Ras相关C3肉毒杆菌毒素底物1在肺部疾病中作用及机制的研究进展

Ras相关C3肉毒杆菌毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,RAC1)是Ras GTPase超家族的重要成员,在细胞的运动、增殖、黏附等方面发挥核心作用,同时还参与调节血管通透性以及细胞屏障功能。近年来,RAC1在多种肺部疾病发生、发展过程的作用逐渐受到关注,并逐渐成为肺部疾病研究的新方向。本文系统阐述了RAC1的生物学特性并总结了其在肺肿瘤、慢性阻塞性肺疾病、肺损伤和动脉型肺动脉高压中的功能及分子机制,以期为肺部疾病的治疗提供新思路。

植物乳杆菌C88在酸奶中的应用

将植物乳杆菌C88及YO-MIX发酵剂应用于益生菌酸奶生产中,并对酸奶的理化指标、感官进行了测定、评价。结果显示:L.plantarum C88对酸奶样品的商业菌种活菌数、pH值、滴定酸度、凝胶强度、持水力等均无不良影响(P>0.05);在乳中存活能力较好;可提高酸奶样品的黏度、凝胶强度(P>0.05);感官评定结果也表明,C88菌株发酵的酸奶口感更加细腻、绵滑、黏稠、均匀,香气更加浓郁,更加符合国人的口味习惯,具有良好的生产开发前景。

土壤农杆菌C_(58)遗传转化东北红豆杉的初步研究

用土壤农杆菌C58(AgrobacteriumtumefaciensC58)对东北红豆杉(Taxuscuspidata)不同外植体和不同生长时期的愈伤组织进行了不同时间的感染,结果表明,20d龄的愈伤组织对C58菌比较敏感.感染时间为5min时冠瘿诱导率较高(15.0%).对在无激素B5培养基上得到的白色松软的冠瘿组织分析检测发现,有特异的胭脂碱(nopaline)存在,并具有产生紫杉醇的能力.

分枝杆菌甾酮C_(1,2)位脱氢酶基因敲除的研究

利用分枝杆菌对植物甾醇进行边链降解可产生4-AD(4-烯-雄甾-3,17-二酮)和ADD(1,4-二烯-雄甾-3,17-二酮),ADD由4-AD在C1,2位脱氢酶(ksdD)作用下脱氢产生,这两种物质在化学结构上高度相似,难以分离。首先扩增出部分ksdD基因,大小为631bp,并以此为基础构建打靶载体pUC19-MK。将pUC19-MK电转分枝杆菌感受态,通过同源重组敲除分枝杆菌染色体上正常的ksdD基因,使C1,2位脱氢酶失活,以达到4-AD大量积累的目的。结果通过初筛筛选出5株转化子,进行甾体转化实验,发酵144h时,1号转化子的4-AD生成率达到17.52%,比出发菌株提高了192%,而此时ADD的生成率仅为6.12%,比出发菌株降低了89.9%。

猪丹毒杆菌C43005株的制备及检定

为研究猪丹毒杆菌C43005株的菌种特性,制备了一批猪丹毒杆菌C43005株并对菌种的真空度、剩余水分、形态、培养特性、生化特性、血清学特性、毒力、免疫原性等参数进行检定,重点对该菌种的毒力进行重复试验并对影响毒力的因素进行分析。结果表明,菌种的真空度、剩余水分、形态、培养特性、生化特性、血清学特性、免疫原性均符合《中华人民共和国兽用生物制品规程》二〇〇〇版相关质量标准的规定,毒力试验结果明显受培养基质量和动物个体差异的影响。本研究可以为猪丹毒杆菌C43005株的制备和检定提供参考依据。

枯草芽孢杆菌C1-B941的D-核糖发酵中间试验

使用转酮醇酶变异株—枯草芽孢杆菌C1－B941进行了D－核糖发酵中间试验。3000L发酵罐试验结果表明，发酵培养基中的葡萄糖浓度为18％时，发酵周期约为64h，发酵转化率达36．84％。发酵液经离子交换树脂纯化后，可以直接用于生产VBZ合成的中间体—N－D－核糖醇基－3，4－二甲苯胶。

腐蹄病C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因的克隆与表达载体的构建

用 PCR技术从腐蹄病 C型节瘤拟杆菌克隆出具有免疫保护性抗原 0 .85kb纤毛蛋白基因 ( pili基因 ) ,利用该基因构建了纤毛蛋白基因表达载体。提取 C型节瘤拟杆菌染色体DNA;用所设计的专一性引物进行 PCR,扩增出 pili基因 ;将 pili基因克隆于 TE载体 ,TE-pili重组质粒 pili基因序列测定结果正确 ,用 Eco R 酶切 ,低熔点胶回收 pili基因片段 ,经 klenow补平后 ,用 T4DNA连接酶将其与中间载体p PLλ连接 ,将 pili基因克隆于 p PLλ载体 ,经Bam H 、Bam H +Hind 、Dral酶切鉴定 pili基因正向插入 p PLλ载体 ;扩增 p PLλ-pili重组质粒 ,用 Bam H 酶切出 2 .1 kb大小片段 ,回收后 ,与 PME2 90表达质粒连接 ,转化宿主细胞PAK/ 2 pfs中 ,对获得的重组质粒用 Bam H 酶切 ,出现 2 .1 kb大小的带 。

