乌苏里蝮蛇毒一种C-型凝集素相关蛋白的分离、纯化及活性测定

目的从乌苏里蝮蛇蛇毒中分离纯化得到具有促凝血活性的C-型凝集素相关蛋白。方法利用IDA-Sepharose FF亲和色谱作为独立的蛋白分离纯化手段,并且结合Sephadex G-100,Sephadex G-50凝胶过滤色谱从乌苏里蝮蛇蛇毒中分离得到一个新的蛋白组分。结果该组分经还原和非还原SDS-PAGE电泳鉴定结果显示为均一的单一条带,即C-型凝集素相关蛋白,相对分子质量约为15.7 kD。结论经过一系列的分离和纯化,能够从乌苏里蝮蛇蛇毒中提取到C-型凝集素相关蛋白组分。

社区获得性肺炎中医证型与血清C-反应蛋白及甘露聚糖结合凝集素的研究

目的：研究社区获得性肺炎（CAP）中医证型血清C-反应蛋白（CRP）及甘露聚糖结合凝集素（MBL）的变化规律，探索中医辨证分型的客观指标。方法选择CAP患者104例，依据《社区获得性肺炎中医诊疗指南（2011版）》将CAP分为实证类（风热袭肺证、外寒内热证、痰热壅肺证、痰湿壅肺证）、正虚邪恋类（肺脾气虚证、气阴两虚证）、危重变证类（热陷心包证、邪陷正脱证）3类8个证候。以同期健康体检者100例为健康对照者。检测各受试者治疗前及治疗后4 d、7 d血清CRP及MBL水平。结果104例CAP患者中证型实证类居多（占63.5%），正虚邪恋类次之（占19.2%），危重变证类占17.3%。CAP各中医证型血清CRP水平高于健康对照者，且随时间变化及不同中医证型而存在差异。随治疗时间延长CAP各中医证型血清CRP水平均呈下降趋势，风热袭肺、外寒内热证型治疗后7 d已降至正常（mg/L：13.51±11.48、7.07±1.84比6.96±2.19，均P＞0.05）；肺脾气虚、气阴两虚证型血清CRP水平较高，但下降速度较快，治疗后7 d时接近正常，但仍高于健康对照组（25.25±25.90、18.17±23.19比6.96±2.19，均P＜0.05）；痰热壅肺、痰湿壅肺证型血清CRP水平虽有下降，治疗后7 d时仍保持较高水平（51.70±27.33、49.28±30.57）；热陷心包、邪陷正脱证型血清CRP水平无下降趋势。风热袭肺、外寒内热、痰热壅肺、痰湿壅肺、肺脾气虚及气阴两虚证型患者血清MBL水平高于健康对照者；热陷心包、邪陷正脱证型血清MBL水平低于其他证型，随治疗时间延长保持较低水平。结论血清CRP可作为判断CAP中医证型参考指标；低血清MBL提示CAP中医证型较重，预后不良。

凝集素途径激活与原发性膜性肾病外周血栓发生及纤维蛋白原相关抗原沉积的关系

目的探究原发性膜性肾病(PMN)患者肾活检组织补体凝集素途径激活与血栓栓塞发生和纤维蛋白原相关抗原(FRA)沉积的相关性。方法将2014年8月至2023年9月中日友好医院住院期间发生血栓栓塞的10例PMN患者纳入血栓组(病例组),按照病例组的年龄和临床表现,选择同期与之匹配的无血栓的PMN住院患者纳入无血栓组(对照组)。应用免疫组化对两组患者的肾活检组织进行补体凝集素途径(MBL)检测,采用单因素分析及多因素logistic回归模型,分析凝集素途径激活与血栓栓塞事件的相关性;应用免疫荧光检测肾活检组织中FRA沉积,分析PMN患者肾活检组织凝集素途径激活与FRA沉积的相关性。结果血栓组MBL沉积水平显著高于无血栓组(P=0.024),多因素logistic回归分析显示MBL沉积是血栓发生的危险因素(OR=6.888,P=0.027);MBL阳性组患者肾脏FRA沉积显著高于MBL阴性组(P=0.030)。结论在PMN中,凝集素途径补体活化是外周血栓栓塞事件发生的危险因素;凝集素途径的激活与肾小球FRA的沉积相关。

