，发现三种常见片段及一种稀有片段。对其中４例携带稀有片段的受检者进行了胃镜追踪观察，２．５年后发现１例早期胃癌。本文对此作了初步探讨。

HSP70抑制H_2O_2所致C2C12肌原细胞Smac从线粒体的释放及细胞凋亡

目的:阐明HSP70对H2O2所致C2C12肌原细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:采用基因瞬间转 染技术使细胞HSP70或/和Smac高表达,采用Hoechst33258染色观察H2O2(0.5mmol/L)处理转基因C2C12肌原 细胞不同时间后细胞核形态学改变并计算凋亡核百分率。DNA抽提及琼脂糖电泳观察凋亡特征性梯带。采用 caspase活性定量检测试剂盒及蛋白质印迹分析caspase 9和caspase 3的活化。利用免疫荧光分析HSP70对H2O2 所致Smac从线粒体释放的影响。结果:HSP70对H2O2及Smac所致C2C12肌原细胞凋亡具有明显的抑制作用,凋 亡核百分率明显降低,DNA电泳未出现明显“梯状”条带;caspase 9和caspase 3的活化明显受到抑制;并进一步发 现HSP70可抑制H2O2所致C2C12肌原细胞Smac从线粒体释放。结论:HSP70可通过抑制Smac从线粒体释放来

降钙素原和超敏C反应蛋白检测在再生障碍性贫血合并肺部感染患者病原菌诊断中的意义

目的探讨降钙素原(PCT)和超敏C反应蛋白(hs-CRP)在再生障碍性贫血合并肺部感染患者病原菌诊断中的意义。方法将98例再生障碍性贫血合并肺部感染患者分为细菌感染组(n=28)、真菌感染组(n=28)、细菌合并真菌感染组(n=28)、支原体或病毒感染(n=14),并以健康体检者作为对照组(n=28)。检测各组患者降钙素原(PCT)和超敏C反应蛋白(hsCRP)及WBC。结果与对照组比较,细菌感染组、真菌感染组、细菌合并真菌感染组患者PCT和hs-CRP均有不同程度升高,而支原体或病毒感染组的变化不明显。各感染组患者WBC明显低于对照组(P<0.01)。与单纯真菌感染相比,革兰阳性菌和革兰阴性菌感染患者的PCT和hs-CRP均有不同程度升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与总体真菌感染患者比较,念珠菌感染患者PCT值高于曲霉菌感染(P<0.05)。结论 PCT和hs-CRP检测对再生障碍性贫血合并肺部感染患者的病原菌诊断具有重要意义。

斑鳜胃蛋白酶原C及其5′侧翼区的克隆及序列特征分析

采用RT-PCR和RACE等技术克隆了斑鳜(Siniperca scherzeri)胃蛋白酶原C(pepsinogen C,PGC)的cDNA全长和部分DNA序列,结果表明:PGC cDNA序列全长1 505 bp,5′端非翻译区37 bp,3′端非翻译区304 bp,开放阅读框架(ORF)1 164 bp,共编码含有387个氨基酸的蛋白质,包括由16个氨基酸组成的信号肽、39个氨基酸的激活肽和332个氨基酸的成熟肽。斑鳜PGC氨基酸序列与斜带石斑鱼、伯氏豚虾虎鱼、狼鲈、美洲红点鲑4种鱼的相似度分别为92.0%、91.5%、90.2%、89.1%,与非洲爪蟾、鸡、人、兔、褐家鼠的序列相似度分别为76.8%、72.8%、72.5%、69.9%、67.3%,表明PGC基因在长期的进化中较为保守。PGC基因由9个外显子和8个内含子组成,内含子剪切位点符合GT-AG规则,在第7含子中发现(GACA)6、(CA)6类型的微卫星序列,第8内含子中发现(TG)5类型的微卫星序列。采用锚定PCR方法获得了PGC 5′侧翼区长1 924 bp的序列,启动子区域位于-40^+10 bp,包含TATA盒以及GATA-1、CdxA、Hand1/E47、AP-1、Nkx-2、S8、FOX J2等转录因子的结合位点。结果为进一步研究该基因的表达、功能及其转录调控特征奠定了分子基础。

