HIV-1 SF2株env基因C1与C3区的嵌合表达

①目的 构建HIV 1SF2株env基因C1与C3区嵌合片段的克隆并在大肠杆菌中表达。②方法用DNAstar软件辅助设计引物 ,以含有HIV 1SF2株前病毒基因组的 9B1R6质粒为模板 ,PCR法分别扩增出env基因C1和C3段 ;两个片段经KpnⅠ酶切、T4连接酶连接和扩增后 ,再将经EcoRⅠ、SalⅠ双酶切的嵌合片段插入表达载体 pGEX 4T 2中 ,构建重组表达质粒 pGEX 4T 2 /C1C3;重组质粒经酶切、测序鉴定后 ,以TSS法转入大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达融合蛋白和SDS PAGE电泳分析表达蛋白图谱。③结果 经酶切和测序分析 ,插入片段大小、方向和读码框架正确 ,无碱基错配 ,表明成功构建 pGEX 4T 2 /C1C3克隆 ;重组克隆在大肠杆菌DH5α中经IPTG诱导 ,高效表达出相对分子质量为 4 .3万的融合蛋白。④结论 重组质粒 pGEX 4T 2 /C1C3的构建和表达成功 ,为进一步研究该表达蛋白的活性和HIV疫苗的研制奠定了基础。

丙型肝炎病毒C+E1区基因在原核细胞中的克隆与表达

将丙型肝炎病毒Ｃ＋Ｅ１区基因插入到原核高效表达载体ｐＢＶ２２１质粒中，构建了质粒ｐＢＶ２２１ＨＣＶ／Ｃ＋Ｅ１作为表达载体，然后，将含有该质粒的宿主大肠杆菌进行升温诱导表达ＨＣＶ／Ｃ＋Ｅ１区基因，并对表达产物进行了生物活性的检测。结果表明，插入到表达载体ｐＢＶ２２１中的ＨＣＶ／Ｃ＋Ｅ１基因片段能够得到有效的表达，表达产物主要为非融合蛋白形式存在于细胞中。

TRX1与JAB1在急性髓系白血病中的表达及其相关性

目的探讨硫氧还蛋白1(TRX1)和c-Jun激活区结合蛋白1(JAB1)在白血病各组中的表达,及TRX1水平在急性髓系白血病(AML)各组中的表达及其临床意义。方法应用RT-PCR及Western blot的方法对白血病患者TRX1和JAB1的表达进行检测,比较各组之间的差异;进一步分析AML患者其基因表达阳性率与外周血白细胞计数的关系,并采用ELISA方法检测以上血清样本的TRX1水平。结果在白血病患者中TRX1和JAB1基因和蛋白表达明显高于对照组(P<0.05),相关分析显示AML初发和复发病例中TRX1和JAB1表达相关程度高,而且高表达的TRX1和JAB1与外周血白细胞计数有关(P<0.05);ELISA检测外周血TRX1在AML的复发组高于初发组和对照组,初发组高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 TRX1和JAB1之间呈正向关联,与AML的发生及病情进展有密切关系。

抗人凝血因子Ⅷ-C1C2区单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备抗人凝血因子Ⅷ(FⅧ)C1C2区单克隆抗体(mAb),并对其进行生化和生物学鉴定。方法采用基因重组技术表达FⅧ-C1C2区蛋白(rFⅧ-C1C2),以rFⅧ-C1C2免疫8周龄Balb/C小鼠,小鼠脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合后,ELISA法筛选阳性克隆,制备稳定分泌抗rFⅧ-C1C2mAb的细胞株,并对mAb进行生化和免疫学鉴定。结果获得一株抗rFⅧ-C1C2区单克隆抗体阳性克隆2B11,命名为SZ-133。琼脂糖双扩散鉴定为IgG1类,Westernblot法证实SZ-133可与rFⅧ-C1C2区蛋白及重组的全长FⅧ特异性结合,但不影响FⅧ的凝血活性。结论表达了rFⅧ-C1C2,并制备出了抗人凝血因子Ⅷ的单克隆抗体SZ-133,它能特异识别血浆及重组的FⅧ,有可能用于基础和临床应用研究。