血清半乳糖缺陷型IgA1和甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶3在IgA肾病发病机制中的研究进展

IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)是世界范围内最常见的原发性肾小球疾病,是导致终末期肾病的常见原因。目前,肾活检仍然是其诊断和评估病情活动的金标准。已有研究显示半乳糖缺陷型IgA1(galactose-deficient IgA1,Gd-IgA1)的沉积在IgAN致病过程中发挥重要作用,GdIgA1的沉积会激活补体系统,包括替代途径、凝集素途经和经典途径,甘露糖结合凝集素是凝集素途径起始的关键因子,活化的甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶(mannose binding lectin-associated serine protease,MASPs)是凝集素途径的关键酶,MASPs存在三种不同的亚型(MASP1、MASP2、MASP3),MASP3作为一种新型的MASP蛋白酶,成为近期研究热点,国内外多项研究表明MASP3能够激活D因子,参与替代途径,造成肾小球系膜细胞的损伤。因此Gd-IgA1的沉积与MASP3地出现在IgAN当中可能存在一些联系,有待于进一步的实验研究。本文旨在系统综述GdIgA1、MASP3在IgAN的发病机制中的作用,并探讨Gd-IgA1与MASP3之间的相关性。

血清脂蛋白相关磷脂酶A_(2)及可溶性凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1与急性心肌梗死患者Gensini积分的相关性

目的分析血清脂蛋白相关磷脂酶A_(2)(Lp-PLA_(2))及可溶性凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(sLOX-1)与急性心肌梗死(AMI)患者Gensini积分的相关性。方法选取2020年3月至2021年7月焦作市人民医院收治的117例AMI患者作为研究组,另选同期126名健康体检者作为对照组。比较两组血清Lp-PLA_(2)、sLOX-1水平。比较不同病变冠状动脉分支及不同Gensini积分患者血清Lp-PLA_(2)、sLOX-1水平。探讨血清Lp-PLA_(2)、sLOX-1水平变化与Gensini积分的相关性。结果研究组血清Lp-PLA_(2)、sLOX-1水平高于对照组(P<0.05);随冠状动脉病变支数增加,Lp-PLA_(2)、sLOX-1水平持续升高,即单支病变患者血清Lp-PLA_(2)、sLOX-1水平低于双支及多支病变患者,双支病变患者血清Lp-PLA_(2)、sLOX-1水平低于多支病变患者(P<0.05);随Gensini积分升高,血清Lp-PLA_(2)、sLOX-1水平持续升高,即轻度患者血清Lp-PLA_(2)、sLOX-1水平低于中度及重度患者,中度患者血清Lp-PLA_(2)、sLOX-1水平低于重度(P<0.05);经Pearson分析显示,血清Lp-PLA_(2)(r=0.506,P<0.001)、sLOX-1(r=0.457,P<0.001)水平与Gensini积分呈正相关(P<0.05)。结论AMI患者体内血清Lp-PLA_(2)、sLOX-1水平呈高表达状态,且其水平随冠状动脉病变支数增加、Gensini积分升高而升高。

脂蛋白相关磷脂酶A2、可溶性凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1以及氧化修饰低密度脂蛋白水平与高血压脑出血患者预后的相关性研究