胃蛋白酶原C基因多态性在胃癌家系成员中的分布

目的 通过PCR方法检测胃蛋白酶原C基因(pepsinogen C gene,PGC gene)多态在辽宁庄河地区胃癌家系成员基因组中的分布,并进一步分析遗传因素对庄河地区胃癌发生的影响。方法 研究材料为61例胃癌家系成员外周血及42例健康人外周血,通过PCR方法检测胃蛋白酶原C基因多态性。结果 与正常对照组比较,胃癌家系成员组等位基因1出现的频率(0.564)较正常组(0.3659)高且有统计学意义(X^2=5.09,p<0.05)。等位基因1纯合基因型在胃癌家系成员组中的分布频率为0.36,较正常组(0.15)高且有统计学意义(x^2=5.65,p<0.05)。结论 庄河地区胃癌家系高发胃癌与PGC多态有关。本实验结果说明该地区胃癌高发的原因不仅与环境因素有关,而且与遗传因素有关。

重组人源胰岛素原C肽在大肠杆菌中的克隆、表达与纯化(英文)

目的:构建一种新型表达载体(pEDCC),表达并纯化得到人源胰岛素原C肽。方法:将编码截短的门冬酰胺酶突变体(ansB-C),天然C肽,人IgG1铰链区(hinge),额外的酸敏感二肽(DP)以及富含碱性氨基酸的8肽(KRKRKKSR)的核苷酸序列依次分别插入pET28a载体中,构建表达载体pEDCC。在乳糖的诱导下,融合蛋白ansB-C-hinge-DPKRKRKKSRNGS-GR-C-peptide以包涵体形式高效表达。融合蛋白经洗涤和乙醇分级沉淀纯化后,通过酸水解将PKRKRKKSRNGSGR-C-peptide释放出来。C肽N端14肽用胰蛋白酶切割,通过DE52柱与C-peptide分离。结果:构建的表达载体pEDCC序列正确,融合蛋白经分离纯化得到了高纯度的重组人源胰岛素原C肽。结论:以截短的门冬酰胺酶作为融合伙伴,并以富含碱性氨基酸的8肽调节等电点是一种生产重组人源胰岛素原C肽的有效方法。

Nesprin-1在C_2C_(12)肌原细胞系分化过程中的作用

目的探讨Nesprin-1在肌细胞分化过程中的作用。方法将C2C12肌原细胞分化成肌小管,采用Western blot和免疫荧光技术检测Nesprin-1蛋白表达水平和亚细胞定位在肌小管分化成熟过程中的改变;同时利用RNA干扰技术抑制Nesprin-1蛋白的表达,观察其对C2C12肌原细胞分化的影响。结果 Nesprin-1各亚型在C2C12肌原细胞系分化过程中表达水平以及在细胞中的定位有明显改变。Nesprin-1 siRNA组与对照组相比,分化前后C2C12细胞中Nesprin-1蛋白表达明显降低,同时分化后肌组织分化成熟的蛋白标志肌球蛋白(myosin)的表达量以及肌小节的数量比对照组均明显减少(P<0.001)。结论本文证实Nesprin-1了对骨胳肌细胞分化至关重要,不同分子大小Nesprin-1亚型在C2C12肌原细胞分化过程中发挥各自的特殊作用,在该细胞质与细胞核中的也有不同的作用。

幽门螺杆菌相关性胃疾病胃蛋白酶原C的表达研究

目的:探讨幽门螺杆菌(Hpylori)相关性胃疾病胃蛋白酶原C 的表达及其意义. 方法:采用免疫组织化学染色法检测318例胃黏膜标本中胃蛋白酶原C的表达情况;采用HE染色、ELISA及PCR方法检测Hpylori感染情况. 结果:Hpylori阳性组浅表陛胃炎胃蛋白酶原C抗原的过表达率高于Hpylori阴性组(P<0.05,X2=0.032,28/33vs 15/25),Hpylori阳性组萎缩性胃炎胃蛋白酶原C的表达率低于Hpylori阴性组(P<0.01,X2=0.003 4/61 vs9/30), Hpylori阳性组的异型增生和胃癌胃蛋白酶原C的表达率与Hpylori阴性组相比有下降趋势(P>0.05). 结论:Hpylori感染与胃蛋白酶原C的表达密切相关,在胃黏膜炎症中胃蛋白酶原C的表达增加;在萎缩性胃炎、异型增生和胃癌中胃蛋白酶原C的表达降低.

