胃粘膜癌变过程中幽门螺杆菌感染与p53,c-erbB-2基因表达的研究

目的探讨胃粘膜癌变过程中幽门螺杆菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ，Ｈｐ）感染与ｐ５３，ｃｅｒｂＢ２基因表达的关系．方法浅表性胃炎１６例，肠上皮化生２２例，异型增生１４例，早期胃癌１８例及进展期胃癌４０例作为研究对象．用ＷａｒｔｈｉｎＳｔａｒｙ银染色法检测Ｈｐ，用免疫组化Ｓｐ法检测ｐ５３和ｃｅｒｂＢ２的基因表达产物．结果Ｈｐ，ｐ５３，ｃｅｒｂＢ２在浅表性胃炎的检出率各为５００％，００％，００％；在肠上皮化生的检出率各为５９１％，２２７％，１３６％；在异型增生的检出率各为８５７％，６４３％，２８６％；在早期胃癌的检出率各为１６７％，３３３％，１１１％；在进展期胃癌的检出率各为５０％，５２５％，５５０％；在癌旁粘膜的Ｈｐ检出率为８６７％；在癌前病变中，Ｈｐ阳性组的ｐ５３，ｃｅｒｂＢ２表达率均高于Ｈｐ阴性组．结论Ｈｐ感染参与了胃癌前病变的发生与发展；Ｈｐ感染可引起野生型ｐ５３基因失活和ｃｅｒｂＢ２基因激活，从而导致胃粘膜的癌变．

乳腺癌组织nm23-H1和c-erbB-2基因表达与淋巴结转移的关系

目的 研究 nm2 3- H1,c- erb B- 2基因表达与乳腺癌淋巴结转移的关系 .方法 应用原位杂交技术检测正常乳腺组织 30例 ,乳腺癌原发灶 4 8例及转移淋巴结组织 30例中nm 2 3- H1m RNA和 c- erb B- 2 m RNA.结果 nm2 3- H1m R-NA失表达在有无淋巴结转移的原发肿瘤之间 ,组织学 , , 分级之间 ,以及淋巴结转移灶与原发肿瘤之间的差异具有显著性 (46 .7% vs16 .7% ;2 0 .0 % ,30 .4 % vs5 3.3% ,6 3.3% vs35 .4 % ,P<0 .0 5 ) .c- erb B- 2 m RNA阳性表达在有无淋巴结转移的原发肿瘤之间 ,ER阳性与阴性的乳腺癌之间 ,以及组织学 , , 分级之间的差异具有显著性(70 .0 % vs 33.3% ;4 4 .8% vs 73.7% ;30 .0 % ,5 6 .5 % vs73.3% ,P<0 .0 5 ) .c- erb B- 2 m RNA在淋巴结转移灶与原发肿瘤组织之间的差异具有显著性 (86 .7% vs5 6 .2 % ,P<0 .0 1) .结论 肿瘤抑制基因 nm 2 3- H1和 c- erb B- 2癌基因在预测乳腺癌淋巴转移有着重要价值 .

胃癌及癌前病变组织中p53、c-erbB-2基因表达

目的 :探讨p5 3、c -erbB - 2基因表达与胃癌及癌前病变生物学行为之间的关系。方法 :采用免疫组化ABC法检测胃粘膜病变中的p5 3、c -erbB - 2蛋白表达。结果 :慢性浅表性胃炎组织中p5 3、c -erbB - 2蛋白无表达 ;慢性萎缩性胃炎p5 3、c -erbB - 2蛋白表达率分别为 10 %、2 0 % ;早期胃癌组织中分别为 5 0 %、4 1% ;进展期胃癌中的表达率分别为 73%、76 .7%。结论 :p5 3、c -erbB -

