转录因子c-fos/c-jun调控成釉细胞基质金属蛋白酶20基因的表达

背景:基质金属蛋白酶20是在成釉细胞中特异性表达的一种蛋白酶,其在牙齿釉质发育过程中具有重要作用。从分子角度研究基质金属蛋白酶20可受到的调控机制,为进一步做动物实验奠定基础。目的:通过研究转录因子c-fos/c-jun对小鼠成釉细胞基质金属蛋白酶20基因的调控作用,初步确定c-fos/c-jun在牙釉质发育中的作用。方法:首先构建c-fos真核表达载体重组质粒,分别利用双荧光素酶基因检测报告系统和定时定量RT-PCR法分析c-jun、c-fos转染成釉细胞对基质金属蛋白酶20基因活性的影响;并利用基因定点突变和双荧光素酶基因检测报告系统进一步分析c-jun、c-fos对基质金属蛋白酶20基因活性的影响。结果与结论:双荧光素酶基因检测报告系统和定时定量RT-PCR法分析显示c-jun、c-fos转染转染小鼠成釉细胞后,基质金属蛋白酶20基因表达显著上调;突变基质金属蛋白酶20启动子的AP1结合位点后,c-fos/c-jun失去上调基质金属蛋白酶20启动子的转录活性的作用。结果提示c-fos/c-jun对基质金属蛋白酶20基因表达具有重要的调节作用,表明其在釉质发育过程中有其重要的生物学意义。

C-FOS、STAT3在PCOS患者着床窗口期子宫内膜的表达及意义

目的探讨C-FOS,STAT 3对多囊卵巢综合征(PCOS)患者窗口期子宫内膜容受性的影响。方法选取15例已婚PCOS患者(PCOS组),14例其他原因导致不孕的妇女(对照组),在窗口期收集其子宫内膜组织,经HE染色判断组织学分期,用免疫组织化学SP法检测C-FOS,STAT 3在窗口期子宫内膜的表达。结果 PCOS组窗口期C-FOS表达高于对照组,STAT 3表达低于对照组,二者呈显著负相关,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 C-FOS高表达、STAT 3低表达可能影响PCOS组窗口期子宫内膜容受性的建立,是造成PCOS患者妊娠率低、流产率高的原因之一。

C-fos、EGFR在肝癌、肝硬化中表达的研究

目的研究转录因子C-fos在人肝细胞癌(HCC)组织与肝硬化组织中的表达及C-fos与EGFR在HCC组织中表达的关系。方法用免疫组化法检测51例HCC组织、51例癌旁组织、15例肝硬化组织、10例良性病变而切除的正常肝组织C-fos蛋白表达情况;EGFR在47例HCC组织中的表达情况。结果C-fos蛋白在正常肝组织、肝硬化组织、肝癌组织中具有不同的表达,与肝病的不同进展情况存在显著差异(P<0.05),在HCC组织中C-fos蛋白表达与EGFR的表达无显著相关性(P>0.05)。结论C-fos蛋白在肝癌、肝硬化组织的过表达提示C-fos参与在肝癌、肝硬化的发病过程,但可能通过EGFR以外的信号通路参与肝癌发病过程。

人参皂甙对红系、粒单系、巨核系细胞株的增殖及转录因子的诱导作用

目的 :通过观察人参皂甙 (GS)对c fos、GATA 1转录因子的诱导作用 ,探讨GS在造血细胞内的作用机理。方法 :选用粒系细胞株HL 60、单核细胞株U937、红系细胞株K562和巨核系细胞株Meg 0 1作靶细胞 ,MTT法和祖细胞集落培养法观察GS的增殖效应 ;用WesternBlot来分析核蛋白抗原与c fos、GATA 1抗体的结合反应。结果 :( 1)MTT法和祖细胞集落培养法均显示GS( 10 μg/ml)能够明显地刺激三系细胞增殖 ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 0 5)。 ( 2 )WesternBlot分析表明HL 60、K562和Meg 0 1细胞经GS处理后核内c fos转录调控蛋白量分别是未经处理细胞的 1 5、2 0和 2 5倍 ,但U937细胞不表达c fos蛋白。 ( 3)除了U937细胞不表达GATA 1蛋白外 ,其他细胞株经GS刺激后GATA 1转录调控蛋白量分别是处理前的 1 5、2 1和 1 3倍。结论 :GS能够明显地刺激 3种系列的细胞株增殖 ,并能有效地通过诱导c fos或GATA 1转录因子而调控造血细胞与增殖或分化有关基因的表达。

C-fos诱导生长因子在胰腺再生中的重要作用

目的探讨c-fos诱导生长因子(Figf)对小鼠胰腺再生的影响。方法建立小鼠胰腺损伤模型,于术前、术后12h、24h检测血糖,48h后收集剩余胰腺组织。经全基因组芯片分析、Q-PCR验证Figf发生高表达。构建Figf过表达质粒,转染胰岛内皮细胞(MS 1),36h后ELISA检测上清培养液胰岛素分泌量的变化,Q-PCR检测转染后MS 1中Pdx1、Insulin1mRNA表达水平。结果小鼠胰腺再生过程Figf mRNA表达上调。与未转染组、转染PcDNA 3.1组比较,转染Figf过表达质粒组胰岛素分泌量明显升高[未转染组(116.89±6.09)(P<0.01);转染PcDNA 3.1组(114.24±4.60)(P<0.01)],转染Figf过表达质粒组Pdx1、Insulin1mRNA表达水平均明显升高(P<0.01)。结论 MS 1中过表达Figf可使Pdx1、Insulin1mRNA表达水平升高,增加胰岛素的分泌。Figf可能在胰岛β细胞再生中发挥着重要作用,是小鼠胰腺再生的关键基因。

