p38MAPK抑制剂SB203580抑制人绒癌JAR细胞的体外侵袭作用

目的 研究 p38MAPK通路在人绒癌 JAR细胞体外侵袭中的作用。方法 用细胞 EL ISA法测定 JAR细胞中 p38MAPK的活性变化 ;用 Transwell细胞侵入系统检测细胞的侵袭作用。结果 PMA呈浓度依赖性地激活 JAR细胞中 p38MAPK。 PMA能促进人绒癌 JAR细胞的体外侵袭作用 ,而 p38特异性抑制剂 SB2 0 35 80抑制了JAR细胞的侵袭能力。结论 p38MAPK通路在人滋养细胞的侵袭行为以及人绒癌的形成中具有重要作用。p38抑制剂可能会为人绒癌的防治提供新的途径。

17β-雌二醇对大鼠血管平滑肌细胞C反应蛋白及其mRNA表达的影响

目的:探讨17β-雌二醇对大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)生成的影响及其相关机制。方法:采用免疫细胞化学法观察17β-雌二醇对正常状态大鼠VSMCs CRP表达的影响,免疫印迹法检测其对Ang-Ⅱ刺激大鼠VSMCs CRP及p-ERK1/2表达的影响,RT-PCR方法检测其对Ang-Ⅱ刺激状态大鼠VSMCs CRPmRNA表达的影响。结果:本实验所选用17β-雌二醇浓度(1、10、100 nmol/L)不影响正常状态大鼠VSMCs形态及CRP表达,但呈浓度依赖性抑制Ang-Ⅱ刺激的大鼠VSMCs CRP(r=-0.834,P<0.01)、p-ERK1/2(r=-0.712,P<0.05)及CRP mRNA(r=-0.856,P<0.01)的表达。结论:17β-雌二醇可以抑制Ang-Ⅱ刺激的大鼠VSMCs CRP及其mRNA表达,其作用机制与抑制ERK1/2信号转导通路相关。

马桑内酯致痫大鼠海马结构内SYN和GFAP的表达及其意义

目的:研究马桑内酯所致癫痫持续状态下海马结构内突触体素(SYN)及胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化规律,探讨癫痫的发生机制。方法:成年健康雄性SD大鼠30只,随机分为模型组及对照组,采用马桑内酯(50μg/kg)侧脑室注射法建立急性癫痫动物模型,应用免疫组织化学方法观察癫痫持续状态下SYN和GFAP的表达。结果:①模型组海马结构各区突触体素阳性免疫反应产物的密度较对照组普遍增加,尤以CA3区苔藓纤维层和齿状回分子层内带为甚(P<0.05)。②模型组海马结构内GFAP免疫反应阳性的胶质细胞与对照组相比,其平均光密度、胞体截面积和周长均显著增强或增大(P<0.05),GFAP免疫反应性增强。结论:突触体素表达的增强可能易化了神经递质的装载和释放,与癫痫持续状态的维持和加重相关。活化的星形胶质细胞在癫痫持续状态中可能主要起保护作用。

Wortmannin对视网膜缺血再灌注后HIF-1α表达的影响

目的:探讨磷酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI3K)途径在大鼠视网膜缺血再灌注后对低氧诱导因子(HIF-1α)表达的影响。方法:将磷酰肌醇-3激酶(PI3K)特异抑制剂Wortmannin(WT)注入大鼠玻璃体内,抑制PI3K活性为A组,玻璃体内注射等量林格液作为B组,空白对照组为C组,采用前房灌注生理盐水升高大鼠眼压到110mm Hg(1 kPa=7.5 mm Hg)持续1 h的方法制作实验性视网膜缺血再灌注损伤模型,于再灌注后0、2、6、8、12、24、48 h取材,行免疫组织化学法染色观察HIF-1α在视网膜细胞的阳性表达;并应用RT-PCR来检测HIF-1αmRNA的表达。结果:视网膜缺血再灌注6、8、12、24、48 h,视网膜神经节细胞层及内核层细胞出现HIF-1α阳性表达且表达逐渐增加,12 h达到高峰,然后逐渐降低,预先玻璃体内注射PI-3K特异抑制剂Wortmannin(WT)的大鼠视网膜HIF-1α表达明显减弱,亦在12 h达到高峰,然后逐渐降低。结论:缺血再灌注后大鼠视网膜HIF-1α的表达是经过PI3K途径来实现,阻断PI3K途径,可以明显减少HIF-1α的表达,但从实验结果来看PI3K途径被阻断后并没有完全阻断HIF-1α的表达,由此猜测HIF-1α的表达可能存在多种途径。