血尿Ⅰ型胶原交联C端肽和Ⅰ型胶原交联N端肽在骨关节结核转移的研究

目的探讨骨关节结核患者血尿Ⅰ型胶原交联C端肽(CTX)和Ⅰ型胶原交联N端肽(NTX)变化水平与结核杆菌骨关节转移程度的相关性。方法选取健康体检人群、肺结核患者和骨关节结核患者各60例,测定三组人群血尿CTX、NTX的含量及血清中骨源性碱性磷酸酶(BALP)、Ⅰ型前胶原C-末端前肽(PICP)、Ⅰ型前胶原N-末端前肽(PINP)变化水平。对比观察三组人群血尿CTX、NTX的含量,血清BALP、PICP、PINP水平,血CTX、NTX和尿CTX、NTX与抗结核治疗效果的相关性。结果骨关节结核组的血CTX、NTX和尿NTX的含量与健康对照组比较均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05),而三组间尿CTX含量差异无统计学意义(P>0.05);骨关节结核患者血清中PICP、PINP明显低于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05),三组间血清BALP差异无统计学意义(P>0.05);血CTX、NTX和尿NTX、CTX与抗结核治疗效果均呈明显正相关(P<0.05)。结论骨关节结核组患者血CTX、NTX和尿NTX含量明显高于健康对照组,在排除骨质疏松症和骨肿瘤等破坏性骨相关疾病的肺结核患者早期检测血尿CTX、NTX含量可作为预测骨关节结核转移的重要参考指标。

降钙素原及C反应蛋白在新生儿感染中的意义

目的探讨降钙素原及C反应蛋白、WBC对新生儿感染诊断中的意义。方法选择感染新生儿60例,健康新生儿60例的血清对降钙素原及C反应蛋白水平及WBC计数。结果与健康组比较,降钙素原及C反应蛋白在感染早期均升高,WBC计数特异性差,有显著性差异。结论两者联合测定能够更早、准确、灵敏地诊断新生儿早期感染疾病。

吸烟对原癌基因c-fos在骨组织表达的影响

目的探讨原癌基因c-fos在吸烟诱导骨质疏松中的可能作用机制。方法 选取吸烟和不吸烟健康成年志愿者各20名,分为吸烟组和非吸烟组,吸烟组患者为每天吸烟20支以上,烟龄不少于10年;非吸烟组患者为不吸烟或每天吸烟不超过1支。各取约1克髂骨松质骨,提取其总RNA和总蛋白,通过RT-PCR测定c-fos mRNA的表达;通过Western blotting测定Fos蛋白表达;通过免疫沉淀法测定Fos蛋白磷酸化程度。结果吸烟组c-fos mRNA表达高于非吸烟组,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blotting检测,吸烟组Fos值高于非吸烟组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 吸烟可以导致人骨组织c-fos基因与Fos蛋白表达增加,提示原癌基因c-fos与吸烟诱导骨质疏松关系密切,可能c-fos表达增高与骨细胞和成骨细胞的凋亡有关。

运动与杏仁核原癌基因c-fos的研究综述

通过对杏仁核的位置、结构、功能及原癌基因的结构、产物的特征、激活和表达的研究进行综述和讨论,提出了该领域今后的研究方向:(1)运动对杏仁核原癌基因c-fos影响;(2)运动后原癌基因c-fos表达的部位深入研究的方向。

胃蛋白酶原C在不同胃疾病中的表达及其与血清sPGC、sPGA的相关性

目的:探讨胃蛋白酶原C(PGC)在不同胃疾病中的表达及其与血清sPGC、sPGA的相关性。方法:选取2010年10月至2015年6月陕西省延安市人民医院消化内科收治的360例不同胃疾病患者临床资料。360例患者中,90例浅表性胃炎,85例萎缩性胃炎,100例胃黏膜糜烂溃疡,85例胃癌。所有患者均采用免疫组织化学染色检测胃黏膜标本中PGC的表达水平,患者血清sPGC、sPGA水平检测方法采用酶联免疫吸附实验法。结果:浅表性胃炎患者PGC抗原均为阳性表达,表达率100%;萎缩性胃炎、胃癌及胃黏膜糜烂溃疡患者PGC抗原阳性表达率分别为34.48%、11.43%、80.00%,PGC抗原阳性表达率随着疾病恶性程度的增加而下降(P<0.05);患者血清sPGC、sPGA的水平各组间比较差异无统计学意义(P>0.05);浅表性胃炎、胃黏膜糜烂性溃疡、萎缩性胃炎、胃癌患者的血清sPGC、sPGA比值随着其病变组织PGC表达水平的降低而降低,呈正相关关系(r=0.297,P=0.001)。结论:PGC组织表达与患者胃疾病的恶性程度关系密切;而PGC抗原组织表达与血清sPGC、sPGA水平具有明显的相关性。

