c-fos表达与心理应激脑机制的研究

近年来，ｃ－ｆｏｓ表达作为脑细胞激活的标志，已广泛应用于心理应激脑机制的研究，并已取得了相当的进展。根据目前的认识，本文讨论了以下几个问题：（１）与心理应激有关的脑区及其与促皮质激素释放激素（ＣＲＦ）作用的关系；（２）室旁核中ｃ－ｆｏｓ表达与ＣＲＦ的关系；（３）杏仁核与ＣＲＦ系统；（４）ＣＲＦ系统的其它研究；（５）心理应激的非ＣＲＦ系统。

中药抗纤软肝颗粒抑制PDGF诱导的肝星状细胞MEK-1和c-fos表达

目的:探讨抗纤软肝颗粒对PDGF诱导的肝星状细胞MEK-1和c-los表达的影响.方法:采用无血清培养,不同浓度的抗纤软肝颗粒温育肝星状细胞24h后,PDGF-BB(10pg/L)刺激24h,再加入上述浓度的抗纤软肝颗粒,3h后,又加入PDGF-BB(10pg/L)作用5min,然后收集细胞.采用MTT法测定细胞增生,免疫印迹化学发光法检测MEK-1,原位杂交法检测c-fosmRNA.结果:无血清培养显示抗纤软肝颗粒对于PDGF诱导的细胞增生具有抑制作用,并呈剂量依赖性,抗纤软肝颗粒5g/L、1.25g/L各组的MTT测定值分别为0.28±0.03和0.43±0.04,与PDGF对照组(0.82±0.05)相比P<0.01;对PDGF诱导的MEK-1及c-fosmRNA表达均有显著的抑制作用:抗纤软肝颗粒5g/L、1.25g/L各组细胞的MEK-1表达水平分别为0.143±0.013、0.169±0.007,与PDGF组(0.186±0.010)比较有显著陛差异(P<0.01);c-fosmRNA表达水平分别为0.152±0.010、0.163±0.005,与PDGF组(0.183±0.014)比较也显著减弱(P<0.01).结论:在所应用的剂量范围内,抗纤软肝颗粒可抑制PDGF诱导的HSC增生,其机制与干扰Ras-MEK-MAPK信号通路有关.

定痫丸对戊四唑点燃癫痫大鼠脑内神经递质含量及海马c-fos表达的影响

目的:通过观察定痫丸对癫痫大鼠神经递质谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)和海马c-fos表达的影响来探讨该方治疗癫痫的机理。方法:采用腹腔注射戊四唑3.2mg/100g,连续给予4周造成大鼠癫痫模型,造模同时给予定痫丸、丙戊酸钠和定痫丸加丙戊酸钠治疗,连续4周。结果:采用戊四唑造模后,模型组大鼠脑组织中谷氨酸含量升高而γ-氨基丁酸含量明显降低,c-fos阳性细胞数明显增多,与正常组比较有显著性差异(P<0.05)。定痫丸组、丙戊酸钠组和中西药合用组均可明显降低谷氨酸含量,升高γ-氨基丁酸含量,减少c-fos阳性细胞数,与模型组比较具有显著性差异(P<0.05)。结论:定痫丸可对抗戊四唑致大鼠癫痫的作用,作用机理与降低脑内神经递质谷氨酸含量、升高γ-氨基丁酸含量以及阻断脑内c-fos蛋白的表达有关。

辣椒素处理对电针“四白”穴诱导三叉神经脊束核尾侧亚核c-fos表达的影响

目的:探讨四白穴针刺效应的传入途径。方法:SD大鼠36只,随机分成空白组、假手术组、辣椒素组、溶媒组、电针"四白"穴+辣椒素组、电针"四白"穴+溶媒组。游离一侧眶下神经,辣椒素组将浸泡有1.5%辣椒素的棉条包绕在眶下神经上。溶媒组用浸泡在溶媒中的棉条包绕在眶下神经上。采用免疫组化技术观察三叉神经脊束核尾侧亚核(cSTN)的c-fos表达。结果:空白组在cSTN各层可见到零星、散在的阳性细胞。溶媒组、辣椒素组以及假手术组cSTN的c-fos阳性细胞数与空白组相似。电针"四白"穴+溶媒组c-fos在cSTN内主要集中在浅层(Ⅰ-Ⅱ层),其阳性细胞的数量明显多于其余各组(P<0.01);cSTN的深层(Ⅲ-Ⅳ层)c-fos数量多于空白组、溶媒组和假手术组(P<0.01,P<0.05,P<0.05)。电针"四白"穴+辣椒素组cSTN的Ⅰ-Ⅱ板层的c-fos阳性细胞数与电针"四白"穴+溶媒组相比明显减少(P<0.01),但cSTN的Ⅲ-Ⅳ板层的c-fos阳性细胞数与电针"四白"穴+溶媒组相比无明显变化(P>0.05)。结论:C纤维可能是四白穴针刺效应(调节胃功能活动)的主要传入途径。