腐蹄病C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因工程疫苗对家兔的免疫试验

将转化 C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因表达子粒的工程菌 PAK/ 2 pfs C在含羧苄青霉素营养肉汤培养基中培养 ,用 Mg Cl2 法在培养物上清中提取表达产物 (纤毛蛋白 )。将表达的纤毛蛋白产物用弗氏完全佐剂乳化 ,制成疫苗。用疫苗免疫 3只健康家兔 ,2 1 d后再次接种 ;定期采血 ,用对流免疫电泳和 K凝集实验检测试验家兔的体液免疫应答及抗体水平。结果发现 ,免疫 7d即可产生相应抗体 ,2 1 d后抗体效价达到 80 0 0×以上 ,而且高滴度抗体可维持 6个月以上。试验表明 ,腐蹄病

腐蹄病C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因的克隆与表达

用 PCR从腐蹄病 C型节瘤拟杆菌扩增出具有免疫保护性抗原 0 .85 kb纤毛蛋白基因 (pili基因 ) ,并构建了该基因的表达载体。转化宿主细胞 PAK/2 pfs,在营养肉汤中进行 pili基因的表达。培养 18～ 2 4h后 ,收集培养液上清 ,加入 0 .1mol/L Mg Cl2 ,离心提取重组纤毛蛋白。用羊抗兔 C型节瘤拟杆菌抗血清与提取的纤毛蛋白进行对流免疫电泳试验 ,结果表达的重组纤毛蛋白有特异性 ;用 SDS- PAGE和 Western- blot证明表达的蛋白是 C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白。

产广谱细菌素米酒乳杆菌C2发酵培养基的研究

为了提高米酒乳杆菌C2发酵产细菌素的水平,对发酵培养基的组成进行研究。采用琼脂扩散法,以金黄色葡萄球菌为指示菌,对发酵的基础培养基、碳源、氮源、无机盐和氨基酸对细菌素产生的影响进行研究,并确定最佳的培养基组成。实验结果表明:米酒乳杆菌C 2发酵产细菌素的最佳基础培养基为SL培养基,培养基中的碳源、氮源、无机盐及补加氨基酸对细菌素产生的影响显著。当培养基的组成为:葡萄糖20 g.L-1,酵母浸粉25 g.L-1,MgSO4.7H2O 0.38 g.L-1,L-半胱氨酸1 g.L-1,柠檬酸三铵2 g.L-1,乙酸钠2.5 g.L-1,吐温80 1 ml.L-1时细菌素的产量最大,抑菌圈直径可达28.97 mm。

米酒乳杆菌素C2生物稳定性的研究

从发酵酸菜中筛选到一株产新型广谱细菌素的米酒乳杆菌C2,为了促进这种新型广谱米酒乳杆菌素C2在食品中的应用,本文对其生物稳定性进行了研究。采用琼脂扩散法,以金黄色葡萄球菌为指示菌,研究了温度、pH、无机盐、有机溶剂和表面活性剂对米酒乳杆菌素C2生物稳定性的影响。结果表明:米酒乳杆菌素C2具有较强的热稳定性,在121℃处理15min后抑菌活性仅降低了19.1%。在pH3.0～8.0,米酒乳杆菌素C2的抑菌活性很稳定,抑菌活性损失小于20%。当无机盐浓度低时,抑菌活性损失较小,而当无机盐浓度较高时,抑菌活性损失较大,最大可达46%。有机溶剂、表面活性剂对米酒乳杆菌素C2的抑菌活性的影响不显著。

腐蹄病C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因工程疫苗对绵羊的免疫试验

将转化C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因表达质粒的工程菌PAK/2pfsC在含羧苄青霉素的营养肉汤中表达,用MgCl2法在培养物上清中提取表达产物(纤毛蛋白)。将表达的纤毛蛋白用弗氏完全佐剂乳化,制成疫苗,疫苗免疫4只健康绵羊,定期采血,用对流免疫电泳和K凝集试验检测实验绵羊的体液免疫应答及抗体水平。结果发现,免疫后5d即可产生相应抗体,21d后抗体效价达到1∶4000以上。试验表明,腐蹄病C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因工程疫苗对绵羊具有较好的免疫应答和免疫保护性。

高产超氧化物歧化酶芽孢杆菌C328菌株产酶培养基的研究

研究了芽孢杆菌(Bacilluscereus)C328SOD(Superoxidedismutase)生产菌株在发酵培养过程中培养基种类、碳氮比以及补充碳氮源对产酶的影响.结果表明,C328菌株发酵产酶率与培养基种类、复配碳氮比有密切关系.培养基浓度为10%时,对菌株生长及产酶有明显的促进作用,超过13%则抑制SOD酶产生.筛选出最佳产酶发酵农副产品培养基和优化配比组合产酶培养基.

