miR-150靶向调控c-FLIP对结肠癌HT-29细胞自噬影响的实验研究

目的探讨上调结肠癌细胞miR-150表达对自噬的影响以及可能调控机制。方法体外培养HT-29细胞,转染miR-150 mimics或细胞型Fas相关死亡域样白介素-1β转换酶抑制蛋白(c-FLIP)基因,分为空白对照组、阴性对照组、miR-150 mimics组和miR-150 mimics+c-FLIP组,实时荧光定量PCR(q PCR)鉴定转染效果。q PCR检测各组miR-150和cFLIP mRNA表达;Western blotting检测各组自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3-Ⅱ)、Beclin 1以及c-FLIP蛋白表达。采用细胞免疫荧光染色观察各组细胞自噬的情况。采用双荧光素酶报告实验验证miR-150与c-FLIP的靶向关系。结果 miR-150 mimics组和miR-150 mimics+c-FLIP组miR-150表达水平分别为2. 25±0. 13和2. 19±0. 16,均高于空白对照组的1. 00±0. 09和阴性对照组的1. 02±0. 13,差异有统计学意义(P<0. 05)。miR-150 mimics组c-FLIP mRNA和蛋白表达水平明显低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义(P<0. 05);而miR-150 mimics+c-FLIP组c-FLIP mRNA和蛋白表达水平均高于空白对照组、阴性对照组和miR-150 mimics组,差异有统计学意义(P<0. 05)。miR-150 mimics组细胞Beclin 1、LC3-Ⅱ蛋白表达量明显高于空白对照组和阴性对照组;miR-150 mimics+c-FLIP组细胞Beclin 1、LC3-Ⅱ蛋白表达量低于空白对照组、阴性对照组和miR-150 mimics组。miR-150 mimics组自噬细胞阳性率为(52. 92±6. 63)%,高于空白对照组的(33. 54±5. 40)%和阴性对照组的(31. 05±4. 97)%,差异有统计学意义(P<0. 05);miR-150 mimics+c-FLIP组自噬细胞阳性率为(22. 50±4. 38)%,低于空白对照组、阴性对照组、miR-150 mimics组。双荧光素酶报告基因实验证实c-FLIP是miR-150的下游靶基因。结论上调miR-150表达可通过负性调控c-FLIP提高结肠癌细胞HT-29的自噬活性。

微小RNA-150靶向c-Myb表达对T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖的影响

目的探讨微小RNA-150(miR-150)靶向c-Myb表达对人T淋巴细胞白血病(T-LL)Jurkat细胞增殖的影响。方法体外培养人Jurkat细胞,分为空白对照组(不转染)、阴性对照组(转染negative control-miR-150)和miR-150过表达组(转染hsamiR-150 mimic)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测Jurkat细胞中miR-150及c-Myb表达;人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)法检测Jurkat细胞增殖;流式细胞仪检测各组Jurkat细胞凋亡情况;双荧光素酶报告基因实验检测miR-150和c-Myb的靶向关系;蛋白质印迹法(Western blotting)检测各组Jurkat细胞中c-Myb、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达情况。结果空白对照组与阴性对照组Jurkat细胞中miR-150表达水平、c-Myb mRNA及蛋白表达水平、OD值、细胞凋亡率、及PCNA、Bax蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05);与空白对照组相比,miR-150过表达组Jurkat细胞中miR-150表达水平[(1.42±0.14)比(1.03±0.09)]、凋亡率[(20.79±1.15)%比(8.76±0.74)%]、Bax蛋白表达水平[(0.65±0.18)比(0.42±0.13)]显著升高(P<0.05),c-Myb mRNA[(0.66±0.14)比(0.98±0.09)]及蛋白表达水平[(0.37±0.06)比(0.64±0.12)]、OD值[(0.25±0.06)比(0.46±0.09)]、PCNA蛋白表达水平[(0.33±0.07)比(0.56±0.11)]显著降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示,c-Myb是miR-150的靶基因。结论miR-150靶向c-Myb表达抑制Jurkat细胞增殖并诱导其凋亡。