胃癌及癌前病变组织中p53、c-erbB-2基因表达

目的：探讨ｐ５３、ｃｅｒｂＢ２基因表达与胃癌发生的生物学行为之间的关系。方法：应用免疫组化Ｓｐ法检测１８例早期胃癌、４０例进展期胃癌、１４例不典型增生、２２例肠上皮化生及１６例浅表性胃炎中抑癌基因ｐ５３、原癌基因ｃｅｒｂＢ２的蛋白表达。结果：浅表性胃炎组织中ｐ５３、ｃｅｒｂＢ２无表达；肠上皮化生组织中ｐ５３、ｃｅｒｂＢ２表达率分别为２２７％、１３６％；不典型增生组织中ｐ５３、ｃｅｒｂＢ２表达率分别为６４３％、２８６％；早期胃癌组织中ｐ５３、ｃｅｒｂＢ２表达率分别为３３３％、１１１％；进展期胃癌组织中ｐ５３、ｃｅｒｂＢ２表达率分别为５２５％、５５％；不典型增生和进展期胃癌的ｐ５３表达率均高于肠上皮化生（Ｐ＜００５）；进展期胃癌的ｃｅｒｂＢ２表达率高于早期胃癌和肠上皮化生（Ｐ＜００１）；ｃｅｒｂＢ２在有淋巴结转移胃癌中的表达率（６４３％）高于无淋巴结转移（２０％）（Ｐ＜００１）；中、低分化腺癌的ｐ５３表达率均高于高分化腺癌（Ｐ＜００５）；胃癌组织中ｐ５３、ｃｅｒｂＢ２表达有很强的相关性（Ｐ＜００１）。结论：ｐ５３、ｃｅｒｂＢ２基因协同作用参与?

乳腺癌C-erbB-2基因表达与雌、孕激素受体的关系及意义

目的探讨乳腺癌中C-erbB-2癌基因与ER、PR表达的关系及临床治疗意义。方法应用免疫组化S-P法,对96例原发性乳腺癌组织进行了ER、PR和C-erbB-2检测并进行统计学分析。结果C-erbB-2过度表达与ER、PR状况呈负相关(P<0.05),与后发性肿瘤的大小关系不大,与腋窝淋巴结转移关系明显(P﹤0.05)。结论ER、PR的阳性表达是乳腺癌预后良好的指标,C-erbB-2过度表达是乳腺癌预后不良的指标。联合检测C-erbB-2与ER、PR可以更加正确地判断预后以及更加合理地拟定术后治疗方案,以提高乳腺癌病人的治愈率。

乳腺浸润性导管癌组织C-erbB-2基因表达对预后的不同价值探讨

目的探讨乳腺浸润性导管癌组织中C-erbB-2表达与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、雌激素调节蛋白(PS-2)、临床分期、淋巴结转移的关系。方法乳腺浸润性导管癌患者73例,用免疫组化法进行ER、PR、PS-2、C-erbB-2染色,对每例患者进行肿瘤TNM分期和临床分期;对清扫的10枚以上淋巴结进行石蜡切片检查,对比各指标的关系。结果ER阴性组C-erbB-2的阳性率高于ER阳性组,差异有显著性意义(P<0.05);PS-2阴性组C-erbB-2的阳性率高于PS-2阳性组,差异有显著性意义(P<0.05);随临床分期增高,C-erbB-2的表达阳性率亦增高,差异有显著性意义(P<0.05);有腋淋巴结转移组C-erbB-2表达阳性率高于腋淋巴结阴性组,差异有显著性意义(P<0.05)。结论可根据ER、PR、PS-,2、C-erbB-2的不同预测价值,结合每例患者的临床分期、淋巴结转移、病理和免疫组化结果,作为制定个体化的综合治疗方案的重要参考依据。

