pp^(60c-src(+))在神经生长端的表达及其意义

目的 探索 pp60c-src( + ) 在神经生长端的表达特征及其生理意义。方法 用免疫细胞化学方法检测 pp60c-src( + ) 在初代培养鸡胚脊神经节细胞内的分布特征。结果 pp60c -src( + ) 的免疫活性分布在神经细胞的细胞膜下、核周体、神经突起 ;在生长端体部和丝状伪足 ,pp60c -src( + ) 的免疫活性较强 ,少数免疫活性较弱。在伸长的突起上有时可见 pp60c-src( + ) 免疫活性分布在串珠样膨体上。结论 pp60c-src( + ) 参与生长端的运动和生长 ;在生长端分化、神经生长过程中 ,pp60c-src( + )

原癌基因c-src通过磷酸化信号转导与转录激活子-3蛋白影响大鼠精原干细胞活性

本文旨在研究原癌基因c-src在体外培养的9日龄大鼠精原干细胞中的表达及其与精原干细胞活性相关的信号通路。用MTT比色法观察反义c-src脱氧寡核苷酸(oligodeoxynucleotides,ODNs)对精原干细胞作用的量效及时效关系;用RT-PCR检测c-src mRNA的表达;用Western blot检测c-src表达产物pp60c-src和磷酸化的信号转导与转录激活子-3(phosphorylatedsignal transducer and activator of transcription-3,p-STAT3)的表达。结果显示,与空白对照组相比,10μmol/L反义c-srcODNs作用12h后精原干细胞活性下降8.1%(P<0.05),且c-src mRNA表达明显下调;Western blot结果显示反义c-src ODNs组pp60c-src、p-STAT3蛋白表达与空白对照组相比分别下降了33.8%、45.3%(均P<0.01)。以上结果提示,原癌基因c-src可能通过p-STAT3蛋白影响精原干细胞的活性。

镇肝熄风汤对自发性高血压大鼠c-Src mRNA和蛋白表达的影响

目的：研究不同剂量的镇肝熄风汤对自发性高血压大鼠（Spontaneously Hypertensive Rats,SHR）腹主动脉血管组织c-Src蛋白和c-Src mRNA表达的影响。方法：将60只24周龄SHR大鼠随机分为模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组、复方罗布麻组,每组12只,同源雄性魏-凯二氏大鼠（WKY） 12只作为正常对照组。灌胃给药45 d后,Western Blot测定腹主动脉血管组织中c-Src蛋白表达,实时聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定大鼠c-Src mRNA基因表达。结果：与模型组比较,正常组、镇肝熄风汤中药高剂量组和复方罗布麻组c-Src蛋白表达和c-Src mRNA表达明显降低（F=90. 637,sig=0. 000,P 〈0. 01）。结论：镇肝熄风汤可以抑制腹主动脉血管组织中c-Src蛋白和c-Src mRNA表达,可能通过减少对血管氧化损伤和血管细胞增殖的作用,来降低血管重构,从而起到降低血压的作用。

肺腺癌c-Src及核仁磷蛋白/B23(NPM1)蛋白的高表达与化疗疗效负相关

目的观察c-Src蛋白及核仁磷蛋白/B23(NPM1)在肺腺癌组织中的表达并探讨与化疗疗效的关系。方法选择2012-10-10/2015-06-30期间怀化市第一人民医院确诊的肺腺癌患者的肿瘤标本共107例,采用免疫组织化学染色方法检测c-Src蛋白和NPM1蛋白的表达情况,分析c-Src蛋白和NPM1蛋白的表达与肺腺癌发生、发展的关系,其中Ⅲ-Ⅳ期患者55例予以吉西他滨联合顺铂方案规则化疗4疗程,探讨c-Src蛋白和NPM1蛋白的表达与化疗疗效的关系。结果 c-Src蛋白和NPM1蛋白在肺腺癌组织中皆为阳性表达,临床分期越高,c-Src蛋白和NPM1蛋白的表达越高,同时c-Src蛋白和NPM1蛋白在肿瘤细胞的表达随分化程度的升高而降低,化疗疗效随c-Src蛋白和NPM1蛋白的表达升高而降低。结论高表达c-Src、NPM1的肺腺癌化疗敏感性较差,高表达c-Src和NPM1可能与肺腺癌低分化有关。

