松萝酸对增生性瘢痕成纤维细胞生物学行为及JNK/MAPK信号通路的影响

目的:探讨松萝酸对增生性瘢痕成纤维细胞(HSFBs)增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响,并阐明其对c-Jun氨基末端激酶(JNK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的调节作用。方法:取对数生长期HSFBs分为对照组、10μmol·L^(-1)松萝酸组、20μmol·L^(-1)松萝酸组和50μmol·L^(-1)松萝酸组,除对照组外,其他各组细胞给予相应浓度松萝酸处理。噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞存活率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Transwell小室实验检测各组细胞侵袭和迁移能力,Western blotting法检测各组细胞中磷酸化JNK(p-JNK)、JNK、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平。结果:MTT法和流式细胞术检测,与对照组比较,10、20和50μmol·L^(-1)松萝酸组细胞存活率均降低(P<0.05),细胞凋亡率均升高(P<0.05);与10μmol·L^(-1)松萝酸组比较,20和50μmol·L^(-1)松萝酸组细胞存活率均降低(P<0.05),细胞凋亡率均升高(P<0.05);与20μmol·L^(-1)松萝酸组比较,50μmol·L^(-1)松萝酸组细胞存活率降低(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05)。Transwell小室实验检测,与对照组比较,10、20和50μmol·L^(-1)松萝酸组侵袭细胞数和迁移细胞数均减少(P<0.05);与10μmol·L^(-1)松萝酸组比较,20和50μmol·L^(-1)松萝酸组侵袭细胞数和迁移细胞数均减少(P<0.05);与20μmol·L^(-1)松萝酸组比较,50μmol·L^(-1)松萝酸组侵袭细胞数和迁移细胞数均减少(P<0.05)。Westernblotting法检测,与对照组比较,10、20和50μmol·L^(-1)松萝酸组细胞中Bcl-2蛋白表达水平均降低(P<0.05),Bax和p-JNK蛋白表达水平均升高(P<0.05);与10μmol·L^(-1)松萝酸组比较,20和50μmol·L^(-1)松萝酸组细胞中Bcl-2蛋白表达水平均降低(P<0.05),Bax和p-JNK蛋白表达水平均升高(P<0.05);与20μmol·L^(-1)松萝酸组比较,50μmol·L^(-1)松萝酸组细胞中Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05),Bax和p-JNK蛋白表达水平均升高(P<0.05)。结论:松萝酸可抑制HSFBs增殖、侵袭和迁移,诱导HSFBs凋亡,并激活JNK/MAPK信号通路。

藏红花素对自发性高血压大鼠血管内皮功能障碍及动脉粥样硬化的作用及其ROCK/JNK信号通路机制

目的:探讨藏红花素(CR)对自发性高血压(SH)大鼠血管内皮功能障碍(ED)和动脉粥样硬化(As)的影响,阐明其可能的作用机制。方法:选取10只Wistar Kyoto大鼠作为正常组,40只SH大鼠随机分为模型组和低(25 mg·kg^(-1)·d^(-1))、中(50 mg·kg^(-1)·d^(-1))及高剂量(100 mg·kg^(-1)·d^(-1))CR组,每组10只,正常组和模型组大鼠腹腔注射等量生理盐水。检测各组大鼠血压和血脂水平、动脉粥样硬化指数(AI)及24 h尿样8-异构前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)肾脏排泄量,HE染色观察各组大鼠主动脉组织形态表现,ELISA法检测各组大鼠血清谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、内皮素1(ET-1)及血栓素B2(TXB2)水平,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组大鼠主动脉组织中RhoA/Rho相关激酶1(ROCK1)、ROCK2和C-Jun氨基酸末端激酶(JNK)mRNA表达水平,Western blotting法检测各组大鼠主动脉组织中ROCK1、ROCK2、JNK和磷酸化JNK(p-JNK)蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠收缩压与舒张压,24 h尿8-iso-PGF2α肾脏排泄量,血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)水平,AI,MDA、ET-1及TXB2水平、主动脉组织中ROCK1、ROCK2和JNK mRNA表达水平及ROCK1、ROCK2、JNK和p-JNK蛋白表达水平升高(P<0.05),血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)、GSH-Px和NO水平降低(P<0.05)。模型组大鼠主动脉血管壁粗糙、增厚及大量泡沫细胞和坏死物质分布。与模型组比较,低、中和高剂量CR组大鼠收缩压与舒张压,24 h尿8-iso-PGF2α肾脏排泄量,血清TC、TG和LDL-c水平,AI,MDA、ET-1和TXB2水平,主动脉组织中ROCK1、ROCK2和JNK mRNA表达水平以及ROCK1、ROCK2、JNK和p-JNK蛋白表达水平降低(P<0.05),血清GSH-Px活性和HDL-c及NO水平升高(P<0.05)。低剂量CR组大鼠主动脉血管壁粗糙、增厚及泡沫细胞与动脉粥样坏死物质分布可见不同程度减少。与低剂量CR组比较,中剂量CR组大鼠收缩压和舒张压,24 h尿8-iso-PGF2α肾脏排泄量,血清TC、TG和LDL-c水平,AI,MDA、ET-1及TXB2水平,主动脉组织中ROCK1、ROCK2及JNK mRNA表达水平及ROCK1、ROCK2、JNK和p-JNK蛋白表达水平降低(P<0.05),血清GSH-Px活性和HDL-c及NO水平升高(P<0.05)。中剂量CR组大鼠主动脉血管壁粗糙、增厚及泡沫细胞与动脉粥样坏死物质分布有所减少;与中剂量CR组比较,高剂量CR组大鼠收缩压和舒张压,24 h尿8-iso-PGF2α肾脏排泄量,血清TC、TG和LDL-c水平,AI,MDA、ET-1及TXB2水平,主动脉组织中ROCK1、ROCK2及JNK mRNA表达水平及ROCK1、ROCK2、JNK和p-JNK蛋白表达水平降低(P<0.05),血清GSH-Px活性和HDL-c及NO水平升高(P<0.05)。高剂量CR组大鼠主动脉血管壁动脉粥样病理形态明显改善。结论:CR可改善SH大鼠ED及As,其作用机制可能与抑制ROCK/JNK信号通路激活有关。

