^(11)C-β-CFT:多巴胺转运蛋白显像剂的合成及其在帕金森病诊断中的应用

目的探讨脑多巴胺转运蛋白显像剂^(11)C-甲基-N-2β-甲基酯-3β-(4-F-苯基)托烷(^(11)C-β-CFT)的PET/CT显像在早期帕金森病诊断中的临床应用价值。方法将第一步反应生成的^(11)C-CH_(3)I在线转换成Triflate-^(11)CH后与前体2β-甲基酯-3β-(4-F-苯基)去甲基托烷进行室温反应,反应结束后加水转移反应液到C18柱上进行纯化,产品^(11)C-β-CFT用乙醇从C18柱上洗脱后加水混匀得到终产品。5例轻度帕金森病患者静脉注射^(11)C-β-CFT后约60min后对其进行脑部PET/CT显像。结果^(11)C-β-CFT的总合成时间约16 min,放化纯度>98%,比活度>2 GBq/μmol,未校正合成产率为(25.0±5.0)%。轻度帕金森病患者脑PET/CT显示双侧前壳核、后壳核^(11)C-β-CFT摄取明显减少,以患病侧壳核区域最为显著。结论全自动化制备^(11)C-β-CFT的合成速度快、产率高、产品放化纯度和比活度能够满足临床需求。上述显像结果表明该显像剂可准确反映病情,有助于帕金森病的早期诊断。

茵陈蒿中芹菜素6,8-二-C-β-D-葡萄糖苷的确认及含量测定

目的 确认我国内地产茵陈蒿中存在芹菜素6,8-二-C-β-D-葡萄糖苷,并建立测定其含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法 采用高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)法鉴定,色谱柱为Symmetry C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为200~400 nm;采用超快液相色谱-三重四极杆飞行时间串联质谱(UFLC-Triple-Q-TOF-MS/MS)法鉴别,电喷雾电离负离子模式下采集数据,PeakView 1.6软件提取总离子流图;采用对照品比对,比较对照品溶液和供试品溶液色谱图中色谱峰的保留时间、紫外吸收光谱及总离子流图中相同保留时间分子离子峰的一级和二级质谱数据,鉴定茵陈蒿中的芹菜素6,8-二-C-β-D-葡萄糖苷;同时,采用HPLC法,于270 nm波长处测定35批茵陈蒿样品中芹菜素6,8-二-C-β-D-葡萄糖苷的含量。结果 对照品溶液和供试品溶液色谱图中相同保留时间色谱峰的紫外吸收光谱基本相同,总离子流图中相同保留时间分子离子峰的一级和二级质谱数据基本一致。芹菜素6,8-二-C-β-D-葡萄糖苷质量浓度在0.082 3~16.640μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 9,n=8);定量限和检测限分别为36.67 ng/mL和20 ng/mL;日内精密度、日间精密度、稳定性和重复性试验的RSD均小于4.10%(n=6);平均加样回收率为96.37%,RSD为1.40%(n=6)。35批茵陈蒿样品中芹菜素6,8-二-C-β-D-葡萄糖苷含量在0.037~0.339 mg/g之间,其中产地为河南的平均含量最高(0.144 mg/g)。结论 确认了我国内地产茵陈蒿中存在黄酮二糖碳苷类成分芹菜素6,8-二-C-β-D-葡萄糖苷。所建立方法操作简单、重复性好,可用于茵陈蒿中芹菜素6,8-二-C-β-D-葡萄糖苷的含量测定。

