C型尿钠肽在动物卵巢表达及对生殖机能影响的研究进展

C型尿钠肽(C-type natriuretic peptide,Cnp)为尿钠肽家族成员之一,广泛分布于动物大脑、肾脏、心脏及血管等组织,具有维持心血管系统功能稳态、调控细胞增殖及促进骨骼生长等功能。普遍认为哺乳动物有3种钠尿肽受体(Natriuretic peptide receptor,NPR):NPR1,NPR2和NPR3。Cnp主要通过结合NPR2受体激活下游信号通路,发挥生物学作用。Cnp信号传导通路的组成成分主要包括:配体(Cnp)、跨膜受体(NPR2)及cGMP等。当Cnp分子与跨膜受体NPR2结合后,使受体的激酶同型区域(kinase homology domain,KHD)构象发生变化,进而激活鸟苷酸环化酶,将GTP转化为cGMP后激活下游信号通路。目前,许多研究表明Cnp及受体在雌性动物卵巢上表达模式相似,Cnp主要在卵泡壁层颗粒细胞上表达,NPR2受体主要在卵丘颗粒细胞上表达。另外,动物体内卵泡生长期间,Cnp和受体Npr2表达受激素调控,FSH通过雌激素介导促进卵泡颗粒细胞Cnp和受体Npr2表达;同时卵母细胞通过分泌卵母细胞分泌因子促进了颗粒细胞Npr2表达。LH可能通过表皮生长因子信号通路降低卵泡颗粒细胞Cnp和受体Npr2表达。值得注意的是,研究表明Cnp与FSH功能类似能够促进动物卵泡发育,有利于卵丘颗粒细胞的形成,并能诱导一些与卵泡成熟和类固醇合成相关的颗粒细胞基因表达,揭示卵泡颗粒细胞分泌的Cnp与FSH具有类似的功能,作用于颗粒细胞上的受体分别经由cGMP和cAMP的信号通路影响颗粒细胞基因表达,刺激卵泡生长,促进卵母细胞成熟。另外,近年研究揭示Cnp是动物体内维持卵母细胞减数分裂阻滞的关键物质,卵泡壁层颗粒细胞分泌的Cnp,作用于卵丘颗粒细胞上的受体NPR2,激活鸟甘酸环化酶后将cGTP转化为cGMP,cGMP进入卵母细胞后抑制磷酸二酯酶phosphodiesterase,PDE)的活性,维持卵母细胞内高水平的cAMP,卵母细胞内高水平的cAMP通过激活蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)使成熟促进因子(maturation promoting factor,MPF)的催化亚基磷酸化,进而抑制MPF的活性、维持减数分裂阻滞,但对裸卵没有影响,说明Cnp通过作用卵丘颗粒细胞间接影响卵母细胞减数分裂成熟。此外,研究表明Cnp体外前处理卵丘卵母细胞复合体,有利于卵母细胞胞质成熟,提高了成熟受精后的发育能力。综上,动物体内卵泡生长期间,卵巢内产生的Cnp可能通过影响颗粒细胞的正常功能,在维持卵母细胞减数分裂阻滞的同时促进胞质成熟,保证成熟受精后具有较高的发育能力。基于此,Cnp在用作生理性的减数分裂阻滞剂增强家畜卵母细胞体外发育方面将具有重要的应用前景。因此,论文综述了Cnp结构、信号转导通路、在动物卵巢上表达及对卵巢生殖机能的影响。

C型尿钠肽信号转导机制及其对雌性动物生殖机能的调控

C型尿钠肽(C-type natriuretic peptide,CNP)为尿钠肽家族成员之一,在维持动物心血管系统功能稳态、促进骨骼生长及调控细胞增殖等方面发挥了重要作用。研究表明,CNP是动物体内维持卵母细胞减数分裂阻滞的关键物质,在维持卵母细胞减数分裂阻滞的同时,促进了卵泡发育和卵母细胞成熟。另外,CNP在调控动物物妊娠和胎儿发育方面亦发挥了重要作用。因此,本文综述了CNP结构、信号转导机制及对雌性动物生殖机能的影响,为科学合理的调控动物卵泡发育、促进卵母细胞成熟及维持妊娠和胎儿发育,进而提高家畜的繁殖力提供理论基础。