缬沙坦对冠状动脉支架术后C反应蛋白水平的影响

目的：探讨缬沙坦对冠状动脉支架术后C反应蛋白（CRP）水平的影响。方法：选取稳定性心绞痛及陈旧性心肌梗死行冠状动脉支架术患者,分为缬沙坦组（19例）及对照组（21例）,缬沙坦组术前1个月至术后1周均服用缬沙坦80～160 mg/d,观察支架术前、术后24 h、术后72 h、术后1周的CRP水平。结果：手术前两组CRP无明显差别,术后24 h及72 h两组CRP均明显升高（P〈0.001）,但缬沙坦组CRP水平明显低于对照组（P〈0.05）。术后1周两组CRP恢复正常,与术前比较均P〉0.05。结论：缬沙坦降低了冠状动脉支架术后CRP水平。

姜黄素对人胚胎干细胞向视网膜色素上皮样细胞定向诱导效率的促进作用

背景 来源于多能干细胞的视网膜色素上皮（RPE）细胞移植治疗年龄相关性黄斑变性（AMD）和视网膜色素变性（RP）是近年研究热点,但RPE体外分化诱导效率低下、成本高等一直是难以克服的障碍.研究表明,姜黄素（curcumin）可促进人胚胎干细胞（ESCs）的定向诱导分化,但其对人ESCs向RPE样细胞的定向分化的作用机制尚不清楚. 目的 研究体外培养的人ESCs向视网膜色素上皮（RPE）样细胞的诱导分化过程,探讨curcumin对人ESCs向RPE细胞定向诱导效率的影响及其机制. 方法 将人ESCs株进行体外培养,将处于对数生长期的ESCs传代至基质膜（Matrigel）包被的6孔板中,以mTeSRTM1培养基培养至过渡融合状态后更换为含质量分数87％ KnockOutTM DMEM、质量分数10％血清替代物（SR）、质量分数1％非必需氨基酸和质量分数1％谷氨酰胺及青链霉素双抗的分化诱导体系,同时加入终浓度为1 μmol/L的curcumin处理24 h,对照组培养基中未加入curcumin.分别于诱导培养3周及5周时提取细胞RNA及蛋白,采用荧光定量逆转录PCR（RT-PCR）法检测诱导RPE（iRPE）细胞中干细胞标志物、RPE相关标志物及Wnt/β-catenin信号通路相关因子mRNA的相对表达水平;采用Western blot法及免疫荧光染色检测人ESCs、iRPE细胞及人RPE细胞中相关标志物蛋白的表达水平;通过细胞吞噬实验检测iRPE细胞的吞噬功能. 结果 Curcumin组诱导后3周时即可见iRPE细胞色素化,随着时间延长色素化程度更高,而对照组细胞在诱导后5周时开始出现细胞色素化.RT-PCR结果显示,curcumin诱导后3周及5周,curcumin组iRPE细胞中ESCs标志物NANOG mRNA的相对表达水平明显低于对照组,差异均有统计学意义（t=13.086,P=0.022;t=34.186,P=0.004）,而RPE标志物Pax6、RX、CRALBP及RPE65 mRNA的相对表达量明显高于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.01）.Western blot检测显示,CRALBP、RPE65和MITF蛋白在iRPE细胞中表达,表达强度与人RPE细胞相近,而人ESCs不表达上述蛋白.免疫荧光染色显示,iRPE细胞中Pax6、MITF和ZO-1蛋白表达阳性,分别定位于细胞质和细胞膜,可见curcumin组得到的细胞为iRPE细胞,纯化效率达到100％,体外细胞吞噬实验显示,iRPE细胞的细胞质内呈现的聚苯乙烯荧光微球接近阳性对照组,而阴性对照组iRPE细胞中未见到聚苯乙烯荧光微球.诱导培养后第3周和第5周时,curcumin组细胞中Wnt信号通路下游靶因子Lef1、MYC和TCF7,Wnt受体FZD3及Wnt配体Wnt2B和Wnt7B的mRNA相对表达水平明显高于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.01）. 结论 Curcumin能提高人ESCs向RPE样细胞的定向诱导效率,其主要机制可能是通过促进Wnt/β-catenin信号通路的活性,从而促进iRPE细胞的分化和成熟。