雾霾颗粒物对支气管哮喘缓解期儿童外周血和痰液中血小板衍生生长因子、转化生长因子-β1、c-fos mRNA表达的影响

目的探讨雾霾颗粒物对支气管哮喘缓解期儿童外周血和痰液中血小板衍生生长因子(PDGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、c-fos mRNA表达的影响。方法选取来自重度雾霾污染、轻度雾霾污染和没有雾霾污染3个地区的支气管哮喘缓解期的儿童为样本,并将它们分为3组。检测3组患儿PDGF、TGF-β1、c-fos mRNA的相对表达水平。同时,比较受到污染时间不同的患儿这几种RNA的相对表达水平。结果重雾霾污染组、轻雾霾污染组和无雾霾污染组3组支气管哮喘缓解期患儿的外周血PDGF、TGF-β1、c-fos mRNA的相对表达水平分别为(3.47±0.2)、(2.77±0.3)和(1.67±0.1),(3.71±0.4)、(2.91±0.4)和(1.91±0.2),(4.23±0.5)、(3.33±0.4)和(2.13±0.3),痰液中的PDGF、TGF-β1、c-fos mRNA的相对表达水平分别为(5.38±0.6)、(4.18±0.5)和(2.98±0.3),(5.62±0.4)、(4.42±0.4)和(3.12±0.3),(5.94±0.7)、(4.84±0.6)和(3.64±0.4),3组比较差异有统计学意义(均P<0.05)。受到雾霾颗粒物污染长达3年及以上患儿的外周血PDGF、TGF-β1、c-fos mRNA相对表达水平分别为(4.35±0.3)、(5.15±0.4)、(5.26±0.5),痰液中的PDGF、TGF-β1、c-fos mRNA相对表达水平分别为(5.24±0.4)、(5.78±0.3)、(5.87±0.4);而受到雾霾颗粒物污染3年以下的患儿外周血PDGF、TGF-β1、c-fos mRNA相对表达水平分别为(2.65±0.4)、(2.76±0.3)、(2.86±0.3),痰液中的PDGF、TGF-β1、c-fos mRNA相对表达水平分别为(4.32±0.3)、(4.18±0.2)、(3.75±0.2),两组比较差异有统计学意义(均P<0.05)。结论雾霾颗粒物显著增加支气管哮喘缓解期儿童外周血和痰液中的PDGF、TGF-β1、c-fos mRNA的表达水平;并且污染时间越长,表达水平越高。

淫羊藿苷通过激活ATF6/c-fos信号通路改善自然衰老大鼠睾丸支持细胞功能减退的研究

目的探究淫羊藿苷对自然衰老大鼠睾丸支持细胞(Sertoli细胞)功能减退的改善作用及可能的作用机制。方法将SPF级Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠按体重随机分成青年对照组(2月龄)、衰老模型组(17月龄)、淫羊藿苷低和高剂量组(2、6 mg·kg^(-1),17月龄),各组大鼠分别给予普通饲料或含药饲料持续喂养4个月。苏木素-伊红(HE)染色法观察各组大鼠睾丸组织形态学改变。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠睾丸组织闭锁小带蛋白1(ZO-1)、闭锁蛋白(occludin)、β-连环蛋白(β-catenin)、早幼粒细胞白血病锌指蛋白(PLZF)、骨形成蛋白4(BMP4)、激活转录因子6(ATF6)和c-fos的蛋白表达和定位。结果HE染色结果发现,淫羊藿苷可明显改善自然衰老大鼠睾丸组织形态学变化。Western blot结果显示,与青年对照组相比,衰老模型组大鼠睾丸组织中ZO-1、occludin、β-catenin、PLZF和BMP4蛋白表达水平均显著下降,而淫羊藿苷可显著上调衰老大鼠睾丸组织中上述蛋白的表达水平。免疫荧光结果显示,与衰老模型组相比,淫羊藿苷能明显上调衰老大鼠睾丸Sertoli细胞中occludin和β-catenin以及通路相关指标ATF6和c-fos蛋白表达水平。结论淫羊藿苷可减轻衰老所致大鼠睾丸Sertoli细胞功能减退,机制可能与激活Sertoli细胞ATF6/c-fos信号通路有关。

p300和HDAC3介导的可逆的乙酰化作用参与调控IL-18p1启动子荧光素酶报告基因活性

IL-18是调节先天性免疫和获得性免疫的重要细胞因子,在Th1的发育中起着重要作用.p300是一种具有组蛋白乙酰化酶活性的转录辅因子.HDAC3是一种组蛋白去乙酰化酶.通过一系列共转染实验证实,p300能够刺激外源IL-18启动子活性,而HDAC3则抑制其活性.p300的乙酰化酶活性对于增强IL-18p1启动子荧光素酶报告基因激活是必需的.p300能提高转录因子c-Fos介导的IL-18启动子荧光素酶报告基因的活性,这种作用能被HDAC3抑制.p300对于内源IL-18mRNA合成有增强作用.首次证实了组蛋白乙酰化酶和去乙酰化酶参与IL-18p1启动子活性的调控,为进一步研究IL-18基因表达调控的机制奠定基础.