c-myc反义寡核苷酸对人肝癌细胞SMMC-7721端粒酶活性的影响

目的 :探讨c -myc反义基因治疗肿瘤的机制。方法:将正义 (sense)、反义 (antisense)、错配 (mismatch)的c -myc寡核苷酸作用于体外培养的人肝癌细胞SMMC -7721 ,分别应用免疫组化、RT -PCR、PCR -ELISA等方法 ,观察对c -myc蛋白表达、端粒酶亚单位及活性表达的影响。结果:10μmol/L浓度的反义c -myc寡核苷酸作用于SMMC -772124h、48h后 ,相应的c -myc蛋白、端粒酶催化亚单位hTERTmRNA及其端粒酶活性与空白对照组相比 ,差别有统计学意义(P<0.01);而正义组和错配组与空白对照组相比 ,差别无统计学意义(P>0.05)。结论:c -myc反义寡核苷酸可能通过抑制端粒酶活性而抑制肿瘤细胞增殖。

脂质体技术促进c-myc反义寡核苷酸导入人体肝癌细胞的作用

观察脂质体技术促进 c- myc反义寡核苷酸导入人体肝癌细胞的作用。方法 采用新一代脂质体 Lipofect AMINE( LR)包裹针对肝癌表达基因 c- myc反义寡核苷酸 ( ASODN) ,借助FITC荧光标记 c- myc- ASODN,应用细胞培养方法及荧光分光光度计以及荧光显微镜。结果 LR促进 ASODN进入靶细胞并增强其对肿瘤细胞基因的特异性封闭作用。结论 脂质体作为一种安全、简便。

C-myc反义寡核苷酸联合5-FU对胃癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用的研究

目的探讨C-myc反义寡核苷酸(ASODN)联合5-FU对胃癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用。方法将30只裸鼠建立人胃癌MKN-45细胞移植瘤动物模型。成瘤后动物随机平均分为6组,分别由皮下瘤体内注射脂质体(lipofectin,Lip)、正义寡核苷酸(SODN/Lip)、反义寡核苷酸(ASODN/Lip)、5-FU、5-FU+SODN/Lip和5-FU+ASODN/Lip,每周1次,共3次。观察肿瘤抑制率、肿瘤体积和动物存活情况。RT-PCR及免疫组化法检测各组肿瘤的c-myc蛋白表达情况。结果ASODN/Lip组和5-FU组肿瘤体积明显减少,肿瘤生长抑制,抑瘤率达41.5%和36.8%,5-FU+C-mycASOND/Lip组抑制作用更为显著,抑瘤率达46.7%;ASODN/Lip组裸鼠生存期较SODN/Lip组和Lip对照组延长明显(P<0.05);RT-PCR及免疫组化显示ASODN和5-FU均使C-myc mRNA和蛋白表达下降。结论C-myc基因反义寡核苷酸联合5-FU可以有效抑制人胃癌裸鼠皮下肿瘤的生长,延长动物生存期,下调C-myc基因表达,为胃癌的治疗提供新的思路。

c-Myc反义寡核苷酸对人肝癌Bel-7402细胞增殖的双向调节作用(英文)

目的观察c-Myc反义寡核苷酸(c-Myc ASODN)对人肝癌Bel-7402细胞增殖的双重调节作用,探讨c-Myc基因的生物学功能。方法台盼兰拒染细胞计数,CCK-8细胞检测试剂盒检测各组细胞增殖抑制率,计算单纯黄连素组及合用c-Myc ASODN后IC50。结果单纯黄连素及c-Myc ASODN均能明显抑制细胞的增殖(P<0.05),将黄连素合用c-Myc ASODN后,细胞增殖抑制率低于单用黄连素组,但仍高于c-Myc ASODN组。黄连素作用Bel-7402细胞的IC50值在合用c-Myc ASODN后增加1.42倍。结论c-Myc基因在Bel-7402细胞细胞生长环境良好时可促进细胞的生长,在细胞生长环境不利的情况下则诱导细胞的的凋亡,抑制细胞的生长。依据环境不同,对Bel-7402细胞增殖具有不同的调节作用,c-Myc ASODN通过下调c-Myc基因的表达,在不同的环境下亦表现出不同的生物学效应。c-Myc ASODN与黄连素合用能明显降低Bel-7402细胞对黄连素的敏感性。