P-cadherin、PCNA和c-erbB-2基因表达与乳腺癌转移的关系

目的 探讨胎盘钙黏素 (P -cd)、增殖细胞核抗原 (PCNA )和c erbB 2基因表达与乳腺癌转移的关系。方法 采用逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR )半定量的方法 ,测定 17例乳腺癌组织中P -cd基因的mRNA表达 ,采用免疫组化SP法测定PCNA和c erbB 2基因的蛋白表达。结果 无淋巴结转移组的P -cd校正值 ( 0 .9367± 0 .5 2 90 )明显高于有淋巴结转移组 ( 0 .35 88± 0 .12 85 ) ,有显著性差异 (t =3.0 2 8,P <0 .0 5 )。PCNA阳性表达率为 70 .6% ( 12 /17) ,其中无淋巴结转移组为 5 0 .0 % ( 4/8)、有淋巴结转移组为 88.9% ( 8/9) ;c erbB 2阳性表达率为 5 2 .9% ( 9/17) ,其中无淋巴结转移组为 2 5 .0 % ( 2 /8)、有淋巴结转移组为 77.8%( 7/9) ,两者无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 P

人宫颈癌c-erbB-2基因表达与临床意义

探讨人宫颈癌中c-erbB-2基因表达的改变及其临床意义 方法 对123例宫颈癌和26例非癌的宫颈组织采用免疫组化ABC法检测c-erbB-2基因蛋白的表达,结合临床资料分析该基因改变的临床意义。结果 正常宫颈组织中未见阳性染色,16例慢性宫颈炎中有3例阳性。强度为(阳性),宫颈癌组织中c-erbB-2基因表达为31.14％(42/123),显著高于正常和有慢性炎症的宫颈组织(P<0.01),并显示其与宫颈癌病理组织学分化高低及存活期有关。结论 c-erbB-2基因的变化在宫颈癌的发生和发展中起重要作用,其过度表达提示较差的临床行为和预后。

胃粘膜异型增生C-erbB-2基因表达及其癌变率的研究

目的 利用免疫组化的方法探索癌前病变到癌这一过程的转化 ,探索C erbB 2基因在这一转化过程的重要作用以及在胃癌早期诊断中的意义。方法 采用胃镜活检标本 ,选择胃粘膜异型增生的病例 ,资料完整 ,有随访结果 ,分出癌变组与未癌变组 ,利用免疫组化的方法检测C erbB 2基因蛋白表达情况。结果 正常胃粘膜、轻、中、重度异型增生的癌变率分别为 0、3 4%、10 7%、16 7%,随着异型增生的程度增加其癌变率增加。未癌变组C erbB 2蛋白表达的阳性率分别为 0、5 6 1%、72 %、83 3%,癌变组分别 0、5 0 %、33 3%、2 0 %,中、重度异型增生未癌变与癌变组间差异有显著性 (P <0 0 5 )。在癌变组C erbB 2蛋白表达的阳性率降低 ,而癌变率增加。结论 异型增生是一种重要的癌前病变 ,C erbB 2基因的变异在胃癌的发生、发展中起重要作用 ,对异型增生胃粘膜进行C erbB 2基因检测有助于胃癌的早期诊断和治疗。

乳腺癌患者中C-erbB-2基因表达的研究

目的 :探讨乳腺癌患者中C erbB 2基因的表达情况与各临床病理参数之间的关系。方法 :应用免疫组化SP法 ,研究 15 6例乳腺癌患者中C erbB 2基因的表达。结果 :C erbB 2基因的表达与病人患病时年龄无相关性 ,而与癌组织学类型、淋巴结转移、临床分期及术后生存期的长短有相关性。结论 :C erbB 2基因表达可望作为乳腺癌研究中的重要指标之一 。

肺癌nm23、c-erbB-2基因表达及其临床意义

为探讨ｎｍ２３、ｃ－ｅｒｂＢ－２基因在评估肺癌生物学行为及预后中的作用，应用免疫组化ＡＢＣ法检测了４１例肺癌及３０例癌分组织中ｎｍ２３及ｃ－ｅｒｂＢ－２的表达。结果表明癌组织中ｎｍ２３ｋｃ－ｅｒｂＢ－２表达率显著高于癌旁组织（Ｐ＜０．００１）；两者相关性极强（Ｘ２＝６．６２，Ｐ＜０．０２），且均与癌病理分级、ＴＮＭ分期及肺门和（或）纵隔淋巴结转移（简称分级、分期及转移）呈正相关（Ｐ＜０．００１、０．０１或０．０５）。提示ｎｍ２３及ｃ－ｅｒｂＢ－２基因表达可作为肺癌诊断及预后和生物学行为评估的指标。