薰衣草精油对抑郁症大鼠海马、杏仁核pCREB及c-fos表达影响的研究

目的探讨薰衣草精油对抑郁大鼠海马及杏仁核pCREB及c-fos的表达的影响及其对抑郁行为及学习记忆能力的改善作用。方法24只SD大鼠随机分为空白对照组(n=8)、抑郁对照组(n=8)、抑郁香薰组(n=8)。抑郁对照组和抑郁香薰组采用孤养加慢性不可预见性的温和应激(Chronic Unpredictable Mild Stress,CUMS)诱导抑郁症模型,造模后抑郁香薰组给持续吸入雾化薰衣草精油水溶液1 h,每天3次,持续28 d;抑郁对照组及空白对照组给吸入雾化的蒸馏水1 h,每天3次,持续28 d。采用旷场实验、糖水偏爱百分比及体质量及摄食量测定大鼠抑郁行为,采用Morris水迷宫测试记录大鼠学习记忆能力。采用免疫组化检测脑组织c-fos和pCREB的表达。结果(1)各组大鼠造模前糖水消耗百分比、水平运动及垂直活动得分差异无统计学意义(P>0.05)。造模后,抑郁对照组和抑郁香薰组大鼠糖水消耗百分比、水平活动得分和垂直活动得分均明显降低(P<0.05),各组大鼠造模前摄食量差异无统计学意义(P>0.05),造模后抑郁对照组及抑郁香薰组摄食量低于造模前(P<0.05),雾化后4周抑郁对照组摄食量同造模后比较差异无统计学意义(P>0.05),雾化后第3周及第4周抑郁香薰组摄食量高于造模后(P<0.05),但仍低于造模前(P<0.05)。雾化后第3周及第4周抑郁香薰组大鼠摄食量高于抑郁对照组(P<0.05)。各组造模前定位巡航潜伏期差异无统计学意义(P>0.05),造模后抑郁对照组及香薰对照组潜伏期延长(P<0.05),雾化吸入后4周抑郁香薰组级抑郁对照组潜伏期较造模后减少(P<0.05),但仍长于造模前(P<0.05),且抑郁对照组长于抑郁香薰组(P<0.05)。抑郁对照组及抑郁香薰组造模后第三象限路程百分比、第三象限时间百分比及穿越平台次数均减少(P<0.05),抑郁对照组及抑郁香薰组间差异无统计学意义(P>0.05),雾化吸入4周后抑郁对照组及抑郁香薰组第三象限路程百分比、第三象限时间百分比及穿越平台次数较造模后均有提高(P<0.05),且抑郁香薰组高于抑郁对照组(P<0.05)。(2)与空白对照组相比,抑郁对照组海马及杏仁核区pCREB表达均明显减弱,差异有显著统计学意义(P<0.01);与抑郁对照组相比,抑郁香薰组海马及杏仁核区pCREB的表达均明显增加,差异有显著统计学意义(P<0.05);与空白对照组相比,抑郁对照组海马及杏仁核区c-fos表达均明显减弱差异有统计学意义(P<0.05);与抑郁对照组相比,抑郁香薰组杏仁核区c-fos表达高于抑郁对照组,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论薰衣草精油芳香疗法能够上调抑郁症模型大鼠海马和杏仁体pCREB及c-fos的表达,并改善大鼠学习记忆能力。

