下肢动脉粥样硬化闭塞症患者C型凝集素样受体-2水平与介入术后2年支架内再狭窄的关系

目的探讨下肢动脉粥样硬化闭塞症(LEAOD)患者支架植入术后血浆C型凝集素样受体(CLEC)-2水平与术后2年支架内再狭窄的关系。方法选取2016年3月至2018年2月在安顺市人民医院就诊的103例LEAOD患者作为研究对象。采用酶联免疫吸附法检测血浆中CLEC-2水平,分析其与介入术后支架内再狭窄的关系。结果103例患者支架植入术均获成功并随访2年。41例(39.8%)发生支架内再狭窄。再狭窄组和未狭窄组患者血浆CLEC-2水平随时间进展呈降低趋势(P<0.05)。术后7 d血浆CLEC-2评价支架内再狭窄的效能,显著高于术前和术后1 d CLEC-2(P<0.001)。多因素logistic回归分析显示,泛大西洋学会联盟(TASC)Ⅱ分型、术后7 d CLEC-2是LEAOD介入术后支架内再狭窄的独立危险因素(P<0.05)。结论血浆CLEC-2是LEAOD支架植入术后支架内再狭窄的独立危险因素。检测血浆CLEC-2有助于判断LEAOD介入术后再狭窄。

C型凝集素样受体-2在血栓形成中的作用研究进展

C型凝集素样受体-2(CLEC-2)是细胞表面受体C型凝集素超家族的一员。表达于血小板表面的CLEC-2是一种基于免疫受体酪氨酸活化基序的血小板活化受体,可通过与其配体结合参与血小板的活化及聚集。这一生理过程可以避免机体过度失血,但同时也是多种血栓栓塞性疾病的病理基础。在动脉粥样硬化、炎症血栓状态、血管壁完整性的维持、癌症相关血栓形成等病理生理过程中均有CLEC-2及其配体的参与。该文从以上4个方面对CLEC-2在血栓形成过程中的重要作用进行综述。

血小板C型凝集素样受体-2参与肿瘤血行转移的研究进展

肿瘤转移过程极其复杂,研究发现血小板与肿瘤血行转移密切相关,血小板可释放生物活性因子协助肿瘤细胞逃脱免疫监视,促进肿瘤细胞的上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)、增殖和侵袭能力,以加快肿瘤血行转移。近年来研究发现,血小板表面的C型凝集素样受体2(C-type lectin-like receptor-2,CLEC-2)与其配体平足蛋白(podoplanin,PDPN)结合后可激活血小板参与肿瘤的生长、迁徙和转移。应用抗CLEC-2抗体或阻断CLEC-2与PDPN的结合可能是抗肿瘤转移的一个新的研究方向,本文就CLEC-2在肿瘤血行转移中的作用及其临床应用前景进行综述。

可溶性凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1在急性缺血性脑卒中表达及与静脉溶栓预后和静脉溶栓后脑出血转化的关系

目的探讨可溶性凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(sLOX-1)在急性缺血性脑卒中(AIS)表达及与静脉溶栓预后和静脉溶栓后脑出血转化的关系。方法选取2017年3月至2020年6月南京市高淳人民医院AIS病人104例,酶联免疫吸附法(ELISA)法测定血清sLOX-1水平,比较sLOX-1表达高低与病人临床资料的关系,分析sLOX-1与AIS病人静脉溶栓预后和静脉溶栓后脑出血转化的关系。结果相比于低sLOX-1表达组,高sLOX-1表达组病症更加严重,美国国立卫生院卒中量表(NHISS)评分显著增大,白细胞显著升高,肾小球滤过率估算值(eGFR)、尿酸(UA)显著降低(均P<0.05);行重组组织型纤溶酶原(rt-PA)静脉溶栓治疗预后不良组sLOX-1表达显著高于预后良好组[(2.18±0.71)比(1.67±0.53)];多因素logistic回归模型结果发现经过年龄、溶栓时间、NHISS评分、eGFR等校正过后,sLOX-1[OR=3.83,95%CI:(1.77,5.12),P=0.007]仍然是行rt-PA静脉溶栓AIS病人预后的独立危险因素,经过年龄、NHISS评分、溶栓时间等校正过后,sLOX-1[OR=1.84,95%CI:(1.12,2.54),P=0.020]也仍然是AIS病人发生脑出血性转化(HT)的独立危险因素。结论血清sLOX-1是行rt-PA静脉溶栓AIS病人预后的独立危险因素,也是AIS病人发生脑HT的独立危险因素。

凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1在C反应蛋白诱导人脐静脉内皮细胞组织因子表达中的作用

目的研究凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(lectin-type oxidized LDL receptor1,LOX-1)在C-反应蛋白(c-reactive protein,CRP)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)组织因子(tissue factor,TF)表达中的作用。方法用人重组质粒pTracer CMV2-CRP转染HUVECs细胞,分正常对照组、空质粒GFP组和CRP-GFP组(n=3),RT-PCR、Western blot检测TF、LOX-1 mRNA和蛋白表达。Western blot检测各组P-ERK1/2、T-ERK1/2、P-JNK、T-JNK蛋白表达。CRP-GFP组分别加LOX-1阻断剂、ERK1/2阻断剂(U0126)、JNK阻断剂(SP600125),Westernblot检测TF蛋白。结果用表达人CRP的质粒转染HUVECs显著增加LOX-1 mRNA和蛋白表达[(0.70±0.03)vs(0.24±0.01),(0.661 6±0.020 0)vs(0.255 8±0.040 0),P<0.05]、TF的mRNA和蛋白表达[(0.442±0.040)vs(0.146 0±0.030 0),(0.727 4±0.020 0)vs(0.217 4±0.020 0),P<0.05]。CRP启动了ERK1/2 MAPK,未启动JNKMAPK。CRP上调TF表达被ERK1/2阻断剂而非JNK阻断剂阻断.抗LOX-1的中和抗体显著减少CRP诱导的TF mRNA和蛋白表达[(0.264 0±0.030 0)vs(0.442 0±0.040 0),(0.324 4±0.040 0)vs(0.727 4±0.020 0),P<0.05]。结论CRP诱导HUVECs细胞LOX-1表达上调,并通过LOX-1受体这一新途径上调TF表达,且CRP通过ERK1/2 MAPK信号途径非JNK MAPK途径上调了HUVEC细胞TF的表达。

C型凝集素受体Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体制备

目的克隆人C型凝集素受体dectin-2和dectin-3胞外区基因并进行原核表达及制备它们的单克隆抗体。方法利用PCR扩增编码人dectin-2和dectin-3胞外区的基因序列,分别克隆到原核表达载体pET28a(+)中,IPTG诱导基因的原核表达;纯化后免疫Balb/c小鼠,融合并筛选获得克隆化的杂交瘤细胞株,制备Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体;利用ELISA、FACS和Western印迹法检测抗体的效价和特异性;检测Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体是否能够特异性阻断相应受体的功能。结果成功构建原核表达质粒pET28a(+)-Dectin-2和pET28a(+)-Dectin-3,并在E.coli BL21(DE3)中诱导Dectin-2和Dectin-3胞外区的高效表达。纯化目的蛋白后免疫Balb/c小鼠,融合获得8株Dectin-2和12株Dectin-3的阳性杂交瘤细胞。进一步克隆化筛选获得7株Dectin-2和8株Dectin-3的单克隆细胞株,并且其分泌的抗体能够特异结合Dectin-2和Dectin-3胞外区的原核表达蛋白。利用单克隆细胞株制备小鼠腹水,纯化获得Dectin-2和Dectin-3的单克隆抗体。单克隆细胞株D2-7和D3-2产生的抗体能够特异结合RAW中表达的人Dectin-2和Dectin-3蛋白及小鼠骨髓来源巨噬细胞中Dectin-2和Dectin-3蛋白。抗体功能实验显示:单克隆细胞株D2-7和D2-10产生的抗体能够阻断Dectin-2受体介导白念珠菌菌丝态刺激引起的NF-κB激活,而单克隆细胞株D3-1和D3-2产生的抗体能够阻断Dectin-3受体介导白念珠菌菌丝态刺激引起的NF-κB激活,并且具有剂量依赖性及高度特异性。结论成功获得高纯度的Dectin-2和Dectin-3胞外区蛋白,并分别获得了特异、高效价的单克隆抗体。

