Experiment study of effect of Valeriana officinalis var. latifolia on expression of C-Fos,C-Jun in hippocampus zone after focal cerebral ischemia

AIM: To study influence of Valeriana officinalis var. latifolia(VOL) on expression of C Fos,C Jun after focal cerebral ischemia. METHODS: Inducing rat model of reversible middle cerebral artery occlusion(MCAO)using Koizumi’s intraluminal suture occlusion method.48 male rats were divided into 5 groups randomly, pseudo operation group, MCAO group, saline control group,VOL group.2 hours after MCAO, we took gastric gavage with VOL and saline, 8 hour per time, and took out of brain to test C Fos,C Jun expression immunohistochemically at the 5th day after operation.RESULTS: There was no positive cell in each hippocampus zone of normal group;we observed C Fos, C Jun positive cells in each Hippocampus zone after MCAO;Density of C Fos,C Jun positive cells of VOL group were apparently lower than that of simple ischemia group. CONCLUSION: VOL can relieve histopathological lesions after cerebral ischemia and promote protection function of rat through inhibiting the expression of C Fos,C Jun expression.

巴戟天配伍维生素C对大鼠运动性肾脏缺血再灌注的保护作用

本文对巴戟天配伍维生素C对大鼠运动性肾缺血再灌注损伤的保护作用及机制进行了研究。试验中对大鼠以1 g/kg剂量的巴戟天灌胃,100 mg/kg剂量的维生素C腹腔注射56 d,并进行力竭游泳训练及血尿素氮等生化指标测定。结果显示,8周的过度训练导致大鼠运动性肾缺血"再灌注",肾组织组织病理学发生明显改变,肾功能受到严重损坏。血尿素氮和血清肌酐各组较对照组明显上升,与OM组相比MOM组、VCOM组、MVCOM组明显下降(分别为P<0.05、P<0.05、P<0.01);与VCOM组相比,MOM组、MVCOM组明显下降(分别为P<0.05、P<0.01)。SOD活性各组较对照组明显降低,与OM组相比MOM组、VCOM组、MVCOM组明显上升(分别为P<0.05、P<0.05、P<0.01);与VCOM组相比,MOM组、MVCOM组明显上升(分别为P<0.05、P<0.01)。MDA含量各组较对照组明显升高,与OM组相比MOM组、VCOM组、MVCOM组明显下降(分别为P<0.05、P<0.05、P<0.01);与VCOM组相比,MOM组、MVCOM组明显降低(分别为P<0.05、P<0.01)。从而说明巴戟天和维生素C均可以增强SOD活性,清除氧自由基,减轻脂质过氧化作用,对运动性缺血再灌注肾脏具有保护作用。巴戟天作用优于维生素C。二者配伍使用效果更好。

山茱萸环烯醚萜苷类成分对AGEs诱导HUVEC损伤的保护作用

目的探讨山茱萸环烯醚萜苷类特征成分马钱苷、莫诺苷对糖基化终末产物（AGES）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）损伤的保护作用.方法体外培养HUVEC,用马钱苷、莫诺苷（终浓度分别为100、10、μmol·L^-1）预孵1h后,再加人AGE/（200mg·L^-1）刺激,并设氨基胍为阳性对照,孵育24h后,采用MTT法检测马钱苷、莫诺苷对HUVEC增殖率的影响;采用试剂盒检测细胞上清液中-氧化氮（NO）、内皮素（ET-1）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）;采用Westernblot法检测HU-VEC中糖基化终末产物受体（RAGE）、核转录因子（NF-kB）的蛋白表达.结果山茱萸环烯醚萜苷类特征成分马钱苷、莫诺苷能抑制AGEs导致的HUVEC损伤,与空白对照组比较,模型组细胞RAGE、NF-kB蛋白表达上调（/3〈0.01）,ET-1、MCP-1、VCAM-1分泌增加（P〈0.01）,NO水平降低（P〈0.01）.马钱苷、莫诺苷给药组能不同程度地下调RAGE、NF-kB蛋白表达,减少ET-1、MCP-1、VCAM-1分泌,升高NO水平,与模型组比较差异具有显著性（P〈0.05-0.01）.结论山茱萸环烯醚萜苷类特征成分马钱苷、莫诺苷对AGEs导致的HUVEC损伤具有明显的保护作用,其作用机制为下调RAGE蛋白表达,抑制RAGE受体相关NF-κB信号通路发挥抗炎作用,从而改善内皮细胞功能.

