A群脑膜炎奈瑟菌多糖IgG抗体检测试剂研制

目的研制检测A群脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖IgG抗体的酶联免疫吸附试验（ELISA）检测试剂。方法以CTAB、酚、乙醇从A群脑膜炎奈瑟菌培养上清中提取荚膜多糖（MenA PS）,将多糖与卵清蛋白（EA）以还原氨基法偶联,并以Sepharose CL-4B纯化。优化反应条件,建立以偶联物MenA PS-EA为包被抗原检测A群脑膜炎奈瑟菌多糖IgG抗体的间接ELISA法,并与血清杀菌力试验（SBA）比较。结果高效液相色谱检测MenA PS-EA结合物纯度为81.50%。试剂具有良好重复性（变异系数CV=4.26%～5.30%）;37℃放置7d、4℃放置12个月,试剂的灵敏度不变,具有优良的稳定性;分别用该试剂和SBA法检测192份血清,试剂相对于血清杀菌力试验的灵敏度为96.91%,特异度为90.00%,一致性为95.83%,统计学分析表明,2种检测方法之间差异无统计学意义。结论以纯化MenA PS-EA作为包被抗原建立的A群脑膜炎奈瑟菌多糖特异性IgG抗体间接ELISA检测试剂具有可行性,为进一步研究及开发细菌多糖类抗体诊断试剂提供了可借鉴的方法。

健康人群流行性脑脊髓膜炎流行前期和流行期A、C群脑膜炎奈瑟菌抗体水平研究

目的掌握合肥市健康人群A、C群脑膜炎奈瑟菌(Nm)抗体水平现状。方法应用重复横断面监测研究模式,以合肥市辖3县4区划分为7个研究地区,在2005-2006,2006-2007年流行性脑脊髓膜炎(流脑)流行季节流行前期和流行期,采用整群重复抽样方法,应用酶联免疫吸附试验,对健康人群A、C群Nm抗体水平进行调查。结果连续监测健康人群2次流行前期和流行期,实际抽样范围672～690人。2次流行前期和流行期之间A群无差异,C群差异有统计学意义;2次流行期之间A、C群差异均有统计学意义。0～5岁和≥21岁组相对较低,11～15岁、16～20岁、≥21岁组流行期明显上升。同期不同地区之间差异均有统计学意义,肥西县、长丰县呈现明显低抗体水平。结论健康人群中存在一定A、C群Nm抗体水平,结合现状应确保儿童和青少年疫苗有效接种率,加强成人流脑预防控制工作。

湖南省首起由C群脑膜炎奈瑟菌引起流脑局部流行的调查

目的了解湖南省首起由C群脑膜炎奈瑟菌引起的流脑局部流行疫情特征。方法依据《全国流行性脑脊髓膜炎防治指南(试行)》和GB16884—1997进行调查和实验室检测。结果从患者的脑脊液中分离到奈瑟菌。经湖南省CDC实验室复核鉴定为C群脑膜炎球菌。结论此次疫情为湖南省首起由C群脑膜炎奈瑟菌引起的流脑疫情。隔离治疗病人、在疫区易感人群中紧急接种流脑(A+C)疫苗是控制疫情扩散的有效方法。

从流脑病人血液检出C群脑膜炎奈瑟菌

2002年1-3月份,广西壮族自治区来宾县良塘乡发生流脑流行,共发现流脑病人15例,死亡3例.从暴发点患者血液中分离出一株病原菌.

应用单克隆抗体和免疫斑点试验对B群脑膜炎奈瑟氏菌脂寡糖分型

本研究使用４种抗Ｂ群脑膜炎奈瑟氏菌（Ｎｍ）脂寡糖的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）和免疫斑点试验（ｄｏｔ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ）首次对我国不同年代和地区收集的９１株Ｂ群Ｎｍ进行了脂寡糖（Ｌｉｐｏｏｌｉ－ｇｏ－ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＯＳ）分型，总分型率为９０．１１％，其中Ｌ３．７．９复合型最多，占６３．７４％，其次为Ｌ１．３．７．９复合型，占１２．０９％。该结果为确定我国引起流脑发病的Ｂ群Ｎｍ主要ＬＯＳ型提供了依据，为筛选本国的Ｂ群Ｎｍ菌苗菌株及其作为菌苗成分的ＬＯＳ抗原奠定了基础。

