凋亡信号调节激酶1通过c-Jun氨基末端激酶通路调控高糖诱导的视网膜神经节细胞损伤

目的研究细胞凋亡信号调节激酶1(apoptosis signal-regulating kinase1,ASK1)对高糖诱导的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)损伤的保护作用及其可能的机制。方法建立大鼠RGC细胞的分离培养和体外高糖(50 mmol/L葡萄糖)损伤模型。转染ASK1 siRNA沉默ASK1的表达。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ASK1 mRNA表达水平;Western blot检测ASK1、JNK蛋白表达量和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)磷酸化水平;MTT和CCK-8方法、Ki67染色分别检测RGC生长活力和增殖情况;Annexin-V FITC/PI方法和TUNEL检测RGC凋亡情况;试剂盒方法检测Caspase-3活性。结果 RGC高糖环境下培养4d,细胞生长活力降低明显(P<0.05);ASK1表达水平在高糖损伤的RGC中明显上升(P<0.05);ASK1 siRNA的转染实验结果显示:ASK1的表达水平明显下降(P<0.05),说明沉默表达实验成功;ASK1表达被抑制后RGC的生长活力(P<0.05)和增殖能力(P<0.05)明显上升,RGC的凋亡(P<0.01)和Caspase-3的活力(P<0.01)明显降低。沉默ASK1的表达有效地降低JNK蛋白的磷酸化水平。结论抑制ASK1的表达对RGC的高糖损伤有保护作用,其机制可能与抑制JNK通路有关。

α-硫辛酸对糖尿病大鼠肾脏c-Jun氨基末端激酶通路的影响

目的探讨α-硫辛酸(ALA)对糖尿病(DM)大鼠肾脏c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路及足细胞的影响。方法链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,大鼠分为正常组(NC组)、糖尿病组(DM组)和ALA干预组(ALA组),8周后测各组大鼠血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、尿白蛋白排泄率(UAER)、血糖、肾皮质超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA);透射电镜观察足细胞超微结构;Western blotting法测肾脏P-JNK、JNK蛋白的表达;免疫组织化学法测足细胞Nephrin蛋白的表达。结果与NC组比较,DM组BUN、Scr、UAER和血糖均显著增加;肾皮质MDA含量显著增加,SOD活性显著降低;透射电镜示:DM组足突增宽,肾小球基底膜增厚,系膜基质增多;肾脏P-JNK、JNK蛋白的表达及P-JNK/JNK均显著增加;Nephrin的表达显著降低。与DM组比较,ALA组BUN、Scr、UAER和MDA含量均显著降低;SOD活性显著增加;足细胞超微结构明显改善;肾脏P-JNK、JNK蛋白的表达及P-JNK/JNK均显著降低;Nephrin的表达显著增加。结论 ALA可能通过抑制DM大鼠JNK信号通路的活性,上调足细胞Nephrin蛋白的表达而发挥对糖尿病肾病的肾保护作用。

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对大鼠心脏成纤维细胞c-Jun氨基末端激酶通路活化的影响

目的探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对血小板源生长因子诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖及胶原合成以及c-Jun氨基末端激酶表达的影响。方法选用新生Wistar大鼠心脏成纤维细胞作为实验研究材料,MTT法检测心脏成纤维细胞代谢活性的改变,免疫细胞化学法检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达的改变,Western Blotting检测大鼠心脏成纤维细胞中磷酸化JNK(p-JNK)和JNK蛋白及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果 10μg/L血小板源生长因子刺激下,代表大鼠心脏成纤维细胞代谢活性的OD值增加,Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达增强,表明血小板源生长因子刺激了心脏成纤维细胞增殖,促进了胶原的合成。同时p-JNK蛋白表达增高,而JNK蛋白表达无明显改变。10-9mol/LAcSDKP能够抑制血小板源生长因子诱导的大鼠心脏成纤维细胞代谢活性,同时抑制了Ⅰ型、Ⅲ型胶原及p-JNK蛋白的表达,而JNK蛋白表达无明显改变。结论 AcSDKP能够通过阻断血小板源生长因子介导的JNK通路激活进而抑制大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原蛋白表达。