听源性惊厥易感大鼠惊厥和点燃后前脑结构内的c-fos表达

为探讨听源性惊厥点燃和前脑结构的关系，用免疫细胞化学方法结合体视学分析，研究了Ｗｉｓｔａｒ种系的听源性惊厥易感大鼠（Ｐ７７ＰＭＣ）惊厥和点燃后，前脑结构内ｃ－ｆｏｓ表达的差异。结果显示，（１）正常Ｗｉｓｔａｒ大鼠接受一次强音刺激后，海马、齿状回、杏仁核、内嗅皮质、嗅周皮质和额－顶皮质内未见Ｆｏｓ阳性神经元；（２）Ｐ７７ＰＭＣ大鼠一次惊厥后，除海马、齿状回外，上述被检各区内可见广泛的Ｆｏｓ阳性神经元，其分布具有区域差异；（３）Ｐ７７ＰＭＣ大鼠点燃后，海马、齿状回内有大量Ｆｏｓ阳性神经元，其他的被检各区内，Ｆｏｓ阳性神经元数量更多，阳性神经元的光密度更大，与一次惊厥后相比较，具有显著差异（Ｐ＜０．０１）。在点燃大鼠海马结构中，齿状回内的Ｆｏｓ免疫反应最强，海马ＣＡ１、ＣＡ２区次之，ＣＡ３区较弱。结果表明，听源性惊厥点燃可以导致海马结构参与到惊厥活动之中。

VNP减弱NE刺激的心肌细胞c-fos表达

目的 :研究血管利钠肽 (VNP)对去甲肾上腺素 (NE)刺激的心肌细胞c fos表达的影响。方法 :分离纯化SD乳鼠心肌细胞 ,随机分为四组 :对照组、NE组、VNP组和VNP +NE组。以免疫组织化学染色方法观察各组c fos的表达情况 ,采用放射免疫方法测定了细胞内cGMP水平。结果 :NE( 10 -6mol/L)可以显著升高Fos样免疫阳性细胞数及染色强度 (P <0 .0 5 ,vs对照组 ) ,VNP( 10 -7mol/L)预处理心肌细胞可以减弱NE的作用 (P <0 .0 5 ,vsNE组 ) ,但fos的表达量仍高于基础水平 (P <0 .0 5 ,vs对照组 )。对照组和NE组细胞内cGMP水平无显著差异 ,VNP组cGMP组水平显著高于对照组和NE组 (P <0 .0 5 )。结论 :VNP能减弱NE诱导的c fos表达 ,其 10

铅对小鼠学习记忆功能及海马区c-fos表达的影响

目的 观察铅对小鼠海马区c- fos表达及学习记忆功能的影响 ,并探讨二者的关系。方法 小鼠随机分为3个实验组和 1个对照组 ,每组 10只染铅剂量分别为 2 4、4 8和 9 6mmol L ,用跳台学习试验测试小鼠学习记忆能力 ;用RT PCR法观察各组小鼠海马区c fosmRNA的表达状况。结果 (1) 3个染铅组小鼠跳台学习成绩显著低于对照组 (P <0 . 0 1) ;(2 ) 3个染铅组小鼠c- fosmRNA水平均明显降低 ,以对照组的值为 10 0 ,则低剂量组为 75 . 0 4± 4 .75 ,中剂量组为5 8. 3 5± 5 . 2 9,高剂量组为 42. 66± 6 .3 0 ,与对照组相比 ,P <0 .0 1。高剂量组、中剂量组与低剂量组比较 ,P <0 . 0 1。结论 慢性铅染毒间接阻碍了c- fox基因的反应性表达 ,c- fos基因表达水平的下降可能与铅致小鼠学习记忆功能损害有关。

腹外侧眶皮层内给予吗啡对福尔马林试验诱发脊髓背角c-fos表达的抑制效应

目的 研究前额叶腹外侧眶皮层 (VLO)内微量注射吗啡对大鼠福尔马林试验诱发的腰段脊髓背角c fos蛋白表达的抑制作用。方法 用免疫组化的方法观察c fos样免疫反应神经元在脊髓背角的表达。结果 VLO内微量注射吗啡明显抑制大鼠后爪注射福尔马林诱发的脊髓背角c fos蛋白表达 ,c fos阳性神经元数为 1 8.5 0± 0 .2 6,与注射生理盐水 5 8.2 5± 0 .98相比 ,差异显著(P <0 .0 0 1 ) ,并且这种抑制效应可被VLO内注射阿片受体拮抗剂纳络酮所翻转 ,其c fos阳性神经元数为 5 6.32± 2 .2 8,与单独注射吗啡相比差异显著 (P <0 .0 0 1 ) ,但与注射生理盐水相比 ,无显著差异 (P >0 .0 5 )。