太原铁路职业人群流行性脑脊髓膜炎A群、C群奈瑟菌IgG抗体水平分析

目的了解太原铁路职业人群流行性脑脊髓膜炎的免疫现状。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA),对太原铁路部分健康职业人群进行了A群脑膜炎奈瑟菌IgG抗体、C群脑膜炎奈瑟菌IgG抗体检测。结果本次健康人群流脑抗体水平监测共检测253人,其中A群脑膜炎奈瑟菌IgG抗体阳性者162人,阳性率64.03%,GMT为1∶1.58;C群脑膜炎奈瑟菌IgG抗体阳性者122人,阳性率48.22%,GMT为1∶1.42,阳性率之间的差异有统计学意义(!2=9.6266,Ρ<0.01),GMT之间的差异也有统计学意义(t=3.3250,Ρ<0.01);不同年龄组的健康人群中,流脑A群脑膜炎奈瑟菌IgG抗体阳性率差异无统计学意义(!2=0.9756,Ρ>0.05),流脑C群脑膜炎奈瑟菌IgG抗体阳性率差异有统计学意义(!2=8.0911,Ρ<0.05);不同性别健康人群,流脑A群脑膜炎奈瑟菌IgG抗体阳性率差异无统计学意义(!2=1.7728,Ρ>0.05),GMT之间的差异也无统计学意义(t=1.7266,Ρ>0.05);流脑C群脑膜炎奈瑟菌IgG抗体阳性率差异有统计学意义(!2=24.4448,Ρ<0.01),GMT之间的差异也有统计学意义(t=4.7619,Ρ<0.01;不同职业类型的健康人群,流脑A群脑膜炎奈瑟菌IgG抗体阳性率差异无统计学意义(!2=0.6872,Ρ>0.05),流脑C群脑膜炎奈瑟菌IgG抗体阳性率差异也无统计学意义(!2=4.7672,Ρ>0.05)。结论太原铁路地区属于流脑散发地区,健康人群保持着一定流脑抗体免疫水平,但是太原铁路地区的流脑免疫屏障已经基本不存在,需要继续加强流脑的人群免疫工作。

SEA为载体蛋白的A/C群脑膜炎奈瑟菌结合物初步免疫效果评价

目的对以金黄色葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxin A,SEA)为载体蛋白的A/C群脑膜炎奈瑟菌结合物的免疫效果进行初步评价。方法采用1-氰基-4-二甲氨基-砒啶四氟硼酸(1-cyano-dimethylamino pyridiniumtetrafluoroborate,CDAP)活化法,将SEA、破伤风类毒素(tetanus toxin,TT)分别与A群脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖(group A N.meningitidis capsular polysaccharide,GAMP)、C群脑膜炎奈瑟菌荚膜多糖(group C N.meningitidis cap-sular polysaccharide,GCMP)结合制备结合物;将结合物分别免疫BALB/c小鼠,腹部皮下免疫3次,于第1针免后第9天、第19天、第27天眼眶采血,分离血清备用;检测体液免疫及细胞免疫反应水平。结果 SEA与GAMP结合后能增强抗-GAMP Ig G抗体水平,第3次免后GAMP-SEA组多糖抗体水平达到1∶12 800,高于GAMP组1∶400,但GCMP-SEA组结果不理想。SEA与GAMP结合后均能激发细胞免疫反应,IFN-γ和IL-4的SFC与GAMP组比较均升高,且IFN-γ高于IL-4。SEA与GAMP、GCMP结合后Th1/Th2细胞亚群比值分别达到23.48和22.19,高于GAMP组(14.09)和GCMP组(16.73),差异有统计学意义(P<0.05),提示SEA与GAMP、GCMP结合后可激发细胞免疫。结论 SEA与GAMP、GCMP结合后既能增强GAMP、GCMP的免疫原性,提高体液免疫反应,又能激发细胞免疫反应,提示SEA具备作为A/C群脑膜炎奈瑟菌结合疫苗载体蛋白的可行性。

单价B群脑膜炎奈瑟菌OMV疫苗免疫后的抗体亲和力及其IgG亚型

脑膜炎奈瑟菌(简称脑膜炎球菌)是导致全球范围脑膜炎和败血症的重要病原菌,B群脑膜炎球菌血清亚型P1.7-2.