马鞭草C部位诱导人绒毛膜癌JAR细胞凋亡分子机制研究

目的:探讨马鞭草C部位诱导人绒毛膜癌JAR细胞凋亡的分子机制。方法:流式细胞仪检测细胞周期;Western-blot及RT-PCR检测Fas/Fasl蛋白及基因的表达。结果:药物作用后细胞被不同程度阻滞于G2/M期,并伴有G0/G1期比例下降;Fasl蛋白表达降低,Fas在C部位作用前后均无表达;FaslmRNA转录呈下降趋势。结论:马鞭草C部位将人绒毛膜癌JAR细胞阻滞在G2/M期,并诱导其凋亡,其作用机制可能与Fasl的表达下调有关。

A New Neogregarine Entomopathogen from Crioceris asparagi （Linne, 1758） in Turkey

In present study, a neogregarine from Crioceris asparagi is reported for the first time in Turkey. C. asparagi （common asparagus beetle） is an important pest of Asparagus officinalis L. crops in Turkey and the world. Therefore, determining of the protist pathogens of C. asparagi is aimed. During the study, a total of 1,099 C. asparagi adults were examined thoroughly using a light microscope. Insects were collected from the provinces of Manisa, Eskisehir and Bahkesir in Turkey, with 117 of them collected from Manisa, 204 of them from Bahkesir and 778 of them from Eskisehir. A neogregarine pathogen was found in Bahkesir and Manisa. Total infection rate was 18% for Bahkesir between the years 2014-2015 and 15.3% for Manisa in 2011. Oocysts of the neogregarine pathogen were observed only in malpighian tubes of C. asparagi adults. Fresh mature oocysts of the neogregarine was measured as 9.34 ± 0.74 lam （n = 50） in length and 5.27 ± 0.36 μm （n = 50） in width. Identification of entomopathogens is prerequisite for their use in biological control.

Three unprecedented biphenyl derivatives bearing C6-C3 carbon skeleton from the bark of Magnolia officinalis var.biloba

(+)-Magoilgomer A[(±)-1]and magoilgomer B(2)were identified from the bark of Magnolia officinalis var.biloba.(+)-1 and(-)-1 were a pair of novel biphenyl derivatives featuring three C6-C3 subunits.2 was an unprecedented adduct containing magnolol and honokiol.These three oligomers possessed new parallel mode which should be biosynthesized from the coupling of three or four C6-C3 subunits.The structures of(±)-1 and 2 were elucidated based on the spectroscopic data analyses and electronic circular dichroism(ECD)calculations.2 exhibited neuroprotective effects of oxygen glucose deprivation-induced SK-N-SH cell injury.

Estimation of Nuclear DNA Content in Tannin-rich Medicinal Plant Cornus officinalis by Flow Cytometry

Objective The amount of nuclear DNA（C-value）is a key biodiversity character that provides strong unifying elements in revealing the phylogenetic regularity and relationship between genome size and functional traits for plant resource.The estimation of C-values could primarily extend our knowledge on the genetic background and genome diversity for medicinal plants,and thereby the variation of pharmacological constituents and phylogenetic mechanism of medicinal plant taxa will be revealed.However,a large number of medicinal plants（e.g.Cornus officinalis）typically contain a series of secondary metabolites,especially tannic acid,which would significantly affect the estimation of DNA content by flow cytometry（FCM）.Methodological discussions and improvement need to be made to solve this problem.Methods Two isolation buffers LB01 and Otto 1 were selected to prepare nuclear suspension with additional treatments of pre-soaking and centrifugation combination of gradient centrifugal force and duration.The best isolation and estimation methods were determined by FCM measurement in C.officinalis.Results The dry leaves were pre-soaked in Otto I buffer for 15 min and the Otto I nuclear suspension was centrifugated at 1.0×103 g for 2 min.The results showed that debris and nuclei were better separated and the scatterplots of good quality were obtained with low coefficient of variation（CV）.Contrarily,the nuclear DNA content of C.officinalis could not be accurately estimated for nuclei extracted by LB01 buffer.Finally,2C-value and genome size of C.officinalis were first estimated as 5.92 pg and 2893 Mbp,respectively.Conclusion The new methods proposed here are able to accurately estimate DNA content of C.officinalis,which provides valuable references for the estimation of genome size in other tannin-rich medicinal plants.