JNK抑制剂SP600125对游离脂肪酸诱导β细胞凋亡的影响

目的探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125在游离脂肪酸(FFA)诱导的胰岛β细胞凋亡中的作用。方法采用MTT法观察FFA对小鼠βTc3细胞生长的抑制作用,流式细胞术观察细胞凋亡率,免疫细胞化学和Western blot法检测p-JNK、p-c-Jun在FFA作用下及SP600125阻断JNK信号通路情况下的表达。结果 FFA可诱导体外生长的βTc3细胞凋亡,与对照组比较明显增加(P<0.05)。FFA诱导βTc3细胞凋亡过程中,p JNK和p c Jun蛋白显著增加(P<0.05);用SP600125预处理βTc3细胞后,p JNK和p-c-Jun蛋白含量较未处理组明显减少(P<0.05)。结论 FFA可诱导小鼠βTc3细胞凋亡,凋亡过程通过JNK途径实现。

川芎嗪对脑梗死大鼠脑保护作用与ROCK-JNK信号通路的相关性研究

目的探究Rho蛋白激酶(ROCK)-C-Jun氨基酸末端激酶(JNK)信号通路在川芎嗪对脑梗死大鼠脑保护作用机制。方法将138只SPF级SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、川芎嗪组和尼莫地平组(阳性对照),其中川芎嗪组再依据不同干预剂量分为川芎嗪25、50和100 mg·kg^(-1)亚组。除假手术组外,其余各组大鼠均参照改良Longa线栓法构建永久性大脑中动脉闭塞模型。分别采用Longa评分5级标准法评价神经功能缺损症状、TTC染色法测定大鼠脑组织梗死体积、干湿重法测定脑组织含水量、苏木精-伊红染色观察脑组织病理形态学改变、TUNEL法检测脑神经元凋亡率;溴化乙锭染色检测血脑屏障通透性以及Western blot法检测RhoA、Rock2、JNK蛋白表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经功能损伤评分、神经细胞凋亡率、脑组织含水量、RhoA、Rock2和JNK表达水平均显著升高;脑梗死体积显著增大,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,川芎嗪50 mg·kg^(-1)和100 mg·kg^(-1)亚组大鼠神经功能损伤评分、神经元凋亡率、脑组织含水量明显降低,脑梗死体积显著减小;RhoA、Rock2、JNK表达水平均降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。川芎嗪50和100mg·kg^(-1)亚组各指标与尼莫地平组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论川芎嗪通过抑制ROCK-JNK通路,减少细胞凋亡,降低血脑屏障渗透性,发挥对脑梗死模型大鼠的保护作用。

基于JNK信号通路探讨缬草酸对癫痫孕鼠仔鼠海马神经元保护作用

目的:基于JNK通路探究缬草酸对癫痫仔鼠海马神经元保护作用。方法:18只大鼠建立癫痫模型并成功妊娠后,随机分为模型对照组及缬草酸低、高剂量组(各6只),另取6只大鼠成功妊娠后为正常对照组。其中缬草酸低、高剂量组灌胃60 mg·kg^(-1)·d^(-1)、180 mg·kg^(-1)·d^(-1)缬草酸溶液至孕20 d,模型对照组、正常对照组同时间灌胃等量0.9%氯化钠溶液。统计各组总仔鼠数及活仔鼠数;HE染色观察仔鼠海马组织病理学变化;TUNEL技术检测仔鼠海马CA1区神经元细胞凋亡情况;免疫印迹法检测仔鼠海马组织中JNK、p-JNK、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达变化。结果:与模型对照组相比,缬草酸低、高剂量组总仔鼠数、活仔鼠数均升高,海马CA1区神经元细胞AI、海马组织中p-JNK/JNK及p-p38 MAPK/p38 MAPK表达水平均降低(P均<0.05)。结论:缬草酸对癫痫仔鼠海马神经元具有保护作用,可能是通过抑制JNK通路实现的。