C激酶底物蛋白、人类表皮生长因子受体2与胃癌患者临床病理特征的相关性

目的探讨豆蔻酰化富丙氨酸C激酶底物蛋白(MARCKS)和人类表皮生长因子受体2(HER2)与胃癌患者临床病理特征的相关性。方法2018年3月到2021年3月,选择我院收治的60例胃癌患者作为观察组,选择同期60例良性胃部肿瘤患者作为对照组,应用免疫组化法检测两组受检者MARCKS和HER2的表达水平,并分析观察组织中MARCKS、HER2蛋白表达与胃癌患者临床病理特征的关系。结果观察组患者MARCKS、HER2阳性率均明显高于对照组(P<0.05);观察组中,MARCKS、HER2阳性与阴性患者性别、年龄、肿瘤大小比较无明显差异(P>0.05),而TNM分期、淋巴结转移、组织分化程度差异有统计学意义(P<0.05);Spearman相关分析显示,TNM分期、淋巴结转移、组织分化程度与MARCKS和HER2表达呈正相关(P<0.05)。结论胃癌组织中,MARCKS、HER2蛋白表达升高,且MARCKS和HER2蛋白表达水平与胃癌患者的TNM分期、淋巴结转移和组织分化程度呈正相关,可为胃癌的临床诊断和预后评估提供参考价值。

高脂血症大鼠心脏组织中src抑制的C激酶底物表达的变化

目的观察高脂饲料喂养的大鼠心脏组织中src抑制的C激酶底物(SSeCKS)的表达变化,探讨高脂血症对SSeCKS表达的影响。方法高脂饮食组(n=8)和正常饮食组(n=8)SD大鼠分别经高脂饲料和普通饲料喂养16周后,测血清总胆固醇及甘油三酯;用HE染色观察心脏病理学改变;用免疫组织化学法检测SSeCKS在心脏的表达;用免疫荧光双标法观察SSeCKS在心脏中的细胞定位。结果高脂饮食组总胆固醇和甘油三酯较正常饮食组明显升高(P<0.05);病理学观察发现高脂饮食组形成高脂性心脏病变;免疫组织化学检测发现高脂饮食组中SSeCKS表达主要分布在心内膜、心间质;免疫荧光双标发现SSeCKS与心脏组织内皮细胞和α-平滑肌肌动蛋白阳性细胞部分共定位。结论高脂饲料喂养能使大鼠形成高脂血症,并引起心脏SSeCKS表达升高,SSeCKS可能参与了心脏结构重塑及细胞凋亡,从而促进动脉粥样硬化心脏病的发展。

大鼠坐骨神经切断后Src抑制的蛋白激酶C的底物的表达变化

目的探讨大鼠坐骨神经切断后,Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)在神经中的表达变化及其意义。方法制备成年SD大鼠坐骨神经切断模型。通过Western blotting和免疫组织化学方法检测坐骨神经切断后SSeCKS表达的时空变化。结果Western blotting显示,大鼠坐骨神经切断后,近端SSeCKS的表达逐步升高,伤后2d达到高峰,之后逐渐下降。远端SSeCKS表达于12h达到高峰,之后呈下降趋势。免疫组织化学方法结果表明,SSeCKS在神经断端处高表达,成簇状聚集;在远离断端处表达明显降低,分布亦较为均一。免疫荧光双标记结果显示,SSeCKS与S100、NF200及GAP43有部分共定位。结论大鼠坐骨神经切断后,可以引起SSeCKS的表达变化,其可能参与周围神经损伤后某些伤害性刺激信号分子的转导,并与损伤后神经的再生及功能修复有关。