基于肌醇需求激酶1α/c-Jun氨基末端激酶信号通路探讨胆宁片干预非酒精性脂肪性肝病的作用及机制

目的基于肌醇需求激酶1α/c-Jun氨基末端激酶(IRE1α/JNK)信号通路,探讨胆宁片对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型大鼠的作用及机制。方法将32只SD大鼠随机分为正常饮食组(A组,等体积生理盐水,8只)和高脂饮食组(24只);高脂饮食组大鼠喂养10周复制NAFLD模型成功后,再随机分为模型组(B组,等体积生理盐水)、多烯磷脂酰胆碱组[C组,142.5 mg/(kg·d)]和胆宁片组[D组,562.5 mg/(kg·d)],各8只。各组小鼠均灌胃相应药物干预6周。测定大鼠的体质量、血糖(GLU);采用苏木精-伊红染色(HE)法观察大鼠肝组织病理形态变化,采用油红染色法观察肝组织脂质沉积;检测血清胰岛素(INS)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、游离脂肪酸(NEFA)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;采用免疫印迹(Western blot)法检测肝组织IRE1α、JNK1、磷酸化胰岛素受体底物1(p-IRS1)的蛋白表达水平。结果与B组比较,D组大鼠血糖和TC,TG,LDL-C,NEFA,ALT,AST水平均显著降低(P<0.01),血清INS和HDL-C水平显著升高(P<0.01);脂肪变性程度及细胞肿胀明显减轻,脂滴空泡体积缩小,数量减少;肝脏IRE1α,JNK1,p-IRS1蛋白表达水平均显著降低(P<0.01)。结论胆宁片可能通过下调IRE1α/JNK信号通路,减轻肝脏脂肪变性,从而改善NAFLD。

针刺通过c-Jun氨基末端激酶通路调控急性脑出血大鼠自噬水平

目的:观察针刺对脑出血大鼠JNK通路及自噬水平的影响,探讨针刺抗脑出血的部分机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、针刺组,每组进一步分为1、3、7 d亚组,每个亚组5只。采用自体血注入法复制脑出血大鼠模型。针刺组针刺“百会”透患侧“曲鬓”,每次30 min,每日1次,各亚组分别治疗1、3、7 d。采用Bederson评分评价各组大鼠神经功能缺损情况;Western blot法检测各组大鼠出血脑组织B淋巴细胞瘤-2基因同源结构域蛋白抗体(Beclin1)、微管相关蛋白轻链3(LC3)Ⅰ/Ⅱ、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、磷酸化(p)-c-Jun蛋白相对表达量。结果:各时点模型组大鼠Bederson评分高于空白组(P<0.05),针刺组大鼠Bederson评分3、7 d低于模型组(P<0.05)。与空白组比较,模型组各时间点的LC3Ⅰ/Ⅱ、Beclin1、p-c-Jun、p-JNK蛋白表达升高(P<0.01)。与模型组比较,针刺组大鼠3、7 d时LC3Ⅰ/Ⅱ相对表达量降低(P<0.05,P<0.01),Beclin1、p-c-Jun、p-JNK蛋白表达均升高(P<0.05,P<0.01)。结论:针刺可激活脑出血大鼠脑组织中JNK通路提高自噬水平,从而改善脑出血大鼠神经功能。

c-Jun氨基端激酶信号通路调控急性呼吸窘迫综合征中重要炎症介质表达机制的研究进展

急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是一种临床常见的危重症,其核心问题在于过度的炎症反应。c-Jun氨基端激酶(JNK)是促分裂原活化的蛋白质激酶(MAPK)家族最重要的成员之一,在调控细胞增殖、分化、凋亡、自噬及炎症等多个重要功能中发挥作用。JNK信号通路被过度激活时,会导致炎症反应的持续激活和炎症因子的过度生成,从而对机体造成严重损害。因此,明确JNK通过哪些信号通路参与炎症反应,对于控制ARDS的炎症进程和调节机体的免疫反应平衡具有重要意义。

