Cu^(2+)、Cd^(2+)对瓯江彩鲤(C. carpio var. color)的急性毒性研究

以瓯江彩鲤为试验对象,采用静水换水法研究了Cu2+、Cd2+对瓯江彩鲤的急性毒性效应.其目的在于评价水环境中Cu2+和Cd2+对瓯江彩鲤的影响,为瓯江彩鲤的养殖水质风险评价提供一定的参考依据.结果表明,Cu2+、Cd2+对瓯江彩鲤均具有潜在的毒性效应,Cu2+对瓯江彩鲤24,48,72和96h的LC50分别为0.18,0.13,0.09和0.08mg.L-1,Cd2+对瓯江彩鲤24,48,72和96h的LC50分别为6.23,5.48,4.71和4.56mg.L-1;Cu2+和Cd2+对瓯江彩鲤的毒性顺序为Cu2+>Cd2+;瓯江彩鲤死亡率与Cu2+、Cd2+浓度均呈二次曲线关系,Cu2+、Cd2+对瓯江彩鲤的安全浓度分别为0.008、0.46mg.L-1.

鲤多拷贝基因MRC1的全基因组鉴定及表达分析

甘露糖受体C1型基因(mannose receptor C-type 1,MRC1)是C型凝集素超家族的成员之一,其编码的甘露糖受体是一种模式识别受体,在先天免疫反应中发挥关键作用。MRC1基因在哺乳动物免疫反应中的作用被广泛研究,但在鱼类中的研究较少。近年来,随着高密度集约化养殖模式的发展,由病原微生物引发的疾病频繁暴发,其中,嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)是常见的致病菌之一。本研究首次在鲤(Cyprinus carpio)全基因组范围鉴定MRC1基因,共发现11个基因拷贝,并进行了功能域预测、共线性分析、多序列比对和系统进化分析,结果表明,MRC1基因在物种进化过程中保守程度较高。拷贝数比较分析发现,MRC1基因在不同物种中表现出不同程度的多拷贝现象,在多数鱼类中发现2个拷贝,而在鲤中发现多达11个拷贝。同时,比较了各拷贝在健康鲤脑、肌肉、肝脏和脾脏组织中的表达情况,发现在免疫相关组织脾脏中的表达量相对高于其他组织。进一步对感染嗜水气单胞菌4、12、24 h后在鲤脾脏中的表达进行差异比较分析,发现不同拷贝的表达特征各有差异,其中,HHLG13g0734在感染嗜水气单胞菌4 h后表达显著上调,HHLG13g0734在感染24h后表现出极显著上调,HHLG3g0497在整个感染过程中表达显著下调,表明鲤MRC1基因只有部分拷贝保留了免疫相关功能及参与机体的免疫反应。本研究结果有助于进一步了解鲤MRC1基因在抵抗嗜水气单胞菌感染过程中发挥的免疫功能,并为分子选育抗病新品系提供一定的数据基础。

鲤CCAAT增强子结合蛋白α基因的克隆与时空表达特征

CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)是脂肪细胞分化中起重要调控作用的转录因子。本研究利用逆转录PCR和RACE技术获得了体质量200~250 g鲤Cyprinus carpio C/EBPα基因全长cDNA序列为1463 bp,开放阅读框861 bp,编码286个氨基酸。C/EBPα蛋白质相对分子量32.5 KD,理论等电点(PI)为7.02。氨基酸同源性分析结果显示,鲤C/EBPα基因与斑马鱼Danio rerio同源性最高为93.36%,与小鼠同源性仅为52.47%。系统进化树结果显示,鲤C/EBPα氨基酸序列与鲫Carassius auratus聚为一支,同源性最高。实时荧光定量PCR检测表明,C/EBPα基因在成体鲤腹腔脂肪组织中表达量最高,肠组织次之,腹部肌肉中表达量最低;胚胎发育期,C/EBPα基因在心跳期表达量最高,七体节期次之,八细胞期最低。鲤C/EBPα基因序列的获得及表达特征研究为进一步深入研究鲤脂肪细胞分化及脂肪发育分子调控机制奠定了基础。