c-src和c-met与甲状腺乳头状癌淋巴结转移的关系

目的探讨c-src和c-met在甲状腺乳头状癌(thyroid papillary cancer,TPC)中的表达及其与TPC淋巴结转移的关系。方法免疫组化EnVision法检测35例TPC切除标本中c-src和c-met的表达,并分析表达情况与淋巴结转移等临床病理指标之间的关系;同样方法检测16例TPC原发性TPC和淋巴结转移性TPC中c-src和c-met的表达,并进行比较。结果 c-src和c-met在TPC中的表达阳性率分别为62.9%和97.1%,与其在甲状腺良性病变组织中表达的差异均有统计学意义(P=0.000 4,P<0.001)。c-src在TPC组织中的表达与肿瘤大小和淋巴结转移相关(P=0.000 2,P=0.001 7);c-met在TPC组织中的表达与患者年龄相关(P=0.015 5)。TPC中c-src和c-met的表达呈正相关。c-src和c-met在淋巴结转移性癌中的表达阳性率均高于原发性癌,但两者在原发性癌中的表达与淋巴结转移性癌中表达的差异无统计学意义。结论 c-src和c-met的异常表达在TPC的发生发展中起重要作用,并且可能与TPC的淋巴结转移有关。

老年前期及老年期甲状腺乳头状癌C-MET和PP60C-SRC蛋白的表达

目的探讨45岁以上老年前期及老年期甲状腺乳头状癌(PTC)组织中C-MET和PP60C-SRC蛋白表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学染色法分别检测27例45岁以上老年前期及老年期PTC组织、31例45岁以下人群PTC组织和27例甲状腺良性病变(腺瘤和结节性甲状腺肿)组织C-MET和PP60SRC蛋白表达。结果 C-MET在PTC中表达阳性率:老年前期及老年组为96.3%,45岁以下组为74.2%,甲状腺良性病变组为33.3%,各组差异显著(均P<0.05)。PP60C-SRC在癌组织中表达阳性率:老年前期及老年组为66.7%,45岁以下组为64.5%,甲状腺良性病变组为18.5%,PTC组与甲状腺良性病变组差异显著(P<0.05),但不同年龄组PTC中PP60C-SRC表达差异无统计学意义。结论 C-MET和PP60C-SRC在PTC存在高表达,且C-MET随年龄的增加有表达上调的趋势。

pp60c-src在高静水压培养的人脐静脉内皮细胞增殖中的作用

目的 :探讨短期高压刺激是否诱导人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)增殖以及pp60c -src所起的作用。方法 :分大气压 (AP ,0mmHg) ,中压 (MP ,12 0mmHg)和高压培养 (HP ,180mmHg) 3组 ,各组分别用卡托普利 (Cap ,10μmol/L)和厄贝沙坦 (Irb ,10 μmol/L)进行干预。测定 β -N -乙酰氨基己糖苷酶活性以反映细胞增殖。用Westernblotting法测定细胞内pp60c -src含量。结果 :① 2h时各组氨基己糖苷酶活性相似 ;中、高压组 4h时酶活性明显增高 (0 118± 0 0 0 3vs 0 14 5± 0 0 18和 0 14 4± 0 0 19,P <0 0 1) ,而大气压组 8h才见增高。 12h时各组酶活性相近。与此相应 ,2h时中、高压组pp60c -src明显高于大气压组 (0 12± 0 0 3vs 0 16± 0 0 2和 0 19± 0 0 6,均P <0 0 5) ,而大气压组 4h后才缓慢增加至中、高压组水平。② 12h时大气压组Cap与Irb对细胞数无影响 ,而在中、高压组两药使细胞增加 (MP组 0 189± 0 0 0 6vs 0 2 0 2± 0 0 0 5和 0 2 0 7± 0 0 0 3 ,P <0 0 5;HP组 0 193± 0 0 0 4vs 0 2 13± 0 0 0 4和0 2 2 1± 0 0 0 4,P <0 0 5)。但Cap与Irb干预组pp60c -src含量与对照组相似。结论 :压力刺激促使HUVECs早期 (4h)增殖 ,pp60c

