七彩神仙鱼C型凝集素家族成员CD302和MBL的克隆及在病原刺激下的免疫应答

七彩神仙鱼(Symphysodon aequifasciatus)具独特的亲代抚育行为,前期研究发现2种C型凝集素在育幼亲本皮肤中高表达,但表达模式不同,预示着潜在的功能分化。为探究两者潜在免疫功能的差异性,克隆获得了七彩神仙鱼C型凝集素基因SaCD302和SaMBL,并分析了病原刺激下的免疫应答模式。结果显示,SaCD302和SaMBL的开放阅读框(ORF)长度分别为741和795 bp,分别编码246和264个氨基酸。SaCD302的氨基酸序列包含一个信号肽(aa 1—29),一个CTL结构域(aa 32—169)和一个跨膜结构域(aa 184—206)。SaMBL的氨基酸序列包含两个低复杂度区域(aa 32—92和aa 104—121)和一个典型的CTL结构域(aa 137—263)。SaCD302和SaMBL的氨基酸序列与尼加拉瓜湖始丽鱼(Archocentrus centrarchus)对应氨基酸序列的同源性最高。SaCD302在各组织中均有表达,头肾中表达量最高,其次为肝脏和鳃;SaMBL在皮肤中高表达,在肠道、肝脏、脾脏和性腺中低表达。嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染后,SaCD302在脾脏、头肾、肠道和皮肤中的表达量均显著上调,SaMBL仅在头肾、肠道和皮肤中表达上调,且时序性不同,表明二者可能在七彩神仙鱼免疫防御中发挥不同作用。

家蚕C型凝集素16基因(BmCTL 16)的电子克隆及序列特征和表达谱

C型凝集素是在动物先天免疫中发挥重要作用的模式识别受体。从家蚕杂交一代超亲表达的基因中筛选出一个C型凝集素16基因（Bm CTL 16）,通过电子克隆、序列拼接获得了总长度为1 105 bp的序列,其5＇端和3＇端分别为63 bp、385 bp,预测ORF为657 bp,在3＇端终止密码子下游314 bp位置为加尾信号胞质多聚腺苷化特异因子（CPSF）结合位点。预测Bm CTL16编码218个氨基酸,组成蛋白质的氨基酸有20种,数量最多的是亮氨酸（有19个）,蛋白质理论等电点（p I）6.65,分子质量25.124 4 k D。Scan Prosite结构域预测Bm CTL 16存在与其它鳞翅目昆虫CTL一样保守的糖蛋白识别位点CRD。系统进化分析表明Bm CTL 16与烟芽夜蛾、小菜蛾、刺舌蝇、埃及伊蚊的同源CTL序列相似度均高达99%。对电子拼接序列进行RT-PCR验证,扩增片段的测序结果与电子克隆的Bm CTL 16序列完全一致。qRT-PCR分析Bm CTL 16在5龄第1-2天幼虫中肠组织中的表达量较高,之后呈现下降趋势,推测可能是家蚕5龄初期旺盛的生命活动提高了蚕体免疫功能。