基于c-Jun氨基末端激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路探讨阿魏酸钠对偏头痛大鼠炎症反应的抑制作用

目的 探讨阿魏酸钠(SF)通过调控JNK/p38 MAPK信号通路对偏头痛大鼠炎症反应的抑制作用。方法 腹腔注射硝酸甘油制备偏头痛大鼠模型,模型制作成功后随机分为模型组、SF低剂量(SF-L)组(50 mg/kg)、 SF高剂量(SF-H)组(100 mg/kg)、SF+JNK抑制剂(SF+SP600125)组(SF 100 mg/kg+SP600125 10 mg/kg)、 SF+JNK激活剂[SF+茴香霉素(AN)]组(SF 100 mg/kg+AN 5 mg/kg),每组12只,另取12只SD大鼠不做处理作为空白组。给药结束24 h后观察各组大鼠行为学变化,ELISA法检测血清中5-羟色胺(5-HT)、一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平,TUNEL染色观察脑组织神经元凋亡情况,免疫组织化学法检测脑组织中TNF-α、 IL-6、降钙素基因相关肽(CGRP)表达,Western blotting法检测脑组织中JNK/p38 MAPK通路相关蛋白的表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠挠头次数以及爬笼次数明显增加,神经元凋亡率显著升高;血清5-HT含量显著降低,NO、TNF-α和IL-6水平显著升高;脑组织中TNF-α、IL-6和CGRP表达以及磷酸化JNK(p-JNK)/JNK、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)/p38 MAPK比值均显著升高(均P<0.05)。与模型组比较,SF-L组、SF-H组大鼠挠头次数及爬笼次数显著减少,神经元凋亡率显著降低;血清中5-HT含量显著升高,NO、TNF-α和IL-6水平显著降低;脑组织中TNF-α、IL-6和CGRP表达以及p-JNK/JNK、p-p38 MAPK/p38 MAPK比值均显著降低(均P<0.05)。与SF-H组比较,SF+SP600125组能够显著增强SF对偏头痛大鼠的保护作用;SF+AN组能够显著逆转SF对偏头痛大鼠的保护作用。结论 SF可能通过抑制JNK/p38 MAPK信号通路的表达,有效抑制偏头痛大鼠神经源性炎症反应,减少神经元凋亡,实现对偏头痛大鼠的保护作用。

银杏叶提取物对肝纤维化大鼠肝脏内质网应激相关c-jun氨基末端激酶通路的影响

目的:观察银杏叶提取物(Gb E)对肝纤维化大鼠肝组织内质网应激相关c-jun氨基末端激酶(JNK)通路的影响,探讨Gb E抗肝纤维的作用机制。方法:采用40%的CCl4皮下注射(3m L·kg-1·d-1,2次/周,首剂加倍),连续6周诱导大鼠肝纤维化模型,同时分别以低、中、高剂量(50、100、200m L·kg-1·d-1)Gb E灌胃干预6周,空腹取肝组织,Real-time PCR法检测JNK m RNA表达,Western blot技术检测大鼠肝组织中JNK通路关键分子凋亡信号调节激酶(ASK)及JNK的总蛋白及其磷酸化表达。结果:肝组织JNK m RNA表达及ASK、JNK总蛋白活化水平较正常组明显增强(P<0.05,P<0.01);Gb E低、中、高剂量组大鼠肝组织JNK m RNA表达及ASK、JNK总蛋白活化水平较模型组不同程度下降(P<0.05,P<0.01)。结论:CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝脏内质网应激相关的JNK通路被激活,Gb E可通过调节肝纤维化大鼠JNK通路防止肝纤维化的进展。