目的分析脂蛋白相关磷脂酶A2(Lipoprotein-associated phospholipaseA2,Lp-PLA2)、可溶性凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(soluble lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1,sLOX-1)、氧化修饰低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)水平与高血压脑出血(hypertensive intracerebral hemorrhage,HICH)患者预后的相关性。方法回顾性分析66例HICH病例资料,患者术后均持续随访1个月,使用格拉斯哥预后评分(Glasgow outcome sacle,GOS)评估患者预后,GOS 1~3分为预后不良(n=32),GOS 4~5分为预后良好(n=34)。比较两组基线资料、Lp-PLA2、sLOX-1、ox-LDL水平和美国国立卫生研究院卒中量表(National Institute of Health stroke scale,NIHSS)评分。采用Pearson相关性分析法分析HICH患者Lp-PLA2、sLOX-1、ox-LDL水平与NIHSS评分的相关性。使用受试者工作特征曲线(Receiver operator characteristic curv,ROC)分析Lp-PLA2、sLOX-1、ox-LDL水平评估HICH患者预后的价值。结果两组HICH患者性别、年龄、发病至入院时间、高血压病程,差异无统计学意义(P>0.05),但预后不良组HICH患者出血量、Lp-PLA2、sLOX-1、ox-LDL水平与NIHSS评分均高于预后良好组(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示:HICH患者Lp-PLA2、sLOX-1、ox-LDL水平与NIHSS评分均呈正相关(P<0.05)。ROC分析结果显示:Lp-PLA2、sLOX-1、ox-LDL水平在评估HICH患者预后的最佳临界值分别为157.75μg/L、362.50ng/L、54.15μg/dL,曲线下面积分别为0.793、0.900、0.793(P<0.05),敏感度分别为75.00%、87.50%、78.13%,特异度分别为82.35%、82.35%、76.47%。结论预后不良组HICH患者Lp-PLA2、sLOX-1、ox-LDL水平呈高表达,Lp-PLA2、sLOX-1、ox-LDL水平越高,神经损伤越严重,且Lp-PLA2、sLOX-1、ox-LDL水平在评估HICH患者预后中具有一定价值。

血清半乳糖凝集素-3、分泌型卷曲相关蛋白-1与早期糖尿病肾病的相关性

目的:探讨早期糖尿病肾病(EDN)患者血清半乳糖凝集素-3(Gal-3)、分泌型卷曲相关蛋白-1(SFRP-1)的表达水平,分析其与EDN的相关性。方法:纳入2020年1月—2021年10月我院住院的2型糖尿病患者90例作为DM组,早期2型糖尿病肾病90例作为EDN组,同期健康体检者60例作为对照组,对比3组生化指标、Gal-3、SFRP-1、尿白蛋白/肌酐比值(uACR)的差异。同时根据uACR水平将EDN患者分成正常白蛋白尿组(uACR<30mg/g,n=24)、微量白蛋白尿组(30mg/g≤uACR<300mg/g,n=38)与大量白蛋白尿组(uACR≥300mg/g,n=28),对照各组血清Gal-3、SFRP-1水平的差异。分析血清Gal-3、SFRP-1水平与EDN的相关性。结果:(1)DM组、EDN组低密度脂蛋白(LDLC)、甘油三酯(TG)、空腹血糖(FBG)、收缩压、舒张压、餐后2小时血糖(2hPG)、尿酸(UA)、同型半胱氨酸(Hcy)、Gal-3、SFRP-1均较对照组升高,而EDN组LDLC、TG、FBG、收缩压、舒张压、2hPG、UA、Hcy、Gal-3、SFRP-1较DM组升高,差异有统计学意义(均P<0.01)。(2)随着肾损害逐渐加重,血清Gal-3、SFRP-1水平逐渐升高,差异有统计学意义(均P<0.01)。(3)Pearson相关分析显示:血清Gal-3、SFRP-1均与收缩压、LDLC、TG、FBG、2hPG、UA、Hcy、uACR呈正相关(P<0.01或P<0.05)。(4)Logistic回归分析:Gal-3、SFRP-1、FBG、2hPG、LDLC、收缩压、UA、Hcy为影响早期DN的独立危险因素(均P<0.01或P<0.05)。结论:EDN患者血清Gal-3、SFRP-1水平升高,其为影响EDN的独立危险因素,可能参与EDN的发生、发展。