发汗前后厚朴对IBS-C大鼠肠道菌群分布及5-HT、SP水平的影响

目的:研究发汗前后厚朴对便秘型肠易激综合征(IBS-C)大鼠的作用机制。方法:采用冰水灌胃法建立IBS-C大鼠模型。将大鼠随机分为空白组、模型组、莫沙必利组(1 mg·kg^(-1))、未发汗厚朴组(以下简称“厚朴组”,10 g·kg^(-1))及发汗厚朴组(10 g·kg^(-1))。观察大鼠体质量、粪便含水量、粪便数量变化;采用16S rRNA测序检测大鼠粪便肠道菌群的结构变化;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定大鼠结肠组织中5-羟色胺(5-HT)及P物质(SP)水平。结果:与模型组比较,给药后莫沙必利组、厚朴组、发汗厚朴组的粪便含水量和粪便数量明显升高(P<0.05)。16S rRNA测序结果显示,菌群门水平丰度前4种分别为厚壁菌门、拟杆菌门、螺旋体门、变形菌门,与空白组比较,模型组厚壁菌门相对丰度明显降低(P<0.05),螺旋体门相对丰度明显增加(P<0.05);与模型组比较,厚朴组及发汗厚朴组的厚壁菌门、螺旋体门比例趋近于空白组,且发汗厚朴组螺旋体门相对丰度低于厚朴组;在科水平上,菌群丰度前4种分别为乳酸菌科、S24_7、瘤胃球菌科、拟杆菌科,与空白组比较,模型组的乳酸菌科相对丰度明显降低(P<0.05),模型大鼠给药后厚朴组和发汗厚朴组的乳酸菌科相对丰度明显提高(P<0.05),且两组大鼠菌群结构趋近于空白组;在属水平上,菌群丰度前4种分别为乳酸菌属、Unspecified_S24_7、拟杆菌属、密螺旋体属,与空白组比较,模型组的乳酸菌属相对丰度明显降低(P<0.05),密螺旋体属的相对丰度则明显增加(P<0.05);与模型组比较,厚朴组与发汗厚朴组乳酸菌属和密螺旋体属菌群结构比例趋近于空白组,说明发汗前后厚朴均可恢复IBS-C大鼠肠道菌群结构。药理实验结果显示,与模型组比较,莫沙必利组的5-HT含量明显降低(P<0.05),厚朴组与发汗厚朴组的5-HT和SP含量均显著升高(P<0.01),且发汗厚朴组高于厚朴组。结论:发汗前后厚朴均可通过改善肠道菌群结构、调节5-HT和SP含量治疗IBS-C。

高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱分析紫甘蓝和羽衣甘蓝中花色苷

应用高效液相色谱-电喷雾/四极杆飞行时间串联质谱联用技术分析了紫甘蓝和羽衣甘蓝中的花色苷成分。选用Agilent TC-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm×5 mm),二元线性梯度洗脱,柱后流出液采用电喷雾四极杆飞行时间质谱的正、负离子模式进行检测。根据一级质谱的分子离子和二级质谱碎片离子,获得化合物的准确分子量信息,与相关文献报道进行比较,分别从紫甘蓝和羽衣甘蓝中分离并检测到了16种和17种花色苷,且从紫甘蓝和羽衣甘蓝中发现了锦葵-3-(p-香豆酰基)-芸香苷。本方法快速、准确,无需标准品。