腐蹄病C型节瘤拟杆菌纤毛蛋白基因的克隆与序列分析

提取C型节瘤拟杆菌染色体DNA。用PCR技术从腐蹄病C型节瘤拟杆菌克隆出具有免疫保护性抗原 0 .85kb纤毛蛋白基因 ( pili基因 ) ,将PCR产物pili基因克隆于TE载体 ,在含X - gal和IPTG的AmpLB平板上 ,挑选白色单一菌落进行质粒的筛选 ,用EcoR1酶切提取重组质粒 ,琼脂糖凝胶电泳 ,出现一条 0 .85kb的条带 ,从而筛选出TE - pili重组质粒。对 pili基因进行序列测定 ,结果与国外报道的 pili基因序列一致。

C型副鸡禽杆菌山东株的分离及PCR鉴定

山东某免疫鸡传染性鼻炎(A型)灭活疫苗的蛋鸡场,在疫苗保护期内发生疑似鸡传染性鼻炎感染。通过对患病鸡进行剖检、细菌分离、PCR鉴定和血清型鉴定,结合HMTp210基因Region 2序列测序并分析,最终确定引起该蛋鸡场发病的病原是C型副鸡禽杆菌。

抗单增李斯特菌枯草芽孢杆菌C3增菌培养条件优化

枯草芽孢杆菌对单增李斯特菌有强烈抑制作用,该文对其增菌培养基和培养条件进行优化,为今后将其应用于食品和饲料奠定基础。在对培养基成分和培养条件进行单因素试验的基础上,设计5因素4水平正交试验对培养基成分进行优化。结果表明,培养基成分优化为葡萄糖1.0%,酵母浸粉1.0%,NaCl 0.5%,KH_2PO_40.2%,MgSO_4·7H_2O 0.2%,培养条件优化为pH5.4,装液量50 m L/250 m L,接种量3%,温度37℃,150 r/min培养14 h,在此条件下,活菌数可达到7.1×10^(10) CFU/m L,比优化前提高了7.89倍。

植物乳杆菌C010产细菌素的分离纯化及理化稳定性分析

为从植物乳杆菌C010 (Lactobacillus plantarum C010)发酵液中分离提纯出细菌素,实验采用硫酸铵沉淀、有机试剂萃取、pH吸附解析3种方法对L.plantarum C010发酵液进行粗步提取,通过Sephadex G-25、Sephadex LH-20凝胶层析结合半制备液相色谱法分离出单一抑菌活性组分物质,并对其结构及理化稳定性进行分析。结果表明,L.plantarum C010发酵液的3种粗提方法中,有机试剂萃取显著优于硫酸铵盐析和吸附解析(P<0.05);再经凝胶层析和半制备液相色谱分离得到单一组分抑菌活性物质,经EI质谱(electron ionization, EI)和核磁共振图谱分析,该活性物质分子质量为260.116 1 Da的环(L-苯丙氨酰-反式-4-羟基-L-脯氨酸)二肽,为首次从乳酸菌中分离提取到的细菌素(命名为Plantarum C010)。进一步理化稳定性分析,该细菌素对多类蛋白酶耐受性强,耐热性强、耐强酸,但pH>5.0时,对韩国假单胞菌PS1和梭状芽胞杆菌J4抑菌活性显著下降(P<0.05)甚至失活。该结果为L.plantarum C010所产细菌素的提纯及应用开发提供数据基础。

一株产抗单增李斯特菌细菌素的枯草芽孢杆菌C3产芽孢条件的优化

枯草芽孢杆菌C3可产抗单核细胞增生李斯特菌的细菌素,有良好的抗逆性,具备开发为微生态饲料制剂的潜力。为提高该菌的芽孢数量和产孢率,对其产芽孢条件进行优化。通过单因素试验及正交试验对枯草芽孢杆菌C3的产孢培养基和培养条件进行研究。结果表明,优化后的产芽孢培养基为麸皮1.0%,花生饼粉1.0%,CaCl_2 1.0%,pH 7.5;优化后的培养条件为装液量50 m L/250 m L,接种量2.0%,摇床温度40℃,160 r/min,培养时间36 h。在优化条件下,芽孢数达41.60亿CFU/m L,产孢率为91.42%。