目的:目的研究167例乙肝病毒截短型表面抗原中蛋白(C-terminally truncated middle size surface proteins,MHBst167)和X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)对肾小管上皮细胞核转录因子κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)活化的影...目的:目的研究167例乙肝病毒截短型表面抗原中蛋白(C-terminally truncated middle size surface proteins,MHBst167)和X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)对肾小管上皮细胞核转录因子κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)活化的影响及其相关机制探讨。方法:肾小管上皮细胞系(HK-2)转染mhbst167或(和)hbx后,蛋白印迹法检测NF-κB核易位及其抑制蛋白(inhibitor of nuclear factor-kappa B,IκBα)磷酸化水平的变化,凝胶电泳迁移率和双萤光素酶报告基因分析进一步检测NF-κB活性;通过对蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)活性和细胞外调节激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)磷酸化水平检测探讨NF-κB活化的机制。结果:HK-2细胞转染mhbst167或(和)hbx基因后,NF-κB核易位、磷酸化IκBα、κB结合活性及κB基因转录均增加(P<0.05);且PKC激酶活性和磷酸化ERK水平也增加(P<0.05),而Raf蛋白均无表达。结论:在肾小管上皮细胞中,MHBst167/HBx可能通过PKC/ERK通路(非Raf依赖性)活化NF-κB。展开更多
目的探讨酸性环境对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的影响及其机制。方法体外分离培养大鼠VSMCs,采用免疫细胞化学法鉴定。将VSMCs按随机数字表法分为正常对照组、高磷+p H 7.4组、高磷+p H 7.1组。刺激4 d后,采用逆转录聚合...目的探讨酸性环境对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的影响及其机制。方法体外分离培养大鼠VSMCs,采用免疫细胞化学法鉴定。将VSMCs按随机数字表法分为正常对照组、高磷+p H 7.4组、高磷+p H 7.1组。刺激4 d后,采用逆转录聚合酶链反应和Western blot检测活化T细胞核因子c1(NFATc1)、Runt相关转录因子2(Runx2)基因和蛋白的表达。刺激14 d后,对各组细胞进行钙化染色、钙含量和碱性磷酸酶(ALP)活性测定。结果与正常对照组比较,高磷+p H 7.4组的钙含量、ALP活性、Runx2和NFATc1表达升高(P<0.05);与高磷+p H 7.4组比较,高磷+p H 7.1组的钙含量、ALP活性、Runx2和NFATc1表达降低(P<0.05)。相关性分析发现,NFATc1蛋白表达水平与ALP活性、Runx2蛋白表达水平呈正相关(P<0.05)。结论酸性环境可以抑制高磷诱导的大鼠VSMCs钙化,其机制可能是通过降低NFATc1表达,抑制VSMCs表型转化来实现的。展开更多
文摘目的:目的研究167例乙肝病毒截短型表面抗原中蛋白(C-terminally truncated middle size surface proteins,MHBst167)和X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)对肾小管上皮细胞核转录因子κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)活化的影响及其相关机制探讨。方法:肾小管上皮细胞系(HK-2)转染mhbst167或(和)hbx后,蛋白印迹法检测NF-κB核易位及其抑制蛋白(inhibitor of nuclear factor-kappa B,IκBα)磷酸化水平的变化,凝胶电泳迁移率和双萤光素酶报告基因分析进一步检测NF-κB活性;通过对蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)活性和细胞外调节激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)磷酸化水平检测探讨NF-κB活化的机制。结果:HK-2细胞转染mhbst167或(和)hbx基因后,NF-κB核易位、磷酸化IκBα、κB结合活性及κB基因转录均增加(P<0.05);且PKC激酶活性和磷酸化ERK水平也增加(P<0.05),而Raf蛋白均无表达。结论:在肾小管上皮细胞中,MHBst167/HBx可能通过PKC/ERK通路(非Raf依赖性)活化NF-κB。
文摘目的探讨酸性环境对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化的影响及其机制。方法体外分离培养大鼠VSMCs,采用免疫细胞化学法鉴定。将VSMCs按随机数字表法分为正常对照组、高磷+p H 7.4组、高磷+p H 7.1组。刺激4 d后,采用逆转录聚合酶链反应和Western blot检测活化T细胞核因子c1(NFATc1)、Runt相关转录因子2(Runx2)基因和蛋白的表达。刺激14 d后,对各组细胞进行钙化染色、钙含量和碱性磷酸酶(ALP)活性测定。结果与正常对照组比较,高磷+p H 7.4组的钙含量、ALP活性、Runx2和NFATc1表达升高(P<0.05);与高磷+p H 7.4组比较,高磷+p H 7.1组的钙含量、ALP活性、Runx2和NFATc1表达降低(P<0.05)。相关性分析发现,NFATc1蛋白表达水平与ALP活性、Runx2蛋白表达水平呈正相关(P<0.05)。结论酸性环境可以抑制高磷诱导的大鼠VSMCs钙化,其机制可能是通过降低NFATc1表达,抑制VSMCs表型转化来实现的。