miR-150通过靶基因c-Myb改善心肌梗死后心肌纤维化

目的:研究miR-150在心肌梗死后心肌纤维化中的作用及机制。方法:在心梗大鼠,通过过表达miR-150的慢病毒上调miR-150,用RT-PCR及Western bloting检测梗死边缘区col1ɑ1与α-SMA的表达及Masson染色检测纤维化,研究miR-150在心梗纤维化模型中的作用。分离及培养心肌成纤维细胞,用荧光素酶报告载体、慢病毒及c-Myb的si RNA验证miR-150与c-Myb的关系。结果:体内实验表明miR-150在心梗后第2周及第4周心肌表达下调(P<0.001,P<0.05),而上调miR-150明显改善心肌纤维化(P<0.001),抑制col1ɑ1及ɑ-SMA的表达(P<0.01,P<0.05)。体外实验表明c-Myb是miR-150的靶基因且miR-150可通过c-Myb抑制col1ɑ1及ɑ-SMA的表达。结论:miR-150在心肌梗死边缘区表达下降,且可通过靶基因c-Myb改善心肌纤维化。

NF-κB p65通过miR-150/TRPC6信号通路改善肾缺血再灌注损伤

目的 探究NF-κB(nuclear transcription factor-κB, NF-κB)p65通过miR-150/瞬时受体电位阳离子通道6(transient receptor potential cation channel 6, TRPC6)信号通路促进肾缺血再灌注损伤的作用。方法 选取2022年8月—2023年8月由齐齐哈尔医学院医药科学研究院购买的60只雄性大鼠作为研究对象,将体质量相似的大鼠按照随机数字表法随机分为3组:假手术实验组(Sham组,n=10)、缺血/再灌注(ischemic/reperfusion, I/R)I/R实验组(n=10)、慢病毒实验组(n=40),其中慢病毒实验组分为miR-150-mimic组(n=10)、I/R+miR-150-mimic组(n=10)、NF-κB p65-si组(n=10)、I/R+NF-κB p65-si组(n=10)。评估各组大鼠肾组织中血清肌酐(creatinine, Cr)和血尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)、炎性因子、miR-150、NF-κB p65、TRPC6的水平。结果 I/R实验组与Sham组比较,NF-κB p65、miR-150蛋白水平降低(0.26±0.02 vs 0.79±0.03、0.34±0.08vs 1.46±0.12),TRPC6蛋白水平下降(0.35±0.04 vs. 1.08±0.15),差异有统计学意义(t=46.484、24.558、8.603,P均<0.05)。与I/R实验组相比,I/R+miR-150-mimic组TRPC6水平升高,而炎症因子水平更低,I/R+NF-κB p65-si组miR-150水平更高,炎症因子水平升高,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论 NF-κB p65通过调节miR-150/TRPC6信号通路影响肾功能及炎症,改善肾缺血再灌注损伤。

miR-150在套细胞淋巴瘤中的表达及意义

目的:探讨套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma,MCL)中miR-150的表达情况及其临床意义。方法:通过定量RT-PCR检测29例初治MCL患者及7例正常人外周血B细胞中miR-150和c-Myc的表达水平,探索miR-150和c-Myc表达之间的关系;利用RNAi阻断MCL细胞系Mino和HBL-2中c-Myc表达后,检测miR-150的变化,确定c-Myc是否参与miR-150的表达调控;抑制P493-6细胞表达c-Myc后,观察miR-150的变化,进一步明确miR-150是否受c-Myc调节;将pre-miR-150电转HBL-2细胞系,通过集落形成试验明确miR-150对细胞增殖的影响,Western blot检测c-Myb蛋白的变化。结果:与正常人外周血B细胞相比,MCL患者低表达miR-150、过表达c-Myc,两者的表达呈负相关;阻断c-Myc后,Mino和HBL-2细胞的miR-150表达增加;抑制c-Myc表达后,P493-6细胞的miR-150表达增高;过表达miR-150后,HBL-2的c-Myb蛋白表达水平和集落形成能力下降。结论:MCL患者低表达miR-150的原因可能与其c-Myc过表达有关。miR-150能够抑制MCL的增殖,在MCL的治疗中具有潜在价值。