大鼠面部和胃肠道伤害性传入信息在延髓内的汇聚──c-fos表达研究

本研究应用神经元Fos样蛋白的表达作为对伤害性传人信息反应的标志，将少量Formalin分别注入大鼠一侧面部软组织或导入胃肠道作为伤害性刺激，然后用免疫细胞化学双重标记法，显示其延髓神经元对面部和胃肠道化学伤害性信息传人的反应及其与几条酚胺递质的关系。结果表明：（1）胃肠道伤害性刺激诱导延髓内大量神经元的c-fos表达，其Fos样免疫反应（Fos-LI）神经元主要位于孤束核（NIS）、延髓腹外侧区（VLM）和最后区（AP），少数分布于NIS与VLM之间的网状结构（RF）、三叉神经旁核（PaV）；（2）面部伤害性信息传人诱导的Fos－LI神经元除大量分布在三叉神经脊束核尾侧亚核（nSpVc）浅层和PaV外．也分布于NTS、VLM和RF；(3)两种不同区域伤害性刺激所诱导的Fos表达神经元在延髓NIS和VLM的分布明显重叠，其中许多Fos—LI神经元同时呈酪氨酸羟化酶（TH）－LI．Fos/TH双重阳性神经元约占TH—LI神经元总数的50％。本结果提示延髓NTS和VLM是面部和胃肠道伤害性传入信息所汇聚的主要区域，其儿茶酚胺能神经元是所汇聚的重要成分，并讨论了它们参与面部穴位针刺对胃肠道功能调节的中枢弥漫性伤害抑制性控制（DiffuseNoxiousInhibitoryControls，DNIC）过程的可能性。

投射于腰骶髓后连合核的传递伤害性刺激的初级传入纤维的来源探索—c-fos表达方法

本课题组的既往研究曾发现 ,膀胱的初级传入投射纤维中有一部分传递伤害性刺激 ,投射于腰骶髓的后连合核。本研究的目的是通过比较盆腔内脏和后肢躯体性结构的伤害性刺激诱导 FOS阳性反应在大鼠后连合核的表达状况 ,藉以确定投射于后连合核的传递痛信号的初级传入的来源。本实验分别向盆腔内脏的膀胱和直肠以及坐骨神经支配的小腿外侧皮肤及腓肠肌等四个不同部位注入 2 %福尔马林溶液 ,用免疫组织化学方法观察了腰骶段脊髓内 FOS的表达状况 ;并向此四部位注射生理盐水作为对照。结果证明 ,将 2 %福尔马林溶液注入膀胱或直肠内腔后可主要诱导 L6,S1 ,S2 节段后连合核出现大量 FOS阳性细胞核( 2 5～ 95个 /片 ) ;向小腿外侧皮肤或腓肠肌注射福尔马林溶液 ,则主要在背角浅层出现浓密的 FOS阳性细胞核而在后连合核仅发现极少量的 FOS阳性细胞核 ( <5个 /片 ) ;在不给予福尔马林刺激的对照组 ,后连合核内也出现极少量散在的 FOS阳性细胞核 ( <3个 /片 )即后连合核内出现极少量的传递躯体伤害性刺激的传入成分与不给予福尔马林刺激的对照组结果无明显差别 ,这种极少量的神经元在神经机能的传递上不应有何作用。因而 ,本研究结果提示 。

不同运动负荷对大鼠海马神经c-fos表达的影响

目的探讨不同运动负荷对大鼠海马神经c-fos表达的影响机制。方法将40只Wistar雄性大鼠随机分为对照组和每天进行15 mins、30 mins、60 mins的小、中、大负荷游泳训练的实验组。实验8周后,利用S-P免疫组化法,检测海马神经c-fos的表达水平。结果与对照组相比,中、大运动负荷组均具有非常显著性差异(P<0.01);与小强度负荷组比,中、大运动负荷组具有显著性和非常显著性的差异(P<0.05和P<0.01);大强度负荷组显著高于中等强度负荷组(P<0.05)。结论脑海马神经c-fos表达水平,随着运动负荷的增加而显著表达。