大鼠坐骨神经损伤后Src抑制的蛋白激酶C的底物在背根神经节中的表达变化

目的:探讨大鼠坐骨神经损伤后,Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)在背根神经节(DRG)中的表达变化及其意义。方法:制备成年SD(Sprague-Dawley)大鼠坐骨神经夹伤及切断模型。通过Western印迹法、Real-time PCR及免疫组织化学方法检测坐骨神经损伤后SSeCKS在DRG中表达的时空变化。结果:大鼠坐骨神经夹伤后6h,DRG中可检测到SSeCKS的表达并逐步升高,伤后12h达到高峰,2d后逐渐下降;而大鼠坐骨神经切断后DRG中SSeCKS的表达高峰发生在伤后2周,1d时最低;SSeCKS主要分布于DRG大、中、小神经元胞质;SSeCKS与NeuN、NF200以及GAP43存在共定位。结论:大鼠坐骨神经损伤后,引起DRG中SSeCKS的表达变化,其可能参与疼痛信号转导通路并与周围神经损伤后的再生有关。

细菌脂多糖对培养星形胶质细胞中Src抑制的蛋白激酶C底物表达的影响

目的研究细菌脂多糖(LPS)对培养的大鼠星形胶质细胞中Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)表达的影响。方法培养的星形胶质细胞随机分为空白对照组、LPS单一刺激组、LPS联合PKC抑制剂(RO-31-8220)刺激组。运用荧光定量PCR(Real time RT-PCR)、免疫印迹和免疫细胞化学法分析SSeCKS的表达变化和亚细胞定位。结果Real time RT-PCR显示,LPS可以上调SSeCKS mRNA水平,在作用浓度为100μg/L和1 mg/L时与对照组有显著差异(P<0.01)。Western blotting表明,当LPS作用浓度为100μg/L时,SSeCKS蛋白表达量明显上调;在此浓度作用下,SSeCKS表达于6 h达高峰并广泛磷酸化,至24 h其蛋白表达仍维持于较高水平。免疫细胞化学分析显示,正常情况下,SSeCKS散在分布于胞质,于胞膜略有浓集。在LPS单一刺激组,SSeCKS富集于核周;当LPS联合RO-31-8220共同作用时,SSeCKS的亚细胞定位与正常组无明显差异。结论在体外培养的星形胶质细胞中,LPS可诱导SSeCKS表达,上调其磷酸化水平,影响其细胞内定位。这些改变与PKC的功能相关。提示SSeCKS可能参与星形胶质细胞中炎症信号的转导。

Src抑制的蛋白激酶C底物在实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脊髓中的表达及其意义

目的研究Src抑制的蛋白激酶C底物(Src-suppressed C kinase substrate,SSeCKS)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)进程中的表达情况,探讨其在EAE病理过程中可能的功能及意义,为多发性硬化(multiple sclerosis,MS)和EAE提供新的治疗靶点。方法构建EAE大鼠模型,进行临床打分评估;用HE染色检测EAE大鼠脊髓组织的炎性浸润情况;用western blot检测SSeCKS的表达变化;用免疫组织化学观察SSeCKS在脊髓组织中的分布。结果髓磷脂碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)诱导单相的EAE过程:Lewis大鼠经MBP免疫后7～10d开始有临床症状,13～16d达到发病高峰,之后自发地恢复,至30d左右恢复到病前水平;EAE病程高峰期,大鼠脊髓炎性浸润情况显著;SSeCKS蛋白表达在EAE起始E1期显著增加,E3期达到高峰,之后开始下降,恢复期基本恢复到正常水平。结论本实验成功构建了Lewis大鼠的EAE模型;EAE病理过程中,SSeCKS蛋白表达水平发生变化,提示SSeCKS可能参与了EAE过程。

长期饮酒后肺损伤大鼠Src抑制的蛋白激酶C底物的变化

目的探讨长期饮酒对大鼠内外源性肺损伤时Src抑制的蛋白激酶C底物(Src-suppressed C kinase substrate,SSeCKS)的影响。方法 SD雄性大鼠36只,随机分为单纯饮酒组、饮酒内源性肺损伤组、饮酒外源性肺损伤组、单纯饮水组、饮水内源性肺损伤组和饮水外源性肺损伤组,每组6只。采用实时PCR法测定肺组织SSeCKSmRNA表达变化,比较各组上述指标是否存在差异。结果单纯饮酒组肺组织SSeCKSmRNA表达较饮水组增多(P<0.05),饮酒内、外源性肺损伤各组较饮水内、外源性肺损伤各组增多显著(P<0.05),饮酒内、外源性肺损伤组之间表达无统计学差异(P>0.05)。结论 SSeCKS表达增加是长期饮酒引起急性呼吸窘迫综合征(actue respiratory distress syndrome,ARDS)的易感性增加和病情严重的可能机制之一。