PKC-β抑制剂LY333531对糖尿病肾脏NADPH氧化酶与SOD蛋白表达的影响

目的研究蛋白激酶C（protein kinase,PKC）-β抑制剂LY333531对糖尿病肾脏尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（nicotinamide dinucleotide phosphate,NADPH）氧化酶与超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）的影响。方法 24只SD雄性大鼠（240~260 g）,采用抽签法随机分为正常对照组（normal control,NC）、糖尿病组（diabetes mellitus,DM）及LY333531（LY）治疗组。LY组灌胃给予PKC-β抑制剂LY333531〔1 mg/（kg.d）〕治疗4周后测量血糖、肾质量/体质量、24 h尿蛋白、内生肌酐清除率（creatinine clearance rate,Ccr）、游离15-F2t-Isoprostane、总抗氧化浓度及SOD活性。Western blotting分析NADPH氧化酶亚基P22phox与P67phox,SOD亚型Cu/Zn-SOD与Mn-SOD蛋白改变。结果与NC组比较,DM组血糖、肾质量/体质量、24 h尿蛋白、Ccr、血浆与肾脏中15-F2t-Isoprostane、血浆总抗氧化浓度及P22phox与P67phox表达明显增加,而肾脏总抗氧化物浓度、血浆与肾脏SOD活性、Cu/Zn-SOD及Mn-SOD蛋白表达明显减少（P〈0.05）。LY333531除对血糖与Mn-SOD的表达无显著影响外,均能显著逆转上述变化。结论 LY333531通过抑制糖尿病肾脏NADPH氧化酶的活化与表达,及促进Cu/Zn-SOD的表达而恢复SOD活性,以减少早期糖尿病肾脏的氧化损伤,从而发挥其保护肾脏作用。

蛋白激酶C-β与糖尿病肾病研究的进展

PRKCB1基因编码的蛋白激酶C(PKC)-βⅠ和PKC-βⅡ两种亚型,通过PKC信号通路途径在糖尿病肾病的发生和进展中起着重要作用。PKC-β抑制剂通过降低肾小球基膜的厚度和减少微量白蛋白尿,对糖尿病患者的肾脏起着保护作用。PRKCB1基因的多态或变异通过影响该基因的转录活性、增加胰岛素抵抗、促进血管内皮氧化应激,而与糖尿病肾病风险增加及终末期肾病相关。该文就PKC-β与糖尿病肾病关系的研究进展进行综述。

多巴胺转运蛋白显像剂^(11)C-β-CFT的全自动化合成

通过对反应条件的优化及合成模块的改进,探索了一种高效、全自动化合成11C-β-CFT的方法。以11CO2为起始原料与LiAlH4、HI或HBr反应生成11CH3I(或11CH3Br),再转化成Triflate-11CH3,最后与nor-β-CFT进行甲基化反应合成11C-β-CFT。整个合成工艺实现了全自动化,产品校正放化产率为70.2%±1.8%,放化纯度大于95%。用新方法合成的11C-β-CFT无菌注射液经pH测定、HPLC检测、内毒素检查、细菌培养及异常毒性检查,均符合注射液要求。用制备的11C-β-CFT对正常志愿者与帕金森病患者进行PET显像,PET显像显示正常对照者双侧纹状体影像清晰,帕金森病患者双侧纹状体不对称性摄取减低。该工艺实现了11C-β-CFT全自动化,放化产率高,工艺简单,有利于工作人员放射防护,显像效果良好,可满足临床需要。

糖尿病足截肢患者胫后神经中S-100蛋白、蛋白激酶C-β_2表达的病理学研究

目的观察不同糖尿病病程患者胫后神经中蛋白激酶C-β_2(protein kinaseβ_2,PKC-β_2)、S-100蛋白的表达情况,为糖尿病周围神经病变与PKC-β_2、S-100蛋白关系的研究提供依据。方法选取2012年5月至2017年6月在河北北方学院附属第一医院骨外科因糖尿病足行高位截肢患者截下的肢体共50例,均于大腿中下1/3截肢,手术时留取截肢肢体胫后神经,应用免疫组织化学方法观察不同糖尿病病程患者胫后神经PKC-β_2及S-100蛋白表达的差异。结果免疫组织化学染色结果显示,不同糖尿病病程患者的糖尿病足胫后神经均有PKC-β_2、S-100蛋白表达,且随糖尿病病程延长,糖尿病足胫后神经中PKC-β_2表达水平逐渐增高,S-100蛋白表达水平逐渐降低,差异均有显著性(P<0.05)。结论 PKC-β_2表达增多、S-100蛋白表达减少可能通过某种机制参与了糖尿病周围神经病变的发生发展。

银屑病患者皮损间充质干细胞磷脂酶C-β4和视黄醇脱氢酶10表达水平的研究

目的:通过研究银屑病患者皮损处真皮间充质干细胞(DMSCs)中磷脂酶C-β4(PLCB4)和视黄醇脱氢酶(RDH)10mRNA的表达水平,进一步探讨银屑病发病的细胞及分子机制。方法:对24例寻常性银屑病(PV)患者和22例正常人皮肤DMSCs进行分离培养,流式细胞术进行细胞表型鉴定,实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)测定PLCB4和RDH10 mRNA表达水平。结果:PV组与正常对照组DMSCs形态无差异。PV组患者DMSCs中PLCB4 m RNA的表达水平是正常对照组的3.35倍,RDH10 mRNA的表达水平是正常对照组的1.17倍。结论:银屑病患者DMSCs中PLCB4和RDH10 m RNA表达均增高,可能影响相关信号通路,进而对银屑病发病产生影响。