Hsa-miR-150过表达诱导弥漫大B淋巴瘤细胞系OCI-Ly10再分化

目的:探究hsa-miR-150过表达诱导弥漫大B淋巴瘤细胞系OCI-Ly10再分化的机制。方法:运用real-time PCR检测hsa-miR-150在永生化CD19+B细胞和OCI-Ly10细胞中的表达,利用Western blotting和免疫荧光细胞化学检测hsa-miR-150靶基因c-myb的表达;通过LipofectamineTM2000脂质体法将含有重组慢病毒质粒的病毒上清转染OCI-Ly10细胞(Ly10-control组和Ly10-miR-150组);对新构建的细胞亚系,通过MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期及凋亡;运用real-time PCR、免疫荧光细胞化学和Western blotting检测Ly10-control和Ly10-miR-150的B细胞分化相关基因及c-Myb的表达;利用干扰片段干扰OCI-Ly10细胞c-myb表达后,运用real-time PCR和Western blotting检测干扰效率及干扰后转录调节因子BCL6和浆细胞分化开关蛋白PRDM1的表达。结果:(1)CD19+B淋巴细胞的hsa-miR-150表达量明显高于OCI-Ly10细胞(P<0.05);c-Myb在OCI-Ly10细胞中表达较强,而在CD19+B淋巴细胞表达较弱。(2)OCI-Ly10细胞经转染hsa-miR-150后,B细胞分化相关基因的表达都明显发生了变化,B细胞特异性激活蛋白(PAX5)和BCL6表达下调(P<0.05);干扰素调节因子4(IRF4)、PRDM1和X盒结合蛋白1(XBP1)的表达上调(P<0.05);和对照组相比,c-Myb在Ly10-miR-150细胞中表达明显下调(P<0.05)。(3)干扰OCI-Ly10细胞c-myb表达后,BCL6表达明显下调,而PRDM1表达明显上调。结论:(1)hsa-miR-150过表达对OCI-Ly10细胞抑制增殖和诱导凋亡作用非常明显。(2)过表达hsa-miR-150可诱导该瘤细胞向末端B细胞方向分化,作用机制可能与下调其靶基因c-myb的表达有关。

高糖环境中培养的小鼠心肌微血管内皮细胞蛋白激酶C活性、A激酶锚定蛋白150表达变化

目的观察高糖预处理的小鼠心肌微血管内皮细胞蛋白激酶C(PKC)活性变化和A激酶锚定蛋白150(AKAP150)表达变化,并探讨其意义。方法 8周龄雄性C57BL小鼠,分离并培养左心室心肌微血管内皮细胞。将心肌微血管内皮细胞分为观察组和对照组,分别为含有25 mmol/L葡萄糖、5 mmol/L葡萄糖培养基。培养24 h时采用非放射性PKC活性试剂盒检测两组细胞PKC活性,采用Western blotting法检测细胞AKAP150。运用免疫荧光技术观察细胞AKAP150与PKC结合情况。结果观察组、对照组细胞PKC活性分别为0.231±0.037、0.143±0.047,二者比较,P<0.05;观察组、对照组细胞AKAP150蛋白相对表达量分别为0.527±0.080、0.124±0.038,二者比较,P<0.05。免疫荧光显示观察组细胞AKAP150、PKC结合量多于对照组。结论 PKC活性水平、AKAP150表达在高糖预处理的小鼠心肌微血管内皮细胞中均升高,且结合明显增多。PKC活性水平及AKAP150表达升高可能在高糖导致的小鼠心肌微血管内皮细胞损伤中起重要作用。

