L-丝氨酸产生菌c-11中serA基因的克隆与表达

利用PCR技术以L-丝氨酸产生菌株黄色短杆菌c-11的染色体DNA为摸板,扩增出serA基因,连接到表达载体pEC7上,转化L-丝氨酸产生菌c-11,使其氨基酸产量由12 g/L增加到18 g/L,产酸率增加了50%。

提高黄色短杆菌C-11电转化效率的方法

黄色短杆菌C-11是L-丝氨酸工业化生产的优良菌株,而基因工程菌的构建是提高L-丝氨酸产量的有效途径。在基因工程菌株的构建过程中,重组质粒的转化效率是获得重组菌株的关键。电转化是近几年来被广泛应用的一种快捷而高效的转化方法。电转化效率的高低取决于菌株的特性、质粒的大小、转化的电压、温度、溶液体系、菌体与DNA的浓度等诸多因素,从几个方面就黄色短杆菌C-11电转化效率的提高方法加以论述,也为其它黄色短杆菌电转化效率的提高提供参考方法。

^(11)C-PIB PET定性及半定量分析在鉴别诊断阿尔茨海默病中的价值

目的探讨通过11 C-匹兹堡化合物B(11 C-Pittsburgh compound B,11 C-PIB)正电子发射计算机断层显像(positron emission tomography,PET)定性及半定量分析脑内β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)沉积程度,评价其对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)、轻度认知障碍(mild cognitive impairment,MCI)及非阿尔茨海默病所致认知障碍(non Alzheimer s disease induced cognitive impairment,NAD)的诊断及鉴别诊断价值。方法回顾性分析首都医科大学宣武医院神经内科2022年收治的AD患者(AD,n=36)、轻度认知障碍患者(MCI,n=20)、非AD所致认知障碍患者(NAD,n=19)及健康对照者(normal control,NC,n=10)作为研究对象。此85例受试者均行11 C-PIB PET显像,首先对脑内是否有Aβ沉积做阴性或阳性定性判断,再以脑干为参考脑区对大脑皮质额、顶、颞、枕叶Aβ沉积最大标准化摄取值比值(maximum standardized uptake value ratio,SUVRmax)半定量测量,并分析AD、MCI、NAD及NC组之间SUVRmax的差异。结果定性判断显示,AD组、NC组与其他各组之间差异有统计学意义,MCI组与NAD组之间差异无统计学意义。半定量分析显示,对于所有的脑区(额叶、顶叶、颞叶、枕叶),AD组的SUVRmax值都明显高于其他3个组,差异有统计学意义。在所有脑区中,NC组的SUVRmax数值最低,但SUVRmax在MCI组、NAD及NC组之间差异无统计学意义。结论11 C-PIB PET显像定性及半定量分析对诊断AD均有较高价值,半定量分析对AD及MCI有一定的鉴别意义。

在线制备^(11)C-Triflate-CH_3

采用在线装置将11C-CH3I转化成11C-Triflate-CH3,并利用两者间脂溶性的区别,用HPLC方法分析转化效率和放化纯度。该方法在线转化效率大于95%,转化效率与温度有关,与气流无关(20~80 mL/min);11C-Triflate-CH3标记受体类药物标记率明显高于11C-CH3I;一次装入该转换装置的试剂平均使用次数超过120次。

