血清Endocan、补体C3a与重症肺炎患儿病情和预后转归的关系分析

目的探讨血清内皮细胞特异性分子(Endocan)-1、补体C3a与重症肺炎患儿病情和预后转归的关系。方法选择2018年3月至2023年3月中国人民解放军联勤保障部队第961医院及齐齐哈尔市第一医院儿科收治的190例重症肺炎患儿(肺炎组)和95例年龄性别匹配的健康儿童(对照组)为研究对象。根据改良易感性、感染、反应和器官功能衰竭(PIRO)量表将重症肺炎患儿分为低风险组(59例)、中高风险组(76例)、极高风险组(55例)。检测血清Endocan、补体C3a水平,统计重症肺炎患儿不良临床结局,分析影响重症肺炎患儿预后的因素及Endocan、补体C3a预测重症肺炎患儿发展结局的价值。结果肺炎组血清Endocan、补体C3a水平均高于对照组,差异有统计学意义(t值分别为40.775、37.808,P<0.05);极高风险组血清Endocan、补体C3a水平高于中高风险组和低风险组,中高风险组血清Endocan、补体C3a水平高于低风险组,差异有统计学意义(F值分别为109.352、78.293,P<0.05);预后不良组改良极高风险、入住重症监护病房、呼吸衰竭比例高于预后良好组,血清Endocan、补体C3a水平高于预后良好组,差异均有统计学意义(t/χ^(2)值介于5.435~33.346之间,P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示改良PIRO分级极高风险、高水平Endocan、高水平补体C3a是重症肺炎患儿预后不良的危险因素,其OR值及95%CI分别为2.186(1.177~4.061)、1.868(1.092~3.196)、1.667(1.120~2.482),P<0.05;联合Endocan、补体C3a、改良PIRO评分预测重症肺炎患儿发展结局的曲线下面积(AUC)为0.900,高于单独指标预测(Z值分别为3.542、6.317、2.627,P<0.05)。结论重症肺炎患儿血清Endocan、补体C3a水平增高与病情加重、预后不良有关,可作为重症肺炎病情和预后评估的潜在标志物。

慢性重型肝炎血浆对C3A细胞解毒功能及细胞膜完整性的影响

目的检测C3A细胞在正常人和在慢性重型肝炎血浆中解毒功能及膜的完整性,探讨慢性重型肝炎患者血浆在体外对C3A细胞株功能的影响。方法把C3A细胞分为两组,一组用慢性重型肝炎患者血浆(100%CSHP)培养,另一组用正常人血浆(100%NHP)培养。分别于第24h及第48h,检测培养细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)及天冬氨酸氨基转移酶(AST)含量,于第48h检测C3A细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)含量。结果在100%CSHP中和100%NHP培养第24h及第48h,培养细胞上清液中ALT和AST含量,100%CSHP组与对照组间差异有非常显著性意义(P<0·01),且第48h与第24h含量间差异有显著性意义(P<0·05)。分别检测在100%CSHP中和100%NHP培养第48h的C3A细胞内GSH含量,100%CSHP组与对照组间差异有显著性意义(P<0·01)。结论慢性重型肝炎患者血浆使C3A细胞内GSH消耗明显增加,导致其解毒功能下降;CSHP使C3A细胞膜受损,并随时间延长而逐渐加重。