Src抑制的蛋白激酶C的底物在脑组织中的表达

目的:探讨大鼠发育过程中,SSeCKS(Src抑制的蛋白激酶C的底物)在脑组织中的表达变化及意义。方法:通过Western blot,免疫组织化学法检测SSeCKS在脑组织中表达的时空变化及细胞定位。结果:SSeCKS在大鼠脑发育过程中存在明显的表达变化,在胎鼠和生后早期的SD大鼠中表达水平较高,尤以生后1周明显,成年以后显著降低,4周时最低。脑分区检测显示端脑、海马和间脑符合全脑检测结果。DAB显色示SSeCKS在脑组织中呈点状散在分布,免疫荧光双标记示SSeCKS与星形胶质细胞有部分共定位,与神经元无明显共定位。结论:SSeCKS在大鼠脑发育过程中存在时空变化,并且主要定位于星形胶质细胞。提示SSeCKS可能通过参与细胞骨架的调节和信号通路的活化影响大鼠胚胎发育过程中星形胶质细胞指导的神经元的迁移和轴突的生长。

非小细胞肺癌组织的MARCKSL1水平及临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织的肉豆蔻酰化富含丙氨酸的C激酶底物样蛋白1(MARCKSL1)水平和临床意义。方法采用实时定量PCR(qPCR)检测92对NSCLC组织和癌旁组织的MARCKSL1水平,分层分析组织MARCKSL1水平与临床病理特征和预后关系,结合Cox比例风险模型进行多因素分析。结果NSCLC组织的MARCKSL1水平为2.890±1.042,高于癌旁组织的1.194±0.484(t=14.159,P<0.001)。组织MARCKSL1水平与肿瘤最大径、TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.05),且MARCKSL1低水平者的中位总生存期为58.0个月,优于高水平者的41.0个月(P<0.05);组织MARCKSL1水平升高是预后不良的危险因素(HR=2.154,95%CI:1.245~3.754,P=0.016)。结论NSCLC组织中异常高表达的MARCKSL1参与了该肿瘤的恶性进展且与不良预后有关,有望成为NCSLC防治的潜在靶点。

Marcksl1基因敲除对小鼠成年造血的影响

目的建立造血系统特异性Marcksl1敲除小鼠,探究该基因敲除对小鼠成年造血的影响。方法对E15.5 Marcskl1敲除小鼠进行胎肝竞争性移植实验,分析胎肝移植后不同月龄小鼠外周血中成熟功能谱系血细胞的占比。流式分选胎肝KSL细胞,利用RNA-Seq分析该基因敲除后差异基因表达。利用CRISPR/Cas9技术,构建Marcksl1条件敲除小鼠,并与Vav1-Cre小鼠杂交,获得造血系统特异性Marcksl1敲除小鼠。利用PCR和Sanger测序鉴定基因型。利用Real-time PCR检测小鼠骨髓和造血干细胞中Marcksl1 mRNA的表达。利用流式细胞技术分析小鼠骨髓、外周血、脾和胸腺中不同类型造血细胞的占比。通过竞争性骨髓移植实验分析Marcksl1敲除对造血重建的影响。结果Marcksl1敲除造成胎肝移植后B细胞占比下降、髓系细胞占比升高,骨髓中CLP和CMP占比下降、GMP占比升高。RNA-seq结果显示该基因敲除后导致胎肝KSL细胞中252个基因上调,400个基因下调。GO结果显示差异基因主要富集在免疫应答、质膜以及低压门钙离子通道活性等相关基因。KEGG结果显示差异基因主要富集在造血谱系分化和细胞因子受体互作相关信号通路。我们利用CRISPR/Cas9技术成功建立造血特异性Marcksl1敲除小鼠。流式结果表明Marcksl1缺失不影响小鼠成年造血,但影响骨髓移植后的造血重建能力。结论成功建立造血系统特异性Marcksl1敲除小鼠。造血系统敲除Marcksl1基因,不影响成年稳态造血,但影响成年造血重建能力。我们建立的Marcksl1条件敲除小鼠,为该基因的成年造血功能研究以及该基因的其他组织特异性功能研究提供了动物模型。