薄壳山核桃CiSPL2基因克隆、亚细胞定位及表达分析

【目的】克隆薄壳山核桃SQUAMOSA启动子结合蛋白(SPL)转录因子基因CiSPL2,并对其进行亚细胞定位及表达分析,为探究该基因在薄壳山核桃雌花发育过程的分子机制提供理论依据。【方法】根据薄壳山核桃基因组数据,采用RT-PCR方法克隆CiSPL2基因编码区(CDS)序列,利用生物信息学软件分析其序列特征和蛋白理化性质,构建pCAMBIA1300-CiSPL2-GFP融合表达载体,瞬时转化烟草后观察荧光信号确定亚细胞定位情况。基于转录组数据和实时荧光定量PCR检测CiSPL2基因在不同组织及不同雌花芽分化时期的表达模式。【结果】薄壳山核桃CiSPL2基因CDS长度为1398 bp,共编码465个氨基酸残基,相对分子量为51.78 kD,理论等电点(p I)为8.28,不稳定系数为49.89,脂肪酸氨基酸指数为64.62,平均亲水性平均值(GRAVY)为-0.617,为不稳定的亲水性蛋白,含有SBP结构域(位于第183~257位氨基酸),亚细胞定位于细胞核。CiSPL2蛋白的二级结构主要由α-螺旋(17.42%)、延伸链(13.55%)、β-转角(1.72%)和无规则卷曲(67.31%)组成。薄壳山核桃CiSPL2蛋白与核桃JrSPL2蛋白氨基酸序列的相似性最高,为95.05%,其次是光皮桦BlSPL2蛋白,相似性为70.83%。CiSPL2蛋白与核桃JrSPL2蛋白亲缘关系最近。CiSPL2基因启动子中含有植物激素响应、干旱胁迫响应和分生组织表达元件。CiSPL2基因在雌花和果实中的表达水平显著高于其他组织(P<0.05),在雌花芽分化各阶段均有表达,在雌花序形成期表达水平最高。【结论】CiSPL2基因含有SPL转录因子家族典型的SBP保守结构域,推测其参与调控薄壳山核桃雌花芽分化和发育过程。

老年舒张性心力衰竭合并肌少症患者可溶性生长刺激表达基因2蛋白、肌红蛋白、白细胞介素-6水平与心功能的相关性

目的 探讨老年舒张性心力衰竭(DHF)合并肌少症患者外周血可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sST2)、肌红蛋白(Myo)、白细胞介素-6(IL-6)水平与心功能的相关性。方法 将122例DHF患者根据有无肌少症分为DHF合并肌少症组60例和DHF组62例,另将健康体检者58例、单纯肌少症患者60例分别纳入对照组、单纯肌少症组,检测各组外周血sST2、Myo、IL-6水平和心功能指标[左室射血分数(LVEF)、心排血量(CO)、心率(HR)、每搏输出量(SV)和心脏指数(CI)]。采用Pearson相关分析法分析sST2、Myo、IL-6与各心功能指标的相关性。绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析sST2、Myo、IL-6单独及联合诊断DHF合并肌少症的效能。结果 与对照组、单纯肌少症组相比,DHF组、DHF合并肌少症组sST2、Myo、IL-6水平和HR均升高,LVEF、CO、SV和CI均降低,差异有统计学意义(P<0.05);与DHF组相比,DHF合并肌少症组sST2、Myo、IL-6水平和HR均升高,LVEF、CO、SV和CI均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。sST2、Myo、IL-6均分别与LVEF、CO、SV、CI呈负相关(P<0.001),均与HR呈正相关(P<0.001);sST2、Myo、IL-6、LVEF、SV是DHF合并肌少症的独立影响因素(P<0.05);sST2、Myo、IL-6联合诊断DHF合并肌少症的曲线下面积为0.936,诊断效能优于三者单独检测。结论 老年DHF合并肌少症患者外周血sST2、Myo、IL-6水平显著升高,且sST2、Myo、IL-6均与心功能指标显著相关,三者联合检测对DHF合并肌少症的诊断效能较高。