体外灌流慢性重型肝炎患者血浆对C3A细胞的细胞色素P4503A活性和表达的影响

目的:通过比较未经灌流处理的重肝血浆及处理过的重肝血浆对CYP3A的影响,阐明C3A细胞安定代谢变化的原因,为未来C3A细胞的改造与功能优化奠定基础。方法:制备血浆和培养C3A细胞;实验分为4组:正常胎牛血浆(NFBP)组,正常人血浆(NHP)组,体外灌流慢性重型肝炎患者血浆(HPP)组,体外未灌流慢性重型肝炎患者血浆(CSHP)组。用分光光度法测定红霉素N-脱甲基酶(ERD)活性即CYP4503A的活性,Western blot法测定CYP4503A4的表达。结果:CSHP组ERD活性低于NFBP组(P<0.05)及NHP组(P<0.05),HPP组ERD活性也低于NFBP组(P<0.05)及NHP组(P<0.05),HPP组ERD活性高于CSHP组(P<0.05);CSHP组CYP4503A4的表达低于NFBP组(P<0.05)及NHP组(P<0.05),HPP组CYP4503A4的表达也低于NFBP组(P<0.05)及NHP组(P<0.05),HPP组CYP4503A4的表达高于CSHP组(P<0.05)。结论:经慢性重型肝炎患者血浆培养的C3A细胞,CYP4503A活性及蛋白表达降低。与之相比,经过体外灌流的慢性重型肝炎患者血浆其C3A细胞CYP4503A活性及蛋白表达有所增加,CYP4503A活性增加可能是导致安定代谢变化的原因。

N-乙酰半胱氨酸对C3A永生化肝细胞增殖和生物转化功能的影响

目的研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)对慢性重型肝炎肝衰竭时肝细胞增殖和生物转化功能的影响,并比较NAC和还原型谷胱甘肽(GSH)的疗效。方法体外慢性重型肝炎患者血浆培养C3A细胞,同时分别加入大、中、小三种剂量NAC及对应剂量的GSH,以正常血浆及培养基(10%FBS-MEM)为对照,分别于24 h、48 h、72 h三个时间点检测细胞安定代谢量的变化,并用MTT法测定C3A细胞活力。结果慢性重型肝炎血浆使细胞的安定代谢量降低,细胞增殖活力提高。NAC和GSH均可提高慢性重型肝炎血浆培养C3A细胞的安定代谢量,呈一定剂量依赖性,并可使细胞增殖活力进一步提高。结论NAC可以显著改善慢性重型肝炎肝衰竭时肝细胞增殖活力和生物转化功能,GSH也有相似功效,相同剂量的NAC优于GSH。

N-乙酰半胱氨酸对C3A永生化肝细胞解毒代谢功能的影响

目的:研究N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对慢性重型肝炎肝衰竭时肝细胞解毒代谢功能的影响,并比较NAC与还原型谷胱甘肽(GSH)的疗效.方法:体外慢性重型肝炎患者血浆(chronic severe hepatitis plasma,CSHP)培养C3A细胞,并同时分别加入大、中、小三个剂量NAC及对应剂量的GSH,以正常血浆(normal human plasma,NHP)及培养基(100 mL/L FBS-MEM)为对照,分别于24、48、72h3个时间点检测细胞内GSH及脂质过氧化物(MDA)的含量,并检测安定代谢量的变化.结果:24、48、72h3个时间点,培养基组、正常血浆组、各剂量NAC治疗组和GSH治疗组C3A细胞中GSH含量与安定代谢量均分别高于慢性重型肝炎血浆组(GSH:F=246.116,235.489,201.536,均P<0.01;安定代谢量:F=306.812,476.722,502.061,均P<0.01),而慢性重型肝炎血浆组C3A细胞中MDA含量均分别高于上述各组(F=332.48,662.349,492.983,均P<0.01).慢性重型肝炎血浆+NAC组与慢性重型肝炎血浆+GSH组比较,前者细胞内的GSH含量和对安定的代谢量,大、中、小剂量组均分别高于后者对应剂量组(P<0.01),而前者细胞内的MDA含量,大、中、小剂量组均分别低于后者对应剂量组(P<0.01).结论:NAC可以显著改善慢性重型肝炎肝衰竭时肝细胞解毒代谢功能,GSH也有相似功效,且相同摩尔剂量的NAC效果要优于GSH.

