新烯二炔类大分子抗肿瘤抗生素C1027的分子构成与活性关系

Ｃ１０２７是含烯二炔发色团的大分子肽类新抗肿瘤抗生素，由一个蛋白和一个烯二炔发色团两部分构成。后者是活性部分，对肿瘤细胞有强杀伤作用，蛋白对发色团的活性有保护作用。蛋白和发色团在一定条件下可以重新组建成完整的Ｃ１０２７。Ｃ１０２７分子内的二硫键有辅助蛋白保护发色团的作用，当二硫键被还原后，Ｃ１０２７活性丢失加快。Ｃ１０２７被链霉蛋白酶降解产生一个分子量为３～５ｋＤａ的中间产物，此产物对肿瘤细胞的杀伤作用与完整Ｃ１０２７相同，表明Ｃ１０２７是可以裁剪的，保护发色团的最小肽段为３～５ｋＤａ。

烯二炔类新抗生素C1027的抗肿瘤作用研究

从我国湖北潜江县土壤分离的一株链霉菌产生的Ｃ１０２７是大分子肽类抗生素，其发色基团是新的烯二炔化合物。研究表明，抗生素Ｃ１０２７对肿瘤细胞有强烈杀伤作用。Ｃ１０２７在精原细胞法检测中显示高度活性，比阿霉素、丝裂霉素Ｃ等强５００倍。由发色基团和蛋白质两部分构成的Ｃ１０２７分子可以拆分与重建；而重建的Ｃ１０２７分子同样具有很强的活性。在可耐受剂量，Ｃ１０２７对移植性小鼠结肠癌２６以及对移植于裸鼠的人体肝癌和盲肠癌均有显著的疗效。

抗肿瘤抗生素C1027对人结肠癌HCT-8细胞凋亡相关基因表达的影响

目的：研究抗肿瘤抗生素Ｃ１０２７ 对人结肠癌ＨＣＴ８ 细胞凋亡相关基因表达的影响。方法：利用ｃＤＮＡ 排列（ｃＤＮＡａｒｒａｙｓ）、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 杂交、ＲＴＰＣＲ 检测技术。结果：用１０ ｎｍｏｌ·Ｌ－ １ Ｃ１０２７ 处理ＨＣＴ８ 细胞８ ｈ 后，利用ｃＤＮＡ 排列检测，发现Ｃ１０２７ 可以促进ＴＲＩＰ，ＴＲＡＦ３ ，ＤＲ４ ，ＭＣＨ６ ，ＭＣＨ４，Ａｐｏ３ ，ＤＲ５，ＡＢＬＬ，ＳＴＡＴ１ 等基因的表达，抑制ｒｈｏＣ的表达。用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 杂交及ＲＴＰＣＲ 也得到了同样结果。结论：Ｃ１０２７ 可能通过调节ＴＮＦ 受体家族有关的凋亡信号传导通路，诱导细胞凋亡。

烯二炔类大分子抗肿瘤抗生素C1027抗肿瘤研究进展

烯二炔类抗肿瘤抗生素 C1 0 2 7是迄今已报道的活性最强的大分子蛋白类抗肿瘤抗生素之一。本文综述了 C1 0 2 7抗肿瘤活性、分子作用机制、活性基团与活性关系以及 C1 0 2

抗癌抗生素C1027与单克隆抗体偶联物的抗肿瘤作用

抗癌抗生素C1027对癌细胞有强烈杀伤作用,比阿霉素强10000倍以上,C1027与癌细胞接触10min即显示对DNA合成的强烈抑制作用,C1027分子由发色团与蛋白质两部分构成;发色团是烯二炔新化合物,是C1027分子的主要活性部分.C1027分子可拆分与重建,重建的C1027同样有高度抗肿瘤活性.通过新的交联方法可制备C1027与单抗的强化偶联物.体外、体内试验表明.C1027单抗偶联物对肿瘤靶细胞有很强的特异性杀伤作用;对移植于探鼠的人体肝癌、胃癌有显著疗效,在可耐受剂量,肿瘤抑制率达85%(P<0.01).研究结果显示,C1027作为高效“弹头”药物,可用于研制新的小型化高效抗肿瘤导向药物.

抗癌抗生素C1027与单克隆抗体Fab片段偶联物的抗肝癌作用

抗人肝癌单克隆抗体(单抗)3A_5用木瓜蛋白酶消化得到Fab片段。单抗3A_5和Fab片段分别与抗癌抗生素C1027偶联,偶联物经克隆生成法测定对肝癌细胞有很强的杀伤作用,C1027,Fab-C1027和3;3A_5-C1027的IC_(50)分别为6.5×10^(16),8.6×10^(15)和4.2×10^(15)mol·L^(-1);Fab-C1027偶联物对非靶细胞(KB)的IC_(50)值为1.4×10^(-13)mol·L^(-1),与靶细胞(BEL-7402)的IC_(50)值相比,两者相差160倍。说明Fab-C1027的杀伤活性强于3A_5-C1027,并对靶细胞呈选择性杀伤作用。给皮下移植人肝癌的裸鼠iv剂量0.1 mg·kg^(-1),结果C1027和Fab-C1027的抑瘤率分别为59和85%,说明Fab片段与C1027偶联物比游离C1027的疗效更高。