内镜逆行性胰胆管造影术对急性胰腺炎大鼠的作用及其对活性氧／c-Jun氨基末端激酶通路的影响

目的观察内镜逆行性胰胆管造影术对急性胰腺炎大鼠的作用及其对活性氧（ROS）／c-Jun氨基末端激酶（JNK）通路的影响。方法选取60只雄性大鼠，分为空白组（尾静脉注射0.1ml的体积分数0.1％胎牛血清）、模型组（尾静脉注射0.1ml的体积分数0.1％胎牛血清）及手术干预组（内镜逆行性胰胆管造影术）各20只。建模后，处死大鼠后，留取外周血、胰腺组织标本，采用免疫组织化学技术检测3组大鼠核凶子-κB（NF-κB）的核转位，胰腺组织切片采用苏木素-伊红（HE）染色法行病理检查，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定3组大鼠血清肿瘤坏死因子-α（TNF-d）、白细胞介素（IL）-6、IL-1β水平，采用流式细胞分析检测3组大鼠胰腺组织ROS水平变化，采用Western blot检测3组大鼠胰腺组织磷酸化JNK（p-JNK）、JNK变化。结果与模型组（55.9±2.2、79.6±12.6、322.3±28.5、436.8±32.9）比较，手术干预组的NF-κB、ROS、P-JNK、JNK均明显降低（12.3±1.1、61.2±13.2、2551.4±25.9、289.6±36.5），差异有统计学意义（P=0.011、0.015、0.014、0.009）；与模型组（85.6±2.5、58.6±13.6、82.3±12.5）比较，手术干预组的TNF-α、IL-6、IL-1β水平均明显降低（22.3±1.1、10.3±1.2、11.3±2.3），差异有统计学意义（P=0.018、0.012、0.016）。结论ROS／JNK通路的启动会引发一系列炎性反应加重病情，内镜逆行性胰胆管造影术对急性胰腺炎大鼠的治疗作用是通过抑制ROS／JNK通路发挥作用。

microRNA-96-5p对染氟成骨肉瘤细胞c-Jun氨基末端激酶通路的影响

目的探讨miR-96-5p对染氟大鼠成骨肉瘤(UMR-106)细胞c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)通路的影响。方法将处于对数生长期的UMR-106细胞分别转染mi R-96-5p反义寡核苷酸(anti-miRNA oligonucleotide,AMO)、过表达质粒以达到抑制和过表达作用,再以0(对照)、2 000μmol/L NaF对细胞进行染毒,培养24 h后通过实时荧光定量PCR检测miR-96-5p及JNK通路上各因子基因的变化;培养48 h后,采用蛋白免疫印迹法检测JNK通路上各因子蛋白的变化。结果与无氟对照组相比,氟染毒组UMR-106细胞mi R-96-5p、天冬氨酸蛋白水解酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,caspase-3)mRNA表达水平升高(P<0.05),cAMP直接活化交换蛋白(exchange protein directly activated by cAMP,Epac)mRNA表达水平下降,差异均有统计学意义(P<0.05);转染mi R-96-5p质粒后,与质粒对照组相比,质粒+NaF组UMR-106细胞miR-96-5p mRNA表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);转染AMO后,与AMO对照组相比,AMO+NaF组UMR-106细胞mi R-96-5p mRNA表达水平升高,Epac和caspase-3 mRNA表达水平下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。与无氟对照组相比,氟染毒组UMR-106细胞腺苷酸环化酶6(Adenylate Cyclase 6,AC6)、Epac、p-JNK蛋白表达水平均下降,差异均有统计学意义(P<0.05);与质粒对照组相比,质粒+NaF组UMR-106细胞AC6、Epac、天冬氨酸蛋白水解酶9(cysteinyl aspartate specific proteinase 9,caspase-9)蛋白表达水平均下降,而p-JNK、磷酸化Jun癌基因(Jun oncogene,c-Jun)、细胞色素C(cytochrome C,cyt C)和非活化caspase-3蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);转染AMO后,与AMO对照组相比,AMO+NaF组UMR-106细胞AC6、Epac、caspase-9、p-JNK蛋白表达均下降,p-c-Jun、cyt C和非活化caspase-3蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 mi R-96-5p可能促进染氟UMR-106细胞JNK通路磷酸化,从而介导细胞凋亡。