慢性重型肝炎患者血浆对C3A 细胞增殖功能的影响

目的观察慢性重型肝炎患者血浆对 C3A 细胞株增殖功能的影响,为研究应用 C3A 细胞株的生物反应器进行生物人工肝支持治疗提供实验依据。方法分别用100%正常人血浆(normal human plasma,NHP)和100%慢性重型肝炎患者血浆(chronic severe hepatitis plasma,CSHP)培养 C3A 细胞,通过四甲基偶氮唑盐法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTr)检测细胞活力,光镜下观察 C3A 细胞在100% CSHP 中和在100% NHP 中的状态,扫描电镜观察细胞在100% CSHP 中和在100% NHP 中的生长状态,研究慢性重型肝炎患者血浆对 C3A 细胞增殖的影响。结果①连续5d 检测100% CSHP 培养的 C3A 细胞活力均明显高于100% NHP 组(t 值分别为6.26、4.89、3.55、3.94、6.17,P 值均小于0.01);②姬姆萨染色可见100% CSHP 培养的C3A 细胞生长较密;③48h 电镜下可见2组细胞生长状态均良好,但是100% CSHP 组处于分裂前期细胞数明显多于100%NHP 组,且分裂较活跃。结论 CSHP 对C3A 细胞的增殖有促进作用。

慢性重型肝炎及肝衰竭患者血浆对C3A细胞活力和蛋白合成功能的影响

目的观察慢性重型肝炎及肝衰竭患者血浆对C3A细胞株的影响,为研究应用C3A细胞株的生物反应器进行生物人工肝支持治疗提供实验依据。方法用100%正常人血浆(normalhumanplasma,NHP)和100%慢性重型肝炎患者的血浆(chronicseverehepatitisplasma,CSHP)培养C3A细胞,四甲基偶氮唑盐法(Methylthiazolyltetrazolium,MTT)检测细胞活力,通过3H-亮氨酸掺入法检测细胞蛋白合成速率,Western-blot分析比较白蛋白合成功能,从细胞活力和蛋白合成方面研究慢性重型肝炎患者血浆对C3A细胞的影响。结果①连续5天检测100%CSHP培养的C3A细胞活力均明显高于100%NHP组,(t值分别为6.26、4.89、3.55、3.94、6.17,P值均小于0.01);②第48h100%CSHP培养的C3A细胞蛋白合成速率高于100%NHP组,结果差异有显著性(t=5.93,P<0.01);③培养24h后Western-Blot分析可见100%CSHP组白蛋白表达量明显高于100%NHP组。结论CSHP对C3A细胞的增殖和蛋白合成功能有促进作用。

C3a分泌性表达载体及过表达C3a肾小管上皮细胞株的构建

目的已有的研究表明包括糖尿病肾病在内的多种肾病患者肾小管上皮细胞存在C3a/C3aR轴过度活化现象,但有关C3a/C3aR轴过度活化在肾小管上皮细胞中的病理意义未知。文中构建分泌性过表达C3a的肾小肾小管上皮细胞株,为探讨各种病理情况下C3a/C3aR轴过度活化的病理意义提供细胞模型。方法设计合成人C3a分泌性表达单元,将其克隆到慢病毒表达载体p Lenti6.3-MCS-IRES2-EGFP的多克隆位点,构建成C3a分泌性表达载体p Lenti6.3-C3a-IRES2-EGFP;将p Lenti6.3-C3a-IRES2-EGFP和包装质粒共转染293 T细胞,包装成C3a表达重组慢病毒LV-C3a;以LV-C3a感染人肾小管上皮细胞系HK2,根据LV-C3a上带有杀稻瘟菌素抗性基因的特点,以杀稻瘟菌素筛选稳定转染细胞克隆;利用荧光定量PCR和ELISA方法对稳定转染细胞克隆的C3a表达水平和分泌情况进行分析,从中鉴定出稳定分泌性过表达C3a的人肾小管上皮细胞株。结果 1成功构建了序列完全正确的C3a分泌性表达载体p Lenti6.3-C3a-IRES2-EGFP;2成功进行了重组慢病毒包装,得到了高滴度(5×108个/m L)的C3a表达重组慢病毒LV-C3a;3成功进行了LV-C3a对HK2细胞的转染,得到了稳定转染LV-C3a的HK2细胞株;基于荧光定量PCR和ELISA的分析证实,与HK2细胞比较,HK2-C3a细胞株中C3a mRNA表达水平显著升高[(1.0±0.5)vs(1 321.0±18.0),P<0.01],分泌的C3a水平显著升高[(0.3±0.2)ng/m L vs(249.0±37.0)ng/m L,P<0.01]。结论成功构建的C3a分泌性慢病毒表达载体和分泌性过表达C3a的人肾小管上皮细胞株为进一步研究各种病理情景中C3a/C3aR过度活化在人肾小管上皮细胞中的病理意义提供了很好的细胞模型,也为进一步开展C3a/C3aR过度活化在其他细胞中的病理意义创造了条件。