C150大流动度粉末山砂混凝土配制研究

本文尝试使用贵州普通地材配制了C150大流动性的粉末山砂混凝土,并从配制技术上研讨超低水灰比、胶凝材料级配优化、研制超细矿物掺和料、高强减水剂等方法在超高强混凝土的配制提供的作用及极限。

miR-150在肺癌细胞中表达变化及其对细胞增殖能力的影响和机制

目的观察微小RNA-150(miR-150)在肺癌细胞中的表达变化,并探讨其对肺癌细胞增殖的影响及作用机制。方法常规培养肺癌细胞A549、人肺正常上皮细胞16HBE,qRT-PCR法检测细胞中的miR-150。将A549细胞随机分为抑表达组、促表达组和对照组,抑表达组、促表达组经脂质体分别转染miR-150抑制物、模拟物;转染48 h后,采用qRT-PCR法检测各组细胞中的miR-150验证转染效果,MTS法检测细胞增殖活力,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞仪检测细胞周期,qRT-PCR、Western blotting法分别检测细胞中的c-Myc、Cyclin D1 mRNA及蛋白。结果A549细胞中miR-150相对表达量为10.21±0.06,高于16HBE细胞的1.00±0.10(P<0.05);miR-150相对表达量促表达组>对照组>抑表达组(P均<0.05);与对照组比较,抑表达组细胞增殖OD 490值下降,促表达组细胞增殖OD 490值增高(P<0.05或<0.01);细胞克隆形成数目促表达组>对照组>抑表达组(P均<0.05);与对照组比较,抑表达组G 1期细胞比例增多,促表达组G 2期细胞比例增多(P均<0.05);与对照组比较,抑表达组c-Myc、Cyclin D1 mRNA及蛋白相对表达量下降,促表达组c-Myc、Cyclin D1 mRNA及蛋白增加(P均<0.05)。结论肺癌A549细胞miR-150表达增加;miR-150可能通过上调c-Myc、Cyclin D1表达促进细胞周期的进程,进而增强肺癌细胞的增殖能力。

miR-150、c-Myb和TGF-β1在CNP睾丸生精功能异常中的作用

目的:探讨miR-150、转录调节蛋白c-Myb和转化生长因子-β1(TGF-β1)在慢性非细菌性前列腺炎(CNP)睾丸生精功能异常中的表达水平,分析其影响机制及意义。方法:采用自身免疫反应诱导构建CNP动物模型,将前列腺注射生理盐水(对照组)和动物模型(实验组)的SD大鼠均置于智能培养气候箱中常规饲养至对数生长期,采用苏木精-伊红染色法检测两组前列腺腺泡结构。另根据实验组SD大鼠的睾丸活检情况分为生精功能正常组和生精功能异常组,比较生精功能正常组和生精功能异常组的hsa-miR-150、c-Myb、TGF-β1表达水平差异。通过ROC曲线分析hsa-miR-150、c-Myb、TGF-β1指标在CNP动物模型中生精功能受损情况。采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测两组外周血中hsa-miR-150、c-Myb、TGF-β1表达水平差异。结果:实验组苏木精-伊红染色结果示前列腺腺泡腔被广泛破坏,间质及腺体内炎性细胞浸润明显,腺腔周围可见明显纤维结缔组织增生,与对照组比较(P<0.05),表明动物模型制作成功。实验组的hsa-miR-150、c-Myb、TGF-β1表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。生精功能异常组的hsa-miR-150、c-Myb、TGF-β1表达水平明显高于生精功能正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:自身免疫反应诱导CNP动物模型可引起外周血hsa-miR-150水平呈高表达,进而激活下游靶向因子c-myb,诱导TGF-β1表达升高,其表达水平越高,预示着生精功能障碍越严重。