环境胁迫对大菱鲆C-型凝集素功能的影响

大菱鲆C-型凝集素(SmLec1)是一种重要的免疫因子,本实验通过分析其活性特点以及环境胁迫对其表达调控的影响,探讨其在大菱鲆先天免疫应答过程中的潜在功能以及养殖环境中的应用。实验利用原核表达系统进行重组表达,并通过纯化获得19 ku重组目的蛋白;活性分析结果显示,SmLec1对所选6种细菌的凝集作用存在差异,其中对鳗弧菌和爱德华氏菌具有明显的凝集作用;在选取的8种糖类中,木糖、果糖、蔗糖、乳糖和甘露糖能够抑制SmLec1的凝集活性;在理化因子(pH、温度)中,pH<7和温度>37°C时对SmLec1的凝集活性产生抑制;鳗弧菌感染实验显示,感染6 h时肝组织的SmLec1表达量明显上升,在12 h时达到最高值,随后有所下降;温度胁迫时肝组织的SmLec1 m RNA表达量受到温度的影响显著,在19°C开始升高,22~27°C呈降低趋势,其他组织变化不显著。盐度胁迫对SmLec1在各盐度的表达量变化不显著。研究表明,SmLec1能够抑制鳗弧菌的感染,其表达受到温度的影响,本研究为进一步明确SmLec1蛋白的抗菌机理和探索对大菱鲆疾病的免疫学防治途径提供科学依据。

凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1在C反应蛋白诱导人脐静脉内皮细胞组织因子表达中的作用

目的研究凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(lectin-type oxidized LDL receptor1,LOX-1)在C-反应蛋白(c-reactive protein,CRP)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)组织因子(tissue factor,TF)表达中的作用。方法用人重组质粒pTracer CMV2-CRP转染HUVECs细胞,分正常对照组、空质粒GFP组和CRP-GFP组(n=3),RT-PCR、Western blot检测TF、LOX-1 mRNA和蛋白表达。Western blot检测各组P-ERK1/2、T-ERK1/2、P-JNK、T-JNK蛋白表达。CRP-GFP组分别加LOX-1阻断剂、ERK1/2阻断剂(U0126)、JNK阻断剂(SP600125),Westernblot检测TF蛋白。结果用表达人CRP的质粒转染HUVECs显著增加LOX-1 mRNA和蛋白表达[(0.70±0.03)vs(0.24±0.01),(0.661 6±0.020 0)vs(0.255 8±0.040 0),P<0.05]、TF的mRNA和蛋白表达[(0.442±0.040)vs(0.146 0±0.030 0),(0.727 4±0.020 0)vs(0.217 4±0.020 0),P<0.05]。CRP启动了ERK1/2 MAPK,未启动JNKMAPK。CRP上调TF表达被ERK1/2阻断剂而非JNK阻断剂阻断.抗LOX-1的中和抗体显著减少CRP诱导的TF mRNA和蛋白表达[(0.264 0±0.030 0)vs(0.442 0±0.040 0),(0.324 4±0.040 0)vs(0.727 4±0.020 0),P<0.05]。结论CRP诱导HUVECs细胞LOX-1表达上调,并通过LOX-1受体这一新途径上调TF表达,且CRP通过ERK1/2 MAPK信号途径非JNK MAPK途径上调了HUVEC细胞TF的表达。