C3aR在调节人壁层肾祖细胞源性的足细胞再生中的作用和机制研究

目的:探讨C3a受体(C3a receptor,C3aR)在人壁层肾祖细胞(CD24^(+)CD133^(+)PEC)向足细胞分化中的作用及其机制。方法:分离和培养原代人CD24^(+)CD133^(+)PEC,诱导分化为足细胞并检测C3aR在分化过程中的表达。构建C3a分泌性表达慢病毒,感染CD24^(+)CD133^(+)PEC,获得C3a过表达细胞株(C3a过表达组)。检测C3a过表达组、空载体组和未感染组细胞的活力、分化情况及E-cadherin、p-ERK1/2的表达。结果:成功分离出CD24^(+)CD133^(+)PEC并诱导其分化为表达Wilms肿瘤蛋白1(Wilms tumor protein 1,WT1)的足细胞,C3aR在分化过程中表达显著降低。C3a过表达组的细胞活力较空载体组和未感染组显著增强(P<0.01);诱导分化第2天,C3a过表达组细胞WT1的表达较空载体组和未感染组显著降低(P<0.01),E-cadherin及p-ERK1/2的表达较空载体组和未感染组显著升高(P<0.01)。结论:C3aR参与了人CD24^(+)CD133^(+)PEC向足细胞分化的过程,C3a过表达促进CD24^(+)CD133^(+)PEC的增殖并抑制其向足细胞分化,可能是通过ERK1/2信号通路发挥作用的。

C3a-C3aR信号通路对正常儿童Treg/Th17免疫平衡的影响

目的探讨补体C3a-C3a受体(C3aR)信号通路对正常儿童外周血Treg/Th17免疫平衡的影响,以期为进一步研究该通路在相关疾病中的作用提供实验依据。方法健康体检儿童17例,其中男性10例,女性7例,平均年龄6.8岁。收取空腹外周血3 ml,提取外周血单个核细胞(PBMC),分为3组:1)正常对照组;2)人重组C3a处理组(C3a组);3)人重组C3a及C3a受体拮抗剂处理组(C3a+C3aRA组)。经过培养后应用流式细胞术分别检测各组中Treg细胞和Th17细胞占CD4+T细胞的百分比,并比较各组间Treg/Th17的比值。结果与正常对照组比较,C3a组Th17细胞比例升高(P<0.01),Treg/Th17的比值明显降低(P<0.01),Treg细胞比例有下降趋势,但无明显统计学差异(P>0.05);与C3a组比较,C3a+C3aRA组Th17细胞比例降低(P<0.05),Treg/Th17的比值明显升高(P<0.05),Treg细胞比例有上升趋势,但无统计学差异(P>0.05);而C3a+C3aRA组较正常对照组Th17细胞、Treg细胞比例以及Treg/Th17的比值均无统计学差异(P>0.05)。结论 C3a-C3aR信号通路可能介导正常生理状态下儿童外周血中Th17细胞活化,同时参与调控正常儿童Treg/Th17细胞免疫平衡。