4例C群脑膜炎奈瑟氏菌感染的分离培养及药敏分析

目的:通过对4例C群脑膜炎奈瑟氏菌感染患者的分离培养、分群及药敏分析,提高我们对脑膜炎奈瑟氏菌感染的检测水平,为临床提供治疗依据。方法:2006年11月至2007年3月先后分离出的4株脑膜炎奈瑟氏菌的鉴定、分群及药敏分析。结果:青霉素S2/4;头孢曲松S4/4;环丙沙星S2/4;复方新诺明S0/4。结论:C群脑膜炎奈瑟氏菌感染者首先头孢曲松预防流脑。

C群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NhhA重组载体pASK-IBA37plus-nhhA的构建

构建C群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白Nhh A重组载体p ASK-IBA37plus-nhh A。以脑膜炎奈瑟菌C群菌株为实验材料,根据Gene Bank上的已知序列设计引物,通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增C群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白Nhh A基因(nhh A)。将nhh A与p ASK-IBA37 plus质粒用EcoRI,Xho I进行双酶切并尝试不同条件进行连接;连接产物实现在大肠杆菌TOP10感受态细胞中的转化。使用验证质粒图谱初筛和PCR与EcoRI,Xho I双酶切双重验证法复筛的方式筛选p ASKIBA37plus-nhh A阳性转化子。最后将构建好的p ASK-IBA37plus-nhh A进行基因测序。成功构建C群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白Nhh A重组载体p ASK-IBA37plus-nhh A,同时发现nhh A与p ASK-IBA37plus摩尔数之比为5.1、连接体系20μL、DNA终浓度为1.7 ng/μL时,获得的转化子阳性率能达到18.8%,且转化子菌落总数数量适中,方便后续筛检。同时,测序得到1 797 bp的nhh A序列信息,在Gen Bank上进行序列相似性比对,发现该基因与脑膜炎奈瑟菌NGH38的外膜蛋白GNA992(Neisseria meningitidis strain NGH38 outer membrane protein GNA992)基因的相似性为98%。

C群脑膜炎奈瑟菌致流行性脑脊髓膜炎的病原学分析

;目的对江苏省徐州市2021年3月发现的1例青少年流行性脑脊髓膜炎病例进行病原学分析。方法对血培养阳性菌株采用质谱仪鉴定,用普通PCR技术进行基因分型,同时进行多位点序列分型(MLST),用纸片扩散法对临床常见抗菌药物敏感性进行分析。结果从临床标本中分离出的菌株经PCR分型,为C群脑膜炎奈瑟菌。该菌株的MLST分型为ST-4821型。该菌株对临床常见13种抗菌药物均敏感。结论徐州市发现C群脑膜炎奈瑟菌感染致流行性脑膜脊髓膜炎病例,应加强本地区病原菌的检测与研究。

儿童接种C群脑膜炎奈瑟菌结合疫苗的安全性与免疫原性

在英国,C群脑膜炎奈瑟菌(简称脑膜炎球菌)结合疫苗自1999年11月以来已被常规用于婴儿免疫。然而,对于学龄前儿童而言,在初次免疫之后的应答以及该疫苗诱导的保护性抗体存在的时间及其活性却未见报道。因此本文作者检测了学龄前儿童血清中C群脑膜炎球菌特异性IgG抗体和抗体活性。作者选择182名健康婴儿作为研究对象,并将他们分为4组。第1组:在出生后第2、3。