c-myc反义寡核苷酸对胃癌SGC7901增殖及凋亡的影响

目的通过脂质体将c-myc正反义寡核苷酸转入人胃癌细胞SGC7901,测定c-myc正反义寡核苷酸对SGC7901细胞的增殖和凋亡的影响。方法通过脂质体将c-myc正反义寡核苷酸转入人胃癌细胞SGC7901,western blot检测c-myc蛋白的表达变化,MTT法检测增殖,流式细胞术检测凋亡。结果 c-myc反义寡核苷酸可以抑制SGC7901细胞c-myc蛋白的表达,并在72小时达到高峰,MTT检测到c-myc的反义寡核苷酸使细胞生长受到了明显的抑制,流式细胞仪监测c-myc反义寡核苷酸可明显的使得凋亡率上升其作用的高峰在第72小时达到高峰。结论 c-myc反义寡核苷酸可以明显得使得癌基因c-myc的表达受到抑制,从而发挥促进胃癌细胞SGC7901的凋亡并抑制细胞增殖的作用,而这些作用是与c-myc表达的抑制水平相平行的。

c-myc反义寡核苷酸对肾癌细胞的生长抑制作用及对细胞周期的影响

目的 观察修饰的c myc反义寡核苷酸 (ASODN)对肾癌细胞的生长和细胞周期的影响。 方法 用人工合成的c mycASODN转染于培养的人肾癌细胞 ,观察其对瘤细胞的作用。结果 ①MTT法测定发现 ,与正义和错配链相比较 ,c mycASODN有明显抑制肾癌细胞生长的作用 ,12 μmol·L-1c mycASODN组作用 4 8h ,对瘤细胞的生长抑制率为 4 7% ;该生长抑制作用随反义药物剂量的增加而增强 ,同时随作用时间的变化而变化。②流式细胞仪检测证明 ,c mycASODN对肾癌细胞周期的抑制作用在G1期到S期。结论 c

半乳糖受体介导的c-myc反义寡核苷酸对人肝癌细胞的靶向投递作用

背景与目的:c-myc反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,ASODN)能抑制肝癌细胞的增殖,脂质体和腺病毒介导的c-mycASODN投递虽能显著抑制肝癌细胞的增殖,抑制荷肝癌小鼠肿瘤的生长,但这种投递缺乏靶向性;受体介导的药物投递具有高效性和靶向性的特点,已被用于基因及ASODN的靶向投递。本实验以半乳糖(galactose,Gal)-聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)作为载体,介导c-mycASODN作用于人肝癌细胞Bel-7402,探讨c-mycASODN对Bel-7402细胞的靶向投递作用。方法:用流式细胞仪检测Bel-7402、U937细胞对荧光标记的Gal-PEI-c-myc-ASODN(简称Gal-PEI-ASODN)的摄取率及细胞内平均荧光强度;相差/荧光显微镜观察荧光标记的Gal-PEI-ASODN及c-myc-ASODN进入Bel-7402、U937、Raji细胞的形态;台盼蓝拒染法检测不同浓度Gal-PEI-ASODN对这三种细胞增殖的影响。结果:荧光标记的Gal-PEI-ASODN或ASODN与相应细胞孵育10min到4h,Gal-PEI-ASODN-Bel-7402细胞的荧光摄取率为88.25%～98.66%,细胞内平均荧光强度为38.64%～111.90%,与单纯c-mycASODN-Bel-7402细胞组、Gal-PEI-ASODN-U937细胞组相比,所有时间点的细胞荧光摄取率、胞内平均荧光强度均显著增高,经Poission分布检验,均有显著性差异(P<0.01)。相差/荧光显微镜观察到?

c-myc反义寡核苷酸对卵巢癌细胞COC1/DDP顺铂耐药的逆转作用

目的:探讨c-myc反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)逆转人卵巢癌细胞顺铂(cisplatin,又称DDP)耐药的可行性。方法:以卵巢癌DDP耐药细胞株COC1/DDP为研究对象,实验组以脂质体为载体分别将c-myc ASODN、c-myc正义寡核苷酸(sense oligodeoxynucleotide,SODN)转染到COC1/DDP细胞内,阴性对照组细胞以同体积的培养液转染。采用计数法检测转染细胞增殖变化,MTT法检测DDP对细胞增殖的抑制率,RT-PCR、免疫组织化学技术分别检测转染细胞及c-myc ASODN治疗后裸鼠移植瘤c-myc mRNA及蛋白的表达,研究c-myc ASODN逆转癌细胞耐药及降低肿瘤恶性表型和成瘤能力的作用。结果:实验组转染ASODN后COC1/DDP细胞增殖被抑制;对DDP的敏感性提高,细胞生长抑制率增高,与SODN组及阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。ASODN转染后COC1/DDP细胞的c-myc mRNA和蛋白表达均明显降低,与相同浓度SODN转染组、阴性对照组的COC1/DDP细胞比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。裸鼠腹水瘤模型中ASODN+DDP治疗组与单纯DDP治疗组及SODN+DDP治疗组相比较,腹水少、腹腔内瘤块少且体积小、移植瘤中c-myc mRNA和蛋白的表达均明显降低。结论:体外、体内实验中c-myc ASODN均能有效地逆转卵巢癌细胞DDP耐药性,c-myc反义寡核苷酸可望成为一种有效的卵巢癌治疗方法。