胃癌组织中MARCKS、HIF-1α的表达水平与临床病理特征的关系

目的分析胃癌组织中豆蔻酰化的富含丙氨酸的蛋白激酶C底物(MARCKS)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达水平与临床病理特征的关系。方法回顾性分析2020年7月至2021年7月陕西中医药大学第二附属医院收治的80例胃癌患者的临床资料,以手术切除采集其病灶组织及癌旁组织,检测胃癌组织和癌旁组织中的MARCKS、HIF-1α表达水平,比较胃癌组织和癌旁组织中MARCKS、HIF-1α表达阳性率;比较不同临床病理特征患者胃癌组织中MARCKS、HIF-1α表达阳性率。随访1年,比较胃癌组织中MARCKS阳性及阴性患者、胃癌组织中HIF-1α阳性及阴性患者无进展生存期(PFS)和1年生存率。结果Ⅲ期、Ⅳ期患者胃癌组织中MARCKS阳性率分别为91.67%、90.91%,HIF-1α阳性率分别为91.67%、100.00%,明显高于Ⅰ期、Ⅱ期患者[MARCKS阳性率分别为57.89%、61.54%,HIF-1α阳性率分别为63.16%、73.08%],差异均有统计学意义(P<0.05);中分化和低分化者胃癌组织中MARCKS阳性率分别为80.00%、91.67%,HIF-1α阳性率分别为88.00%、95.83%,明显高于高分化者的54.84%、61.29%,差异均有统计学意义(P<0.05);有淋巴结转移患者胃癌组织中MARCKS、HIF-1α阳性率分别为93.10%、96.55%,明显高于无淋巴结转移患者的62.75%、70.59%,差异均有统计学意义(P<0.05);肿瘤浸润至浆膜层患者胃癌组织中MARCKS、HIF-1α阳性率分别为89.19%、94.59%,明显高于未浸润至浆膜层患者的60.47%、67.44%,差异均有统计学意义(P<0.05);胃癌组织中MARCKS、HIF-1α表达阳性率分别为73.75%、80.00%,明显高于癌旁组织的38.75%、43.75%,差异均有统计学意义(P<0.05);胃癌组织中MARCKS、HIF-1α阳性和阴性患者PFS和1年生存率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论胃癌组织中MARCKS、HIF-1α表达与患者胃癌分期、肿瘤细胞分化程度、淋巴转移情况、肿瘤浸润深度密切相关,可考虑作为辅助制定胃癌患者临床治疗方案的参考指标。

MARCKS及其对气道黏蛋白胞吐作用的调节

黏液高分泌是慢性气道炎症性疾病的重要病理特征。豆蔻酰化富丙氨酸C激酶底物蛋白(myristoy-lated alanine-rich C kinase substrate,MARCKS)是黏液分泌过程中的关键蛋白。蛋白激酶C或其他激酶、细胞内钙离子浓度、钙调蛋白、纤维型-肌动蛋白、磷脂酰肌醇4,5二磷酸、热休克蛋白70等均可通过MARCKS的桥梁作用,介导气道分泌颗粒的胞内运动和黏蛋白的出胞释放。