甲状腺乳头状癌中c-met和c-src的表达与临床病理特征的关系

目的:探讨c-met和c-src在甲状腺乳头状癌(thyroid papillary cancer,TPC)中的表达及其相关性与临床病理特征的关系。方法:免疫组化SP法检测80例甲状腺乳头状癌和38例良性病变切除标本中cmet和c-src的表达,并分析表达情况与临床病理特征之间的关系。结果:c-met和c-src在TPC中的表达阳性率分别为96.3%和63.8%,与在甲状腺良性病变组织中表达有显著差异(P<0.01)。c-met在TPC组织中的表达与患者年龄相关(P<0.05)。c-src在TPC组织中的表达与肿瘤大小和淋巴结转移相关(P<0.01)。TPC中c-src和c-met的表达呈正相关(r=0.698,P<0.01)。结论:c-src和c-met的异常表达在TPC的发生、发展中具有重要意义,并且c-src可为TPC的淋巴结转移提供依据。

有氧运动干预自发性高血压模型大鼠主动脉血管内皮细胞c-Src mRNA表达和c-Src的活性

背景:原癌基因c-Src在调节高血压等心血管系统疾病中起着重要的作用,目前尚未看到有关运动干预影响主动脉血管内皮细胞c-Src的表达和活来调节高血压的研究。目的:观察有氧运动对自发性高血压大鼠主动脉血管内皮细胞c-Src m RNA表达和c-Src活性的影响。方法:8只雄性Wistar大鼠作为正常对照组,16只自发性高血压大鼠随机分为自发性高血压组8只,自发性高血压运动组8只。自发性高血压运动组每天进行90 min无负重有氧游泳运动,6 d/周,共8周;正常对照组和自发性高血压组大鼠不做游泳运动。每周测定大鼠血压1次,8周后,测定各组大鼠主动脉血管内皮细胞c-Src m RNA表达和c-Src活性。结果与结论:与自发性高血压组相比,自发性高血压运动组血压明显降低,主动脉血管内皮细胞c-Src m RNA表达和c-Src活性明显升高。与正常对照组相比,自发性高血压运动组大鼠主动脉血管内皮细胞c-Src活性和c-Src m RNA表达高于正常对照组和自发性高血压组(P<0.01)。结果提示有氧运动可以促进自发性高血压大鼠主动脉血管内皮细胞c-Src活性和c-Src m RNA表达的增加。

猪hnRNPK蛋白与酪氨酸蛋白激酶c-Src的互作分析

旨在探讨猪不均一核糖核蛋白K(hnRNPK)与含SH3结构域的非受体型酪氨酸激酶(c-Src)之间的互作关系。采用PCR和酶切连接的方法,构建pGBKT7-hnRNPK、pGADT7-c-Src、pGADT7-ΔSH3、pGADT7-ΔSH2、pGADT7-ΔPTKc和pGADT7-SH3酵母双杂交载体,用PEG-LiAc法转化到酵母菌株AH109中,鉴定其自激活活性,并通过酵母双杂交方法从体内验证猪hnRNPK蛋白与c-Src不同缺失体之间的相互作用;采用DNA重组技术构建pET28a-hnRNPK与pGEX-6p1-c-Src、pGEX-6p1-ΔSH3、pGEX-6p1-ΔSH2、pGEX-6p1-ΔPTKc和pGEX-6p1-SH3蛋白表达载体,转化E.coli BL21经IPTG诱导表达目的蛋白,利用亲和层析纯化法纯化融合蛋白,通过GST pull-down试验从体外验证猪hnRNPK蛋白与c-Src不同缺失体之间的相互作用。结果表明,成功构建了猪hnRNPK与c-Src不同缺失体的酵母双杂交重组质粒,转化酵母细胞发现各质粒均无自激活活性;在酵母中,与阴性对照相比,共转化pGBKT7-hnRNPK与pGADT7-c-Src或pGADT7-ΔPTKc或pGADT7-SH3的酵母菌落在SDTrp-Leu-His-Ade四缺培养基上生长良好,表明在酵母中hnRNPK与c-Src激酶N端的SH3结构域之间存在直接的相互作用;成功构建了猪hnRNPK与c-Src不同缺失体的融合表达质粒,经IPTG诱导表达及纯化获得了可溶性His-hnRNPK、GST-c-Src、GST-ΔSH3、GST-ΔSH2、GST-ΔPTKc和GST-SH3融合蛋白,GST pull-down试验表明,hnRNPK与c-Src N端存在较强的相互作用,与SH2和PTKc结构域相互作用则较弱。本研究揭示了猪hnRNPK蛋白可与c-Src蛋白的N-端的SH3结构域互作,有助于进一步研究它们的调节位点,为深入探讨hnRNPK与c-Src相互调控关系,进而阐明其生物学功能奠定了基础。