C型尿钠肽的作用机制及其对动物生殖调控的研究进展

C型尿钠肽(CNP)属于尿钠肽家族,其结构较为保守,在各种动物体内分布广泛,主要通过自分泌和旁分泌方式发挥生物学作用。C型尿钠肽受体NPR-B通过第二信使cGMP传递信号。CNP在动物生殖中发挥重要作用。在雄性动物中,CNP通过CNP/NPR-B/cGMP级联效应调节精子活力、促进生殖细胞发育、对阴茎勃起具有调节作用;在雌性动物中,CNP作为一种卵母细胞减数分裂抑制因子促进卵泡发育、增加促性腺激素刺激后的排卵数量。CNP作为双相体外前成熟系统的核心抑制剂大大提高卵母细胞体外成熟率。文章对CNP结构、功能和调控机制进行综述。

C型利尿钠肽对AGEs抑制的利尿钠肽B受体及受体后信号的调节作用

目的:探讨C型利尿钠肽(CNP)对晚期糖基化终末产物(AGEs)抑制的利尿钠肽B受体(NPR-B)及受体后信号的影响。方法:体外培养人肾小球系膜细胞,分别用免疫荧光染色法、酶联免疫吸附分析法和流式细胞术观察CNP和AGEs作用下的NPR-B免疫荧光表达、细胞内cGMP水平和NF-κBp65活性亚基的表达。结果:CNP可以显著上调NPR-B的荧光表达、显著升高AGEs抑制的细胞内cGMP浓度(P<0.001)及抑制AGEs刺激的NF-κBp65活性亚基的表达。结论:CNP能够调节AGEs影响的NPR-B/cGMP信号及NF-κB活性,并且可能通过NPR-B/cGMP途径发挥抑制NF-κB活性的作用。

动物C型尿钠肽对卵巢表达和生殖机能的影响研究

尿钠肽是一组参与维持动物机体水盐平衡、血压稳定、心血管、肾脏等器官组织功能稳定的多肽,主要包括心房尿钠肽、脑尿钠肽、C型尿钠肽(Cnp)。C型尿钠肽是一种自分泌及旁分泌因子,可以维持心血管系统功能稳态,调控细胞增殖及促进骨骼生长等作用,有利于动物生殖机能的稳定与提升。本文介绍了C型尿钠肽的结构及作用机制,分析了对卵巢和生殖机能的影响。

小鼠卵泡内M-CSF和NPPC的表达情况及相互影响

目的观察小鼠卵泡中巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)及其受体(M-CSFR)对C型尿钠肽前体(NPPC)表达的影响,探讨其是否参与减数分裂恢复中的信号传导。方法通过培养小鼠卵泡,根据培养基的不同分为5组,分别为空白对照组:置于37℃MEMα培养液中培养;人绒毛膜促性腺激素(HCG)组:在MEMα培养液中滴入HCG 5IU;M-CSF组:在MEMα培养液中加入M-CSF 200ng/ml;GW2580组:在MEMα培养液中加入M-CSFR阻滞剂GW25801μmol/L;M-CSF+GW2580组:在MEMα培养液中同时加入M-CSF 200ng/ml及GW25801μmol/L。分别于0.5、1、2、4h收集卵泡,采用荧光定量聚合酶链式反应检测各组卵泡内M-CSF、M-CSFR及NPPC mRNA表达水平。结果空白对照组M-CSF、M-CSFR mRNA表达水平呈上升趋势,而HCG组M-CSF、M-CSFR mRNA均呈低水平表达。空白对照组NPPC mRNA未见明显增减,而HCG组可见NPPC mRNA先逐步上升后快速下降,并在2h达到峰值。M-CSF组NPPC mRNA变化曲线与HCG组相类似。GW2580组和M-CSF+GW2580组NPPC mRNA表达水平与空白对照组未见明显差异。结论黄体生成素峰在卵泡内可能经由M-CSF介导的一系列信号传导而影响NNPC的表达,最终使得减数分裂恢复。