蛋白激酶C和N a^+/H^+交换在EGF促肝癌细胞生长中的作用

目的研究蛋白激酶 C 和 Na^+/H^+交换在表皮生长因子(EGF)促人肝癌细胞生长中的作用.方法采用无血清 RPM11640培养基培养人肝癌细胞SMMC7721,给以 EGF 10^(-9)mol·L^(-1),以~3H-7hymidine(~3H-TdR)掺入法,检测肝癌细胞 DNA 合成的速率.并分别用蛋白激酶 C 阻滞剂 H-7 50μml·L^(-1)和 Na^+/H^+交换阻滞剂amiloride 0.1 mmol·L^(-1)阻断 EGF 对肝癌细胞的促生长作用.结果 EGF 10^(-9)mol·L^(-1)可显著促进肝癌细胞的生长,掺入值为(1880±281)·min^(-1)·孔^(-1),与对照组掺入值(1353±175)·min^(-1).孔^(-1)比较,差异有显著性(P<0.05).单纯 H-7或amiloride,掺入值分别为(1179±150)·min^(-1)·孔^(-1)和(1392±152)·min^(-1)·孔^(-1),与对照组差异无显著性(P>0.05),对肝癌细胞的生长无明显影响;而 H-7,amiloride 与 EGF 合用,掺入值分别为(1241±147)·min^(-1)·孔^(-1)和(1380±189)·min^(-1)·孔^(-1),与 EGF 组相比差异有显著性(P<0.01,P<0.05).结论 EGF 能显著促进肝癌细胞的生长,蛋白激酶 C 和 Na^+/H^+交换在 EGF 的促肝癌细胞生长中起关键作用.

miR-375对缺氧诱导的人视网膜微血管内皮细胞功能的抑制作用及其机制

背景研究表明miR-375抑制肿瘤细胞的增生、凋亡、迁移和黏附，并对肿瘤组织中血管内皮生长因子（VEGF）含量的变化进行调控，进而影响血管的生成，但miR-375是否于预视网膜新生血管的形成鲜见报道。目的探讨miR-375对缺氧诱导的人视网膜微血管内皮细胞（HRCECs）功能的影响及其可能的作用机制。方法用IMDM完全培养液培养HRCECs，并将细胞分为正常对照组、CoCl2处理组、CoCl2＋miR-375拟似剂组、CoCl2＋miR-375拟似剂对照组、CoCl2＋miR-375抑制剂组和CoCl2＋miR-375抑制剂对照组，待细胞生长至对数生长期后用200μmol／LCoCl2处理HRCECs以制备缺氧细胞模型；制备终浓度为50nmol／L的miRNA-脂质体复合物和小干扰RNA（siRNA）-脂质体复合物将miR-375和卷曲蛋白4（FZD4）siRNA转染各组细胞48h。采用MTT法检测各组细胞的增生情况（A值）并计算增生倍数；采用Transwell小室法检测各组迁移的细胞数目；采用ELISA法检测细胞培养液中VEGF和血管内皮钙黏蛋白（VE—cadherin）含量；采用实时荧光定量PCR法检测细胞中miR．375mRNA和FZD4mRNA的相对表达量变化；采用Westernblot法分析细胞中Wnt通路相关蛋白的相对表达量变化；采用Matrigel小管形成实验检测细胞的体外形成血管的长度。将培养的细胞分为正常对照组、CoCl2处理组、CoCl2＋mock组和CoCl2＋FZD4siRNA组，采用荧光素酶报告基因法探测miR-375靶基因FZD4的表达。结果miR-375处理组miR-375mRNA相对表达量明显高于正常对照组，miR-375拟似剂组细胞中miR-375mRNA相对表达量明显高于miR-375拟似剂对照组，miR-375抑制剂组细胞中miR-375mRNA相对表达量明显低于miR-375抑制剂对照组，差异均有统计学意义（t=-19．237、8．764，均P〈0．01），提示miR-375的转染效率较高。正常对照组、CoCl2处理组、CoCl2＋miR-375拟似剂组、CoCl2＋miR-375拟似剂对照组、CoCl2＋miR-375抑制剂组、CoCl2＋miR．375抑制剂对照组间细胞增生倍数、迁移细胞数、细胞培养液中VEGF和VE—Cadherin含量以及体外小管形成长度的总体比较差异均有统计学意义（F=24．324、26．776、14．113、19．225、15．040，均P〈0．001），CoCl2＋miR-375拟似剂组细胞增生倍数、迁移细胞数体外小管形成长度及细胞分泌VEGF和VE—cadherin量均较CoCl2＋miR-375拟似剂对照组明显减少，而CoCl2＋miR-375抑制剂组较CoCl2＋miR-375抑制剂对照组明显增加，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。正常对照组、CoCl2处理组、CoCl2＋miR-375拟似剂组、CoCl：＋miR-375拟似剂对照组、CoCl2＋miR-375抑制剂组、CoCl2＋miR-375抑制剂对照组细胞中B—catenin、cyclinD1、MMP2和VEGF蛋白表达量的总体比较差异均有统计学意义（F=11．753、13．283、16．770、10．334，均P〈0．001），CoCl2＋miR-375拟似剂组细胞中B．catenin、cyclinDl、MMP2、VEGF蛋白表达量较CoCl2＋miR-375拟似剂对照组均明显下降，CoCl2＋miR-375抑制剂组较CoCl2＋miR-375抑制剂对照组明显增加，差异均有统计学意义（均P〈0．01）。CoCl，处理组和CoCl2＋mock组细胞增生倍数、迁移细胞数和小管形成长度均较正常对照组明显增加，CoCl2＋FZD4siRNA组细胞增生倍数、迁移细胞数和小管形成长度均明显低于CoCl2＋mock组，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论miR-375抑制缺氧条件下HRCECs的增生、迁移以及血管形成能力，其作用机制与miR-375直接靶向FZD4调控Wnt通路活性有关。