非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏SSeCKS的表达

目的:探讨Src抑制的蛋白激酶C底物(SSeCKS)在大鼠非酒精性脂肪性肝(NAFL)形成中的作用。方法:SD大鼠16只,随机分为正常对照组(正常组)和高脂饮食组(高脂组)。高脂饲料喂养14周后,观察肝脏组织病理改变;检测大鼠血脂及肝功能;免疫组化和westernblot方法研究大鼠脂肪肝形成中SSeCKS表达变化。结果:高脂组大鼠肝脏指数显著高于正常组(P均<0.01)。高脂组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)及丙氨酸转氨酶(ALT)均显著高于正常组(P均<0.01)。肝组织SSeCKS蛋白表达亦明显增强。结论:非酒精性脂肪肝大鼠肝组织SSeCKS表达变化与脂肪肝引起的脂质过氧化损伤程度密切相关。

LPS和TNF-α对血管内皮细胞SSeCKS的表达影响

目的:研究细菌脂多糖(LPS)、肿瘤坏死因子(TNF-α)对牛肺动脉内皮细胞(BPAEC)Src抑制的蛋白激酶C底物(Src-suppressed C Kinase Substrate,SSeCKS)表达的影响和对细胞骨架结构的影响,探讨SSeCKS参与细胞骨架结构改变的可能机制。方法:应用LPS、TNF-α刺激体外培养的BPAEC,应用原位杂交、免疫印迹方法检测不同刺激条件下BPAEC中SSeCKS mRNA和蛋白的表达情况;免疫细胞荧光法观察LPS、TNF-α对内皮细胞中SSeCKS与纤维状肌动蛋白(F-actin)定位和结构的影响。结果:静息状态的BPAEC表达极少量的SSeCKS;经LPS刺激后,SSeCKS表达没有明显变化;而TNF-α以浓度和时间依赖的方式诱导内皮细胞SSeCKS表达增加;LPS和TNF-α刺激后,F-actin发生重构,且SSeCKS向核周、细胞膜纤维、板状伪足聚集;蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro-31-8220抑制LPS和TNF-α对内皮细胞F-actin和SSeCKS细胞内定位改变的影响。结论:TNF-α能够诱导内皮细胞SSeCKS表达增加,PKC参与LPS、TNF-α诱导内皮细胞F-actin的重构和SSeCKS重新分布,提示SSeCKS可能与LPS和TNF-α诱导内皮细胞F-actin的重构有关。

血小板活化因子诱导大鼠肺微血管内皮细胞Src抑制的蛋白激酶C底物基因表达

目的研究血小板活化因子（PAF）对大鼠肺微血管内皮细胞（RPMVEC）中Src抑制的蛋白激酶C底物（SSeCKs）mRNA表达的影响及其信号转导途径。方法体外培养RPMVEC，采用细胞原位杂交技术检测不同刺激条件下RPMVEC中SSeCKsmRNA的表达变化。结果正常RPMVEC中有少量SSeCKSmRNA表达，为棕黄色细颗粒状杂交信号，分布于胞质；用10^-10、10^-9、10^-8、10^-7mol／L的PAF分别孵育RPMVEc1．5h，SSeCKSinRNA表达随其浓度增加而升高（分别为0．0549±0．0007、0．0599±0．0018、0．0690±0．0018、0．0754±0．0019），与正常对照组（O．0368±0．0037）比较差异均有统计学意义（均P〈0．05）；10^-7mol／LPAF刺激RPMVEC0．5、1．5、3、6、12、24h，SSeCKS mRNA表达水平于0．5h即显著升高（0．0710±0．0015），1．5h达峰值（0．0756±0．0017），之后逐渐下降，24h时（0．0439±0．0010）仍高于正常对照组（0．0382±0．0041，均P〈0．05）；10／lmol／L核转录因子-κB（NF-κB）抑制剂吡咯烷二巯基氨甲酸（PDTc）预处理RPMVEC1h可显著下调PAF对SSeCKSmRNA的诱导效应（0．0497±0．0032比0．0719±0．0019，P〈0．05），而蛋白激酶C（PKC）抑制剂双吲哚基顺丁烯二酰亚胺（BIM）预处理RPMVEC0．5h则不影响此效应（0．0697±0．0021比0．0719±0．0019，P〉0．05）。结论PAF呈浓度和时间依赖的方式上调RPMVEC中SSeCKS基因转录；NF-κB信号通路而非PKC参与了PAF的诱导效应。