新抗癌抗生素C1027及其单克隆抗体组装偶联物的抗肿瘤活性

C1027是链霉菌株产生的大分子肽类新抗癌抗生素,对肿瘤细胞具有显著的杀伤作用,它由一条肽链和一个发色团组成,后者是主要活性部分。本研究用甲醇拆分C1027并重新组建,重建的C1027与天然C1027活性相似;C1027的重建是特异的,肽链与发色团的结合不受BSA竟争影响。肽链不能与表阿霉素组建;单抗H16(IgG_1)不能与发色团组建。我们用不同的方法分别制备了C1027与抗人肝癌单抗H16直接偶联物和组装偶联物(单抗与肽链连接后再加入发色团);克隆形成测定,前者IC_(50)为42pmol·L^(-1),后者为5.5pmol·L^(-1);C1027与无关抗体M3组装偶联物的IC_(50)为240pmol·L^(-1)。结果表明H16-C1027组装偶联物对肝癌细胞的抑制作用比直接偶联物明显增强,并具有选择性杀伤作用。

烯二炔类大分子抗肿瘤抗生素C1027抗菌与抗肿瘤活性差异的研究

Ｃ１０２７具有极强杀伤肿瘤细胞活性，作用靶点在ＤＮＡ，但Ｃ１０２７ 的抗菌活性不强，如能了解差别出现的原因，就可进一步掌握Ｃ１０２７的抗菌作用机制，并为将来在临床上确定其应用范围打下良好基础。对Ｃ１０２７ 的抗肿瘤活性与抗菌活性的差异的初步研究结论如下：大分子Ｃ１０２７ 与小分子博莱霉素Ａ５ 相比，对肿瘤细胞抑制作用明显高于后者；对细菌的抑制作用却明显低于博莱霉素Ａ５；对支原体的抑制作用略大于博莱霉素Ａ５ 。Ｃ１０２７（１００～０．０１ｍ ｇ／Ｌ）对大肠埃希氏菌Ｂ原生质体ＤＮＡ合成几乎无抑制作用，同对大肠埃希氏菌Ｂ菌体的ＤＮＡ合成抑制作用相比，差别不大。细胞壁并非阻碍Ｃ１０２７损伤大肠埃希氏菌ＢＤＮＡ的主要因素。

单抗Fab片段与抗癌抗生素C1027偶联物对裸鼠移植人肝癌的治疗作用

抗人肝癌单抗3A5用氯化汞合木瓜蛋白酶消化,经SDS-PAGE、ELISA方法检测证实得到Fab活性片段。单抗3AS及Fab片段与抗癌抗生素C1027偶联,得到3A5-C1027和Fab-C1027偶联物。克隆生成测定对肝癌细胞具有极强的杀伤作用,C1027、3A5-C1027和Fab-C1027的IC50值分别为6.5 x10^(-16)、4.2×10^(-14)M和8.6×10^(-16) M。 Fab-C1027对人咽上皮癌细胞与靶细胞的杀伤活性相比,两者相差32倍,呈选择性杀伤作用。观察C1027、Fab-C1027对移植人肝癌裸鼠的治疗作用,其抑瘤率分别为59％和85％。在可耐受剂量下,C1027对人肝癌有明显的抑制作用,而Fab-C1027显示更强的抑制作用。

具有强烈杀伤肿瘤细胞活性的新抗肿瘤抗生素C1027分子作用机制

本研究表明,C1027是以细胞内染色质或染色体DNA为靶体,直接造成核小体连接区DNA损伤,损伤的方式包括DNA单链断裂、双链断裂及单链断裂合并互补链上相邻断裂口部位出现无碱基位点,C1027损伤细胞DNA的作用显著强于新制癌菌素,平阳霉素,阿霉素及丝裂霉素C,本文还从分子机制的水平讨论了C1027强烈细胞毒性。

烯二炔抗癌抗生素单克隆抗体的制备及初步应用

抗癌抗生素Ｃ１０２７分子由一个含１１０个氨基酸的蛋白和一个含烯二炔结构的发色团非共价结合而成。发色团是Ｃ１０２７的活性部分，易被紫外线照射灭活，蛋白则对发色团有保护作用。以紫外灭活的Ｃ１０２７为抗原，用杂交瘤技术，制备了小鼠抗Ｃ１０２７单克隆抗体Ｆ９。免疫印迹证实单抗Ｆ９能特异性识别Ｃ１０２７，该单抗对Ｃ１０２７与紫外线灭活Ｃ１０２７的亲和力无显著差别。单抗Ｆ９对Ｃ１０２７的亲和常数为２２±０４７×１０７Ｌ·ｍｏｌ－１，其亚型为ＩｇＧ１。克隆形成测定结果表明，单抗Ｆ９对Ｃ１０２７的细胞毒性无明显影响，提示该单抗没有对Ｃ１０２７的发色团产生封闭效应。ＥＬＩＳＡ与Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ测试说明单抗Ｆ９能与裁短的Ｃ１０２７基因工程肽发生特异性结合。提示单抗Ｆ９可用于Ｃ１０２７基因工程的研究，并可能用于研究Ｃ１０２７的代谢与分布及筛选大分子抗肿瘤抗生素等方面。

新抗癌抗生素C_(1027)诱导细胞凋亡以及对癌基因表达的影响

C_(1027)是我所从湖北省潜江县土壤中分离得到的一株链霉菌(Streptomyces globisporus C_(1027))代谢产物中筛选出的一个新的大分子蛋白类抗肿瘤抗生素。它由一个酸性蛋白和一个发色团构成。发色团具有新的烯二炔类结构,分子量为845Da,是C_(1027)分子的活性部分。蛋白部分由110个常见氨基酸组成,计算分子量为10 500Da。C_(1027)具有极强杀伤肿瘤细胞活性,比阿霉素、丝裂霉素的活性高一万倍以上。C_(1027)延缓肝癌BEL-4O2S期细胞,并阻断于G_2+M期,强烈抑制DNA生物合成。