^(11)C-MET PET/CT诊断脑胶质瘤术后复发残留的初步研究

目的探讨^(11)C标记的蛋氨酸(^(11)C-methionine,^(11)C-MET)PET/CT在诊断脑胶质瘤术后复发残留的应用价值。方法回顾性分析因胶质瘤术后行CT或MRI检查可疑术后复发残留的患者17例。患者均行^(11)C-MET PET/CT检查,均经二次手术病理或临床随访证实为脑胶质瘤术后复发残留(postoperative relapse and residue, PORR)或治疗后相关良性病变(therapy-related benign changes, TRBC)。双盲法由2名>5年PET/CT诊断经验的医师测量病灶最大标准摄取值(maximum standardized uptake value,SUV_(max))及靶/本底比值(target/normal background ratio,T/N:病灶SUV_(max)/对侧正常额叶SUV_(mean))并作出定性诊断。比较2位医师之间病灶半定量测量和定性诊断的一致性。计算^(11)C-MET PET/CT诊断胶质瘤术后复发残留的敏感度、特异度和准确率。比较PORR组与TRBC组SUV_(max)及T/N值的差异。胶质瘤PORR组病灶SUV_(max)及T/N值与胶质瘤WHO初次手术病理分级行相关分析。结果在半定量测量方面(SUV_(max)及T/N值),2位医师测量值比较,差异均无统计学意义(均P>0.05);在定性诊断上,2名医师诊断一致率为100%。17例胶质瘤术后患者中,PORR 14例,TRBC 3例。^(11)C-MET PET/CT诊断胶质瘤术后复发的敏感度85.7%(12/14),特异度为100%(3/3),准确率88.2%(15/17)。PORR组与TRBC组SUV_(max)及T/N值比较,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。14例胶质瘤术后复发残留患者中WHO分级Ⅰ级1例,Ⅱ级6例,Ⅲ级5例,Ⅳ级2例。复发残留病灶的SUV_(max)与T/N值有相关性(r=0.86,P<0.01);SUV_(max)与肿瘤WHO分级无相关性(r=0.102,P=0.728);T/N值与肿瘤WHO分级无相关性(r=0.056,P=0.848)。结论 ^(11)C-MET PET/CT能清楚显示复发残留病灶,不同医师之间诊断有很高的一致性,诊断准确率高,易于胶质瘤术后复发残留的检出。病灶的^(11)C-MET摄取程度与肿瘤分级无相关性,有利于低级别肿瘤复发的检出。

自动化制备^(11)C-胆碱及临床应用

目的 研究 [N 甲基 11C]胆碱 (11C 胆碱 )自动化合成的工艺和设备 ,并应用于临床。方法 柱色层法在线制备11C 胆碱。以荷肺腺癌裸鼠研究生物学分布 ,荷瘤大鼠行PET显像。 11例患者接受11C 胆碱检查 ,并与18F 脱氧葡萄糖 (FDG)PET显像对照。结果 11C 胆碱放化纯 >99% ,合成效率为 95 % ,合成时间 5min。动物分布实验表明 ,放射性主要分布于肝和肠道 ,血液清除较快 ,注射后 5min瘤 /血比值为 0 9,2 0min为 6 9。 4例肿瘤患者11C 胆碱检出 7/7个病灶 ;18F FDG检出 3/7个 ,脑部 4个病灶18F FDG为假阴性。 7例肺部良性病灶18F FDG均有高摄取 ;11C 胆碱 6例阴性 ,1例假阳性。结论 柱色层法制备11C 胆碱时间短 ,效率高 ,操作简单 ,适于PET中心常规生产。

^(11)C-胆碱PET显像的临床初步应用

目的:初步探讨11C -胆碱PET显像诊断体内占位病变的良恶性价值。材料和方法:对3例脑内、1 4例肺内占位病变患者同时行N -甲基- 11C-胆碱( 11C -胆碱)和18F FDGPET显像,ROI方法测定最大标准摄取值(SUVmax)。结果:1 3处恶性占位病灶11C -胆碱PET显像均为阳性;但病灶大小与SUVmax间无明显相关性。8处良性占位病灶,18F FDG均为假阳性,11C 胆碱PET显像仅有1例为假阳性。11C -胆碱显像漏检1处肺癌肾上腺转移病灶。结论:11C- 胆碱PET显像可能成为肿瘤良恶性鉴别的可靠方法。

^(11)C-乙酸盐自动化合成改进工艺及PET/CT显像

采用国产碳-11胆碱/蛋氨酸自动合成模块,研究简单、快速、自动化合成11 C-乙酸盐(11 C-AC)的工艺流程。11 C-CO2与溴化甲基镁(MeMgBr)在改进的Loop环内反应生成中间体乙酰溴化镁加合物,中间体经在柱水解和SEP-PAK小柱纯化后制备11 C-AC注射液。总合成时间约8min,校正放化产率为(40.5±4.6)%,放化纯度大于95%。该改进法适于多种商用全自动化模块自动化生产11 C-AC。生产的11 C-AC注射液安全、有效,有望用于动物和人体PET显像研究。