急性缺血性脑卒中患者血清长链非编码RNA母系表达基因3和Zeste同源物增强子-2表达与神经功能损伤的相关性分析

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)母系表达基因3(MEG3)与Zeste同源物增强子-2(EZH2)在急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清中的表达水平及其与神经功能损伤之间的关系。方法选取延安市人民医院2021年1月至2022年11月收治的92例AIS患者为脑卒中组,92例健康体检者为对照组,根据NIHSS评分将脑卒中组患者分为致残性损伤组19例,非致残性损伤组73例。采用实时荧光定量聚合酶链式反应、酶联免疫吸附法分别检测血清lncRNAMEG3、EZH2水平。采用Spearman相关分析法进行AIS患者血清lncRNAMEG3、EZH2表达水平与美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分之间的相关性分析;采用多因素Logistic回归分析AIS患者合并神经功能致残性损伤的影响因素,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA MEG3、EZH2水平对AIS患者合并神经功能致残性损伤的诊断价值。结果脑卒中组患者血清lncRNA MEG3、EZH2表达水平均高于对照组(t=11.817、11.542,P<0.05)。Spearman相关分析显示,AIS患者血清lncRNA MEG3、EZH2水平与NIHSS评分均呈正相关(r=0.540、0.603,P<0.01)。致残性损伤组体质量指数、吸烟史占比、甘油三酯、总胆固醇、同型半胱氨酸、发病-到院时间(ODT)、lncRNAMEG3、EZH2水平均高于非致残性损伤组(t/χ2=2.103、5.050、9.121、5.585、2.276、5.448、4.638、4.682,P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,甘油三酯、总胆固醇、lncRNA MEG3、EZH2以及ODT均是AIS患者合并神经功能致残性损伤的影响因素(OR=4.853、4.277、2.674、3.052、3.901,P<0.05)。lncRNA MEG3、EZH2联合诊断AIS患者合并神经功能致残性损伤的曲线下面积(AUC)大于lncRNAMEG3以及EZH2单独诊断的AUC(Z=2.626、2.954,P<0.01),敏感度、特异度分别为94.74%、82.15%。结论AIS患者血清lncRNA MEG3、EZH2水平均上升,与AIS患者神经功能损伤程度均正相关,可用作AIS患者合并神经功能致残性损伤的诊断指标,且联合诊断效果更好。

鸡FGL2基因的克隆分析及原核表达

【目的】克隆鸡纤维蛋白原样蛋白2(fibrinogen-like protein 2,FGL2)基因,并进行生物信息学分析和原核表达,为鸡FGL2蛋白的功能研究奠定基础。【方法】采用逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)技术扩增鸡FGL2基因,克隆至pMD19-T载体,测序后对鸡FGL2基因及其编码的蛋白进行生物信息学分析。构建原核表达质粒pET-32a-FGL2,将其转化BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot分析。【结果】成功克隆了鸡FGL2基因的CDS区,序列全长为1320 bp,编码439个氨基酸。生物信息学分析显示,鸡FGL2氨基酸与火鸡、雉鸡、珍珠鸡、鹌鹑等禽类的同源性高,达96%以上;与哺乳类动物的同源性较低,其中与犬的同源性仅有64.8%。FGL2蛋白由439个氨基酸组成,理论分子质量为50.24 ku,分子式为C_(2221)H_(3451)N_(615)O_(673)S_(22),理论等电点(pI)为8.63,为不稳定的亲水性分泌型蛋白,无跨膜区。成功构建了原核表达质粒pET-32a-FGL2,其在大肠杆菌BL21(DE3)可表达以包涵体形式为主的FGL2融合蛋白,分子质量约为70 ku。【结论】成功克隆出了1320 bp的鸡FGL2基因,明确了其编码蛋白的生物学信息,经诱导表达后获得FGL2重组蛋白。