破骨细胞抑制凝集素相关蛋白2的真核表达及多克隆抗体制备

目的:为了获得真核表达的重组蛋白OCILRP2-Fc和OCILRP2特异性抗体,用于OCILRP2生物学功能的进一步研究。方法:构建了融合人IgG Fc段的小鼠OCILRP2真核表达载体pIg-CD5-OCILRP2,将pIg-CD5-OCILRP2转染CHO细胞,G418筛选稳定表达细胞株;Protein A亲和层析从CHO细胞培养上清中纯化重组蛋白OCILRP2-Fc并免疫家兔制备OCILRP2多克隆抗体。ELISA检测抗血清和多克隆抗体的效价,Western blot验证多克隆抗体的特异性,并应用该抗体检测OCILRP2在树突状细胞(Dendritic cells,DC)中的表达。结果:ELISA结果表明OCILRP2-Fc稳定表达细胞株经过多次传代培养后仍然具有较高的蛋白表达水平;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示纯化后的蛋白只有单一条带出现,且该条带可以被抗人IgG检测到;重组蛋白OCILRP2-Fc免疫家兔获得的抗血清和纯化后得到的OCILRP2多克隆抗体效价分别为1∶1 280 000和1∶320 000,Western blot证明该抗体可以和免疫原OCILRP2-Fc及NIH/3T3细胞中表达的OCILRP2特异性结合。应用该抗体检测OCILRP2在DC的表达发现OCILRP2在成熟DC的表达明显高于不成熟DC。结论:获得了真核表达的重组蛋白OCILRP2-Fc和高效价的OCILRP2特异性抗体,为进一步研究OCILRP2在免疫应答中的功能奠定了基础。

甘露糖结合凝集素补体途径与糖尿病肾病的相关性的研究进展

糖尿病肾病是糖尿病最严重的微血管并发症,是终末期肾病的重要病因之一。甘露糖结合凝集素(mannose-binding lectin,MBL)是糖尿病肾病发生发展重要的生物标志物,H型纤维胶原凝集素(H-ficolin)也与糖尿病肾病的发展有关,而MBL相关丝氨酸蛋白酶与糖尿病肾病的关系有待进一步研究。

血清Visfatin CTRP12半乳糖凝集素-3对2型糖尿病合并脑梗死诊断及预后评估的价值

目的 探讨血清内脂素、C1补体肿瘤坏死因子相关蛋白12、半乳糖凝集素-3对2型糖尿病合并脑梗死诊断及预后评估的应用价值。方法 将72例2型糖尿病合并脑梗死患者设为研究组,另选取80例单纯2型糖尿病患者设为对照组。比较入院时两组血清内脂素、C1补体肿瘤坏死因子相关蛋白12、半乳糖凝集素-3水平,采用受试者工作特征曲线分析各血清指标诊断价值,比较治疗7 d及治疗14 d不同预后患者血清内脂素、C1补体肿瘤坏死因子相关蛋白12、半乳糖凝集素-3水平及颈动脉内膜中层厚度,采用Pearson相关性分析法分析各血清指标与颈动脉内膜中层厚度、格拉斯哥预后量表评分关联性及预后预测价值,并采用Kaplan-Meier曲线进行生存分析。结果 入院时研究组血清内脂素、半乳糖凝集素-3水平显著高于对照组(P<0.01),C1补体肿瘤坏死因子相关蛋白12水平显著低于对照组(P<0.01)。血清内脂素、C1补体肿瘤坏死因子相关蛋白12、半乳糖凝集素-3联合诊断2型糖尿病合并脑梗死的曲线下面积最大,为0.878。治疗第7 d、第14 d预后良好组血清内脂素、半乳糖凝集素-3水平及颈动脉内膜中层厚度显著低于入院时(P<0.01),且显著低于预后不良组(P<0.01),C1补体肿瘤坏死因子相关蛋白12水平显著高于入院时(P<0.01),且显著高于预后不良组(P<0.01);治疗第14 d预后不良组血清内脂素及半乳糖凝集素-3水平显著低于入院时(P<0.05或0.01)。血清内脂素、半乳糖凝集素-3水平与颈动脉内膜中层厚度呈显著正相关(P<0.05),C1补体肿瘤坏死因子相关蛋白12水平与颈动脉内膜中层厚度呈显著负相关(P<0.05)。入院第14 d内脂素预测2型糖尿病合并脑梗死预后的曲线下面积最大,为0.808。Kaplan-Meier曲线分析显示,血清内脂素、C1补体肿瘤坏死因子相关蛋白12、半乳糖凝集素-3的生存曲线比较差异有统计学意义(P<0.05或0.01)。结论 2型糖尿病合并脑梗死患者存在血清内脂素、C1补体肿瘤坏死因子相关蛋白12、半乳糖凝集素-3异常表达情况,与颈动脉内膜中层厚度、格拉斯哥预后量表评分关系密切,可作为早期诊断、预后评估的检测指标,为临床治疗指明新方向。

