C17∶0激活GPR40受体的作用及信号转导分子机制研究

目的研究长链脂肪酸C17∶0对GPR40受体的激活作用,并探讨其介导的信号转导分子机制。方法在体外培养HEK293T细胞的基础上,免疫荧光结合共聚焦显微镜检测受体膜定位和内吞情况;通过多功能酶标仪检测Ca^(2+)流的强弱;Western Blot检测ERK1/2的磷酸化水平。结果免疫荧光结果显示:C17∶0可通过招募β-arrestin 2介导GPR40内吞;胞内Ca^(2+)动员检测结果证实:长链脂肪酸C17∶0可作用于GPR40引起胞内Ca^(2+)浓度升高;Western Blot结果显示:C17∶0可作用于GPR40诱导ERK1/2磷酸化。结论C17∶0是GPR40的内源性配体,通过激活Gaq和Gai/o蛋白介导的信号通路,引起胞内Ca^(2+)动员及ERK1/2的磷酸化。

奇数链脂肪酸抑制脂多糖诱导的Caco-2细胞炎症反应研究

为明确奇数链脂肪酸(OCFA)与人体健康的关系,采用气相色谱-质谱法(GC-MS)检测分析健康人群和结肠癌患者血清中OCFA的分布特征差异,并采用脂多糖(LPS)诱导的Caco-2细胞炎症模型探究OCFA对炎症的抑制效应,包括对细胞活性、促炎因子基因表达以及脂肪酸组成的影响。结果表明:健康人群中的OCFA(C15∶0和C17∶0)含量显著高于结肠癌人群;男性以及高龄(59岁以上)结肠癌人群中C15∶0和C17∶0水平偏低;C15∶0和C17∶0对细胞活力无影响,C15∶0能够显著降低LPS刺激后Caco-2细胞中促炎因子TNF-α、IL-8和iNOS的表达,C17∶0能够显著降低促炎因子IL-6、TNF-α、IL-8和iNOS的表达,两种OCFA均能够起到类似于n-3PUFA缓解炎症刺激的作用;两种OCFA(C15∶0和C17∶0)能够在肠道细胞Caco-2中吸收并代谢成C17∶0、C17∶1。综上,OCFA能够调节肠道炎症因子的表达进而抑制肠上皮细胞炎症反应,对肠道健康有潜在的保护作用。

注射用银杏叶提取物及其制剂中总银杏酸含量的测定

目的:建立超高效液相色谱串联三重四极杆质谱测定注射用银杏叶提取物及其制剂中总银杏酸的方法。方法:采用HLB固相萃取净化制剂,Waters Cortecs T3色谱柱(50 mm×2. 1 mm,2. 7μm),以甲醇-1%冰醋酸溶液(90∶10)为流动相,在电喷雾离子化负离子模式下,以多反应监测方式(MRM)检测。结果:银杏酸C13:0、C15:1、C17:1在0～50 ng/mL范围内成良好线性关系,相关系数均大于0. 999;平均加样回收率为97. 3%～115. 2%,相对标准偏差(RSD)为0. 3%～3. 4%;检出限分别为0. 03、0. 06、0. 04 mg/kg。结论:本方法可应用于实际样品的测定。

银杏叶中银杏酚酸类成分含量测定方法研究

目的建立银杏叶药材中白果新酸(C13∶0)、白果酸(C15∶1)、十七烷二烯银杏酸(C17∶2)、氢化白果酸(C15∶0)和十七烷一烯银杏酸(C17∶1)等5种银杏酚酸类成分的含量测定方法。方法采用HPLC法。色谱柱为Phenomenex Luna C18(4.6mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸(90∶10)为流动相,流速为1.0 m L·min-1,检测波长为310 nm,柱温为30℃。结果白果新酸(C13∶0)、白果酸(C15∶1)和十七烷一烯银杏酸(C17∶1)质量浓度分别在1.47~29.40、6.05~121.00、8.00~160.00μg·m L-1内呈良好线性关系,相关系数分别为0.999 9、0.999 9和0.999 9,平均回收率分别为98.6%(RSD=2.57%,n=9)、100.1%(RSD=2.36%,n=9)、97.4%(RSD=2.99%,n=9),建立了十七烷二烯银杏酸(C17∶2)、氢化白果酸(C15∶0)相对定量分析方法。结论该方法简便、准确、重现性好,可用于银杏叶的质量控制。不同产地、不同采收期的银杏叶药材中5种银杏酚酸类指标成分含量差异较大。