过表达C-Src激酶结合蛋白诱导Jurkat淋巴细胞表型改变和凋亡

目的研究上调C-Src激酶结合蛋白(CBP)表达对Jurkat细胞超微结构及相关生物学功能的影响。方法构建CBP-EGFP融合蛋白过表达病毒载体,转染建立稳定的高表达CBP-EGFP融合蛋白的Jurkat细胞株。光学显微镜下观察细胞的基础生长状态,共聚焦显微镜观察病毒转染效率及CBP蛋白在细胞上的定位,电镜观察细胞内细胞器的复杂程度。流式细胞术检测细胞的基本参数及凋亡情况,实时定量PCR(qRT-PCR)检测CBP基因及信号转导通路中C-Src激酶(CSK)、原癌基因蛋白Vav(Vav oncoprotein)mRNA水平。结果光镜下发现转染CBP-EGFP病毒的Jurkat细胞皱缩细胞增多,大小均一性较差。共聚焦显微镜显示细胞转染效率达到100%,同时发现CBP定位于细胞膜上。电镜可见CBP组细胞内细胞器较Jurkat细胞复杂,有线粒体,并出现大量的溶酶体样结构。与阴性组相比,转染了CBP-EGFP病毒后,死亡细胞的数量大大增加,而qRT-PCR结果显示CBP组CSK表达上调,Vav则表达下调。结论在Jurkat细胞中,CBP蛋白高表达可以使细胞的均一性下降,凋亡细胞增多。

c-Src在RANKL诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移中的作用

目的探讨非受体酪氨酸激酶c-Src在核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移中的作用。方法流式细胞仪检测MDA-MB-231细胞表面受体核因子-κB受体活化因子(RANK)蛋白的表达及RANKL刺激后细胞p-Src及c-Src的表达;Transwell法测定细胞迁移能力。结果 MDA-MB-231细胞表达RANK蛋白,RANKL诱导MDA-MB-231细胞迁移能力增强。应用RANKL的圈套受体OPG可阻断RANKL诱导的细胞迁移。RANKL刺激后MDA-MB-231细胞p-Src表达升高,应用Src激酶抑制剂PP2可显著抑制RANKL诱导的细胞迁移。结论 c-Src信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移。

华蟾酥毒基对肝癌HepG2细胞c-Src基因表达的影响

目的观察华蟾酥毒基作用于HepG2细胞后,c-Src基因的表达改变。方法华蟾酥毒基作用于HepG2细胞6 h后,提取细胞RNA和蛋白,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测c-Src mRNA的表达变化,Western blot法检测c-Src蛋白的表达。结果华蟾酥毒基作用于HepG2细胞6 h后,c-Src mRNA和蛋白的表达均降低。结论华蟾酥毒基可在转录和翻译水平上抑制HepG2细胞c-Src的表达。

HBx和c-Src对肝癌细胞HepG2上皮间质转化的介导作用及其分子机制

目的探讨HBx和c-Src对肝细胞癌Hep G2细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的介导作用及其分子机制。方法构建HBx腺病毒及对照腺病毒,转染Hep G2细胞,观察细胞形态改变,应用Western blot和免疫组化的方法探索Hep G2细胞的EMT相关信号分子的表达及细胞定位情况。应用c-Src特异性抑制剂PP2处理HBx转染的Hep G2细胞,观察PP2处理前后细胞的EMT形态及分子特征变化。结果 HBx基因的转染导致Hep G2细胞形态发生改变,呈现出成纤维细胞样改变,细胞连接松散。HBx蛋白有效下调了上皮细胞标志E-cadherin的表达(P<0.05),上调了间质细胞标志N-cadherin和vimentin的表达(P<0.05),符合EMT改变。c-Src特异性抑制剂PP2能够有效阻断HBx所介导的Hep G2细胞的EMT改变。结论 HBx基因的转染导致肝细胞癌Hep G2细胞发生EMT改变,c-Src分子在HBx蛋白介导的EMT改变中发挥了至关重要的作用。