炎性细胞因子对人肾小管上皮细胞C3a受体表达的调控

目的:为更好了解肾脏组织中C3aR表达调控因素,我们研究了多种炎性细胞因子对人肾小管上皮细胞(HK2细胞)C3a受体(C3aR)表达的调控作用。方法:用多种炎性细胞因子[干扰素γ(IFN-γ)、C3a、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β(TGF-β)]刺激HK2细胞,利用荧光定量PCR、免疫组化及免疫印迹的方法检测HK2细胞C3aR表达水平。结果:炎性细胞因子IFN-γ能够显著促进HK2细胞C3aR的表达上调[与正常对照组相比,C3aR mRNA表达水平的约增长5倍(P=0.001),蛋白水平表达上调大约1.6倍(P=0.046)],且HK2细胞C3aR mRNA水平表达上调与IFN-γ呈剂量及时间依赖关系;而其他的炎性细胞因子如TNF-α、TGF-β、IL-1β甚至生物活性多肽C3a均未观察到对HK2细胞C3aR表达造成影响。结论:肾小管上皮细胞表面可表达生物活性肽段C3aR,而且炎症细胞因子IFN-γ能够明显增强肾小管上皮细胞C3aR表达,预示C3a/C3aR轴可能参与了肾脏局部炎症反应的调节并且与肾脏疾病的发生、发展有一定的相关性。

补体C3a促进人视网膜色素上皮细胞分泌血管内皮生长因子的研究

目的观察补体活化产物C3a对体外培养的人视网膜色素上皮细胞(RPE)分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)和半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法,测定浓度0.1μmol/L和0.3μmol/L的重组人C3a干预RPE细胞24、48、72 h后VEGF蛋白和mRNA表达水平。结果 0.1μmol/L的C3a干预RPE细胞72 h后,VEGF蛋白表达高于干预48 h和24 h的水平,差异均有统计学意义(P<0.05);0.3μmol/L的C3a作用RPE细胞24、48、72 h后,VEGF蛋白表达组间差异均有统计学意义(P<0.01),具有正性时间—效应关系;0.1μmol/L的C3a作用RPE细胞72 h后,VEGF mRNA表达高于48 h和24 h,差异有统计学意义(P<0.05);0.3μmol/L的C3a作用RPE细胞72 h后,VEGF mRNA表达高于48 h和24 h,差异有统计学意义(P<0.01);0.3μmol/L的C3a作用72 h时VEGF的蛋白表达量高于0.1μmol/L的C3a,差异有统计学意义(P<0.01);0.3μmol/L的C3a作用24 h时VEGF mRNA表达量高于0.1μmol/L的C3a,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 C3a可促进人RPE细胞VEGF的分泌,高浓度C3a对VEGF分泌的促进作用早于低浓度C3a,提示补体活化程度越强,对新生血管的促进作用则越迅速。

补体C3a受体1与低级别胶质瘤预后及免疫细胞浸润的关系

目的借助癌症基因组图谱(TCGA)数据库研究低级别胶质瘤(LGG)组织中补体C3a受体1(C3AR1)的表达水平及其与LGG患者预后及肿瘤免疫细胞浸润的关系。方法从TCGA数据库下载514例LGG患者的基因表达谱数据和临床信息。比较C3AR1基因在LGG组织和正常组织中的表达水平,分析不同WHO分级LGG组织样本中C3AR1基因的表达量及与患者预后的关系,分析LGG患者临床特征和C3AR1基因表达水平对患者预后的影响,分析LGG组织中C3AR1基因表达与肿瘤免疫细胞浸润的相关性及免疫细胞浸润水平对患者预后的影响。对与C3AR1基因表达呈正相关的基因群进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果LGG组织中C3AR1基因表达水平高于正常组织(P<0.05)。C3AR1基因在WHOⅢ级LGG组织中的表达高于WHOⅡ级(P<0.05),C3AR1基因低表达组患者的预后优于高表达组(HR=1.7,95%CI 1.1~2.4,P=0.0036)。患者年龄、LGG级别和C3AR1基因表达水平是LGG的独立预后因素(P均<0.01)。C3AR1基因的表达水平与LGG的免疫细胞浸润水平呈正相关(P均<0.01),且后者影响LGG患者预后。与C3AR1基因表达呈正相关基因群的干扰素γ介导的信号通路、Ig/主要组织相容性复合体(MHC)保守位点、Ig样Cl型结构域、MHCⅠ/Ⅱ类抗原识别蛋白、连接肽特定区域、Toll样受体信号通路等多条通路参与调控LGG。结论C3AR1与LGG的预后和免疫细胞浸润有关,可能成为LGG分级诊断、免疫治疗和预后判断的生物标志物。