血清胱抑素C、凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对不稳定型心绞痛的诊断价值

目的探讨血清胱抑素C(CysC)、凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(Lox-1)及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对不稳定型心绞痛(unstable angina pectoris,UAP)的诊断价值。方法选取50例UAP患者为UAP组,30例稳定型心绞痛(stable angina pectoris,SAP)患者为SAP组以及30例健康体检者为对照组。分别检测三组受试患者血清CysC、Lox-1及GM-CSF水平,并绘制受试者工作曲线(ROC)分析各指标对UAP的诊断价值。结果 UAP组患者血清CysC、Lox-1及GM-CSF水平显著高于SAP组和对照组,差异均具有显著性(P<0.05)。UAP组中,随着病情的加重,患者血清CysC、Lox-1及GM-CSF表达水平及阳性率也显著升高,差异具有显著性(P<0.05)。ROC分析显示,CysC、Lox-1、GM-CSF诊断UAP的最佳临界值分别为CysC>0.90mg/L、Lox-1>221.52ng/L、GM-CSF>0.36μg/L,各因子诊断UAP的灵敏度分别为86.0%、64.0%、90.0%,特异度为60.0%、86.7%、76.7%。结论 UAP患者血清CysC、Lox-1、GM-CSF水平异常升高,其浓度随UAP危险程度的增加而增加,测定血清CysC、Lox-1、GM-CSF水平对UAP的诊断具有重要参考价值。

血清脂蛋白相关磷脂酶A_(2)及可溶性凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1与急性心肌梗死患者Gensini积分的相关性

目的分析血清脂蛋白相关磷脂酶A_(2)(Lp-PLA_(2))及可溶性凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(sLOX-1)与急性心肌梗死(AMI)患者Gensini积分的相关性。方法选取2020年3月至2021年7月焦作市人民医院收治的117例AMI患者作为研究组,另选同期126名健康体检者作为对照组。比较两组血清Lp-PLA_(2)、sLOX-1水平。比较不同病变冠状动脉分支及不同Gensini积分患者血清Lp-PLA_(2)、sLOX-1水平。探讨血清Lp-PLA_(2)、sLOX-1水平变化与Gensini积分的相关性。结果研究组血清Lp-PLA_(2)、sLOX-1水平高于对照组(P<0.05);随冠状动脉病变支数增加,Lp-PLA_(2)、sLOX-1水平持续升高,即单支病变患者血清Lp-PLA_(2)、sLOX-1水平低于双支及多支病变患者,双支病变患者血清Lp-PLA_(2)、sLOX-1水平低于多支病变患者(P<0.05);随Gensini积分升高,血清Lp-PLA_(2)、sLOX-1水平持续升高,即轻度患者血清Lp-PLA_(2)、sLOX-1水平低于中度及重度患者,中度患者血清Lp-PLA_(2)、sLOX-1水平低于重度(P<0.05);经Pearson分析显示,血清Lp-PLA_(2)(r=0.506,P<0.001)、sLOX-1(r=0.457,P<0.001)水平与Gensini积分呈正相关(P<0.05)。结论AMI患者体内血清Lp-PLA_(2)、sLOX-1水平呈高表达状态,且其水平随冠状动脉病变支数增加、Gensini积分升高而升高。

凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1的cDNA克隆及在毕赤酵母中的表达(英文)

凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)是氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的主要受体,它与动脉粥样硬化过程密切相关。通过RT-PCR从THP-1细胞系获得LOX-1 cDNA并被克隆到载体pPIC9K的a信号肽的下游。线性化的重组质粒转化Pichia pastoris GS115。阳性转化子经过BMMC液体培养基培养,上清液经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,出现1条在受体菌对照中不曾有的大小约43 kDa的蛋白带。重组蛋白的功能研究在进行中。

血小板受体C型凝集素样受体2在巨核细胞自噬中的作用

目的:用C型凝集素样受体-2(C-type lectin like receptor 2,CLEC-2)缺陷小鼠检测CLEC-2在自噬过程中的作用,从而探究CLEC-2信号通路对巨核细胞发育的影响。方法:怀孕14.5 d的小鼠胚胎取出、分离并培养巨核细胞。体外雷帕霉素处理巨核细胞,检测巨核细胞CLEC-2和CD41的表达。小鼠经雷帕霉素处理后,检测小鼠骨髓自噬蛋白的表达。结果:自噬基因在胎肝来源的巨核细胞中表达,并且表达量很高。小鼠巨核细胞在雷帕霉素处理后,CLEC-2表达下调,提示CLEC-2参与调控自噬。雷帕霉素处理后,与野生型小鼠相比,敲除小鼠的巨核细胞CD41和CD61蛋白表达明显降低(P<0.001)。体内实验发现雷帕霉素能显著增强敲除小鼠LC3蛋白的表达。CLEC-2的缺陷能显著降低自噬紊乱导致的高倍体巨核细胞数。CLEC-2的缺陷降低雷帕霉素诱导胎肝来源的巨核细胞周期相关蛋白Cyclin D1、Cyclin D2的表达。结论:血小板受体CLEC-2在巨核细胞自噬中具有重要的调控作用。