三七总皂甙对凝血酶诱导VSMCs增殖及pp60c-src活性的影响

目的探讨三七总皂甙(total spaonins of panax notoginseng,tPNS)对凝血酶诱导大鼠血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖作用及与pp60c-src活性的关系。方法采用4-10代的VSMCs的单细胞悬液用于实验。通过MTS法测定VSMCs细胞增殖率。用免疫沉淀测定pp60c-src的活性。结果①0.5U/mL和1.0U/mL2种浓度的凝血酶(Thrombin,TH)促VSMCs增殖相对于对照组,在各时间段均有明显促增殖作用(P<0.05)。增殖曲线呈双峰样改变(峰值在1h和24h);②不同浓度(300.0～600.0μg/mL)的tPNS在24h时对凝血酶刺激VSMCs都有明显抑制作用(P<0.05),且各浓度之间差异有显著性意义(P<0.05)。③相对凝血酶组,tPNS(450.0μg/mL)有效地降低了凝血酶诱导VSMCs增殖的1、24h峰值(P<0.05)。④凝血酶刺激组pp60c-src活性在1h(P<0.01)明显增加,并且6、12、24、48、72h也有增加。用tPNS干预凝血酶诱导VSMCs增殖组,与凝血酶组比较,pp60c-src活性在1h(P<0.01)高峰明显被抑制,并且6、12、24、48、72h也有减少。结论①凝血酶促VSMCs的增殖在时间上呈双峰样改变。②不同浓度的tPNS对凝血酶诱导VSMCs增殖均有抑制作用。③tPNS能抑制凝血酶早期快速及后期促VSMCs增殖作用。④tPNS对凝血酶诱导VSMCs增殖有明显抑制作用,部分机制与其降低pp60c-src活性有关。

pp60c-src在凝血酶诱血管平滑肌细胞增生中的作用

目的探讨凝血酶参与血管平滑肌细胞(VSMCs)异常增生的时相关系,及pp60c-src在其增生信号传递过程中的作用。方法本实验采用培养大鼠胸主动脉3-10代的VSMCs的单细胞悬液用于实验。用MTS法测凝血酶促VSMCs细胞增殖率。用免疫沉淀测定pp60c-src的活性。结果①0.5(umol/ml)和1.0(umol/ml)两种浓度的凝血酶促VSMCs增殖相对于对照组,在各时间段均有明显促增殖作用,且二者作用程度相似,呈双峰样改变,增殖峰在1h(P<0.05)和24h(P<0.05)。②凝血酶刺激组pp60c-src活性在1h(P<0.05)及12h(P<0.05)均明显上升。相对凝血酶组,PP1有效的降低了凝血酶诱导VSMCs1h峰值(P<0.05)及24h的峰值(P<0.05)。结论①凝血酶促VSMCs的增殖在时间上呈双峰样改变,提示凝血酶不仅有早期快速促VSMCs的增殖作用,而且有后期促VSMCs的增殖作用。②由于pp60c-src活性第二高峰(12h)在凝血酶促VSMCs第二增殖峰值(24h)之前,提示pp60c-src活性后期的增加参与了凝血酶促VSMCs后期增殖。