不同剂型维生素C对锦鲤生长及其组织中维生素C含量的影响

为了研究饲料中添加不同剂型维生素C对锦鲤生长性能及其组织中维生素C含量的影响,按饲料中维生素C有效含量为50、100、150、200 mg/kg的剂量分别添加维生素C多聚磷酸酯和包膜维生素C,进行为期60 d的锦鲤饲养试验。结果表明,当分别在饲料中添加维生素C多聚磷酸酯100～200 mg/kg和包膜维生素C 150～200 mg/kg (均以有效维生素C含量计)时,锦鲤生长速度较快,成活率较高,尤其是有效维生素C含量分别在150 mg/kg和200 mg/kg时,锦鲤肌肉和肝脏组织维生素C含量最高,且肝脏的维生素C含量高于肌肉;饲料中添加维生素C多聚磷酸酯对锦鲤的生长促进效果优于添加包膜维生素C。

L-肉碱强化卤虫对鲤鱼开口苗脂肪酸组成和C/N比率的影响

【目的】研究L-肉碱强化卤虫对鲤鱼开口苗脂肪酸组成和C/N比率的影响,为鲤鱼开口苗的饲养提供参考。【方法】分别用质量浓度为0(对照),1,100,1 000 mg/L的L-肉碱强化卤虫无节幼体(Artemiasp.)12和24h,然后投喂给鲤鱼(Cyprinus carpio)开口苗,21 d后测定鱼苗的脂肪酸组成和C/N比率。【结果】投喂L-肉碱强化12 h的卤虫时,1 mg/L L-肉碱处理组鲤鱼开口苗的∑C14-24脂肪酸含量、饱和脂肪酸含量和单不饱和脂肪酸含量较对照组显著降低(P<0.05);1 000 mg/L L-肉碱处理组鲤鱼开口苗的单不饱和脂肪酸含量较对照组显著升高(P<0.05);L-肉碱对鲤鱼开口苗的多不饱和脂肪酸含量、∑n-3+∑n-6和∑DHA+EPA含量均无显著影响(P>0.05);1 000mg/L L-肉碱处理组鲤鱼开口苗的C/N比率显著低于对照组和1 mg/L L-肉碱处理组(P<0.05)。投喂L-肉碱强化24 h的卤虫时,1和100 mg/L L-肉碱处理组鲤鱼开口苗的∑C14-24脂肪酸和饱和脂肪酸含量较对照组显著降低(P<0.05),但2组之间差异不显著(P>0.05);1 000 mg/L L-肉碱处理组鲤鱼开口苗的∑C14-24脂肪酸和饱和脂肪酸含量较对照组显著升高(P<0.05);1 mg/L L-肉碱处理组鲤鱼开口苗的单不饱和脂肪酸含量较其他3组显著降低(P<0.05),多不饱和脂肪酸、∑n-3+∑n-6和∑DHA+EPA含量与对照组差异不显著(P>0.05);100 mg/L和1 000 mg/L L-肉碱处理组鲤鱼开口苗的多不饱和脂肪酸、∑n-3+∑n-6和∑DHA+EP A含量较对照组显著升高(P<0.05),且2组之间差异显著(P<0.05);1,100 mg/L L-肉碱处理组鲤鱼开口苗的C/N比率较对照组和1 000 mg/L L-肉碱处理组显著降低(P<0.05)。【结论】本试验条件下,以质量浓度100 mg/L L-肉碱强化卤虫24 h后再投喂鲤鱼开口苗,可显著改善鲤鱼开口苗的脂肪酸组成和C/N比率。

鲤鱼NLR-C基因分子克隆及其特性分析

利用RT-PCR和RACE技术克隆得到鲤鱼(Cyprinus carpio L.)NLR-C基因cDNA全长。经qRT-PCR检测发现,NLR-C基因在鲤鱼血液和脑中表达最高,在头肾、鳃、后肠和口腔上皮中有较高表达。采用鳗弧菌(V.anguillarum)刺激后,NLR-C mRNA在肝、脾、头肾和后肠中的表达有不同程度升高。结果显示,NLR-C基因参与鲤鱼天然免疫应答过程,具有抵御病原微生物侵袭的作用。

维生素C对锦鲤生长性能、非特异性免疫及其组织中维生素C含量的影响

为了研究饲料中添加维生素C对锦鲤生长性能、非特异性免疫及其组织中维生素C含量的影响,设计了0、20、40、80、160、320 mg/kg等6个不同维生素C添加水平,分别投喂锦鲤[初始平均体质量为(10. 21±0. 02) g],进行为期60 d的饲养试验。结果表明:锦鲤增重率随饲料中维生素C添加量的增加而显著升高(P <0. 05),试验组之间锦鲤的特定生长率和成活率差异不显著(P> 0. 05);饲料中维生素C添加量对肌肉和肝脏中维生素C的含量均有显著影响(P <0. 05),呈先升高后趋于平稳的趋势,且肝脏中维生素C含量显著高于肌肉中维生素C含量(P <0. 05);饲料中添加维生素C对血清LZM酶活性没有显著影响(P> 0. 05),80、160、320 mg/kg组锦鲤血清SOD、CAT和AKP酶活性均显著高于对照组和20 mg/kg试验组(P <0. 05)。研究表明,饲料中添加维生素C可促进锦鲤的生长发育和增强其机体非特异性免疫能力。