C型凝集素样受体2与急性脑梗死病情程度及脑动脉狭窄的相关性研究

目的探讨血小板表面C型凝集素样受体2(C-type lectin-like receptor 2,CLEC-2)与急性脑梗死病情程度及脑动脉狭窄的相关性。方法前瞻性选取首次发病住院的211例急性脑梗死患者为梗死组,根据入院时NIHSS评分及头部MRA检查结果进行分组,并设105例健康体检者为对照组。所有患者入院当天采集静脉血进行CLEC-2检测,统计分析各组间CLEC-2水平。结果梗死组血浆CLEC-2水平较对照组明显升高(P<0.001),急性脑梗死轻、中、重亚组CLEC-2水平逐渐升高,两两比较差异有统计学意义(P<0.001)。调整混杂因素后,CLEC-2浓度(OR=1.034,95%CI 1.020~1.048,P<0.001)为急性脑梗死患者脑动脉狭窄的独立危险因素。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,CLEC-2预测脑动脉狭窄的曲线下面积为0.862(95%CI 0.812~0.912,P<0.001);最佳截断值为266.40 pg/ml,预测脑动脉狭窄的敏感度为80.3%,特异度为80.9%。结论CLEC-2水平升高能评估急性脑梗死患者病情程度,是脑动脉狭窄独立危险因素,对预测脑动脉狭窄有一定价值。

C型凝集素受体和Toll样受体在原因不明复发性流产患者蜕膜中的表达

目的:研究原因不明复发性流产(URSA)患者蜕膜中树突细胞(DC)特异性细胞间黏附分子-3结合非整合素因子(DC-SIGN)和甘露糖受体(MR)及Toll样受体2(TLR-2)和TLR-4的表达情况。方法:采集URSA患者及正常妊娠人工流产妇女(对照组)的新鲜蜕膜。采用免疫组化和Western blot法检测蜕膜中DC-SIGN、MR、TLR-2和TLR-4蛋白表达,RT-PCR检测蜕膜中DC-SIGN、MR、TLR-2和TLR-4 mRNA表达;流式细胞检测蜕膜中DC表面表达DC-SIGN、MR、TLR-2和TLR-4的水平。结果:与对照组比较,URSA组蜕膜中及DC表面的TLR-2和TLR-4表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),DCSIGN表达水平明显降低(P<0.01)。两组的MR表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:相对于正常妊娠妇女,URSA患者蜕膜中及树突细胞表面的C型凝集素受体(CLRs)弱势表达,而TLRs优势表达。CLRs与TLRs之间的免疫平衡失调可能是URSA发病机制中的重要因素之一。

凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1甲基化在同型半胱氨酸作用下对人内皮细胞存活的影响

目的 :探讨凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)对动脉粥样硬化过程中降低内皮细胞存活率的作用机制研究。方法 :按不同浓度的Hcy对人脐静脉内皮细胞作用分组:对照组(0μM Hcy)、50μM Hcy组、100μM Hcy组、200μM Hcy组和500μM Hcy组;②100μM Hcy+30μM维生素B12+30μM叶酸组(拮抗剂组),各组(n=5)培养液孵育72 h后,采用3-(4,5)-双甲基-2-噻唑-(2,5)-2苯基溴化四氮唑蓝试验检测Hcy对内皮细胞活性的影响;用分光光度比色法检测各组细胞中过氧化氢;酶免法检测氧化低密度脂蛋白、甲基转移酶-1(DNMT-1)含量;荧光定量聚合酶链式反应(PCR)测LOX-1和DNMT-1 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法测LOX-1蛋白的表达;巢式降落式PCR法测LOX-1基因甲基化的改变。结果 :同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞存活率的影响:拮抗剂组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。100、200、500μMHcy组与对照组比较:氧化低密度脂蛋白和过氧化氢的含量、LOX-1信使核糖核酸(mRNA)相对甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)表达量及LOX-1蛋白相对β-肌动蛋白表达量均增加;DNMT-1的含量和mRNA表达、LOX-1基因甲基化程度均降低,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论 :LOX-1低甲基化可能是Hcy致内皮细胞损伤的重要机制之一,其中过氧化氢、氧化低密度脂蛋白和DNMT-1可能起了重要的作用。