src抑制的蛋白激酶C底物调控内皮细胞分泌TNF-α

目的探讨8re抑制的蛋白激酶c底物（SSeCKS）对脂多糖（LPS）诱导大鼠肺微血管内皮细胞（PMVEC）分泌肿瘤坏死因子（TNF）-α的影响。方法体外培养Wistar大鼠PMVEC，按随机数字表法分组（n=4），10mg／LLPS刺激1h、3h、6h、12h、24h或0．1mg／L、1mg／L、10mg／LLPS刺激24h；蛋白激酶C抑制剂（BIM）预处理0．5h或50nmol／LSSeCKS-siRNA转染PMVEC48h后再加入10mg／LLPS孵育24h，酶联免疫吸附法检测细胞培养液上清TNF-α 量（ng／L）。采用SPSSl0．0软件进行分析，组间比较采用单因素方差分析，以P〈0．05为差异具有统计学意义。结果0．1、1、10mg／LLPS刺激PMVEC24h后的，TNF-α分泌量分别为（253．70±23．55）、（327．88±37．25）、（403．204-36．22）ng／L，均高于未刺激组（82．28±22．56）ng／L（均P=0．000）；10mg／LLPS刺激PMVEC后，TNF-α分泌量于1h升高（170．11±49．22）ng／L，6h达峰值（404．82±13．78）ng／L，刺激24h后仍维持高水平（395．67±36．23）ng／L，分别与未刺激组（84．60±23．61）ng／L比较：P=0．001，0．000，0．000；BIM预处理PMVEC后再给予LPS刺激，TNF-α分泌量（200．44±27．39）ng／L较LPS单独刺激（402．28±31．07）ng／L显著较少（P=0．000）；与LPS单独刺激比较（407．28±32．64）ng／L，SSeCKS-siRNA抑制SSeCKS表达后，LPS对PMVEC分泌TNF-α的诱导效应（195．20±13．28）ng／L也显著下降（P=0．000）。结论下调SSeCKS表达和蛋白激酶C活性可抑制LPS对PMVEC分泌TNF-α的诱导效应，从而减轻PMVEC的炎症反应。

MARCKS磷酸化对冷刺激诱导人气道上皮细胞MUC5AC分泌的影响

目的:构建豆蔻酰化富丙氨酸激酶C底物(MARCKS)磷酸化位点(PSD)突变体,并探讨瞬时受体电位M8离子通道(TRPM8)及MARCKS在冷刺激诱导黏蛋白(MUC)5AC合成及胞吐过程中发挥的作用。方法:利用PCR克隆全编码MARCKS目的基因,并通过定点突变技术将PSD的4个丝氨酸突变为天冬氨酸编码基因。将野生型及突变体cDNA亚克隆至pcDNA3.0载体后用酶切及DNA测序鉴定。以TRPM8特异性阻断剂BCTC、重组突变质粒转染人气道上皮16HBE细胞为干预手段,用免疫荧光及ELISA检测二者对冷空气刺激诱导的16HBE细胞合成及分泌MUC5AC的影响。结果:成功构建了pcDNA3.0-MARCKS重组质粒及pcDNA3.0-MARCKS-PSD突变体。冷刺激组胞内合成及分泌MUC5AC水平显著高于未刺激对照组(P<0.05)。与冷刺激组比较,BCTC可显著抑制由冷刺激诱导的MUC5AC合成及分泌(P<0.05);与冷刺激组比较,转染MARCKS-PSD突变cDNA可显著下调由冷刺激诱导的MUC5AC高分泌水平(P<0.05),同时胞内的MUC5AC水平与对照组比较呈现显著升高状态(P<0.01),而转染载体及野生型MARCKS对冷刺激诱导的MUC5AC胞内合成及胞外分泌水平无显著影响(P>0.05)。结论:TRPM8及MARCKS-PSD的磷酸化过程介导了冷刺激诱导气道上皮细胞内MUC5AC的胞吐过程。