c-myc反义寡核苷酸对HL-60细胞增殖及c-myc基因表达的影响

目的:观察c- myc基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL- 60细胞增殖及c-myc基因表达的抑制作用,探讨 ASODN作为药物进行白血病基因治疗的可行性。方法:应用c -myc反义寡核苷酸封闭HL-60细胞c- myc基因,RT -PCR方法检测该基因表达抑制情况,流式细胞仪进行细胞周期分析,倒置显微镜观察细胞形态变化,绘制细胞生长 曲线,MTT法检测细胞增殖状态。结果:c- myc基因反义寡核苷酸转染HL -60细胞后,c -myc基因表达明显受抑;S 期细胞比值由55.6%降至16.7%;细胞生长受抑,增殖能力减弱,其抑制作用具有序列特异性及剂量依赖性。结 论:c -myc基因反义寡核苷酸对HL -60细胞增殖及c- myc基因的表达具有明显的抑制作用,有望成为抑制白血病细 胞增殖的核酸药物。

c-myc反义寡核苷酸对结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响

目的:研究体外c-myc反义寡核苷酸(ASODN)对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响.方法:利用脂质体LipofectamineTM2000介导将c-myc ASODN转染入大肠癌HT-29细胞中,逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、Western blot方法检测c-myc基因mRNA及蛋白的表达,MTT、流式细胞仪(FCM)检测c-myc ASODN对人结肠癌HT-29细胞增殖抑制及其对奥沙利铂敏感性影响.结果:转染c-myc ASODN后,HT-29细胞内c-mycm RNA水平显著降低(0.464±0.029vs0.974±0.027,0.945±0.012,均P<0.01).在HT-29细胞中存在分子质量62kDa的特异性条带,与c-myc分子质量相符,ASODN组在PVDF膜上的特异性条带明显弱于对照组;MTT结果显示转染c-myc ASODN48h后的HT-29细胞的增殖速度较对照组细胞明显减慢.FCM显示c-myc ASODN转染后72h后,奥沙利铂+c-myc ASODN组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05).结论:体外c-myc ASODN可抑制c-myc mRNA及蛋白的表达,阻断c-myc可抑制HT-29细胞增殖并增强其对奥沙利铂的敏感性,可能为大肠癌的基因治疗提供新的靶点.

脂质体介导的C-myc反义寡核苷酸在视网膜色素上皮细胞中分布和稳定性的观察

目的在体外培养的人视网膜色素上皮（ＲＰＥ）细胞中，观察脂质体（Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ）介导的Ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸转染效果，为进一步研究增生性玻璃体视网膜病变（ＰＶＲ）的防治提供实验依据。方法将人工合成带有ＦＡＭ荧光标记的反义寡核苷酸（ＡＳ－ＯＤＮ）用脂质体包裹转染体外培养的ＲＰＥ细胞，同时用无脂质体介导的裸ＡＳ－ＯＤＮ作对比，在荧光显微镜下动态观察ＡＳ－ＯＤＮ在ＲＰＥ细胞内的分布和存留时间。结果与无脂质体介导的裸ＡＳ－ＯＤＮ相比，脂质体介导的ＡＳ－ＯＤＮ在细胞内、尤其在胞核的分布明显加强；不仅转染速度快，而且在细胞的存留时间延长１倍以上。结论脂质体能明显增强ＡＳ－ＯＤＮ在ＲＰＥ细胞内的转染效率，有望进一步用于防治ＰＶＲ的研究。