碱性成纤维细胞生长因子对成骨细胞生长与c-fos表达的影响

以重组牛碱性成纤维细胞生长因子 (rb- b FGF)刺激体外培养的大鼠成骨细胞 ,发现 :经过 1～ 2 d的刺激 ,成骨细胞产生很长的突起 ,细胞数量和活力较对照均有显著升高 ;经 rb- b FGF 1h的刺激后 ,c- fos基因的表达即明显高于对照 ,刺激 1～ 2 d后 c- fos基因的表达也明显高于对照。这表明 b FGF可促进大鼠成骨细胞增殖 ,提高c- fos基因的表达量。 c- fos表达量的提高 。

甲磺酸卡莫司他降低急性应激大鼠内脏敏感性和脊髓c-fos表达

目的观察蛋白酶抑制剂(甲磺酸卡莫司他)对急性应激大鼠内脏敏感性的影响,探索肠道蛋白酶活性在急性应激引起内脏高敏感性中的作用。方法采用急性束缚应激动物模型,在束缚应激前30 min口服甲磺酸卡莫司他或者生理盐水,观察大鼠内脏敏感性变化、直肠粘膜和粪便中蛋白酶活性情况以及脊髓c-fos表达情况。结果口服不同剂量的甲磺酸卡莫司他后,大鼠内脏敏感性均有降低,随着剂量的增加,内脏敏感性下降更明显,但是甲磺酸卡莫司他不能将急性应激大鼠组的内脏敏感性降到应激前的水平。c-fos蛋白主要表达于脊髓背角浅层,口服不同剂量的甲磺酸卡莫司他后表达c-fos蛋白的阳性细胞数均减少(P<0.05)。在30 mg/kg组,粪便和直肠粘膜中的蛋白酶活性较应激对照组下降,有统计学差异(P<0.05)。随着蛋白酶抑制剂浓度的增加,蛋白酶活性下降更为明显,在100 mg/kg和300 mg/kg组,粪便和直肠粘膜中的蛋白酶活性较单纯应激组明显下降(P<0.01)。结论肠道蛋白酶参与了急性应激大鼠内脏高敏感性,给予蛋白酶抑制剂后大鼠内脏敏感性和脊髓c-fos表达降低。

鞘内复合应用氯胺酮和L-NAME对甲醛炎性疼痛大鼠脊髓c-fos表达的影响

目的观察鞘内复合应用非选择性一氧化氮合酶（NOS）抑制药-N^G-硝基-L-精氨酸-甲基酯（L-NAME）对氯胺酮抑制甲醛炎性疼痛大鼠脊髓后角c-fos表达效应的影响。方法选择鞘内置管后无神经损伤症状的雌性SD大鼠24只，随机均分为四组，分别经鞘内导管注入均为10μ1容量的生理盐水（K0组）、氯胺酮25μg（K1组）、氯胺酮150μg（K2组）和氯胺酮25μg加L-NAME100μg（KL组）。20min后在大鼠右足底皮下注射5％甲醛40μl，另选4只大鼠在右足底皮下注射生理盐水作为对照（N组）。观察大鼠的疼痛行为表现，并采用免疫组化方法检测脊髓后角FOS阳性细胞（FIL）的数目。结果K1、K2和KL组大鼠同侧脊髓后角FIL总数分别较K。组大鼠分别降低了32．4％、48．5％和39．1％。K1组和K：组大鼠脊髓后角板层Ⅰ～Ⅱ和板层Ⅴ～Ⅵ／Ⅹ内的FIL数目均显著低于K0组大鼠（P〈0．05），而KL组大鼠仅脊髓后角板层Ⅴ～Ⅵ／Ⅹ内的FIL数目显著低于K1组大鼠（P〈0．05）。结论鞘内注射氯胺酮呈剂量依赖性抑制甲醛炎性疼痛大鼠脊髓后角内c—fos的表达，并且复合应用L-NAME可选择性增强其对脊髓后角深层c—fos表达的抑制。