山茱萸环烯醚萜总苷对2型糖尿病心脏病变大鼠胰岛素抵抗及血脂含量的影响

目的:观察山茱萸环烯醚萜总苷(ICO)对2型糖尿病心脏病变大鼠胰岛素抵抗及血脂含量的影响。方法:大鼠以高脂饲养结合STZ腹腔注射造模,2周后灌胃给予ICO(0.1,0.2g/kg)或氨基胍(AG,0.1g/kg)治疗,连续16周。检测体重、空腹血糖、血清Ins、Ins-Ab、CHOL、TG、HDL-C及LDL-C含量;分离心脏进行形态学观察。结果:模型组大鼠体重、血糖、Ins-Ab、IR、CHOL、TG、LDL-C明显升高,Ins水平显著降低;光镜检查显示心肌肥大伴程度不等的间质水肿和组织细胞增生,心内膜或心包膜有轻度炎症及纤维化。ICO及AG组大鼠体重、血糖、Ins-Ab、IR、CHOL、TG、LDL-C均明显降低,心肌肥大程度减轻。结论:ICO对2型糖尿病心脏病变有一定的保护作用。

巴戟天含药血清对成骨-破骨细胞共育体系原癌基因、核心结合因子1mRNA表达的影响

目的观察不同浓度巴戟天含药血清对体外培养成骨-破骨细胞共育体系中原癌基因(C-FOS)、核心结合因子(Cbfa)1 mRNA表达的影响。方法提取24 h内新生SD乳鼠颅盖骨分离培养成骨细胞,采用5周龄SD大鼠双侧股骨、胫骨的骨髓基质细胞,加入集落细胞刺激因子(M-CSF)和细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导培养破骨细胞。采用碱性磷酸酶(ALP)染色鉴定成骨细胞,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、骨吸收陷窝甲苯胺蓝染色、电镜扫描等鉴定破骨细胞,体外建立成骨-破骨细胞共育体系,设置低、中、高三种浓度巴戟天含药血清组和不含药血清组,干预3 d后提取各组总RNA,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定各组C-FOS、Cbfa1 mRNA表达量。结果不同浓度巴戟天含药大鼠血清对成骨-破骨细胞共育体系C-FOS有抑制作用,对Cbfa1 mRNA的表达有促进作用。高浓度含药血清组两者的表达差异显著(P<0.05,P<0.000 1)。结论巴戟天含药血清可抑制成骨-破骨细胞共育体系C-FOS的表达,促进Cbfa1 mRNA的表达,从而达到降低破骨细胞分化成熟及骨吸收活性,促进骨形成。

RP-HPLC法测定保肝丸中五味子甲、乙、丙素及熊果酸

目的 建立RP-HPLC法测定保肝丸中五味子甲、乙、丙素及熊果酸的量,对保肝丸的制剂质量提供保障。方法 采用ZORBAX SB-C_（18）（150 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液（67：33）,体积流量1.0mL/min;紫外检测波长为210 nm;柱温30℃;进样量10μL。结果 五味子甲、乙、丙素及熊果酸的最低检测质量浓度分别为0.016、0.019、0.020、0.025 mg/L,线性范围分别为3.906-250.000、5.323-340.000、3.225-205.000、5.323-340.000 mg/L。供试样品中五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素及熊果酸的平均回收率分别为100.79%、101.09%、101.26%、101.16%;精密度RSD分别为1.76%、1.69%、1.80%、1.86%;重复性试验RSD分别为1.77%、1.66%、1.49%、1.56%;稳定性试验分别为1.61%、1.39%、1.60%、1.56%。保肝丸（0.560 mg）含五味子甲、乙、丙素及熊果酸平均量分别为0.444、1.066、0.3125、1.068μg/丸。结论 该方法简便、灵敏度高、重复性好、回收率高,是检测五味子甲、乙、丙素及熊果酸质量浓度的可信方法。

密蒙花皂甙丙的结构

密蒙花（ＢｕｄｄｌｅｊａｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓＭａｘｉｍ）具有抗炎作用（江苏新医学院编，１９７７），民间用作染饭植物。继从密蒙花中分离鉴定了其色素成分藏红花甙（ｃｒｏｃｉｎ）和黄酮类成分芹菜甙元（ａｐｉｇｅｎｉｎ）、蒙花甙（ｌｉｎａｒｉｎ）及甘露醇（...