巨细胞病毒感染对内皮细胞凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1MRNA表达的影响

目的探讨巨细胞病毒(CMV)感染对人内皮细胞凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1MRNA表达的影响。方法原代培养人脐静脉内皮细胞并传代,CMV感染3～6代细胞,不同时间提取细胞总RNA,采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1MRNA的表达。结果病毒感染6H凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1MRNA表达与对照组相似,病毒感染12、24H与对照组比较明显增强。结论CMV感染上调凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1MRNA表达,可能是CMV参与动脉粥样硬化的机制之一。

阿卡波糖治疗2型糖尿病及对血清炎性因子、抑胃肽、胰升血糖素样肽-1、空腹C肽的影响

目的研究阿卡波糖治疗2型糖尿病(T2DM)及对血清炎性因子、抑胃肽(GIP)、胰升血糖素样肽-1(GLP-1)、空腹C肽(C-P)的影响。方法选择郑州市第一人民医院2014年7月至2018年6月收治的T2DM病人238例,按照随机数字表法分为阿卡波糖组与对照组,各119例。对照组给予甘精胰岛素治疗,阿卡波糖组在对照组基础上给予阿卡波糖治疗。观察两组血清空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 h PG)及糖化血红蛋白(HbA1c)等指标治疗前后的差异,观察GIP、GLP-1、C-P、白介素-4(IL-4)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)等治疗前后水平的变化及两组间的不良反应。结果治疗后,阿卡波糖组FPG(5.07±0.52)mmol/L、2 h PG(7.58±0.77)mmol/L、HbA1c(6.07±0.62)%、GIP(1203.58±123.83)μg/L、IL-6(2.08±0.22)ng/L水平低于对照组(6.22±0.63)mmol/L、(9.71±0.99)mmol/L、(7.18±0.73)%、(1394.38±142.55)μg/L、(2.67±0.28)ng/L水平,IL-4(4.60±0.48)ng/L、IL-10(1.43±0.16)ng/L、GLP-1(26.85±2.67)pmol/L、C-P(2.48±0.26)μg/L水平均高于对照组(4.14±0.44)ng/L、(1.18±0.13)ng/L、(23.64±2.46)pmol/L、(2.21±0.24)μg/L(P<0.05)。阿卡波糖组不良反应发生率(10.92%)与对照组(5.04%)差异无统计学意义(P>0.05)。结论阿卡波糖可有效降低T2DM病人血糖水平,抑制炎症反应,改善GIP、GLP-1、C-P水平,安全可靠。

血清可溶性凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1水平与男性吸烟者合并冠心病的相关性研究

目的探讨血清可溶性凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1（sLOX-1）水平与男性吸烟者合并冠心病相关性。方法该研究共纳人216例男性吸烟者，根据患者是否合并冠心病将所有患者分为冠心病组（n=95）及非冠心病组（n=121），比较两组的血清sLOX-1水平，通过Logistic回归分析评价血清sLOX-1水平与合并冠心病的相关性。结果冠心病组患者血清sLOX-1水平（678～2104ng／L，平均1652ng／L）显著高于非冠心病组患者（382～1334ng／L，平均829ng／L）（P〈0．01）。多元Logistic回归分析显示血清sLOX-1水平与男性吸烟者合并冠心病存在正相关性（优势比为2．136，95％可信区间为1．227～3．401，P〈0．01）。结论高血清sLOX-1水平是男性吸烟者罹患冠心病的独立危险因子，检测血清sLOX-1水平可能成为预测男性吸烟者合并冠心病风险的一种重要的手段。

重组人凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1在毕赤酵母中表达条件的优化

采用单因子和正交试验对毕赤酵母重组菌株产生人凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(rhLOX-1)的发酵过程进行了优化,确定了最佳发酵条件:0.8%甲醇,1.8%酪蛋白水解物,初始pH 7.0,3×接种量。在此培养条件下,rhLOX-1在毕赤酵母重组菌株中的表达量可超过100 mg/L,比对照提高了1倍以上。本研究为大规模发酵制备rhLOX-1蛋白奠定了基础,更好地满足了LOX-1的理论研究及新药筛选的需要。

蛛网膜下腔出血后迟发性脑缺血患者血清可溶性凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1水平的变化及其意义