应用c-myc反义寡核苷酸防治自体静脉移植物内膜增生的实验研究

目的：研究局部应用反义寡核苷酸ｃ－ｍ ｙｃ对自体静脉移植物内膜增生的防治作用，为反义技术防治血管内膜增生的早期临床应用提供实验依据。方法：３０ 只新西兰兔颈外静脉间置于同侧颈总动脉后随机分成对照组、蛋白胶组、正义组、反义组及错配组，以医用生物蛋白胶分别溶解反义、正义及错配的ｃ－ｍ ｙｃ基因片段（３３０ μｇ）后直接涂于静脉移植物外膜。术后２８ｄ 取材制片，显微镜进行形态观察，并用计算机图像分析系统测量和计算内膜厚度、中膜厚度及二者之比值，内膜面积、中膜面积及二者之比值，以ｑ 检验行统计学分析。结果：反义组增生内膜厚度较对照组降低３６．７７％ ，内膜面积降低４８．２２％ ，对照组、蛋白胶组、正义组及错配组间内膜厚度及内膜面积均无明显差异（Ｐ＞ ０．０５）；各组间中膜厚度及中膜面积均无明显差异（Ｐ＞ ０．０５）。结论：医用生物蛋白胶携载反义寡核苷酸ｃ－ｍ ｙｃ局部用于静脉移植物外膜能显著防治其内膜增生，有效防止管腔狭窄。

c-myc反义寡核苷酸对粘液表皮样癌细胞生长的抑制作用

目的 :探讨 c- myc基因的反义寡核苷酸 (ASODN)在涎腺粘液表皮样癌基因治疗中的作用。方法 :人工合成与 c- myc基因第二外显子翻译起始区序列互补的寡核苷酸 ,处理培养的人涎腺粘液表皮样癌 MEC- 1细胞。应用 MTT比色法观察其对细胞增殖的影响 ;流式细胞仪检测对细胞周期的影响 ;并采用免疫组化法检测 C- MYC蛋白的表达。结果 :c- myc反义寡核苷酸能抑制粘液表皮样癌 MEC- 1细胞的增殖 ,抑制作用具有浓度及时间依赖性。 5 0 %抑制浓度 (IC5 0 )为 8.2 μmol/ L。用浓度为 10 μmol/ L 的 c- myc ASODN处理 72 h,对 MEC- 1细胞的抑制率达 5 9%。c- myc ASODN抑制 MEC- 1细胞从 G1 期进入 S期 ;并能抑制 C- MYC蛋白的表达。结论 :c- myc反义寡核苷酸对粘液表皮样癌 MEC-

c-myc反义寡核苷酸对胃癌MKN-45细胞株生物学影响的研究

目的:观察c-myc反义寡核苷酸(ASODN)对胃癌MKN-45细胞株的生物学影响。方法:采用脂质体介导c-myc反义寡核苷酸转染人胃癌细胞系,用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)评价对细胞增殖的影响,免疫细胞化学ABC方法检测转染后c-myc蛋白的表达;流式细胞仪(FCM)观察细胞凋亡;RT-PCR及免疫组化方法检测c-myc基因表达变化。建立荷瘤小鼠模型,通过皮下瘤体内注射药物观察肿瘤体积和抑瘤率的变化。结果:c-myc基因反义寡核苷酸转染MKN-45细胞后,ASODN在0.25～4μmol/L的浓度范围内对MKN-45细胞均有不同程度的增殖抑制作用,作用48h后抑制率为11.2%～23.6%,且呈一定的剂量依赖性;FCM分析结果显示,转染后能诱导胃癌细胞凋亡,G0/G1期细胞增多;免疫细胞化学显示,c-myc蛋白水平明显降低,阳性表达率为(64.9±5.68)%;动物实验显示,ASODN可以抑制荷瘤小鼠肿瘤细胞的生长,肿瘤生长抑制率达41.5%。结论:c-myc基因反义寡核苷酸能明显抑制胃癌MKN-45细胞增殖、诱导细胞凋亡和下调c-myc蛋白水平。

c-myc反义寡核苷酸抑制半乳糖性白内障晶状体上皮细胞凋亡的机制

目的研究c-myc反义寡核苷酸(ASODN)对半乳糖性白内障晶状体上皮细胞(LECs)凋亡的影响。方法将Wistar大鼠按随机数字表法分为生理盐水组、半乳糖组和半乳糖+c-myc ASODN组,每组36只。半乳糖组及半乳糖+c-myc ASODN组每日球后注射0.2mL20%半乳糖,制作大鼠半乳糖性白内障模型,半乳糖+c-mycASODN组球后注射半乳糖4h后加注Lipo-c-myc ASODN复合液0.2mL,隔日1次。分别于给药后7、14、24d处死动物,取出晶状体,检测LECs的凋亡情况,采用TUNEL法检测c-myc ASODN对半乳糖诱导LECs凋亡的影响,透射电镜下观察LECs超微结构的改变。结果各组在7、14、24d的LECs凋亡率比较,差异均有统计学意义(F7days=3418.495,P<0.01;F14days=1137.555,P<0.01;F24days=2198.871,P<0.01);24d时半乳糖组LECs的凋亡率为56.57±3.20,生理盐水组为0.37±0.11,差异有统计学意义(P<0.01);半乳糖+c-myc ASODN组细胞凋亡率为29.35±1.63,较半乳糖组明显降低(P<0.05)。透射电镜下观察发现,半乳糖组可见LECs呈凋亡细胞的早期改变;随着高糖诱导时间的延长,凋亡细胞逐渐增多;生理盐水组几乎未见到凋亡细胞;半乳糖+c-myc ASODN组凋亡细胞数量较同期半乳糖组少。结论在白内障形成过程中半乳糖能诱导LECs凋亡,c-myc ASODN能够抑制半乳糖诱导的LECs凋亡。