蛋白激酶C-β抑制剂LY333531对1型糖尿病大鼠肾功能的影响

目的:观察蛋白激酶C(PKC)-β抑制剂LY333531对1型糖尿病大鼠肾功能的保护作用。方法:27只SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病组和LY组,每组各9只。后两组采用一次性尾静脉注射60mg/kg链脲佐菌素(STZ)成功构建1型糖尿病模型。LY组大鼠给予PKC-β抑制剂LY333531(10mg/kg/天)灌胃治疗8周。抽取各组大鼠颈动脉血并留取24h尿液,测量血糖、内生肌酐清除率和24h尿蛋白。之后处死各组大鼠,摘取肾脏称重并计算肾重/体重。统计学分析各组上述指标的差异。结果:与正常对照组比较,糖尿病组和LY组大鼠的体重均明显减轻,而肾重、肾重/体重、血糖及24h尿蛋白均显著升高(P<0.05);LY组大鼠的肾重/体重、内生肌酐清除率及24h尿蛋白水平均低于糖尿病组(P<0.05),两组肾重、体重和血糖差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PKC-β抑制剂LY333531有利于改善1型糖尿病大鼠内生肌酐清除率和减少蛋白尿的产生。

正电子药物^(11)C-β-CFT的合成及质量控制

目的通过对GE公司多功能碳合成器Tracerlab FXC进行改造,实现^(11 )C-β-CFT稳定地自动化合成,并对^(11 )C-β-CFT的合成进行了质量控制。方法改造合成器上不参与反应的装置,以^(11 )CO_2为起始原料在催化剂作用下与I_2生成^(11 )CH_3I,再转化成Triflate-^(11 )CH_3,最后与nor-β-CFT进行甲基化反应,采用固相萃取法分离纯化制得^(11 )C-β-CFT。通过性状检查、pH值检查、放射化学纯度测定、细菌内毒素检查、无菌检查和放射性浓度检查对^(11 )C-β-CFT注射液进行质量控制。结果经改造后连续5次合成^(11 )C-β-CFT,所得^(11 )C-β-CFT注射液为无色透明的无菌无热原的溶液,其放射化学纯度>95%,均符合规定。用制备的^(11 )C-β-CFT对正常志愿者与帕金森患者进行PET显像,PET显像显示正常对照者双侧纹状体显像清晰,帕金森病患者双侧纹状体不对称性和摄取性降低。结论系统改造后操作简单,可安全、快速地合成^(11 )C-β-CFT,所得产品放化纯度高,产率稳定,可满足临床应用要求。

探讨多巴胺转运蛋白显像剂^(11)C-β-CFT合成效率的影响因素

本文以^(11)C-Triflate-CH3为甲基化试剂合成多巴胺转运蛋白显像剂^(11)C-β-CFT,探讨^(11)C-β-CFT合成效率的影响因素,优化合成条件,提高其合成效率。使用国产合成模块PET-CM-3H-IT-Ⅰ全自动化合成^(11)C-β-CFT,通过研究合成过程中反应溶剂、轰靶时间、前体量及淋洗终产品条件等影响因素,得到优化后^(11)C-β-CFT的生产条件:轰靶时长10~24 min,前体浓度为0.5~1.0g/L,以0.2 mL体积比V(丙酮)∶V(乙腈)=1∶1为溶剂,反应条件为室温。从传输^(11)C-CO2到终产品的总合成时间为16min,产量为(8.07±1.94)GBq(n=76);此条件下^(11)C-β-CFT的合成效率为(76.93±6.49)%(n=76,^(11)CTriflate-CH3校正效率),产品的放化纯度大于97%,比活度(56.26±1.55)TBq/g。优化后的生产条件可以提高^(11)C-β-CFT合成效率,解决了Sep-Pak C18柱残留产品过多的问题,可实现稳定、全自动化合成^(11)C-β-CFT且保证产品满足临床需求。

