miR-26b对宫颈癌细胞系迁移及上皮间质转化的影响

目的探讨miR-26b对宫颈癌细胞迁移及上皮间质转化的影响及其作用机制。方法通过脂质体介导将miR-26b mimic转染C33A宫颈癌细胞系,细胞分为阴性对照组、无义对照组和miR-26b mimic组。用实时荧光定量PCR检测miR-26b及其靶基因的mRNA表达,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Western blot检测E-cadherin和N-cadherin蛋白表达,用双荧光素酶基因报告载体检测miR-26b靶基因的表达。结果与正常宫颈上皮细胞相比,miR-26b mRNA在He La、Si Ha、Caski和C33A 4种宫颈癌细胞系中均低表达,其中以C33A细胞系最为明显;转染miR-26b mimic后,C33A细胞中miR-26b mRNA表达水平明显上升;过表达miR-26b可明显抑制C33A细胞的迁移能力,上调E-cadherin蛋白的表达,下调N-cadherin蛋白的表达,抑制上皮间质转化过程的发生;通过Target Scan、Pic Tar和miRDB软件预测显示,CXCL14、Smad4、TRAF5和Eph A2可能为miR-26b潜在的靶基因。双荧光素酶实验证实miR-26b可直接调控Smad4的表达。结论 miR-26b可能通过作用于Smad4的表达调节宫颈癌细胞的迁移和上皮间质转化过程的发生。

稳定表达人乳头瘤病毒58型(HPV58)E6E7融合基因的人宫颈癌细胞株C33A的构建及验证

为构建稳定表达人乳头瘤病毒(HPV)58型E6E7融合基因的人宫颈癌C33A细胞系,将实验前期构建好并实现真核表达的重组慢病毒颗粒LV-HPV58E6E7转染入HPV(–)的人宫颈癌C33A细胞,经流式细胞仪分选出稳定转染的阳性克隆,利用四唑盐比色(MTT)法检测转染后细胞的生长情况以及流式细胞术检测细胞周期,并将稳定表达HPV58E6E7融合基因的C33A细胞LV-HPV58E6E7/C33A接种于裸鼠左腋下成瘤,用荧光定量PCR(q RT-PCR)、Western blot检测瘤组织中HPV58型E6E7融合基因的转录和表达。结果显示HPV58E6E7融合基因可促进C33A细胞的增殖;LV-HPV58E6E7/C33A细胞株能在裸鼠体内稳定转录及表达HPV58型E6E7融合基因。这表明我们成功建立了能稳定表达HPV58E6E7融合基因的人宫颈癌C33A细胞系LV-HPV58E6E7/C33A,为HPV58型治疗性疫苗的免疫效果检测提供了抗原细胞来源。