2型糖尿病合并冠心病与脂联素及炎性因子的相关性

目的:探讨脂联素(APN)水平与2型糖尿病(T2DM)合并冠心病(CHD)炎症反应的关系,以及与炎症因子在合并冠心病中的相关性及意义。方法:选择临床确诊的住院和门诊T2DM患者128例,分为T2DM组(66例)和T2DM合并CHD组(62例)。采用ELISA法检测血清APN和IL-6、IL-18、hs-CRP水平,进行对比分析。结果:①T2DM患者血清IL-6、IL-18及hs-CRP水平均显著高于对照组(P<0.01),血清APN水平显著低于对照组(P<0.01);T2DM+CHD患者组血清IL-6、IL-18及hs-CRP水平均显著高于T2DM组(P<0.01),血清APN水平显著低于T2DM组(P<0.01);②T2DM合并CHD组血清APN水平与IL-6、IL-18、hs-CRP水平均呈显著性负相关(r=-0.571、-0.602、-0.624,P<0.01);hs-CRP与IL-6、IL-18均呈显著性正相关(r=0.747、0.806,P<0.01);IL-6与IL-18呈显著性正相关(r=0.827,P<0.01)。结论:T2DM患者体内存在APN和IL-6、IL-18、CRP的异常表达,合并CHD患者更为显著,且其具有显著相关性。APN及IL-6、IL-18、CRP参与了T2DM合并CHD的发生发展,此为早期干预T2DM患者合并CHD提供了理论依据。

DC-SIGN荧光融合蛋白的构建、表达和生物学功能初探

目的构建绿色荧光蛋白(EGFP)标记的DCSIGN分子(DCSIGNEGFP融合蛋白),并在哺乳动物细胞中获得功能性表达。方法PCR方法获得DCSIGN分子和EGFP分子的cDNA,分别克隆入真核表达载体pEGFPN1和真核表达载体pCI,使EGFP荧光蛋白分别位于DCSIGN蛋白的C末端和N末端。在转染COS7细胞后,在激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测重组分子的表达及融合蛋白在细胞定位情况。激光共聚焦显微镜检测融合蛋白的功能情况。结果获得了预期的重组表达质粒,经DNA测序证实开放阅读框正确,转染COS7细胞后绿色荧光蛋白位于细胞膜,仅EGFP位于DCSIGNN末端的融合蛋白可被抗DCSIGN抗体结合。EGFP位于DCSIGNN末端的融合蛋白可有效摄取DCSIGN受体的高亲和力配体le(x)寡糖。结论所构建的DCSIGNEGFP融合蛋白在细胞内表达后具有细胞表面受体分子的特征性分布,可被抗DCSIGN抗体检测及摄取特异性配体,为进一步深入研究DCSIGN分子功能提供了良好的模型。

血清galectin-3、S-endoglin水平与1型糖尿病儿童糖代谢紊乱及微血管并发症的相关性分析

目的探讨血清半乳凝集素-3(galectin-3)、可溶性内皮糖蛋白(S-endoglin)水平与1型糖尿病(T1DM)儿童糖代谢紊乱及微血管并发症的相关性。方法选择2016年2月—2022年2月河北省唐山市妇幼保健院小儿内分泌科收治T1DM患儿105例(T1DM组),另选择健康儿童52例为健康对照组。根据T1DM患儿是否发生微血管并发症将其分为并发症亚组28例和无并发症亚组77例。检测2组血清galectin-3、S-endoglin及空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、糖化血红蛋白(HbA)水平。Pearson分析T1DM患儿血清galectin-3、S-endoglin与FPG、FINS、HOMA-IR和HbA的相关性,受试者工作特征曲线(ROC)分析血清galectin-3、S-endoglin诊断T1DM儿童微血管并发症的价值。结果T1DM组血清galectin-3、S-endoglin、FPG、FINS、HOMA-IR、HbA水平均显著高于健康对照组(t/P=24.934/<0.001、13.370/<0.001、12.924/<0.001、5.954/<0.001、88.256/<0.001、14.378/<0.001)。并发症亚组血清galectin-3、S-endoglin水平高于无并发症亚组(t/P=21.812/<0.001、7.495/<0.001),血清galectin-3、S-endoglin水平与FPG、FINS、HOMA-IR、HbA均呈正相关(galectin-3:r/P=0.356/0.006、0.402/0.002、0.562/<0.001、0.411/<0.001;S-endoglin:r/P=0.327/0.009、0.417/<0.001、0.593/<0.001、0.428/<0.001)。血清galectin-3、S-endoglin及二者联合诊断T1DM患儿并发微血管并发症的曲线下面积为0.739、0.718、0.914,二者联合诊断效能高于各自单独诊断(Z=3.183、3.349,P均<0.001)。结论T1DM患儿高血清galectin-3、S-endoglin水平可能与糖代谢紊乱及微血管并发症发生有关。