c-Jun氨基末端激酶信号通路在大鼠脑缺血再灌注过程中的作用

目的探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在大鼠脑缺血再灌注过程中所发挥的作用。方法雄性SD大鼠108只,体重290-310 g,随机分成假手术组(SH组)、缺血再灌注组(IR组)和JNK抑制剂SP600125组(SP组),分别于缺血前30 min侧脑室注射10 mL/L二甲基亚砜(DMSO)1、0 mL/L DMSO及JNK抑制剂SP600125。每组再根据再灌注时间分为2、6、12、24、487、2 h 6个亚组,每亚组6只动物。采用4-VO法建立SD大鼠全脑缺血模型,在预定时间点行灌注、固定、取脑、石蜡包埋切片;免疫组化方法检测p-JNK的表达变化,光镜下计数海马CA1区存活细胞,TUNEL法检测CA1区凋亡细胞。结果脑缺血再灌注后海马CA1区p-JNK在IR组有明显表达,于再灌注2 h时即明显升高,6 h时略有降低,后逐渐上升,24 h到高峰,之后表达量减小。SP组p-JNK的表达则无明显增高,各时点与IR组比较均有显著性差异(P<0.01)。海马CA1区神经元存活数目SP组明显高于IR组(P<0.01),凋亡指数显著低于IR组(P<0.01)。结论在大鼠全脑缺血再灌注损伤过程中,JNK信号通路发挥了重要作用,抑制JNK通路的激活可对脑缺血再灌注损伤导致的细胞损伤起到保护作用。

c-Jun氨基末端激酶信号通路在血管紧张素Ⅱ诱导腹主动脉瘤小鼠模型中的作用机制研究

目的探讨c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号通路在血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导腹主动脉瘤(abdominal aortic aneurysm,AAA)小鼠模型中的作用机制。方法将C57BL/6 ApoE-/-(ApoE knock out,ApoE KO)雄性小鼠随机分为3组,假性手术组、模型组和抑制剂组;假性手术组背部肩胛间皮下手术植入预装生理盐水微量缓释泵,模型组、抑制剂组小鼠背部肩胛间皮下手术植入AngⅡ的痕量缓释泵(1000 ng/(min·kg)),造模周期为28 d,抑制剂组术前48 h腹腔注射JNK抑制剂SP600125(2 mg/kg)1 mL/d进行预处理,假性手术组和模型组给予等体积的生理盐水。苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)观察小鼠炎性反应指标,双氯荧光素(2′,7′-dichlorfluorescein-diacetate,DCFH-DA)染色检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)的荧光强度,蛋白免疫印迹检测p-JNK、p-c-Jun蛋白表达。结果与假性手术组相比,模型组小鼠AAA病理症状明显,AAA组织中绿色荧光明显增强,ROS含量明显升高,p-JNK及p-c-Jun的表达出现了明显的增强,差异均具有统计学意义(均P<0.05);与模型组相比,抑制剂组小鼠AAA病理症状相对好转,AAA组织中荧光强度明显减弱,ROS含量明显降低,p-JNK及p-c-Jun的表达水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论JNK信号通路在血管紧张素Ⅱ诱导小鼠腹主动脉瘤模型中起着重要的调控作用,抑制该通路能抑制氧化应激反应,改善AAA症状。

积雪草酸对糖尿病大鼠肾脏c-Jun氨基末端激酶信号通路的影响

目的:探讨积雪草酸(AA)对糖尿病(DM)大鼠肾脏c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路及足细胞的影响。方法:链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型,将糖尿病大鼠随机分为糖尿病组(DM组)和AA干预组(AA组),并以正常组(NC组)作对照。干预8周后测各组血尿素氮(BUN)、肌酐(SCR)、尿白蛋白排泄率(UAER)、血糖、肾皮质超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;透射电镜观察足细胞超微结构;Western blot法测肾脏p-JNK、JNK蛋白的表达;免疫组化法测足细胞nephrin蛋白的表达。结果:与NC组比较,DM组血BUN、SCR、UAER、血糖均显著增加(均P<0.01);肾皮质MDA含量显著增加(P<0.05),SOD活性显著降低(P<0.05);透射电镜示:DM组足突增宽,肾小球基底膜增厚,系膜基质增多。肾脏p-JNK、JNK表达均显著增加(均P<0.01);nephrin的表达显著降低(P<0.01)。与DM组比较,AA组血BUN、SCR、UAER、MDA含量均显著降低(均P<0.05),SOD活性显著增加(P<0.05);足细胞超微结构明显改善;肾脏p-JNK、JNK表达均显著降低(均P<0.05);nephrin表达显著增加(P<0.05)。结论:AA可能通过抑制糖尿病大鼠JNK信号通路的活性、上调足细胞nephrin的表达而发挥对糖尿病大鼠肾的保护作用。