SB203580对肠缺血再灌注大鼠p38 MAPK及细胞凋亡的影响

目的:探讨大鼠肠缺血再灌注(IR)时p38 MAPK特异性抑制剂SB203580对p38 MAPK、凋亡调控因子及凋亡细胞表达的影响。方法:Wistar大鼠30只随机分为对照组(C组)、缺血再灌注组(Ⅰ组)和SB203580组(S组)(n=10),采用肠IR模型检测p38 MAPK、Bcl-2、Bax、TNF-及凋亡指数的水平。结果:Ⅰ组中p38 MAPK、凋亡调控因子及凋亡细胞的表达均显著高于C组(P<0.05),而S组中p38 MAPK、TNF-α及凋亡细胞的表达减少,Bcl-2/Bax比值增高(P<0.05)。结论:SB203580抑制了小肠组织中p38 MAPK通路的活化,从而增加了Bcl-2的表达、减少了Bax和TNF-α的释放,在缓解细胞凋亡的过程中起到了重要的作用。

亚硒酸钠对胃粘膜细胞非程序DNA合成、LPO和ras P21表达的影响

目的研究亚硒酸钠对甲基硝基亚硝基胍（ＭＮＮＧ）所致胃粘膜细胞损伤的防护作用．方法观察了亚硒酸钠对ＭＮＮＧ所致胃粘膜细胞非程序ＤＮＡ合成（ＵＤＳ）、脂质过氧化物（ＬＰＯ）和ｒａｓＰ２１表达的影响．结果胃粘膜细胞先用１０μｍｏｌ／Ｌ或１μｍｏｌ／Ｌ亚硒酸钠预处理４ｈ，再给ＭＮＮＧ组细胞的非程序ＤＮＡ合成水平（ｃｐｍ／×１０－６ｍｉｎ－１，１１６６±１５６或１５６６±１８７ｖｓ１８３８±２０５，Ｐ＜００１～００５），脂质过氧化物（２０ｄ，μｍｏｌ／Ｌ，４５±０６或４７±０６ｖｓ７４±０７，Ｐ＜００１）和ｒａｓＰ２１蛋白含量（２０ｄ，Ａ，０６８±００８或０８６±００７ｖｓ１０８±０１１，Ｐ＜００１～００５）均显著低于ＭＮＮＧ组．结论一定剂量亚硒酸钠对ＭＮＮＧ诱导的胃粘膜细胞损伤有防护作用．

枳棋子水提取液对乙醇体外诱导脂肪变L-02细胞UCP2基因表达的影响

目的通过建立乙醇体外诱导的L-02肝细胞脂肪肝模型，探讨不同剂量的乙醇对肝脏脂肪变L-02细胞解偶联蛋白（Uncoupling protin2，UCP2）表达水平的关系，观察枳棋子水提取液对其表达的影响。方法建立肝细胞脂肪变模型，选最适合浓度枳棋子提取液进行干预，采用半定量RT．PCR法测各组UCP2mRNA表达量。结果各浓度脂肪变性模型中UCP2mRNA表达均有下降，经枳棋子水提取液干预后UCP2mRNA表达均有明显升高（0．6％乙醇组治疗后值由0．4859升至0．7442）。结论乙醇可降低L-02细胞UCP2mRNA的表达，UCP2mRNA的低表达可能与L-02细胞AFLD发生有关。枳棋子可使L-02细胞UCP2mRNA的表达上调，并推测UCP2mRNA的表达上调是枳棋子减轻酒精诱导肝细胞脂肪变性的机制之一。