人肝肿瘤细胞系生物人工肝治疗重型肝炎的临床初步研究

目的观察人肝肿瘤细胞系生物人工肝治疗重型肝炎病人的临床疗效和安全性。方法对5例重型肝炎病人先行持续的血浆透析滤过和血浆置换,次日进行持续72h的人肝肿瘤细胞系生物人工肝支持治疗,观察患者转归。结果治疗后患者总胆红素由212.0±74.8μmol/L降至145.3±88.7μmol/L(P<0.05),8周后降至23.4±6.0μmol/L(P<0.01);血清AFP从158.4±99.7ng/ml升高至903.7±66.3ng/m(lP<0.05),但在8周后明显下降到95.1±58ng/ml;凝血酶原活动度在治疗中一度下降,但治疗2周后明显恢复。最终3例病人临床痊愈出院,1例好转,1例死亡。结论人肝肿瘤细胞系生物人工肝支持系统可用于重型肝炎患者的治疗,并无严重的副反应发生。

3株肝细胞在硝酸纤维素膜界面上生长的初步研究

目的在体外培养的条件下,观察3株肝细胞在硝酸纤维素膜材料上的生长情况,研究膜的细胞相容性及理化性能的改变,初步探讨硝酸纤维素膜作为一种新的组织工程膜材料用于构建生物人工肝生物反应器中细胞的载体材料的可行性。方法将生物人工肝常用的细胞:肝肿瘤细胞HepG2、C3A、永生化HL7702细胞株分别接种在浸泡处理后的硝酸纤维素膜片上常规培养,在普通光学显微镜以及扫描电镜观察肿瘤细胞在此种膜上的贴壁情况和细胞形态。同时行免疫细胞化学染色和细胞功能检测。结果细胞经常规染色、透明处理后,在光镜下观察到膜上生长的细胞保持了较好的增殖状态及细胞形态;免疫细胞化学染色结果表明,膜上细胞特异性标志物表达良好。培养液上清的生化检测表明培养细胞的主要分泌、代谢功能与常规培养无明显差异;扫描电镜下膜表面细胞呈集落式三维生长,增殖明显。结论硝酸纤维素膜能促进细胞黏附,并且与细胞有良好的相容性。硝酸纤维素膜作为一种良好的细胞黏附生长介质的同时,还具有可以在其上面直接进行相关培养物观察和检测的优点。

还原型谷胱甘肽对肝细胞解毒代谢功能影响的体外实验研究

目的:在细胞水平上研究还原型谷胱甘肽(GSH)对慢性重型肝炎肝衰竭时肝细胞解毒代谢功能的影响。方法体外培养C3A细胞,在培养基加入慢性重型肝炎患者血浆(CSHP),并同时分别加入大中小三个剂量的GSH(25mmol/l,5mmol/l,1mmol/l),以正常血浆(NHP)及培养基为对照,分别于24小时、48小时、72小时3个时间点检测细胞内GSH及脂质过氧化物(MDA)含量的变化。结果①慢重肝血浆使细胞内GSH含量下降、MDA含量增加。②GSH可以提高慢重肝血浆细胞内GSH含量,补充内源性GSH的损耗,降低细胞内MDA含量。③随剂量的增加,上述作用更为明显。结论GSH可以改善慢性重型肝炎肝衰竭时肝细胞解毒代谢功能,且存在量效关系。

OSKM诱导过表达c-Jun肝癌细胞重编程

目的构建OSKM诱导的过表达c-Jun肝癌细胞(C3A-c-Jun)重编程细胞系,探讨外源性c-Jun对肝癌细胞重编程的影响。方法通过C3A细胞稳定过表达c-Jun后进行OSKM诱导重编程,通过碱性磷酸酶染色,Real-time PCR,免疫印迹法,免疫荧光等技术对细胞进行鉴定,建立C3A-c-Jun诱导肿瘤干细胞系C3A-c-Jun-i CSCs。结果 C3A-c-Jun-i CSCs克隆呈圆顶状,边缘圆钝,克隆内细胞小且排列紧密,多层分布,碱性磷酸酶染色阳性,mRNA和蛋白水平均可表达多潜能性标记物OCT4、SOX2;C3A-c-Jun-i CSCs组外源性和内源性Sox2的表达量均明显高于C3A-i CSCs对照组;在重编程过程中c-Jun持续表达。结论 OSKM诱导C3A、C3A-c-Jun肝癌细胞重编程,分别建立C3A-i CSCs和C3A-c-Jun-i CSCs细胞系,发现外源性c-Jun通过上调Sox2基因的表达,启动下游一系列反应,对肝癌细胞重编程过程起促进作用。