山茱萸总苷提取工艺研究

[目的]研究山茱萸中山茱萸总苷的最佳提取工艺。[方法]以四川产山茱萸鲜果为材料提取山茱萸总苷,采用单因素和正交试验优选提取工艺,并进行验证试验。[结果]50%乙醇是山茱萸总苷的最佳提取溶剂。当料液比为1∶4时,提取液中总苷的含量最大。随着提取时间的延长,山茱萸总苷的含量逐渐增加,2～6h增幅最大,时间再延长,总苷含量没有明显增加。随着提取次数的增加,总苷含量呈上升趋势,但提取3次后,所得固形物很少。提取次数对山茱萸总苷含量的影响最显著,然后是料液比、提取时间。[结论]山茱萸中山茱萸总苷的最佳提取工艺是50%乙醇提取,料液比1∶3,提取6h,提取3次,总苷含量达10.016mg/ml,RSD为2.52%。该研究为山茱萸总苷的进一步研究奠定了基础。

HPLC特征指纹图谱结合化学计量学比较川牛膝及其混淆品、掺混品化学成分差异

川牛膝的主要混淆品为同属植物头花杯苋的根,研究报道其在性味和药理活性上存有明显差异,仅可作为地方习惯用药,不得代替川牛膝入药。但因头花杯苋外观形态上与川牛膝十分相似,且杯苋甾酮含量也能达到现行药典限量,导致市场上多以冒充或掺混形式出售,这严重地影响了川牛膝的临床用药安全和道地药材开发。鉴于此,该文采用HPLC特征指纹图谱技术试图揭示川牛膝、混淆品头花杯苋、掺混川牛膝在多组分下的化学特征成分差异,以期为川牛膝区别用药和真伪鉴别提供有力支撑。通过测得川牛膝及其混淆品、掺混品色谱图,得出65个不同组分,以建立26×65的峰面积数据矩阵,并进行特征峰差异分析、相似度分析、聚类分析和主成分分析。特征峰差异分析得出头花杯苋及其掺混品特征峰较川牛膝多且响应值高,筛选出的9个特征峰用以鉴别伪品头花杯苋,其中2个可用以鉴别出掺混5%川牛膝,且9个特征峰的光谱图大多类似于皂苷类成分的末端吸收光谱图,表明头花杯苋可能含有大量皂苷类成分。以建立的川牛膝特征指纹图谱为参照,相似度分析得出川牛膝相似度均大于0.942,而头花杯苋、掺混川牛膝相似度分别小于0.383,0.399。聚类分析树状图和主成分得分三维图均能将川牛膝、头花杯苋、掺混川牛膝明显的分为3类。以上研究结果均表明川牛膝、头花杯苋、掺混川牛膝在化学组分上表现出明显的差异,当区别用药,不可混淆。

基于核磁共振技术比较四川产厚朴根皮与干皮水提冻干粉的化学成分

目的:基于核磁共振技术比较四川产厚朴根皮与干皮水提冻干粉的化学成分。方法:对四川产厚朴根皮与干皮水提冻干粉进行红外吸收光谱(IR)、紫外吸收光谱(UV)及核磁共振(NMR)波谱(包括^(1)H NMR、^(13)C NMR、^(1)H-^(1)H COSY、^(1)H-^(13)C HSQC)进行测定。结果:分析其UV和IR谱图特征吸收峰对应的基团,并对其^(1)H NMR和^(13)CNMR信号进行了归属,分析了其化学成分。结论:该研究将为厚朴的其它相关研究提供参考。

胆木叶生物碱类成分研究

为了研究胆木叶中的化学成分,采用硅胶、Sephadex LH-20、反相键合硅胶柱色谱等方法从胆木叶的95%乙醇提取物中分离得到8个生物碱类化合物,并通过NMR、MS等波谱技术鉴定了化合物的结构,分别为naucleactonin C(1)、strictosamide(2)、vincosamide(3)、pumiloside(4)、angustoline(5)、angustine(6)、18,19-dihydroangustine(7)和naucleofficine D(8)。化合物1为一新的吲哚类生物碱,化合物6和7为首次从该植物中分离得到。

地榆水溶性化学成分研究(Ⅱ)