炎症反应相关因子与2型糖尿病

已知2型糖尿病病人中一些与炎症反应相关的因子如C反应蛋白、瘦素、肿瘤坏死因子、白介素等浓度升高。近年发现这些因子在多种组织中能影响血糖浓度,也能影响胰岛素分泌,通过前瞻性研究可证明C-反应蛋白、肿瘤坏死因子、白介素、血浆纤溶酶原激活物抑制剂、瘦素、脂联素、Tinis等炎症反应相关因子浓度高的人群有较高的2型糖尿病的发病率,且与2型糖尿病的发展有明显相关性。

肺表面活性物质相关蛋白与临床肺疾病

肺表面活性物质是由Ⅱ型细胞产生的磷脂蛋白复合体,有四种肺表面活性物质相关蛋白(SP)。根据它们与磷脂的结合可分为亲水性和疏水性两种,亲水性SP属于C型凝集素家族,基因定位及结构均与其他C型凝集素相似,主要参与宿主防御反应、免疫调节等;疏水性SP由于其结构特征,能够降低肺表面张力,提高肺顺应性。SP参与多种临床疾病的过程,在各种疾病中的变化各不相同。SP基因的各种变异也影响个体对肺部疾病的易感性和对治疗的反应。本文对SP与临床肺疾病作一综述,利于正确认识它们之间的关系。

凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1对乙醇诱导的大鼠心肌细胞自噬的影响

目的探讨乙醇诱导下大鼠心肌细胞模型中凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor 1,LOX-1)的表达及其与自噬相关蛋白Beclin-1和自噬微管相关蛋白轻链3抗体Ⅱ(autophagy microtubule-associated protein light chain 3 antibodyⅡ,LC3-Ⅱ)的相关关系。方法选取对数生长期的大鼠心肌细胞随机分为以下6组:Blank组、乙醇组、乙醇+sh-NC组、乙醇+sh-LOX-1组、乙醇+OE-LOX-1组和乙醇+OE-LOX-1+si-NC组,除空白对照组外,其余各组细胞均用200 mmol/L酒精孵育1 d,体外构建乙醇诱导的大鼠心肌细胞模型。电镜观察自噬小体的数量。实时荧光定量PCR(Realtime PCR)和蛋白印迹法(Western blot)分别检测LOX-1、Beclin-1、LC3-I、LC3-Ⅱ在各组中的表达水平,并进行比较与分析。结果急性乙醇暴露后可使大鼠心肌细胞中LOX-1、Beclin-1、LC3-I和LC3-Ⅱ在基因和蛋白水平表达明显升高(P<0.01)。对LOX-1的表达抑制后,Beclin-1、LC3-I和LC3-Ⅱ表达明显下调(P<0.01),而在对LOX-1进行过表达处理后,则能够增加Beclin-1、LC3-I和LC3-Ⅱ的表达水平(P<0.01)。透射电镜下,急性乙醇摄入可造成大鼠心肌细胞中自噬小体增多;下调LOX-1后可减少自噬小体数量,而过表达LOX-1则会增加自噬小体数量(P<0.01)。结论LOX-1在急性乙醇诱导下的大鼠心肌细胞模型中表达上调,且与自噬相关因子(Beclin-1、LC3-Ⅱ)呈协同变化趋势,提示LOX-1可能通过上调Beclin-1和LC3-Ⅱ表达水平造成自噬水平的过度激活从而推动酒精致心肌损伤的病理过程。