Roux-en-Y胃旁路术对糖尿病大鼠蛋白激酶C-β和蛋白激酶A在肾脏表达的影响

目的探讨Roux-en-Y胃旁路术保护糖尿病大鼠肾脏功能的可能机制。方法采用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)制作糖尿病大鼠模型,经筛选后随机分为糖尿病组(DG组,n=8)、假手术组(SOG组,n=8)、手术组(OG组,n=6)及正常对照组(NCG组,n=8);术后8周观察各组血糖、血尿素氮、血肌酐以及蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)-β和蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)在肾脏的表达变化。结果手术组血糖、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和血肌酐(creatinine,CR)均明显低于糖尿病组和假手术组(P<0.05),PKC-β的m RNA以及蛋白表达水平均较糖尿病组和假手术组低(P<0.05)。PKA的m RNA和蛋白表达水平则较糖尿病组和假手术组高(P<0.05),而手术组与正常对照组无明显差异(P>0.05)。结论 Roux-en-Y胃旁路术后大鼠PKC-β在肾脏表达降低;PKA在肾脏表达增高,使肾脏氧化应激和炎症反应等降低,避免了糖尿病肾损害进一步发展,有效的保护了肾脏功能。

蛋白激酶C-βΙ在乳腺癌组织中的表达及意义

目的观察蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)同工酶在乳腺癌组织中的表达状况,探讨癌细胞信息传递的分子生物学机制。方法应用半定量RT-PCR检测了31例乳腺癌组织与12例癌旁正常乳腺组织中PKC-βΙmRNA表达;应用Westernblot检测以上组织中PKC-βΙ蛋白表达。结果乳腺癌组织中PKC-βΙmRNA与蛋白表达均高于癌旁正常乳腺组织(P<0.001)。结论乳腺癌组织中存在PKC-βΙ同工酶过度表达,它可能介导乳腺癌细胞分化的信号转导过程。

RP-HPLC测定不同产地酢浆草中刺槐素-6-C-β-D-葡萄糖苷含量

目的：建立RP-HPLC测定不同产地酢浆草中刺槐素-6-C-β-D-葡萄糖苷含量的方法,评价酢浆草药材质量。方法：采用高效液相色谱法,DiamonsilC18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,以乙腈和质量分数为0.1%磷酸水溶液（20：80,v/v）作流动相,流速：1 mL/min;检测波长：330nm;柱温：25℃。结果：不同产地酢浆草中刺槐素-6-C-β-D-葡萄糖苷含量差别较大,含量范围为0.5968-2.9504mg/g。结论：该方法简便、快速、准确可靠,适用于酢浆草的质量控制。

在线自动化制备多巴胺转运蛋白显像剂^(11)C-β-CFT

目的建立适于在线自动化制备多巴胺转运蛋白显像剂11C-甲基N-2β-甲基酯3β-(4氟-苯基)托烷(β-CFT)的方法。方法将11C碘代甲烷转换成11C三氟甲基磺酰甲烷(Triflate甲烷),与前体-2β甲基酯-3β(4-氟苯基)去甲基托烷(norβCFT)反应,在线转移到反相C18柱上纯化,最后将11CβCFT洗脱于收集瓶。正常大鼠给药后不同时间处死,测定其生物分布。2例帕金森病(PD)患者分别用11CβCFT和多巴胺D2受体显像剂11C-雷氯必利(Raclopride)显像。结果在线自动化制备的11CβCFT放化纯>98%,比活度>2TBqmmol,校正合成效率为(92.4±3.1)%,从11C-碘代甲烷到11CβCFT的合成时间为4min。放射性在正常大鼠体内主要分布于肝、肾和脑;颅内纹状体摄取放射性最高,与小脑的比值在5、15、30min分别为2.15、4.18和3.15。2例PD患者显像结果表明,11CβCFT对PD的诊断比11C-Raclopride灵敏。结论在线自动化制备11C-β-CFT效率高,速度快,放化纯高。初步显像结果表明,其可满足临床需要。

维生素C-β-CD包合物对湿热和光的稳定性的研究

目的 :研究VitC - β-CD包合物稳定性。方法 :以包合物中VitC含量为指标 ,分别对包合物和混合物进行高温、高湿、光照实验。结果 :包合物中VtiC含量在高温、高湿、光照条件下没有明显变化 ,而混合物中VtiC的含量有明显下降。结论