^(11)C-MET-PET/CT检查在术后放疗脑胶质瘤患者肿瘤复发与放射性脑坏死鉴别诊断中的应用

目的观察^(11)C-蛋氨酸-PET/CT(^(11)C-MET-PET/CT)检查在术后放疗脑胶质瘤患者肿瘤复发与放射性脑坏死鉴别诊断中的应用价值。方法 35例怀疑肿瘤复发或放射性脑坏死的脑胶质瘤患者,分别行^(11)C-MET-PET/CT、MRI、组织病理学检查,以组织病理学检查为金标准,对比分析^(11)C-MET-PET/CT与MRI在鉴别诊断肿瘤复发及放射性脑坏死中的应用价值。结果与组织病理学检查比较,^(11)C-MET-PET/CT诊断脑胶质瘤放疗后肿瘤复发准确率为92.0%(23/25);MRI诊断脑胶质瘤放疗后肿瘤复发准确率61.76%(21/34);^(11)C-MET-PET/CT诊断脑胶质瘤放疗后肿瘤复发准确率与MRI比较,P<0.05。^(11)C-MET-PET/CT诊断脑胶质瘤放疗后肿瘤复发和放射性坏死的灵敏度为92.0%,特异度为83.33%,准确性为94.29%,约登指数为0.753。23例脑胶质瘤放疗后肿瘤复发患者的SUV值中位数2.35,四分位间距1.87~4.25;L/N值中位数1.79,四分位间距1.65~2.08;12例脑胶质瘤放疗后出现放射性脑坏死患者SUV值中位数1.63,四分位间距0.71~2.75;L/N值中位数1.12,四分位间距0.74~1.58,脑胶质瘤放疗后肿瘤复发患者SUV值、L/N值与脑胶质瘤放疗后出现放射性脑坏死患者的比较,P均<0.05。结论^(11)C-MET-PET/CT在脑胶质瘤放疗后区分肿瘤复发和放射性脑坏死方面敏感性和准确性均较高,且较MRI更敏感和准确。

^(11)C-Acetate与^(18)FDG PET联合显像在肝脏肿瘤诊断中的作用

[目的]探讨11C-乙酸盐(11C-Acetate,11C-AC)与18F-去氧葡萄糖(18FDG)PET联合显像在肝脏肿瘤诊断中的作用。[方法]20例疑肝肿瘤患者行18FDG和11C-ACPET联合显像。16例经病理证实并进行分级,4例为随访结果。[结果]3例良性病变对两种显像剂均无明显摄取。癌前病变2例,早期及延迟11C-AC显像均为“+”,18FDG呈“-”。肝细胞肝癌患者10例中,高分化2例仅11C-AC呈“+”,低分化2例仅18FDG“+”,6例两种显像均为“+”。3例肝腺癌、1例血管肉瘤及1例转移癌对18FDG均有明显摄取,但11C-AC均为“-”。[结论]18FDG与11C-AC联合显像可以提高肝癌诊断的阳性率以及估测肿瘤的恶性程度。

多巴胺转运蛋白显像剂^(11)C-β-CFT的全自动化合成

通过对反应条件的优化及合成模块的改进,探索了一种高效、全自动化合成11C-β-CFT的方法。以11CO2为起始原料与LiAlH4、HI或HBr反应生成11CH3I(或11CH3Br),再转化成Triflate-11CH3,最后与nor-β-CFT进行甲基化反应合成11C-β-CFT。整个合成工艺实现了全自动化,产品校正放化产率为70.2%±1.8%,放化纯度大于95%。用新方法合成的11C-β-CFT无菌注射液经pH测定、HPLC检测、内毒素检查、细菌培养及异常毒性检查,均符合注射液要求。用制备的11C-β-CFT对正常志愿者与帕金森病患者进行PET显像,PET显像显示正常对照者双侧纹状体影像清晰,帕金森病患者双侧纹状体不对称性摄取减低。该工艺实现了11C-β-CFT全自动化,放化产率高,工艺简单,有利于工作人员放射防护,显像效果良好,可满足临床需要。

L-[S-^(11)C-甲基]-蛋氨酸的合成及HPLC分析

采用还原碘化法合成11 CH3I,固相法合成11 C-MET,HPLC分析产品放化纯度,并合成11 CH3OH和11CH3I,利用HPLC分析验证11 C-MET中杂质的成分,探讨溶解前体的NaOH浓度和有机溶剂用量对11 C-MET质量的影响。结果表明,先用0.1mL 2mol/L NaOH溶解前体,再与0.1mL无水乙醇混匀后装入C18柱,可以提高11 C-MET的产率及放化纯度。

