尼曼匹克C1样蛋白1及其与胆囊胆固醇结石形成关系的研究进展

脂质代谢异常与胆固醇结石病、动脉粥样硬化、冠心病等疾病发生关系密切。尼曼匹克C1样蛋白1（Niemann Pick C1 like 1,NPC1L1）是小肠参与胆固醇摄取的重要蛋白质[1],自其被发现以来,一直是研究和临床关注的热点。本文对NPC1L1蛋白及其基因多态性研究的最新成果作一综述,并对其在相关疾病治疗中的作用作一展望。

NPC1L1基因-762T>C多态性与启动子活性的研究

目的:研究尼曼匹克C1样1(Niemann Pick C1 like 1,NPC1L1)基因启动子-762T>C多态性的活性差异及药物对其的调节作用。方法:分别构建含NPC1L1基因-762T>C多态性的T/C等位基因启动子荧光酶报告基因,测定启动子活性以及不同药物处理后启动子活性的改变。结果:含T或C等位基因的NPC1L1基因启动子活性无统计学差异(P>0.05)。外源性胆固醇和依泽麦布均在高浓度抑制两种启动子活性,辛伐他汀则增强两种启动子活性(P<0.05),但两种基因型启动子之间对药物依泽麦布和辛伐他汀的反应无统计学差异(P>0.05)。结论:胆固醇和依泽麦布能抑制NPC1L1转录活性活性,辛伐他汀则增强NPC1L1转录活性,而-762T>C多态性不影响启动子活性及药物反应。

新疆维吾尔族ABCG8和NPC1L1基因多态性与胆囊结石病的关系

目的:研究新疆维吾尔族ATP结合盒G8(ABCG8)基因和尼曼-匹克C1样1蛋白(NPC1L1)基因单核苷酸多态性与胆囊结石病的关系。方法:采集43例新疆维吾尔族胆囊结石病人和96例无胆结石对照病人的外周静脉血,提取基因组DNA。用实时定量PCR的等位基因分型法确定ABCG8基因T400K、Y54C、D19H和NPC1L1基因-762 T>C、1679 C>G的基因型。结果:在所有病人中,NPC1L1基因1679 G在胆石组与对照组中的分布无统计学差异(32.6%比26.6%,P=0.306);但在女性胆石组中,1679 G频率明显高于对照组(36.7%比19.4%,P<0.05)。NPC1L1基因-762 T>C位点以及ABCG8基因3个位点在两组间的分布无差异。结论:携带NPC1L1基因1679 G等位基因可能与新疆维吾尔族女性胆石病发病存在相关性。

参苓白术散通过“肠-肝”轴影响胆囊胆固醇结石形成的机制探究

目的:以“肠-肝”轴为切入点,观察参苓白术散对豚鼠胆固醇结石形成相关途径的影响,探究参苓白术散对胆固醇结石的治疗机制。方法:选取雄性SD豚鼠60只,随机均分为6组,对照组予普通饲料,其余50只豚鼠予高脂饲料,建立胆固醇结石模型。建模成功后随机分为5组,每组10只,分别为模型组(等量高脂饮食喂养)、参苓白术散高、中、低剂量组(17、5、0.85 g/kg)、依折麦布组(1mg/kg)灌胃给药2个月。生化法和酶比色法测定各豚鼠血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG);用酶显色法测定胆汁中胆汁酸、胆固醇;在甲醛溶液固定后采用苏木素-伊红(HE)染色,光镜下观察肝组织形态学的变化;光镜下观察胆固醇结晶;酶联免疫吸附法(ELISA法)检测豚鼠肝组织中胆囊收缩素(CCK)、B1型清道夫受体(SRB1)以及小肠组织Niemann-Pick C1样蛋白1(NPC1L1)表达水平。结果:成功建立高脂血症模型。相比对照组,模型组表现为肝脏显著脂肪变,胆汁内胆固醇浓度增高(P<0.01),并由肉眼可见胆固醇结石或结晶出现,血液血脂水平异常(P<0.01),豚鼠肝组织中CCK、SRB1及小肠组织NPC1L1表达水平也升高(P<0.01);与模型组比较,参苓白术散中、高剂量组的胆汁总胆固醇、总胆汁酸、血脂水平明显降低,肝组织中CCK升高,肝组织中SRB1和小肠组织NPC1L1的表达水平均下降,其中高剂量组效果最明显(P<0.01)。结论:参苓白术散通过降低小肠对胆固醇吸收、降低胆汁中胆固醇水平、促进胆囊运动来降低胆囊胆固醇结石形成的风险,其机制可能与降低小肠组织NPC1L1表达,提高肝组织中SRB1、CCK表达有关。