c-src在大鼠卵巢中的表达及其在原始卵泡生长启动中的作用初探

目的:研究原癌基因c-src在大鼠卵巢的表达,及其在原始卵泡启动过程中的作用。方法:取2日龄SD雌性大鼠卵巢,在Waymouth培养体系中培养0、4、8 d后,首先采用RT-PCR方法证实大鼠卵巢中有c-src的表达,再体外合成其RNA小干扰片段(small interference RNA,siRNA)转染培养中的卵巢组织进行RNA干扰,用HE染色及RT-PCR筛选最佳干扰片断并用慢病毒包装后检测干扰效果。结果:随着培养天数的增加,原始卵泡在卵泡总数中所占比例逐渐减少;c-src mRNA在原始卵泡中有表达,经筛选用最佳干扰片断siRNA1慢病毒包装进行RNA干扰,发现干扰后,与空白组、空白载体组相比,最佳干扰组c-src mRNA含量明显下降,原始卵泡在卵泡总数中所占比例相对更多,原始卵泡发育受到抑制。结论:c-src在原始卵泡中有表达,并在一定程度上促进了原始卵泡的发育。

PP^(60c-Src)在血管紧张素对大鼠血管平滑肌细胞信息转导中的作用

目的 :通过观察 c- Src在 Ang 对大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC)丝裂原活化的蛋白激酶 (MAPK)活性和c- fos蛋白表达的影响 ,以进一步了解 Ang 促 VSMC增殖的细胞内信息转导机制。方法 :原代和传代培养 SD大鼠主动脉 VSMC,以脂质体包裹反义 c- Src寡脱氧核苷酸 (Oligodeoxynucleotides ODNs)转染培养的 VSMC以抑制 c- Src蛋白表达和激酶活性。以未转染的 VSMC为对照 ,观察 10 -7mol/ L Ang 刺激对转染的 VSMC的 MAPK活性和 c- fos蛋白表达的影响。蛋白免疫沉淀和酶自身磷酸化率测定 c- Src激酶活性 ;髓鞘碱性蛋白 (MBP)底物磷酸化率测定 MAPK激酶活性 ;Western blot免疫印迹法测定 c- Src和 c- fos蛋白表达情况。结果 :转染不同浓度反义 c- SrcODNs的 VSMC c- Src蛋白含量呈浓度依赖性降低 ,0 .2 μmol/ L、0 .5 μmol/ L、1.0 μmol/ L和 2 .0 μmol/ L分别为对照的 6 8.2 %、34.7%、30 .3%和 15 .8% ,经方差分析具有显著性意义 (P<0 .0 1)。c- Src激酶活性也显著抑制 ;以 Ang 刺激经转染反义 c- Src ODNs的 VSMC,c- Src激酶活性增幅仅为对照组的 8.7% ;MAPK活性仅为对照的 1.6 % ;c- fos蛋白表达的增幅为对照组的 30 .0 %。结论 :Ang 可诱导 VSMC c- Src激活和细胞内信息转导 ,且 Ang 引起的 MAPK和 c-

多肽序列优化降低c-Src蛋白靶向药物的毒性风险

避免c-Src蛋白的多肽类拮抗剂与多个蛋白发生混杂性结合,对于降低抗癌药物的毒性风险具有重要作用。本研究运用生物信息学方法对氨基酸序列进行优化设计,旨在减少混杂性结合的发生。本研究综合利用各种多肽数据库和生物信息学工具,首先总结了多肽分子与多个蛋白SH3结构域之间潜在的混杂性结合,并发现了其中的内在规律。随后,根据所发现的规律,对多肽的氨基酸序列进行针对性的优化设计。结果表明,大多数多肽在经过优化后,所结合的c-Src以外的蛋白数量都有所下降,从而显著提高了多肽与c-Src蛋白之间结合的特异性(P<0.05),并降低了其潜在的毒性风险。本研究所取得的结果将为设计具有高度特异性和低毒性的靶向性多肽药物提供参考。

原位杂交与免疫组化检测c-Src在家族性巨颌症的表达

目的：探讨c—Src基因在家族性巨颌症中的表达及意义：方法：应用原位杂交方法与免疫组织化学技术检测12例家族性巨颌症病变组织中c—Src蛋白与c—SrcmRNA的表达：结果：12例家族性巨颌症病变组织中的多核巨细胞、10％～15％的单核圆形基质细胞胞浆表达c—Sre蛋白与mRNA，二者阳性细胞表达率无显著性差别，c—SrcmRNA表达结果与c—Src蛋白相一致，二者呈正相关关系：结论：c-Src表达可能与家族性巨颌症病变中多核巨细胞的形成和破骨特性有关：