目的研究地榆Sanguisorba officinalis水溶性化学成分。方法采用大孔树脂(D101、HP-20)、透析袋、Toyopearl HW-40、反相硅胶RP18等柱色谱方法进行分离纯化,并运用1H-NMR、13C-NMR、ESI-MS等多种波谱方法对化合物进行结构鉴定。结果从地榆10%乙醇部位中分离并鉴定了25个化合物,分别为4-(4′-hydroxyphenyl)-2-butanone-4′-O-β-Dglucopyranoside(1)、phenethanol-β-vicianoside(2)、junipetrioloside A(3)、citroside A(4)、corchoionoside C(5)、adenosine(6)、tryptophan(7)、tachinoside(8)、d-mandelicacid-β-D-glucopyranoside(9)、(+)-(7S,8S)-guaiacylglycerol8-O-β-Dglucopyranoside(10)、biophenol(11)、3,5-dihydroxyphenethyl alcohol 3-O-β-glucopyranoside(12)、syringin(13)、(2E,5E)-3,7-dimethyl-2,5-octadiene-1,7-diol(14)、(±)-3-hydroxy-3,7-dimethyloct-6-enoic acid(15)、(2Z)-2,6-dimethyl-2,7-octadiene-1,6-diol(16)、phlorizin(17)、(+)-cyclo-olivil-6-O-β-D-glucopyranoside(18)、5′-methoxy-8′-hydroxyl-(+)-isolariciresinol-4′-O-β-Dglucopyranoside(19)、phenethyl-6-O-α-L-arabinofuranosyl-β-D-glucoside(20)、gaultherin(21)、benzyl-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside (22)、(2E)-7-hydroxy-3,7-dimethyl-2-octenyl-6-O-α-L-arabinofuranosyl-β-D-glucopyranoside (23)、3,3′,4′-tri-O-methylellagic acid(24)、methyl-4-(β-D-glucopyranosyloxy)-3-hydroxy-5-methoxybenzoate(25)。结论化合物1~22为首次从该植物中分离得到。

地榆总皂苷对巨核祖细胞增殖分化及相关受体表达的影响

目的:观察地榆总皂苷(DYS)对Baf3细胞和32D细胞的促增殖和分化作用,以及对IL-3受体和干细胞因子受体c-kit表达水平的影响。方法:培养依赖IL-3生长的Baf3细胞和32D细胞,在加或不加IL-3条件下,用质量浓度为5,10,20,30,40 mg·L-1的DYS分别处理细胞24,48,72,96 h后,采用CCK8方法检测细胞增殖;并用Giemsa染色检测细胞分化;另以RT-PCR方法检测DYS对Baf3细胞IL-3受体及对32D细胞c-kit表达水平的影响。结果:DYS单独处理细胞48 h,明显促进Baf3细胞和32D细胞增殖;与对照细胞比较,DYS处理32D细胞呈现成簇生长并形成许多大的细胞团;在加入IL-3的条件下,DYS也能明显增强IL-3的促细胞增殖作用。此外,DYS高浓度单独处理32D细胞可明显诱导多倍体巨核细胞数增加,促进巨核细胞分化。在mRNA水平,DYS单独处理细胞也能明显上调IL-3受体和c-kit的表达。结论:地榆总皂苷单独作用能促使2种巨核祖细胞的增殖和分化,其作用与上调IL-3受体和c-kit表达水平有关。

山茱萸果核提取液对大鼠离体胸主动脉环的影响

目的:研究山茱萸果核提取液对大鼠离体胸主动脉血管环的影响。方法:采用离体灌流法,经生物信号记录系统,观察山茱萸果核提取液对大鼠离体胸主动脉的舒张作用;测定在L精氨酸(L-Arg)、苯肾上腺素(PE)作用下,山茱萸果核提取液对大鼠离体胸主动脉血管环张力的作用。结果:山茱萸果核提取液可明显舒张血管环,且能拮抗PE对血管环的收缩效应,而与NO供体L-Arg具有协同效应。结论:山茱萸果核提取液对血管环具有明显的直接舒张作用,该机制可能与α肾上腺素受体和NO有关。