IKKα通过不同机制介导生长促进和生长抑制信号诱导的c-Fos表达和AP-1活化

目的:探讨IKK激酶催化亚基IKKα在分别介导生长促进信号(血清)和生长抑制信号(紫外线UVB)诱导的反应中,调控转录因子AP-1关键组成亚基c-Fos实现诱导表达的信号传递机制。方法:分别采用Western印迹、RT-PCR和萤光素酶报道分析系统检测血清和紫外线刺激反应状态下IKKα对c-Fos诱导表达和AP-1诱导活化的调控作用;通过转染I-κBα功能抑制型突变体I-κBα-AA,观察NF-κB诱导活化受抑时,c-Fos诱导表达和AP-1诱导活化水平的改变情况。结果:IKKα在生长促进和生长抑制信号诱导的反应中,都能够实现对转录因子AP-1及其关键组成亚基c-Fos诱导表达的调控作用。其中,在血清反应中IKKα可通过NF-κB依赖方式在转录水平调控c-Fos的诱导表达,而在UVB反应中IKKα通过转录非依赖方式调控c-Fos的诱导表达。结论:IKKα能分别以NF-κB依赖和非依赖方式参与调控生长促进和生长抑制信号诱导的反应。

大鼠同种异体甲状旁腺脑室内移植后胶质细胞的c-fos表达

以Wistar大鼠为供体，SD大鼠为受体，在立体定向仪上将同种异体的甲状旁腺移植到SD大鼠的侧脑室。应用免疫细胞化学方法对移植后脑内c-fos的表达进行了研究。移植后24h，前脑内开始出现c-fos的表达，4d达到高峰，持续1周后逐渐减少。到移植后4周，c-fos表达基本消失。c-fos表达的部位主要出现在白质内（如胼胝体。前连合等）以及侧脑室周围的脑组织（如隔区、纹状体等）。诱导表达的c-fos阳性细胞呈簇状、大小不等，类似正在分裂增殖中的小胶质细胞和星形胶质细胞。本文结果提示，在同种异体甲状旁腺脑室内移植过程中c-fos的表达可能与胶质细胞的活化和增殖有关。

大鼠脑缺血再灌注c-fos表达与神经细胞凋亡关系研究

目的探讨大鼠脑缺血再灌注后脑组织中c-fos表达水平与神经细胞凋亡的关系。方法采用大脑中动脉线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型,参考Longa的5分制法在大鼠麻醉清醒后进行评分;应用免疫组化、TUNEL法检测大鼠脑缺血再灌注后脑组织中c-fos表达水平及神经细胞凋亡情况。结果大鼠脑缺血再灌注后缺血脑组织中c-fos表达明显增加(P<0.01),于缺血再灌注12小时后达高峰,且神经细胞凋亡数明显增加(P<0.01)。结论脑缺血再灌注后神经细胞c-fos表达水平增加,并参与神经细胞凋亡机制。

士的宁与电针诱发大鼠脊髓c-fos表达的比较研究

目的 :探讨循经感传形成过程中脊髓兴奋性的作用。方法 :采用免疫组织化学ABC法 ,观察皮下注射甘氨酸受体拮抗剂士的宁后对大鼠脊髓背角c-fos表达的影响并与电针比较。结果 :士的宁和电针均可在大鼠脊髓诱发中等量的c -fos表达 ,但在部位上有差异。结论

大鼠黑质损毁后多巴胺能神经元形态及纹状体c-fos表达的变化

目的:观察毁损黑质后,多巴胺(DA)能神经元形态学变化和纹状体内相关神经元c-fos表达情况,探讨c-fos表达与毁损程度的关系。方法:利用6羟多巴胺(6OHDA)特异毁损大鼠黑质DA能神经元,采用阿朴吗啡(APO)诱导旋转实验观察术后1、7、14和21d行为学变化;利用HE染色、Nissl染色、免疫组织化学方法和电镜,观察各时间点黑质DA能神经元形态学变化和纹状体c-fos表达。结果:毁损侧DA能神经元逐渐减少,超微结构损伤逐渐加重;DA神经元丢失比例≥80%时,纹状体毁损侧c-fos表达上调,APO诱导的旋转实验>7r/min。结论:黑质DA能神经元丢失是毁损大鼠行为改变的病理学基础;cfos的表达与DA能神经元的毁损程度、行为改变有一定的关系。