脂质体介导c-myc反义寡核苷酸对乳腺癌MCF-7细胞生物学行为的影响

目的研究c-myc反义寡核苷酸(ASODN)经脂质体LipfectAMINETM(LR)介导转染对MCF-7细胞中c-myc蛋白表达及细胞增殖、凋亡的影响。方法用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)评价脂质体介导c-myc ASODN对细胞增殖的影响;免疫细胞化学ABC方法检测转染前后c-myc蛋白表达;流式细胞仪(FCM)定量分析细胞凋亡。结果ASODN/LR转染与正义、错义寡核苷酸相比,显著抑制MCF-7细胞增殖(P<0.01)。FCM分析结果显示,转染后可见明显细胞凋亡峰,72h相点细胞凋亡率达(28.76±2.09)%。免疫细胞化学显示c-myc蛋白水平明显降低,阳性表达率为(21.40±1.16)%。结论LR介导c-myc ASODN能明显抑制MCF-7细胞增殖、诱导细胞凋亡和下调c-myc蛋白水平。

c-myc反义寡核苷酸对肿瘤细胞表面抗原和对CD_3AK杀伤敏感性的调节作用

目的 :观察c myc反义寡核苷酸上调人高转移性肺巨细胞腺癌PG细胞表面抗原分子的表达水平 ,提高免疫效应细胞杀伤敏感性的作用和机制。方法 :RT PCR方法检测c mycmRNA表达水平的变化。MTT法检测细胞增殖活性和CD3AK杀伤活性的变化。流式细胞术检测细胞表面抗原表达的变化以及c myc蛋白表达水平的变化。结果 :c myc反义寡核苷酸(1 μmol L) 明显地抑制PG细胞c mycmRNA和蛋白表达水平 ,显著提高细胞表面HLA ABC、ICAM 1分子的表达 ,其表达率分别从 68 44%、38 40 %增高到 83 1 6 %和 42 0 9% (P <0 0 1 )。CD3AK对反义寡核苷酸处理的PG细胞的不同效靶比杀伤活性 ,分别从 40 0 %、65 0 %、74 0 %增高到 52 0 %、74 0 %、91 0 % (P <0 0 1 )。结论 :c myc反义寡核苷酸通过抑制PG细胞c mycmR NA和蛋白表达 ,上调PG细胞表面HLA ABC、ICAM 1分子的表达水平 。

转染PDGF和c-myc反义寡核苷酸抑制移植血管狭窄研究

目的:探讨血管移植后联合应用血小板源生长因子(Platelet-derived growth factor,PDGF)和原癌基因c-myc反义寡核苷酸(Antisense oligodeoxynucleotides,AODN)抑制血管平滑肌(Vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖和防止移植血管狭窄的作用。方法:选48只新西兰雄性白兔,随机分为对照组、PDGF-AODN组、c-myc-AODN组和PDGF-AODN+c-myc-AODN组,每组12只;将同一只兔的左、右髂外动脉(各1.0 cm)对换移植,移植血管用PDGF-AODN和c-myc-AODN液浸泡,血管吻合口用AODN液浸泡过的缝线吻合;取移植血管制片显微镜下观察内膜增生情况,计算机图像分析测量其内膜厚度、内膜面积和移植血管狭窄率,并分别用原位杂交组织化学和免疫组织化学染色计数PDGF和c-myc阳性细胞数。结果:PDGF-AODN+c-myc-AODN组的移植血管内膜厚度、内膜面积、管腔狭窄程度和PDGF阳性细胞及c-myc阳性细胞数均显著低于对照组(P<0.01),而且亦明显低于单独转染PDGF-AODN组或c-myc-AODN组(P<0.05),PDGF-AODN组和c-myc-AODN组间差异无显著意义(P>0.05)。结论:联合应用PDGF-AODN和c-myc-AODN能有效抑制VSMC增殖,阻止内膜增生,防止移植血管狭窄,为利用反义核酸技术联合调控多个基因防止移植器官内血管狭窄奠定了基础。