鲤环指蛋白145基因克隆、生物信息学及功能分析

【目的】试验旨在克隆鲤(Cyprinus carpio)环指蛋白145(ring finger protein145,RNF145)基因CDS区,并对其进行生物信息学分析及功能初探。【方法】对鲤RNF 145基因进行了克隆并测序,通过在线软件对鲤RNF145蛋白进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR分析鲤RNF 145基因在不同发育阶段、不同组织中及在鲤春病毒血症病毒(Spring Viremia of Carp virus,SVCV)和Poly(I∶C)刺激下的mRNA表达变化。【结果】鲤RNF 145基因CDS序列全长2049 bp,编码682个氨基酸,其氨基酸序列与鲫相似性最高;鲤RNF145蛋白分子质量为76.56 ku,理论等电点为6.16,脂肪系数为115.32%,不稳定指数为41.87,无信号肽,含有11个跨膜螺旋,属跨膜蛋白;亚细胞定位预测结果显示,其定位于细胞质膜(87%)和内质网(13%);该蛋白含有TRC8-N、RING_H2_RNF145和RAD18结构域,具有α-螺旋(56.45%)、延伸链(9.68%)、β-转角(2.35%)及无规则卷曲(31.52%),与MFN2、NUGGC.1、ASZ1和TRIM36相互作用的置信度较高。早期发育阶段鲤RNF 145基因mRNA表达呈先显著下降后上升,再显著下降趋势(P<0.05);组织表达谱分析表明,其在脾脏中表达量最高,在肝脏中表达量最低;SVCV1(5.6×107 TCID 50/mL)在体感染24 h后,RNF 145基因在肌肉、脾脏、头肾、心脏中表达量均显著升高,在肝脏中则显著下降(P<0.05);该剂量感染鲤上皮瘤细胞(Epithelioma papulosum crprini,EPC)时,RNF 145基因表达量在12 h时开始显著升高,于48 h时仍显著高于对照组(P<0.05);SVCV2(5.6×104 TCID 50/mL)感染EPC时,鲤RNF 145基因mRNA表达量在感染后24 h时显著高于对照组,48 h后显著低于对照组(P<0.05)。与SVCV1刺激结果不同,在体注射Poly(I∶C)(1000μg/mL)24 h后,该基因在脾脏和头肾中表达量均显著低于对照组(P<0.05);Poly(I∶C)(10μg/mL)感染EPC时,鲤RNF 145基因mRNA表达量在感染后24 h时显著高于对照组,48 h后显著低于对照组(P<0.05)。【结论】本试验成功克隆了鲤RNF 145基因的CDS全长序列,揭示了其在不同组织、早期不同发育阶段及SVCV和Poly(I∶C)刺激下的表达变化,为进一步研究该基因功能提供了前期基础。

三种红鲤生长性状的杂种优势与遗传相关分析

对兴国红鲤、荷包红鲤、瓯江彩鲤及其双列杂交种(F1)在成鱼阶段的体重和10个形态性状的杂种优势和遗传相关分析发现:(1)兴国红鲤×荷包红鲤杂交,表现出显著的平均杂种优势和超亲优势;兴国红鲤×瓯江彩鲤杂交、荷包红鲤×瓯江彩鲤杂交的平均杂种优势不明显,也未表现出超越瓯江彩鲤亲本的超亲杂种优势;(2)体重与全长、体长之间加性相关显著(rA>0.9),但显性相关不显著;全长与体长、全长与尾柄长、体长与尾柄长的加性相关及显性相关均显著(rA>0.9;rD>0.9);全长、体长与体高、尾柄高间均呈显著负加性相关(rA<-0.9);体高与尾柄长呈显著负加性相关(rA=-0.896),体高与尾柄高呈显著正加性相关(rD=0.970)。