维生素C-β-CD包合物抗热抗氧化的研究

目的 :研究维生素 C- β- CD包合物的稳定性。方法 :以包合物中维生素 C含量为指标 ,分别对包合物和混合物进行高温和氧化实验。结果 :包合物中维生素 C含量在高温和氧化条件下没有明显变化 ,而混合物中维生素 C的含量有明显下降。结论

蛋白激酶C-β2信号通路在糖尿病肾病的肾小管上皮细胞损伤的研究进展

蛋白激酶C-β2(PKC-β2)是蛋白激酶的常规异构体,蛋白激酶C的亚型之一。PKC-β2在高血糖条件下高表达,可引发多种糖尿病并发症,主要为心血管并发症,还包括肾病、神经病变、视网膜病变等。选择性抑制PKC-β2将是治疗糖尿病以及糖尿病相关并发症的有利途径之一。由于蛋白激酶C异构体之间高度的序列相似性,选择性地抑制PKC-β2较为困难,但仍有望在近期实现。近年来关于PKC-β2参与糖尿病肾病的研究越来越多,未来有希望成为治疗糖尿病肾病重要的靶点。

大麻素对脑出血大鼠皮质内PKAC-β、c-fos及BDNF表达量的影响

目的探讨大麻素(WIN55,212-2)对大鼠局灶性脑出血后同侧大脑皮质内PKAC-β、c-fos和BDNF mRNA及蛋白质表达量的影响。方法采用Ⅶ型胶原酶制作大鼠脑出血模型,术后0.5h后腹腔注射药物,均在24h后取脑组织;采用免疫组化方法定位PKAC-β、c-fos和BDNF蛋白;采用RT-PCR检测各组大脑皮质内PKAC-β、c-fos和BDNF mRNA的表达;采用Western blot检测各组大脑皮质内PKAC-β和BD-NF蛋白质的表达。结果WIN55,212-2上调同侧大脑皮质内BDNF mRNA和蛋白质的表达,同时也上调c-fos mRNA表达量,但抑制PKAC-β mRNA和蛋白质的表达;免疫组化结果显示PKAC-β,c-fos和BDNF蛋白分别位于神经元胞膜、细胞核或胶质细胞的胞质中。结论WIN55,212-2促进大脑皮质内BDNF蛋白的合成,为其临床上治疗脑血管病提供理论依据。

蛋白激酶C-βⅡ在糖尿病肾病中的研究进展

蛋白激酶C-βⅡ(PKC-βⅡ)是单个多肽链,包含由5个可变区(V1~V5)间隔的4个保守结构域(C1~C4)。高糖环境可导致组织中二酰甘油水平普遍升高,进而激活PKC-βⅡ。而PKC-βⅡ能够激活一系列下游信号通路,引发多组织器官发生病变,导致糖尿病并发症发生,如糖尿病肾病等。PKC-βⅡ抑制剂LY333531可以通过抑制PKC-βⅡ的激活来阻断下游信号通路,从而起到治疗糖尿病肾病的作用。近年来关于PKC-βⅡ在糖尿病肾病中的研究越来越多,本文就其相关研究进展作一综述。

优化^(11)C-β-CFT自动合成模块的工艺研究

目的优化GE Tracerlab FX2-C模块合成^(11)C-β-CFT合成准备,提高模块标记不同药物时的管线包容性。方法 GE Tracerlab FX2-C多功能合成模块由于功能强、接头多、管线复杂,合成不同种类的药物时需要频繁反复的更换接头和管线,不仅容易导致接头阀门的损坏,也可能增加管线接口混淆的可能性,增加药物生产的不稳定性。本实验利用GE Tracerlab FX2-C模块,在不改变硬件、试剂、耗材和方法的情况下,通过短接HPLC六通阀废液出口接头和流动相收集瓶接头V14达到短接反应瓶出口接头V7和收集瓶接头V14的效果,从而避免了合成不同药物时反复更换接头V7的不便,使得合成过程更加便捷。结果此方法合成^(11)C-β-CFT时间约40 min,放化产率10%(未时间校正,n=3),放化纯度>99.9%。结论使用GE Tracerlab FX2-C模块优化后的线路,^(11)C-β-CFT合成时间和效率与传统方法比较没有受到明显影响,但提高了模块标记不同药物时的管线包容性,简化了准备流程。