2017—2022年度安阳市汤阴县健康人群脑膜炎奈瑟菌抗体水平调查

目的分析安阳市汤阴县健康人群脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm)IgG抗体水平,为制定流行性脑脊髓膜炎(流脑)免疫策略提供依据。方法采用多阶段分层抽样的方法,在2017—2022年度冬春季选择安阳市汤阴县健康人群开展问卷调查,并采集血清标本,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中A群和C群Nm IgG抗体,对IgG抗体保护率和中位数浓度(median concentration,MC)进行分析。结果1089名调查对象的A群和C群Nm IgG抗体保护率(≥2μg/mL)分别为59.65%、48.91%(χ^(2)=25.550,P<0.05),MC分别为2.68、1.94μg/mL。不同年龄组别A群Nm IgG抗体保护率为27.15%~84.62%(χ^(2)=175.893,P<0.05),≥20岁年龄组最高;C群Nm IgG抗体保护率为28.86%~59.33%(χ^(2)=47.561,P<0.05),3~<5岁年龄组最高。不同职业Nm IgG抗体保护率A群为37.16%~84.85%(χ^(2)=108.615,P<0.05),C群为38.18%~65.15%之间(χ^(2)=32.219,P<0.05);有、无/不详免疫史人群Nm IgG抗体保护率A群分别为55.31%、78.82%(χ^(2)=38.001,P<0.05),C群分别为48.09%、51.54%(χ^(2)=0.944,P>0.05)。0~<15岁人群随着免疫剂次的增加,Nm IgG抗体保护率A群从18.75%上升到70.00%,C群从19.35%上升到76.47%。结论安阳市汤阴县健康人群A群和C群Nm IgG抗体保护率偏低,建议调整免疫策略,适时加强、优化低龄儿童、青少年和成人脑膜炎球菌疫苗预防接种工作,以提升人群免疫力。

比色法与核磁共振法测定A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖氧乙酰基含量的比较

目的比较Hestrin比色法(简称比色法)和核磁共振(nuclear magnetic resonance,NMR)法在检测A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖氧乙酰基(O-Acetyl,OAc)含量的相关性和精密度。方法用比色法和NMR法测定A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖及其多糖衍生物,Y、W135群荚膜多糖水解物的OAc含量,比较分析两种方法的相关性及精密度。结果两种方法检测A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖OAc含量的决定系数分别为R^2≥0.954、R^2≥0.960、R^2≥0.969、R^2≥0.972;比色法检测3批C群脑膜炎球菌荚膜多糖(PSC)OAc含量的精密度,SD值分别为0.21、0.21、0.18,对应CV值分别为9.03%、9.01%、8.70%(95%置信区间);NMR法检测3批A群脑膜炎球菌荚膜多糖(PSA)OAc含量的精密度,SD值分别为0.66、0.78、0.83,对应CV值分别为0.72%、0.85%、0.93%(95%置信区间);结论比色法和NMR法在检测A、C、Y、W135群脑膜炎球菌荚膜多糖OAc含量方面相关性良好,精密度良好,核磁法较比色法精密度更高。

杭州市2018年0-59岁健康人群W135群脑膜炎奈瑟菌IgG抗体水平调查

目的评估杭州市健康人群W135群脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm)抗体水平。方法采用年龄分层随机抽样于2018年10月选择杭州市0-59岁(9个年龄组)健康人群,采集血清标本;采用酶联免疫吸附试验检测W135群Nm IgG抗体,分析抗体阳性率和几何平均浓度(Geometric mean concentration,GMC)。结果调查对象W135群Nm IgG抗体总阳性率、GMC分别为28.43%(85/299)、1.23μg/mL。各年龄组W135群Nm IgG抗体阳性率在0.00%(30-39岁)-72.73%(3-4岁)之间(χ^(2)=73.14,P<0.001);含W135群Nm成分疫苗0剂次、1剂次、2剂次、不详免疫史人群的W135群Nm IgG抗体阳性率分别为27.97%、72.73%、66.67%、17.93%(χ^(2)=38.17,P<0.001)。结论杭州市0-59岁健康人群W135群Nm IgG抗体水平偏低,人群易感性高。