红鲤4群体间主要组织相容性复合体的差异

应用鱼类主要组织相容性复合体(MHC)基因来探讨鱼类种群间遗传结构,寻找分子遗传标记。根据已报道的鲤鱼MHCⅠ类基因序列,设计了一对特异性引物,从兴国红鲤、荷包红鲤、玻璃红鲤及瓯江彩鲤基因组DNA中扩增了编码MHCⅠ类分子α2链的基因片段,并进行克隆、测序。结果表明,(1)编码MHCⅠ类分子α2链的基因多态性较为丰富,234bp长度中有106个变异位点,多态位点百分率达45.3%;荷包红鲤的基因序列与其它3群体红鲤有显著差异;(2)由编码MHCⅠ类分子α2链的基因和氨基酸序列构建的系统进化树一致,兴国红鲤与瓯江彩鲤关系较近,属于同一进化支,玻璃红鲤和荷包红鲤分别属于另外两个不同的进化支,荷包红鲤是较为特化的群体;(3)多态性丰富的编码MHCⅠ类分子α2链的基因,适宜作为鲤鱼不同群体的分子遗传标记。

中国红鲤四群体线粒体DNA遗传多样性、起源及分化

用13种限制性内切酶对兴国红鲤、玻璃红鲤、荷包红鲤及瓯江彩鲤4种红鲤的线粒体DNA(mtDNA)进行RFLP分析。共产生17种限制性态型,其中5种酶为限制性片段长度多态性(RFLPs),归结为5种单倍型;兴国红鲤、玻璃红鲤、荷包红鲤和瓯江彩鲤的核苷酸多样性(π)分别为0.0087、0.0059、0.0094、0.0286,瓯江彩鲤的遗传多样性最为丰富;瓯江彩鲤起源于单倍型II为主的母系祖先,推算分化时间分别约在11.5万年、9.5万年前;玻璃红鲤和荷包红鲤起源于单倍型I为主的母系祖先,推算分化时间分别约为5～5.6万年、2万年前。

江西3种红鲤血清转铁蛋白遗传多态性

采用不连续聚丙烯酰胺垂直电泳(PAGE)和不连续十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺垂直电泳(SDS-PAGE)对兴国红鲤、玻璃红鲤、荷包红鲤的血清转铁蛋白(Tf)进行研究。PAGE电泳结果表明3种红鲤的Tf图谱具有3条带,荷包红鲤与玻璃红鲤Tf表型由Tfb、Tfc组成,兴国红鲤Tf表型由Tfa、Tfb、Tfc组成;其中玻璃红鲤的Tfb和Tf c条带表达量最高,荷包红鲤的Tfb、Tfc条带表达量最低。不连续SDS-PAGE电泳结果显示3种红鲤Tf的分子量相近,为68 k Da^80 k Da。结果表明转铁蛋白可用于3种红鲤亲缘关系的分析,它们的表达存在一定差异,但三种红鲤鱼的亲缘关系较近。

瓯江彩鲤红、白两种体色遗传关系的初步研究

相对于鲤的普通体色（青灰色）来说，红和白体色均为隐性基因控制。为分析红与白体色之间的遗传关系，通过各自能稳定遗传的红和白体色类型的瓯江彩鲤进行杂交，对4个F1家系和8个F2家系的体色进行了统计与分析，结果发现：无论是正交还是反交F1个体全为红色，F2中红色与白色个体的分离比例为2．75～3．00：1，符合孟德尔遗传规律；红色由显性基因控制，白色由隐性基因控制。研究表明鱼类体色间的显隐性关系是相对的，会随配对体色的不同而表现出显性或隐性关系。

汞对鲤鲫鱼组织转氨酶活性的影响

本文研究了外源汞对鲤、鲫鱼几种组织转氨酶活性的变化规律。结果表明，底泥受汞污染后，鲤、鲫鱼肝、鳃组织ＧＰＴ和ＧＯＴ活性下降，以肝胰脏最明显，血清转氨酶活性则相反，随着汞浓度的递增而呈极显著升高。在底泥Ｈｇ含量为３．３６０ｍｇ／ｋｇ时，肾脏转氨酶达最大活力，但随着汞浓度的加大。