鸡SLMO2基因CDS区克隆、生物信息学及组织表达分析

为了探究类果蝇慢移基因的氨基酸序列特征,探索其在不同肤色鸡不同组织中mRNA表达变化规律,实验采集不同肤色鸡各组织,PCR克隆获得SLMO2完整CDS区,进行生物信息学分析及组织表达分析。实验得到SLMO2的CDS区序列全长560 bp,其中可编码氨基酸174个。生物信息学研究结果表明,鸡SLMO2蛋白并不具有信号肽和跨膜结构,蛋白主要结构以无规性卷曲的α-螺旋结构结合为主,且蛋白分布在线粒体内膜间隙。通过氨基酸序列对比发现,鸡与爪蟾的亲缘关系较近。qRT-PCR结果表明,SLMO2在背肤组织中相对表达量极显著高于其他组织,且该基因在丝羽乌骨鸡背肤组织中表达量极显著高于“豫粉1号”H系鸡。以上结果为进一步探究鸡SLMO2对黑色素沉积的调控机制提供了理论依据。

多浪羊PROKR 2基因克隆、生物信息学及组织差异表达分析

【目的】克隆多浪羊促动力素受体2(prokineticin receptor 2,PROKR2)基因,并检测初情期启动过程中PROKR 2基因在多浪羊不同组织中的表达水平,为探究PROKR 2基因在绵羊初情期启动过程中的作用提供依据。【方法】以初情期后多浪羊下丘脑cDNA为模板,PCR扩增PROKR 2基因并克隆测序。利用DNAMAN软件对测序结果进行拼接,采用MegAlign软件进行物种间相似性比对并构建系统进化树,并利用生物信息学软件预测多浪羊PROKR2蛋白理化性质和结构功能。使用实时荧光定量PCR技术检测PROKR 2基因在多浪羊下丘脑、垂体、卵巢、输卵管及子宫中初情期前、初情期及初情期后的表达水平。【结果】克隆获得PROKR 2基因序列大小为2641 bp,包括5′-UTR 143 bp、3′-UTR 1343 bp和CDS区1155 bp,编码384个氨基酸,与GenBank中绵羊预测mRNA序列(登录号:XM_004014342.5)相似性为99.83%。系统进化树表明,多浪羊PROKR 2基因的遗传距离与山羊最近,与鸡最远。生物信息学分析表明,PROKR2蛋白为疏水稳定碱性蛋白,有7个跨膜结构,属于跨膜蛋白,存在31个磷酸化位点,主要在质膜上发挥作用。多浪羊PROKR2蛋白与GnRH1、PROK1、ANOS1等蛋白存在相互作用关系。实时荧光定量PCR结果显示,在多浪羊下丘脑各时期中PROKR 2基因表达量均显著高于其他组织(P<0.05),且在初情期后的表达量最高;垂体中PROKR 2基因表达量无显著变化(P>0.05);子宫中PROKR 2基因在初情期前的表达量显著高于初情期和初情期后(P<0.05);卵巢和输卵管中PROKR 2基因在初情期的表达量显著高于初情期前和初情期后(P<0.05)。【结论】试验成功克隆了多浪羊PROKR 2基因CDS区序列,PROKR2蛋白属于疏水稳定碱性蛋白,含有7个跨膜结构,主要在下丘脑中表达,且在卵巢和输卵管中的总趋势为先升后降。研究结果可为进一步探究PROKR 2基因在绵羊初情期启动过程中的调控作用提供参考。