c-MYB基因及microRNA-150基因在结外NK/T细胞淋巴瘤中表达及临床意义

目的研究结外NK/T细胞淋巴瘤(ENKTCL)组织中c-MYB基因及microRNA-150基因的表达水平及其相关性。方法收集本院2010年1月至2014年6月经病理组织学及免疫组织化学证实且临床资料完全的ENKTCL病理标本21例,10例增生性淋巴结炎作为对照。用免疫组织化学Maxvision法和实时荧光定量PCR法,分别检测21例ENKTCL和10例增生性淋巴结炎组织中c-MYB蛋白和microRNA-150表达水平,并进行分析与比较。结果 ENKTCL组c-MYB表达率为57%,显著高于增生性淋巴结炎组10%(P<0.05),但c-MYB过表达与患者的年龄、性别、Ann Arbor分期、国际预后指数评分无关(P>0.05)。ENKTCL组织中MicroRNA-150表达与c-MYB表达呈显著负相关(P<0.05)。结论 MicroRNA-150可能通过靶向调控c-MYB基因表达参与了ENKTCL的发生与发展。

加热工艺对冷拔-钎焊不锈钢/碳钢复合钢筋界面性能的影响

Φ22 mm×2 mm 304不锈钢管-0.1 mm铜箔-Φ17.2 mm Q195钢筋经10%减径冷拔使3层金属紧密结合,再经1150℃加热钎焊得到不锈钢/碳钢复合钢筋。研究了1 100~1 225℃保温1 h和1150℃的保温时间(0.5~4 h)对复合钢筋结合界面组织性能的影响。结果表明,1150℃加热后钎焊金属界面强度最大为296 MPa,铜箔作为钎焊层可以有效的实现不锈钢层和碳钢层的冶金结合;随1 150℃保温时间增加,不锈钢和碳钢之间的元素扩散距离和浓度增加,保温2 h,碳钢侧的Fe扩散到铜层约80μm,不锈钢侧的Cr和Ni扩散到碳钢内部约60μm,铜钎焊层出现含Cr、Ni的气泡状铁基固溶体并变大变多;界面区域的剪切强度和显微硬度随保温时间呈先增大后减小的趋势,保温2 h后达到最大值,分别为301 MPa和HV423。

谁说便宜没好货——千元级数码相机也有精品

如今购买数码相机就像购买手机一样平常,但不少刚入门的朋友有这样那样的疑虑,对低价数码相机的疑惑和对高价相机的无奈,始终持币观望.其实目前购买数码相机用于普通摄影的朋友不少,千元以下的数码相机的诱惑力对他们是最大的,可是对这些相机缺乏了解成为推动购买力的最大障碍.

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠内质网应激相关因子的表达

目的观察内质网应激相关因子氧调节蛋白150(ORP150)和C/EBP同源蛋白(CHOP)在缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑皮质内的表达,探讨内质网应激在新生大鼠HIBD中的作用。方法新生7日龄SD大鼠随机分为假手术组和缺氧缺血(HI)组。每组按照观测的时间点不同分为3 h、6 h、12 h、24 h、3 d、7 d 6个亚组,每个亚组8只。在每个时间点将大鼠断头后取皮质脑组织匀浆,用Western blot方法检测不同时间点其脑皮质ORP150及CHOP的动态变化。用原位末端标记法检测相应时间点光镜下其脑皮质组织的凋亡细胞数。结果 1.HI组CHOP表达水平在HIBD后各时间点均高于假手术组(P<0.05),且在24 h达到高峰;ORP150表达水平在完成HIBD后3 h开始增加,6 h达到高峰,后逐渐下降,7 d时与假手术组比较差异无统计学意义(P>0.05)。2.HI后3 h,HI组即发现结扎侧脑皮质有少量的凋亡细胞,随着HI时间的延长,凋亡细胞逐渐增多,24 h达到高峰后下降。3.CHOP的表达变化与神经细胞凋亡时间趋势呈正相关(r=0.911,P<0.05)。结论 HIBD诱发了内质网应激,可能通过上调ORP150表达参与启动未折叠蛋白反应过程,而通过上调CHOP表达诱导神经细胞凋亡的发生。