黑龙江野鲤细菌人工染色体基因组文库构建

为了开展鲤基因组研究,深入研究遗传连锁图谱遗传标记的定位及数量性状的定位和克隆,并最终为分子育种提供服务,本实验构建了鲤的BAC基因组文库。通过采集黑龙江野鲤(Cyprinus caxpio haematopterus)全血细胞制备琼脂糖凝胶包埋块的方法获得了高分子量(HMW)DNA。通过BamHⅠ部分酶切和PFGE电泳分离选择获得100～300kb的DNA片段,用电洗脱和透析的方法对产物进行浓缩和纯化。纯化的HMWDNA连接到大小为7.2kb的克隆载体pEZBAC上。为了评估构建的文库的质量使用一系列引物对文库进行了验证。本研究首次构建黑龙江野鲤的BAC文库,该库含有46656个克隆,插入片段大小在50～300kb之间,平均大小在100kb左右,覆盖鲤全基因组2.45倍,调取任一基因的概率为90%左右。获得的BAC克隆,保存在378块96孔板和27块384孔板中。建立了高效稳定的2步3维PCR筛选黑龙江野鲤BAC文库的方法。本实验为今后进一步进行鲤的功能基因定位及染色体步行、BAC-FISH等研究工作打下重要基础。

二氧化氯对淡水鱼鳃片上附着菌的清除作用

二氧化氯(ClO2)因为具有良好的消毒效果而被广泛用于生活用水和工业循环冷却水处理、医疗卫生消毒、环境保护以及石油、造纸、食品等许多领域,也已被证明是一种良好的水产养殖用消毒剂。然而,由于ClO2制备方法和剂型较多,如何评价ClO2的消毒效果,不同的研究者所采用的方法各异。笔者通过测定供试鱼鳃片上附着菌数量,比较了不同浓度的ClO2溶液浸泡消毒对附着菌的清除作用,旨在将ClO2科学地应用于水产养殖业中提供依据。

鲤鱼野生群体线粒体部分基因片段序列比较

通过对线粒体16S rRNA基因、D-loop区和Cyt b基因部分片段测定,探讨我国鲤鱼C.carpio野生群体和云南大头鲤C.pellegrini的遗传变异和亲缘关系。数据和并后用于分析的序列共1 492bp,变异位点221个,含简约信息位点217个,其中新疆群体用于分析的序列长度为1 478bp。以云南大头鲤为外群,推测鲤鱼群体间的系统发育关系和分化时间,MP法和NJ法得到相似的系统树,新疆群体与其他群体的差异较大,遗传距离较远,单独聚为一支,其他群体间相似性较高聚在一起,新疆群体与其他群体间的分化时间约为2.42×10^6-2.45×10^6年前。

长期铈喂养对鲤鱼肝胰脏、肾脏抗氧化酶活性的影响

为了探讨稀土元素铈对鱼类的生态毒理学效应,在基础饲料中分别添加0(对照)、20、42、65mg·kg-1的硝酸铈饲喂鲤鱼60 d,研究铈对鲤鱼肝胰脏、肾脏自由基的清除能力和抗氧化酶活性的影响。结果表明,与对照组相比,42、65mg·kg-1组能显著提高鲤鱼的抗氧化防御能力,42 mg·kg-1为最佳添加量。20 mg·kg-1组,除肝胰脏、肾脏GSH-Px活性显著升高,肝胰脏内抑制羟自由基能力显著降低外,其它均无明显变化。42 mg·kg-1组,肝胰脏、肾脏抑制羟自由基能力、CAT、MAO活性、肾MDA含量、肝胰脏SOD活性、抗超氧阴离子自由基能力均显著降低,而肾SOD活力显著升高。65 mg·kg-1组,肝胰脏、肾脏抑制羟自由基能力、CAT、MAO活性、肾MDA含量及肝胰脏抗超氧阴离子自由基能力、SOD、GSH-Px活性均显著降低,肾SOD、GSH-Px活性却显著升高。此外,肝胰脏比肾脏对硝酸铈更趋敏感。由此可见,饲料中适当添加稀土元素铈能提高鱼的抗氧化防御能力。本研究结果为稀土元素在饮料添加中的合理应用及相关研究提供了参考。

底泥汞含量对鱼类红细胞微核影响研究

本文研究了底泥ＨｇＣｌ２累积量对鲤、鲫鱼红细胞微核率的影响。结果表明，水体底泥汞污染可引起鱼类血液红细胞微核率的上升，并呈现出较明显的剂量和时间效应。其回归方程分别为：鲤鱼ｙ１＝３．７９３８＋１．３２３６ｌｎｘ（ｒ＝０．９７１０＊＊）；鲫鱼，ｙ２＝４．４４４８＋１．４８７ｌｎｘ（ｒ＝０．９８７４＊＊）。