HBV-IgAN肾组织肥大细胞浸润不同检测方法的对比

目的:探讨以类胰蛋白酶抗体与C3a受体抗体检测肾组织肥大细胞(MC)浸润的可行性。方法:以正常肾组织为对照(n=6),选择乙型肝炎病毒相关性IgA肾病(HBV-IgAN,n=6)和原发性IgA肾病(pIgAN,n=6)为研究对象,采用免疫组化方法分别以类胰蛋白酶抗体、C3a受体抗体检测肾组织肥大细胞浸润情况。结果:C3aR及类胰蛋白酶阳性肥大细胞呈圆形或椭圆形,大小不等,胞浆着色,呈棕褐色颗粒,分布基本一致,但未完全重叠。正常肾组织MC在肾间质偶有浸润,肾小球内未见浸润。与正常对照组相比,HBV-IgAN与pIgAN肾间质肥大细胞浸润显著增加,主要分布于肾小管周围间质区域,以纤维化区域多见。C3aR阳性的肥大细胞数目与类胰蛋白酶阳性肥大细胞数目显著正相关(r=0.975;P<0.05)。但两种疾病之间肥大细胞数量差异无统计学意义。结论:类胰蛋白酶抗体及C3aR抗体两种免疫组化方法均适用于肾组织肥大细胞的检测。肾组织肥大细胞浸润在HBV-IgAN和pIgAN进展中的作用有待研究。

补体C3a在晚期肾透明细胞癌中的表达及免疫治疗中的变化

目的探索补体C3a在晚期肾透明细胞癌免疫治疗中的变化及与疗效的关系。方法收集78例肾透明细胞癌患者组织样本,利用免疫组织化学法检测癌及癌旁组织中补体C3a的表达。酶联免疫吸附实验法检测晚期肾透明细胞癌患者行程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)抑制剂治疗前及治疗4个周期后外周血清中补体C3a的浓度,应用实体瘤疗效评价标准1.1版评估治疗效果。结果78例患者中52例C3a表达呈阳性(67%),即肿瘤细胞胞浆和胞膜呈棕黄染色。不同性别、年龄、部位、组织学分级的肿瘤组织补体C3a的表达相近(均P>0.05)。当肿瘤横径>3.5 cm时,补体C3a的表达显著升高(P=0.025),且TNM分期Ⅱ期患者的补体C3a水平同样升高(P=0.015)。60例行PD-1抑制剂治疗的患者中,完全缓解(CR)+部分缓解(PR)24例、疾病稳定(SD)14例、疾病进展(PD)22例。治疗后CR+PR+SD的补体C3a浓度下降,而PD的浓度上升(P<0.001)。PD-1抑制剂治疗后补体C3a下降患者比上升患者无进展生存时间延长(P<0.001)。结论肾透明细胞癌组织高表达补体C3a,补体C3a的表达与分期及肿瘤大小密切相关。在肾透明细胞癌PD-1抑制剂治疗过程中,血清补体C3a浓度变化可一定程度上反映疗效和预后。

慢性重型肝炎肝衰竭患者血浆对C3A细胞增殖和生物转化功能的影响

急性肝衰竭患者血浆对生物反应器中肝细胞的影响研究较多，并证实患者血浆对所接触的细胞有明显毒性作用。C3A细胞株与正常肝细胞功能接近，易于培养，并已成功应用于临床。现采用C3A细胞为对象，研究慢性重型肝炎肝衰竭患者血浆在体外对其影响。