C-Jun氨基末端激酶信号通路在急性一氧化碳中毒迟发性脑病中的作用

目的探讨c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinas,JNK)信号通路在急性一氧化碳中毒迟发性脑病中的作用。方法 120只雄性SD大鼠随机分成空白对照组(BC组)、急性一氧化碳中毒迟发性脑病组(CO组)和JNK抑制剂SP600125组(SP组)3组,每组40只,采用静态吸入式染毒法复制急性一氧化碳中毒迟发性脑病大鼠模型,选取染毒后1、3、7、14、28 d为时相点,应用Morris水迷宫试验检测平均潜伏期等学习记忆能力,免疫组化法检测海马区p-JNK表达,Tunel法检测海马区锥体细胞凋亡。结果 CO组大鼠平均潜伏期较BC组明显延长(P<0.01),SP组较CO组明显缩短(P<0.01),但仍比BC组延长(P<0.01);p-JNK在CO组大鼠海马区表达较BC组明显增强(P<0.01),SP组较CO组表达明显减弱(P<0.01),较BC组明显增强(P<0.01);CO组海马区锥体细胞第3天已经有凋亡增多(9.94%±1.22%),第7和14天增多最明显(39.77%±1.91%,29.72%±4.89%),第28天仍然增多(5.88%±0.55%),凋亡指数与BC组相比有明显增高(P<0.01),而SP组凋亡指数与CO组相比明显降低(P<0.01)。结论 JNK信号通路参与了急性一氧化碳中毒迟发性脑病的发生,应用其特异性抑制剂SP600125阻断其转导可减少海马区神经元的凋亡,减轻急性CO中毒对学习记忆能力的损害。

瑞香素抑制c-Jun氨基末端激酶/核因子κB(JNK/NF-κB)通路减轻大鼠心肌缺血损伤

目的研究瑞香素(DAP)对于心肌缺血损伤大鼠的保护作用及其作用机制。方法将75只SD大鼠随机分为空白组、模型组、(30、60、90)mg/kg DAP处理组。模型的建立则是采用皮下注射85 mg/kg异丙基肾上腺素(ISO)连续2 d建立大鼠心肌缺血模型,持续灌胃给予相应剂量DAP处理7 d,观察DAP对心肌损伤的保护作用。采用大鼠心电图测量装置测定各组实验大鼠的心电图变化,采用分光光度法测定血清超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)酶活性和丙二醛(MDA)含量,ELISA检测血清肌肉B型肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CPK)水平以及心肌组织匀浆白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量的变化;采用HE染色以及Masson染色观察心肌细胞的损伤及纤维化情况,实时定量PCR检测心肌组织c-Jun氨基末端激酶(JNK)和核因子κB(NF-κB)的mRNA水平,Western blot法检测JNK、NF-κB的磷酸化情况。结果DAP能增加心肌组织SOD、CAT、GSH-Px酶活性,降低MDA,并能降低血清组织中CK-MB、LDH、CPK、TNF-α和IL-1β水平,减少心肌细胞纤维化,抑制JNK和NF-κBp65的表达和磷酸化。结论DAP通过抑制JNK/NF-κB信号通路活化,抑制心肌缺血诱发的心肌细胞凋亡和纤维化。