月季RhMAX2A基因的克隆与表达分析

【目的】克隆月季(Rosa hybrida L.)RhMAX2A基因c DNA序列,分析其序列特征及其在不同组织中和去顶后的表达情况,为探究该基因在月季中的生物学功能及调控侧枝发生的转导机制提供理论支持。【方法】以月季品种滇红(Rosa hybrida‘Dianhong’)为材料,通过RT-PCR技术克隆RhMAX2基因的cDNA序列,利用生物信息学方法对其序列和所编码的蛋白质进行分析,利用烟草(Nicotiana tabacum)瞬时转化技术分析蛋白的亚细胞定位,同时采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测其在不同组织中及去顶后的表达情况。【结果】RhMAX2A基因(GeneBank登录号为OP055810)cDNA序列长1030 bp,编码246个氨基酸,该蛋白分子式为C_(2910)H_(4793)N_(1029)O_(1244)S_(210),相对分子质量为27.35 kD,总原子量为3909;该蛋白不稳定系数为53.07,脂肪系数为106.30,GRAVY值为0.049,是一类不稳定亲水性蛋白;RhMAX2A蛋白的二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲构成,且RhMAX2A为推定的F-box结构域,属于α/β水解酶家族。同源序列比对和系统进化树关系分析结果表明,RhMAX2A氨基酸序列(OP055810)与同属的古老月季品种月月粉(Rosa chinensis‘Old Blush’)氨基酸序列(XP_024283944.1)相似性最高,其次是同亚科的草莓(Fragria vesca subsp.vesca)(XP_004287076.1),三者亲缘关系较近。亚细胞定位结果显示,RhMAX2A编码蛋白位于细胞核。qRT-PCR检测结果显示,RhMAX2A基因在根、腋芽和节中表达,根中表达量最高,去顶处理显著上调RhMAX2A基因在根和腋芽中的表达。【结论】成功克隆了滇红RhMAX2A基因,其编码蛋白在细胞核上发挥作用,主要在根和腋芽中表达,且受去顶诱导上调表达。

牙鲆(Paralichthys olivaceus)抗缪勒氏管激素Ⅱ型受体基因(amhr2)表达特征分析及功能初探

抗缪勒氏管激素Ⅱ型受体(anti-Müllerian hormone receptorⅡ,Amhr2)是抗缪勒氏管激素(anti-Müllerian hormone,Amh)的特异受体。amhr2基因在鱼类性腺分化和发育中发挥重要作用,更决定了有的鱼种的性别,然而,相关功能研究较为有限。本研究旨在明晰amhr2在我国重要海水养殖鱼类—牙鲆(Paralichthys olivaceus)性腺分化和发育过程中的表达特征,并初步探究其功能。首先,克隆了牙鲆amhr2-CDS序列,共1536bp,编码511个氨基酸。系统发育分析显示牙鲆Amhr2近C端较为保守,与其他硬骨鱼类聚为一枝,并与上游sp1以及下游的prr13和PCBP2在基因组中共定位。蛋白结构分析显示,牙鲆Amhr2包含信号肽、跨膜结构域和保守的酪氨酸蛋白激酶结构域。进而,利用实时荧光定量PCR(q PCR)分析表明,牙鲆amhr2主要表达于性腺,且在精巢中的表达极显著高于卵巢(P<0.01),其在I-V期精巢中持续高表达,而在卵巢中仅在I期高表达,后显著下降(P<0.05)。性腺分化期基因的表达,是对雌核发育组(对照组,20±0.5℃,100%雌性)与雌核发育高温诱导组(HT组,28±0.5℃,100%雄性)鱼苗进行检测的,amhr2在对照组全长(totallength,TL)2cm的实验鱼性腺中表达最高,后逐渐下降;而HT组实验鱼性腺中的表达呈现先上升后下降的趋势,并在精巢开始分化的6cm TL时表达最高。利用Hela细胞进行亚细胞定位分析发现,Amhr2与其配体Amh均定位于细胞质。同时,通过原核表达重组牙鲆Amh,并用其孵育离体性腺组织,q PCR分析显示精巢中amhr2的表达没有显著变化,但卵巢中表达显著上升(P<0.05)。进一步通过双荧光素酶报告分析表明,Amh和Amhr2共转染能够显著抑制雌激素合成的关键芳香化酶基因cyp19a的表达(P<0.01)。综上所述,牙鲆amhr2主要表达于精巢,但在不同性腺发育时期表达不同,且其可能与Amh共同影响cyp19a的转录,对雄性表型形成的启动和性腺发育起作用。