基于生物信息学筛查CLEC3B蛋白及其在脓毒症诊断中的作用

目的:研究正常人与脓毒症患者血清差异表达蛋白中C-型凝集素域家族3成员B(CLEC3B)蛋白,探讨目标CLEC3B蛋白作为脓毒症分子标志物的可能性。方法:收集10名健康志愿者(健康组)和18例脓毒症患者(脓毒症组)外周血,利用数据独立采集法对外周血清蛋白数据进行采集,数据上传至i DEP在线平台分析脓毒症患者外周血中差异表达蛋白。并对这些差异蛋白进行生物信息学分析,筛选出脓毒症关键蛋白。酶联免疫吸附法(ELISA)验证并绘制关键蛋白受试者工作特征(ROC)曲线。结果:蛋白质组学分析筛选出138个差异表达蛋白(DEPs),其中34个蛋白显著下调,104个蛋白显著上调。DEPs主要富集在细胞过程、生物调节、生物过程调节、参与绑定、催化活化、分子功能监管、免疫系统、信号转导等。DEPs构建蛋白-蛋白相互作用网络(PPI)筛选出感兴趣的关键蛋白CLEC3B。ELISA实验表明脓毒症组患者CLEC3B蛋白浓度(297.73±22.00)ng/ml显著低于健康组(452.42±191.72)ng/ml,差异具有统计学意义(t=13.13,P=0.000)。CLEC3B蛋白的ROC曲线下面积为0.998,灵敏度为97.73%,特异度为100.0%。结论:CLEC3B蛋白在脓毒症组中显著降低,其灵敏度高,特异度高,可以作为脓毒症潜在的生物学诊断标志物。临床试验注册号中国临床试验注册中心,ChiCTR1900021261。

中介蝮毒腺C-型凝集素样蛋白基因的cDNA克隆和序列分析

C-型凝集素样蛋白是一类钙离子依赖型的具有糖结合活性的非酶蛋白,可结合凝血因子及血小板而影响人体的凝血系统稳态,具有抗凝作用。本研究基于中介蝮(Gloydius intermedius)蛇毒C-型凝集素样蛋白α链和β链的部分核苷酸序列,设计了2对PCR引物,通过RT-PCR技术从中介蝮毒腺中克隆出的α和β链(Gi-CTLPα,Gi-CTLPβ)的全长c DNA,克隆入T载体后,对所获克隆进行了测序,并进行了生物信息学分析。结果表明,Gi-CTLPα、Gi-CTLPβ的开放阅读框(ORF)分别为477 bp和462 bp,分别编码158个和153个氨基酸,信号肽分别为21个和23个氨基酸。蛋白质一级结构同源性分析表明,Gi-CTLPα和Gi-CTLPβ之间的序列相似度为29%,Gi-CTLPα和β分别与日本蝮(Gloydius blomhoffi)的Mamushiginα亚基和β亚基的同源性最高(90%和93%),Gi-CTLPα和Mamushigin的α亚基氨基酸序列的差异主要有13个,Gi-CTLPβ和Mamushigin的β亚基氨基酸序列的差异主要有7个。用蛋白功能预测软件SIFT在线分析表明,Gi-CTLPα中第47和136位的氨基酸差异使得Gi-CTLPα与Mamushiginα的功能明显不同,而Gi-CTLPβ和Mamushiginβ亚基的功能没有明显差异。由于Gi-CTLPα和β链会像Mamushigin那样通过二硫键形成异二聚体,这些一级结构的差异会影响其与靶蛋白的结合特性,这一结果为下一步研究Gi-CTLP的功能及利用奠定了理论基础。