c-Jun氨基末端激酶信号通路在不同剂量舒芬太尼预处理大鼠肝脏缺血-再灌注损伤中的作用

目的研究舒芬太尼预处理对大鼠肝脏缺血-再灌注损伤的作用及其与c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路的关系。方法健康SD大鼠162只,雌雄不拘,体重250-300g,采用随机数字表法将其分为七组：假手术组（S组,n=30）、肝脏缺血-再灌注组（IR组,n=30）、1μg/kg舒芬太尼预处理组（SF1组,n=30）、5μg/kg舒芬太尼预处理组（SF5组,n=30）、10μg/kg舒芬太尼预处理组（SF10组,n=30）、阻断剂SP600125组（SP组,n=30）及二甲基亚砜组（DMSO组,n=6）。舒芬太尼预处理组分别在缺血前30min静脉输注不同剂量（1、5、10μg/kg）舒芬太尼,S组及IR组给予等体积生理盐水,SP组于缺血前30min腹腔注射15mg/kg JNK阻断剂SP600125,DMSO组于缺血前30min静脉注射与溶解SP600125等体积的DMSO;S、IR、SF1、SF5、SF10组于再灌注即刻（T1）、1h（T2）、2h（T3）、4h（T4）、6h（T5）,SP、DMSO组于T3时取肝组织及腹主动脉血2ml;测定血清ALT和AST活性;观察肝组织MDA和SOD的变化;HE染色观察肝组织病理学改变;免疫组化法测定p-JNK;Western blot法测定肝组织p-JNK的蛋白表达水平。结果 T1-T5时IR、SF1、SF5、SF10组,T3时SP、DMSO组血清ALT、AST明显高于S组（P〈0.05）;T1-T5时SF1、SF5、SF10组,T3时SP组血清ALT、AST明显低于IR组（P〈0.05）;T1-T5时IR、SF1、SF5、SF10组,T3时SP、DMSO组肝组织MDA、SOD水平明显高于S组（P〈0.05）;T1-T5时SF1、SF5、SF10组,T3时SP组肝组织MDA、SOD水平明显低于IR组（P〈0.05）;T4时SF10组MDA、SOD水平明显低于SF1、SF5组（P〈0.05）。与T1时比较,T3时IR组p-JNK表达明显升高（P〈0.05）;T3时IR、SF1、SF5、SF10、SP、DMSO组p-JNK表达明显高于S组（P〈0.05）,SF1、SF5、SF10、SP组p-JNK表达明显低于IR组（P〈0.05）,SF5、SF10组p-JNK表达明显低于SF1组（P〈0.05）,SF10组p-JNK表达明显低于SF5组（P〈0.05）。结论舒芬太尼预处理可减轻大鼠肝脏缺血-再灌注损伤,且10μg/kg舒芬太尼保护作用最为显著,其机制可能是通过抑制JNK通路,降低p-JNK的表达,从而减轻大鼠肝脏缺血-再灌注损伤。

c-Jun氨基末端激酶信号通路抑制对白细胞介素-1诱导的大鼠椎间盘纤维环细胞基因表达的影响

目的研究c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路抑制对白细胞介素-1(IL-1)诱导的大鼠椎间盘纤维环细胞基因表达的影响,为阻止椎间盘退变提供新的治疗靶点。方法分离培养大鼠尾椎纤维环细胞,IL-1刺激纤维环细胞后,Western blot检测JNK信号通路的激活;传代的纤维环细胞培养48 h后,以IL-1(10 ng/ml)加或不加JNK通路抑制剂SP600125刺激24 h,Real-Time PCR检测JNK通路抑制对IL-1诱导的大鼠纤维环细胞基因表达的影响。结果 JNK通路抑制可显著抑制IL-1引起的诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素-6(IL-6)、环氧合酶-2(Cox-2)和基质金属蛋白酶(MMP)-3、MMP-13表达上调,同时,可显著逆转IL-1引起的Ⅰ型胶原和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因表达下调。结论 JNK通路抑制可作为阻断IL-1诱导的椎间盘退变的治疗靶点。