减数分裂恢复前期小鼠卵巢组织中M-CSF和NPPC的表达曲线

目的通过建立促排卵小鼠模型,研究减数分裂恢复前期小鼠卵巢组织中巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)和其受体(M-CSFR)、C型尿钠肽前体(NPPC)及其编码的C型尿钠肽(CNP)表达曲线及其相互关系。方法建立促排卵小鼠模型,在人绒毛膜促性腺激素(hCG)促排卵后0、0.5、1、2、4 h分别以免疫组化和RT-PCR方法检测卵巢组织中M-CSF、M-CSFR、NPPC蛋白及mRNA的表达水平。结果促排卵后,M-CSF、M-CSFR蛋白及mRNA表达水平均呈下降趋势,而NPPC mRNA表达水平呈上升趋势,并在1 h达峰值后显著下降,CNP表达水平在2 h上升至峰值后,随即快速下降至较低水平。结论排卵前促黄体生成素峰后,卵巢组织中M-CSF及其受体表达显著下降,引起一系列信号传导,导致CNP表达水平在2 h达到峰值,随即快速下降至较低水平,最终卵母细胞减数分裂恢复及排卵。

寡核苷酸微阵列法检测冠心病患者心血管易感基因SNPs

目的研究13个心血管易感基因中17个SNPs与冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary atherosclerotic heartdisease,CHD)的关系。方法采用寡核苷酸微阵列技术检测并分析32例冠心病患者和30例健康对照者,涉及RAAS和内皮功能相关基因、载脂蛋白等13个基因17个SNPs的基因型频率。结果病例组中ACEAlu和NOS3298偏离Hardy-Weinberg平衡(χ2分别为11.2和28.0)。ANP2238C、ApoBEcor1(-)和KCNQ1140G在中国人群中的分布频率小于5%。NPRC-55在病例组和对照组中的基因频率分布的差异具有统计学意义(P<0.05)。其他SNPs的频率分布差异未检验出。结论RAAS中的血管紧张素转换酶(ACE)的Alu插入与缺失变异和与内皮系统功能相关的内皮型一氧化氮合成酶(NOS3)的E298D以及C型尿钠肽受体(natriuretic peptide receptor C,NPRC)基因调控区域的-55位A的突变可能是导致中国人群冠心病发病的危险因素。

平胃胶囊对肝郁脾虚型功能性消化不良大鼠胃肠动力的影响

目的 探讨肝郁脾虚型消化不良(FD)的发病机制及平胃胶囊促胃肠动力的干预机制。方法 将48只♂Wistar大鼠随机分为正常组(10只)和造模组(38只)。模型组采用复合因素造模法制备肝郁脾虚型FD大鼠模型,持续造模10 d。将造模成功的35只大鼠随机均分为模型组、平胃胶囊低、中、高剂量组和阳性组(莫沙必利),连续给药21 d,每日2次。采用RT-qPCR法、免疫组化SP法、蛋白质免疫印迹法检测各组C型钠尿肽(CNP)、B型钠尿肽受体(NPR-B)、环磷酸鸟苷(cGMP)依赖性蛋白激酶((Prkg1)的表达。结果 与正常组比较,模型组CNP、NPR-B、Prkg1的mRNA表达、平均光密度值及蛋白表达均显著升高,表明造模成功。与模型组比较,平胃胶囊低、中、高剂量组大鼠CNP、NPR-B、Prkg1 mRNA的表达降低,阳性组大鼠CNP、NPR-B mRNA的表达降低。除平胃胶囊高剂量组Prkg1的表达水平降低无统计学意义外,其余各药物干预组CNP、NPR-B、Prkg1的表达显著降低。与模型组大鼠比较,除平胃胶囊低剂量组大鼠CNP蛋白的表达增加外,其余各组CNP、NPR-B、Prkg1蛋白的表达明显降低。结论 肝郁脾虚型FD模型大鼠存在CNP/NPR-B/cGMP信号通路改变;平胃胶囊可能与通过下调该信号通路来促进胃肠动力。