β淀粉样蛋白(1-40)对痴呆老龄大鼠海马MARCKS mRNA表达及学习记忆的影响

目的:研究β-淀粉样蛋白(1-40)致痴呆老龄大鼠海马富含丙氨酸的豆蔻酰化蛋白激酶C的作用底物(MARCKS mRNA)的表达和学习记忆功能的影响。方法:将大鼠随机分为年轻组、老龄组、假手术组以及模型组,对老龄大鼠采用β-淀粉样蛋白(1-40)1次性侧脑室注射,建立痴呆模型。通过行为学以及RT-PCR检测,观察模型大鼠学习记忆功能以及海马MARCKS mRNA的变化。结果:行为学检测表明模型组的学习记忆功能明显低于正常组,模型组MARCKS mRNA表达明显高于老龄组、正常组及假手术组均明显降低(P<0.01)。结论:侧脑室注射β-淀粉样蛋白(1-40)可以明显增加老龄大鼠海马MARCKS mRNA的表达,并且导致老龄大鼠学习记忆障碍。提示MARCKS表达异常很可能是β-淀粉样蛋白(1-40)致神经元可塑性降低的关键环节。

Hck、Lyn和SSeCKS在Kupffer细胞中的表达及意义

目的 :探讨Src家族相关激酶(Hck、Lyn)和Src抑制的蛋白激酶C底物(Src-suppressed C kinase substrate,SSe CKS)在Kupffer细胞中的表达及意义。方法:应用Real-time PCR的方法检测正常Kupffer细胞和炎症Kupffer细胞中Hck、Lyn和SSe CKS的表达水平;用Western Blot的方法检测Hck、Lyn和SSe CKS在Kupffer细胞中的表达水平。构建非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)大鼠模型,采用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)方法检测Hck、Lyn和SSe CKS在大鼠肝脏组织Kupffer细胞中的表达水平。结果:RT-PCR显示Hck、Lyn和SSe CKS在小鼠Kupffer细胞中均有表达,用60%CCl4损伤液刺激后Hck、Lyn表达明显升高(P<0.01),SSe CKS表达减少,但差异无统计学意义(P>0.05);Western Blot结果显示在Kupffer细胞中Hck、SSe CKS表达较为明显,Lyn未见明显表达;IHC结果显示Hck、Lyn和SSe CKS在大鼠正常肝组织Kupffer中均有表达;在炎症组织中Hck、Lyn的表达明显增加,而SSe CKS的表达却显著减少。在炎症刺激后Hck、Lyn的表达与Kupffer细胞数呈正相关,而SSe CKS的表达与Kupffer细胞数呈负相关。结论:Hck、Lyn和SSe CKS参与了NASH的发生发展,可作为NASH炎症反应的潜在调控靶点;检测其表达有助于NASH炎症程度的判断,为临床上治疗NASH提供一定的客观依据。

SSeCKS对施万细胞TNF-α自分泌的作用

目的探讨Src抑制的蛋白激酶C底物(SSeCKS)对施万细胞TNF-α自分泌的作用。方法予TNF-α处理施万细胞及siRNA干扰SSeCKS表达后,ELISA法检测培养基上清中TNF-α的含量,蛋白免疫印迹检测SSeCKS、磷酸化p38、磷酸化JNK、总p38、总JNK的表达。结果 TNF-α可以诱导施万细胞自分泌及SSeCKS表达的增加;干扰SSeCKS表达可以抑制TNF-α的自分泌及p38与JNK通路的激活。结论在施万细胞中,SSeCKS可能通过影响p38及JNK激活对TNF-α的自分泌发挥正向调控作用。