目的探讨蛛网膜下腔出血(SAH)后发生迟发性脑缺血(DCI)患者的血清可溶性凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(sLOX-1)水平的变化及其意义。方法根据是否发生DCI将132例SAH患者分为DCI组(34例)和无DCI组(98例)。采用酶联免疫吸附法检测患者的血清sLOX-1水平,并对结果进行分析。结果 DCI组患者血清sLOX-1水平[1325(313～2698)pg/ml]较无DCI组[757(128～1762)pg/ml]明显升高(P<0.01)。Logistic回归分析显示,血清sLOX-1水平升高是SAH患者发生DCI的独立危险因素(OR=2.362,95%CI:1.276～3.707,P<0.05)。结论血清sLOX-1水平升高可作为预测SAH患者发生DCI的重要血清学标记物。

中国恒河猴DNGR-1分子C型凝集素样结构域在大肠杆菌系统表达

目的获得恒河猴C型凝集素结构域家族9的A成员(Clec9A)基因编码区序列;体外表达CLEC9A的C型凝集素样结构域(CTLD)。方法利用Clec9A基因特异引物,反转录PCR扩增中国恒河猴Clec9A基因编码区,亚克隆至pGEM-T载体,获得pGEM-T-DNGR质粒并进行测序。构建CLEC9A分子的CTLD区原核表达质粒pET-32a-CTLD,转化BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,并用SDS-PAGE和Western blot法对目的蛋白进行鉴定。结果 PCR扩增得到726 bp的Clec9A编码区全长,测序和序列比对发现恒河猴CLEC9A编码区的核苷酸序列与人和小鼠的同源性分别为95.0%和73.1%,推测的氨基酸同源性分别为91.7%和57.3%。体外表达获得相对分子质量(Mr)约32 000的CTLD融合蛋白,Western blot方法鉴定发现其与人DNGR-1分子具有相似的抗原性。结论中国恒河猴Clec9A基因与人的高度相似并能编码与人CTLD抗原性相似的蛋白。

血清Visfatin CTRP12半乳糖凝集素-3对2型糖尿病合并脑梗死诊断及预后评估的价值

目的 探讨血清内脂素、C1补体肿瘤坏死因子相关蛋白12、半乳糖凝集素-3对2型糖尿病合并脑梗死诊断及预后评估的应用价值。方法 将72例2型糖尿病合并脑梗死患者设为研究组,另选取80例单纯2型糖尿病患者设为对照组。比较入院时两组血清内脂素、C1补体肿瘤坏死因子相关蛋白12、半乳糖凝集素-3水平,采用受试者工作特征曲线分析各血清指标诊断价值,比较治疗7 d及治疗14 d不同预后患者血清内脂素、C1补体肿瘤坏死因子相关蛋白12、半乳糖凝集素-3水平及颈动脉内膜中层厚度,采用Pearson相关性分析法分析各血清指标与颈动脉内膜中层厚度、格拉斯哥预后量表评分关联性及预后预测价值,并采用Kaplan-Meier曲线进行生存分析。结果 入院时研究组血清内脂素、半乳糖凝集素-3水平显著高于对照组(P<0.01),C1补体肿瘤坏死因子相关蛋白12水平显著低于对照组(P<0.01)。血清内脂素、C1补体肿瘤坏死因子相关蛋白12、半乳糖凝集素-3联合诊断2型糖尿病合并脑梗死的曲线下面积最大,为0.878。治疗第7 d、第14 d预后良好组血清内脂素、半乳糖凝集素-3水平及颈动脉内膜中层厚度显著低于入院时(P<0.01),且显著低于预后不良组(P<0.01),C1补体肿瘤坏死因子相关蛋白12水平显著高于入院时(P<0.01),且显著高于预后不良组(P<0.01);治疗第14 d预后不良组血清内脂素及半乳糖凝集素-3水平显著低于入院时(P<0.05或0.01)。血清内脂素、半乳糖凝集素-3水平与颈动脉内膜中层厚度呈显著正相关(P<0.05),C1补体肿瘤坏死因子相关蛋白12水平与颈动脉内膜中层厚度呈显著负相关(P<0.05)。入院第14 d内脂素预测2型糖尿病合并脑梗死预后的曲线下面积最大,为0.808。Kaplan-Meier曲线分析显示,血清内脂素、C1补体肿瘤坏死因子相关蛋白12、半乳糖凝集素-3的生存曲线比较差异有统计学意义(P<0.05或0.01)。结论 2型糖尿病合并脑梗死患者存在血清内脂素、C1补体肿瘤坏死因子相关蛋白12、半乳糖凝集素-3异常表达情况,与颈动脉内膜中层厚度、格拉斯哥预后量表评分关系密切,可作为早期诊断、预后评估的检测指标,为临床治疗指明新方向。