^(11)C-鬼臼毒素示踪剂对肺癌与炎症鉴别价值的实验研究

目的探讨11C-鬼臼毒素(11C-PDT)在肺癌和炎症模型小鼠体内的生物分布,评价11C-PDT作为新型正电子发射断层显像(PET)示踪剂对肺癌与炎症的鉴别价值。方法肺癌模型小鼠和炎症模型小鼠各12只,分别根据示踪剂种类随机等分为两组,于模型小鼠尾静脉注入11C-PDT或18F-氟代脱氧葡萄糖(18F-FDG),注药后60min用井型探测仪测量11C-PDT或18F-FDG小鼠体内的生物分布。结果11C-PDT在肿瘤组织放射性摄取值(%ID/g)高于炎症组织(0.63±0.25 vs.0.29±0.09,P<0.05);18F-FDG的肿瘤组织放射性摄取值高于炎症组织(7.56±1.77 vs.3.83±0.71,P<0.01);11C-PDT和18F-FDG示踪剂在肿瘤组织的放射性摄取值比较,差异有统计学意义(P<0.05)。18F-FDG组炎症对肌肉的放射性摄取值的比值为1.58±0.11,明显高于11C-PDT组的0.73±0.28(P<0.05)。结论11C-PDT具有更高的肿瘤特异性,将来有望作为PET示踪剂用于肺癌和炎症的鉴别诊断。

^(11)C-(-)间羟基麻黄素的合成及Micro PET显像

11 C标记(-)间羟基麻黄素(11 C-(-)HED,11 C-HED)是一种交感神经系统显像剂,可用于心肌和肾上腺肿瘤的显像。碘代甲烷与(-)间羟胺直接甲基化反应,生成11 C-HED,经HPLC梯度淋洗纯化;通过动物实验研究在11 C-HED中添加前体后对心肌摄取的影响。结果表明,用碘代甲烷作甲基化试剂可减少副反应,分别用含3%乙醇和10%乙醇的0.24mol/L磷酸二氢钠溶液梯度淋洗,能有效去除前体间羟胺,同时放化纯度从93.2%提高到98%。11 C-HED在动物体内的生物分布表明,注射含2mg/kg前体间羟胺的11 C-HED后,30min时心肌摄取明显降低,而肾上腺摄取增高。Micro PET显像证实,注射11 C-HED后正常心肌显像,但加入前体后心肌摄取降低,清除加快。以上结果提示,分别用含3%和10%乙醇的0.24mol/L磷酸二氢钠溶液梯度淋洗可提高产品化学纯度和放化纯度;在11 C-HED中加入前体间羟胺后对心肌摄取明显降低,而肾上腺摄取增高。

人脑胶质瘤PET成像中^(11)C-蛋氨酸摄取与细胞增殖和血管形成的关系

目的探讨人脑胶质瘤中11 C-蛋氨酸(11 C-MET)摄取量与细胞增殖和血管形成的关系。方法对30例新诊断的脑胶质瘤患者行11 C-MET PET检查,计算11 C-MET最大标准化摄取值(SUVmax);采用免疫组化方法检测Ki-67和CD34抗原在相同脑胶质瘤标本中的表达,计算Ki-67标记指数(Ki-67LI)和微血管密度(MVD)。结果 11 C-MET SUVmax和Ki-67LI均随胶质瘤病理级别的升高而明显增加(P=0.000,P=0.000);在高恶性度胶质瘤中11 C-MET SUVmax和Ki-67LI均明显高于低恶性度胶质瘤(P=0.000,P=0.000);而MVD在胶质瘤不同病理级别间(P=0.831)以及高、低恶性度胶质瘤间(P=0.370)均无明显差异。11 C-MET SUVmax与Ki-67LI存在明显正相关(P=0.000),而11 C-MET SUVmax与MVD(P=0.154)以及Ki-67LI与MVD(P=0.842)之间均无明显相关性。结论 11 C-MET摄取量和细胞增殖活性可较好地反映胶质瘤病理级别和恶性程度。

^(11)C-蛋氨酸PET显像诊断胶质瘤的价值

目的 评价1 1 C 蛋氨酸 (MET)PET显像诊断胶质瘤及鉴别良恶性胶质瘤的价值。方法2 2例经病理检查证实的不同分级胶质瘤患者行1 1 C METPET显像 ,对病灶进行定量分析。结果 2 2例患者的瘤组织均有明显1 1 C MET摄取且与周围正常组织分界清晰 ,Ⅰ～Ⅱ级胶质瘤热点计数与对侧相同部位 (HS CA)放射性比值为 1 .57± 0 .2 8,明显低于Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤 (3 .0 6± 0 .47,t=6 .48,P <0 .0 5)和Ⅱ级少突神经胶质瘤 (2 .34± 0 .79,t=2 .2 6 ,P <0 .0 5) ;而Ⅲ～Ⅳ级胶质瘤与Ⅱ级少突神经胶质瘤的HS CA比值差异无显著性 (t=1 .85 ,P >0 .0 5)。结论 1 1 C METPET显像有助于鉴别诊断不同分级的胶质瘤。