c-Jun氨基末端激酶与首发精神分裂症患者认知功能及预后的相关性研究

目的探讨首发精神分裂症患者血清c-Jun氨基末端激酶(JNK)表达与认知功能及出院1年预后的相关性。方法对168例首发精神分裂症患者进行临床资料调查、认知功能评估和出院后随访。根据有无认知功能受损,168例患者被分为认知功能受损组65例和认知功能正常组103例。采用Pearson相关分析法分析患者血清JNK表达水平与认知功能[MATRICS共识认知成套测试(MCCB)得分]的相关性。采用Logistic回归分析探讨患者认知功能受损的影响因素,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清JNK表达水平等因素对患者认知功能受损的预测效能,采用Cox回归分析法对患者出院后1年的随访预后进行单因素和多因素分析。结果认知功能受损组血清JNK表达水平为(78.12±9.28)%,高于认知功能正常组的(59.38±6.17)%,差异有统计学意义(t=10.420,P<0.001)。首发精神分裂症患者血清JNK表达水平与MCCB得分呈显著负相关(r=-0.492,P<0.001)。血清JNK表达水平是首发精神分裂症患者认知功能受损的独立危险因素(OR=3.080,95%CI:1.864~12.157);血清JNK表达水平预测患者认知功能受损的曲线下面积(AUC)为0.756,最佳截断值为73.49,特异度为0.885,敏感度为0.913。出院后随访1年,高JNK水平患者的无病生存期短于低JNK水平患者,差异有统计学意义(P<0.05)。Cox回归分析显示,年龄、睡眠障碍、抑郁、焦虑、血清JNK表达水平均为首发精神分裂症患者出院后随访预后不良的独立影响因素(P<0.05)。结论首发精神分裂症患者血清JNK表达水平与认知功能、出院1年预后存在相关性,临床医务人员应密切监测患者血清JNK表达水平。

C-Jun氨基末端激酶与Activin A/Smads通路在体外脑缺血损伤中的相互作用

目的探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)与Activin A/Smads信号在体外缺血性脑损伤中的相互作用机制。方法使用鼠神经生长因子诱导大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞神经元样转化,利用连二亚硫酸钠(NaS2O4)构建细胞氧糖剥夺模型(OGD),计时0h和1h。Western blot检测外源性ActA或JNK磷酸化抑制剂SP600125干预后,OGD不同时间Smad3、JNK1总蛋白和磷酸化蛋白的表达情况。结果 OGD损伤后JNK1磷酸化蛋白表达升高27.1%。与对照组相比,外源性ActA下调JNK1蛋白的磷酸化水平,在OGD 0h和1h时分别下降了67.8%和56.4%。SP600125通过抑制JNK1磷酸化,上调Smad3的磷酸化水平。与DMSO对照组相比,在OGD 0h和1h时,SP600125组磷酸化Smad3表达分别升高了142.5%和60.5%。结论 JNK与ActA/Smads通路之间存在负性调控作用。

石菖蒲挥发油对炎性痛大鼠脊髓背角中胶质纤维酸性蛋白、c-Jun氨基末端蛋白激酶和肿瘤坏死因子α表达的影响

目的探讨石菖蒲挥发油(VOA)对炎性痛大鼠脊髓背角中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、c-Jun氨基末端蛋白激酶(JNK)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响。方法36只雄性SD大鼠随机分为:对照组(control)、假手术组(sham)、完全弗氏佐剂组(CFA)、5 g/(kg·d)低剂量VOA+CFA组(VOA-L+CFA)、10 g/(kg·d)中剂量VOA+CFA组(VOA-M+CFA)和20 g/(kg·d)高剂量VOA+CFA组(VOA-H+CFA),共6组,每组6只,于连续灌胃给药的第22天取材。利用免疫荧光染色和Western blotting技术检测各组大鼠脊髓背角中GFAP、JNK和TNF-α的表达情况。结果免疫荧光染色及Western blotting结果表明,与control和sham组相比,CFA组中大鼠脊髓背角中GFAP、JNK和TNF-α阳性表达均显著增多(P<0.01);与CFA组相比,不同剂量VOA处理组大鼠脊髓背角中GFAP、JNK和TNF-α阳性表达均减少,且VOA-H+CFA组大鼠脊髓背角中GFAP、JNK和TNF-α阳性表达减少更明显(P<0.05,P<0.01)。结论VOA可降低CFA诱导的炎性痛大鼠脊髓背角中GFAP、JNK和TNF-α的表达。