小肠吸收胆固醇的分子生物学研究进展

胆固醇通过分布于十二指肠和近段空肠黏膜上皮细胞刷状缘膜的Niemann—Pick C1样蛋白1摄取，ATP结合盒G5、G8抑制小肠对胆固醇的摄取过程。进入上皮细胞的胆固醇大多数被乙酰辅酶A，胆固醇转乙酰基酶2酯化，随后通过组装形成乳糜微粒，经淋巴管进入血循环；另一部分胆固醇则以未酯化形式直接进入血循环形成高密度脂蛋白颗粒。这些过程受核受体——肝脏X受体的调控。年龄、性别、黏膜屏障和小肠传输速度也影响胆固醇的吸收。

龙胆泻肝汤对胆囊胆固醇结石小鼠胆固醇代谢的影响

目的:通过小鼠胆固醇代谢中密切相关基因尼曼-匹克C1样蛋白(NPC1L1)、腺苷三磷酸结合盒转运蛋白(ABC)G5、ABCG8的表达变化,探讨龙胆泻肝汤对胆囊胆固醇结石(CS)小鼠胆固醇代谢的影响。方法:将32只雄性C57BL/6J小鼠随机分为空白组12只,造模组20只,采用胆固醇致石饲料诱导法塑造CS小鼠模型,8周后,两组各随机取4只小鼠取材查看胆囊结石情况。造模成功后,造模组随机分为模型组(8只)和龙胆泻肝汤组(8只),龙胆泻肝汤组予龙胆泻肝汤13.8g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,空白组和模型组给予等量0.9%氯化钠溶液灌胃,干预4周。HE染色观察各组小鼠肝脏与小肠的组织形态;ELISA检测血清胆固醇(TC)与甘油三酯(TG)、胆汁TC与胆汁酸(TBA)含量;q-PCR及Western Blot分别检测小鼠肝脏和小肠组织中NPC1L1、ABCG5/ABCG8 mRNA与蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组小鼠血清TC、TG和胆汁TC、TBA均显著升高(P<0.01,P<0.05);模型组小肠NPC1L1mRNA与蛋白表达显著上调(P<0.01),ABCG5/G8mRNA与蛋白表达显著下调(P<0.01);肝组织中NPC1L1mRNA与蛋白表达均显著下调(P<0.01),而ABCG5/G8mRNA与蛋白表达均显著上调(P<0.01)。与模型组比较,龙胆泻肝汤组小鼠肝和小肠组织病理形态均明显改善;龙胆泻肝汤组血清中TC、TG和胆汁中TC、TBA显著降低(P<0.01,P<0.05);龙胆泻肝汤组小肠NPC1L1mRNA和蛋白表达显著下调(P<0.01,P<0.05),小肠ABCG5/G8mRNA和蛋白表达均显著上调(P<0.01,P<0.05);肝NPC1L1 mRNA和蛋白表达显著上调(P<0.01),肝ABCG5/G8mRNA和蛋白表达显著下调(P<0.05,P<0.01)。结论:龙胆泻肝汤能够改善CS模型小鼠胆固醇代谢异常,肠、肝组织NPC1L1、ABCG5/G8表达异常引起胆固醇过饱和可能是CS湿热蕴结的分子生物学基础之一。