脑干胶质瘤患者中^(11)C-蛋氨酸PET与分子病理及预后的关系

目的探讨脑干胶质瘤患者^(11)C-蛋氨酸PET表现与分子标志物及总体生存率(OS)的关系。方法回顾性分析86例经手术病理证实的脑干胶质瘤患者(男51例,女35例),术前均行11 C-蛋氨酸PET检查。计算并记录PET图像的半定量参数,包括SUVmax、SUVmean、肿瘤摄取比(TBR),以及反映体积的参数代谢肿瘤体积(MTV)。记录并分析患者的分子病理诊断情况(包括p53、ATRX、H3K27M和lDH1的突变状态以及MGMT启动子甲基化)。评估PET影像学表现与肿瘤分级、分子生物标志物和总生存率之间的关系。结果在86例患者中,TBRmax(P=0. 007)和TBRmean(P=0. 032)与肿瘤分级具有显著的相关性。MTV与H3K27M突变(P=0.003)和MGMT启动子甲基化(P=0.021)呈显著负相关。但其他PET参数与分子病理之间没有显著关系。Cox回归分析显示TBRmax、TBRmean和H3K27M突变状态与OS显著相关。TBRmax可以作为一个独立的预后因素,具有重要的预测意义。结论 ^(11)C-蛋氨酸PET的一些参数与脑干胶质瘤的级别、分子病理以及生存期具有明显的关系,因此可以用于评估患者的预后情况。

11^C-PIB PET用于阿尔茨海默病大鼠模型评价研究

为研究Aβ蛋白显像剂11C-PIBPET成像技术用于评价阿尔茨海默病大鼠模型中的作用,以9只Aβ1～40注射模型大鼠和10只生理盐水对照大鼠采用HE染色及Aβ蛋白免疫荧光染色来检测大鼠脑内病理改变。11C-PIB及18F-FDGPET显像在体观察两组大鼠脑内Aβ蛋白分布及葡萄糖代谢情况。结果发现:模型组海马区出现神经元减少及淀粉样斑块的形成。同时模型组PET显像可见注射侧葡萄糖代谢减低及11C-PIB摄取增加。对照组仅见轻微神经元损伤及PET所显示的葡萄糖代谢轻度减低。11C-PIB及18F-FDGPET显像结合行为学及病理学观察可以作为评价AD模型检验方法,该方法为基础研究及临床诊断AD提供了一种分子成像工具。

^(11)C-乙酸盐-PET对前列腺癌复发诊断价值的Meta分析

背景与目的:11C-乙酸盐因不经泌尿系统排泄而能弥补18F-FDG探测膀胱及周围癌症中的缺陷,但关于其在诊断前列腺癌复发准确性上文献报道不一。本文汇总分析了11C-乙酸盐-PET诊断复发性前列腺癌文献,评价其诊断效能。方法:检索2010年4月前Scifinder、EMBASE和中国期刊全文数据库(CNKI)公开发表的有关11C-乙酸盐-PET诊断复发性前列腺癌的所有文献,对纳入的研究进行方法学质量评价和异质性检验,并用统计软件计算综合特异度和诊断优势比,并绘制综合受试者工作特征曲线(summary receiver operating characteristic,SROC)。结果:共纳入5篇文献,综合灵敏度和特异度分别为83.0%(95%CI=70.2%～91.9%)和70.4%(95%CI=49.8%～86.2%),综合DOR为11.5(95%CI=3.9～34.0)。SROC曲线面积(area under the SROC curve,AUC)为0.84,Q*值为0.77。结论:11C-乙酸盐-PET对于复发性前列腺癌的诊断有较高的价值。

肿瘤显像药物^(11)C-胆碱在脑转移瘤中的诊断价值研究

目的探讨肿瘤PET显像药物11C-胆碱在多种脑转移瘤诊断中的应用价值。方法完成肿瘤显像药物11C-胆碱的放射性标记和质量控制,收集6名脑转移瘤志愿者的11C-胆碱与18F-氟代脱氧葡萄糖(18F-FDG)PET/CT成像,并进行脑转移瘤显像诊断的对比分析。结果11C-胆碱产品溶液的放化纯度为>99%,其颜色、澄清度、pH值以及细菌内毒素均符合2015年版《中国药典》要求。PET/CT显像结果显示,6名志愿者中11C-胆碱共检出病灶7个,靶/本底比值分别为6.00、8.35、9.10、45.80、7.14、54.60、13.70,而18F-FDG共检出病灶1个,靶/本底比值为3.30。结论本实验合成的11C-胆碱质量符合放射性药物注射要求,11C-胆碱对于脑转移瘤的鉴别诊断作用明显优于18F-FDG。