Kruppel样因子4过表达对C_2C_(12)肌原细胞中热休克蛋白25表达的影响

目的观察Kruppel样因子4过表达对热休克蛋白25表达的影响。方法运用稳定转染pcDNA3.1/myc-His(-)和Kruppel样因子4-pcDNA3.1/myc-His(-)两种细胞株,采用逆转录聚合酶链反应观察Kruppel样因子4在生理状态和热休克反应时对热休克蛋白25 mRNA表达的影响;采用Western blot观察Kruppel样因子4在生理状态和热休克反应时对热休克蛋白25蛋白表达的影响。结果在正常状态下,两种细胞热休克蛋白25 mRNA及蛋白表达水平均较低。生理状态下,热休克恢复1 h及3 h Kruppel样因子4过表达细胞株热休克蛋白25 mRNA表达水平明显高于转空载体细胞;至热休克恢复6 h后两组细胞热休克蛋白25 mRNA表达无明显差异。在生理状态及热休克恢复不同时间后,Kruppel样因子4过表达细胞热休克蛋白25蛋白表达水平均较空载体组明显增加。结论在生理状态下和热休克反应中,Kruppel样因子4过表达均能够促进C2C12肌原细胞中热休克蛋白25高表达。

Ⅰ型胶原蛋白C末端交联肽(CTX)与骨质疏松症的相关性研究

目的:探讨Ⅰ型胶原蛋白C末端交联肽(C-terminal cross linked peptide,CTX)与骨质疏松症的相关性。方法:(1)利用双能X线测定89例样本不同部位的骨密度(Bone mineral density,BMD),并按照最新原发性骨质疏松症诊断标准分为骨质疏松组、骨量减少组、骨量正常组。(2)利用ELISA法对不同分组静脉血清中CTX进行测定。(3)统计学分析CTX与不同分组BMD的关系。结果:(1)骨质疏松组、骨量减少组、骨量正常组的CTX与BMD结果显示骨质疏松组的CTX明显高于骨质减少组和骨量正常组P<0.017,有统计学意义;(2)正常组、骨质疏松组、骨量减少组的CTX与相应组的BMD呈负相关;(3)不同性别CTX、BMD之间没有差异,P>0.05。结论:CTX是骨质疏松症的敏感指标,与BMD结合能全面反映骨骼的整体情况。

hGH-双精氨酸C肽人胰岛素原基因的克隆表达及纯化研究

旨在提高基因重组人胰岛素在大肠杆菌中表达的稳定性及表达包涵体蛋白的复性水平。在人胰岛素原N端前融合人生长素N端的一段序列来充当前导肽,同时将C肽设计为两个精氨酸,分10段合成长链寡核苷酸链,利用重叠延伸PCR技术(SOE PCR)扩增得到该基因片段。与表达载体PET-30a连接,转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的融合蛋白采用Ni-NTA亲和层析纯化,纯化后的蛋白经复性、冻干等步骤后用胰蛋白酶,羧肽酶B双酶切再过DEAE Sepharose FastFlow阴离子交换柱,收集洗脱峰。对制备所得的胰岛素用SDS-PAGE,Western blot进行性质鉴定,及皮下注射小鼠测定生物活性。结果显示,目的蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中得到了表达,表达产物以不溶性包涵体形式纯在,约占大肠杆菌总蛋白的30%。经Ni-NTA亲和层析得到的重组蛋白纯度为85%,DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换纯化得到单组分胰岛素。Western Blot显示制备所得的胰岛素具有胰岛素免疫原性,皮下给药注射小鼠活性测定表明具有明显的降血糖活性。获得了一种高效生产基因重组人胰岛素的方法,为研究胰岛素类似物奠定了前期基础同时也为今后探索胰岛素的非注射给药途径提供了原料。