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IGF-1介导MAPKs通路在C3H10T1/2细胞成骨分化中的作用
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作者 李冬 董晓俊 徐成栋 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期668-672,共5页
目的探究胰岛素样生长因子1(IGF-1)介导丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路在C3H10T1/2细胞成骨分化中的调控作用及机制。方法不同浓度IGF-1(0、5、10、20 ng/mL)培养C3H10T1/2细胞,碱性磷酸酶(ALP)与茜素红(ARS)染色检测ALP活性、钙盐... 目的探究胰岛素样生长因子1(IGF-1)介导丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路在C3H10T1/2细胞成骨分化中的调控作用及机制。方法不同浓度IGF-1(0、5、10、20 ng/mL)培养C3H10T1/2细胞,碱性磷酸酶(ALP)与茜素红(ARS)染色检测ALP活性、钙盐沉积情况,qRT-PCR法检测成骨特性因子核心结合因子α-1(RUNX2)、成骨分化特异性因子骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)mRNA表达水平,Western Blot法检测MAPK通路蛋白磷酸化表达水平。对数期细胞分为空白组、IGF-1组、ERK通路抑制剂(PD98059)组、PD+IGF-1组、p38通路抑制剂(SB202192)组、SB+IGF-1组,qRT-PCR法检测成骨特性因子RUNX2、成骨分化特异性因子骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)mRNA表达水平。结果不同浓度IGF-1组ALP显色加深,ALP活性升高,钙盐结节形成增多,RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平升高,磷酸化ERK、p38、JNK蛋白表达增加,具有剂量效应(P<0.05)。与空白组比较,PD组、SB组C3H10T1/2细胞RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平明显降低(P<0.05),PD+IGF-1组、SB+IGF-1组C3H10T1/2细胞RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平明显升高(P<0.05);但与IGF-1组比较,PD+IGF-1组、SB+IGF-1组C3H10T1/2细胞RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论IGF-1促进C3H10T1/2细胞成骨分化,其作用机制可能与激活ERK信号通路和p38 MAPK信号通路有关。 展开更多
关键词 胰岛素样生长因子1 丝裂原活化蛋白激酶信号通路 c3h10T1/2细胞 成骨分化
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东紫苏精油对间充质干细胞C3H10T1/2成脂分化的影响及机制
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作者 张梦媛 徐芳 +3 位作者 柏桦 邹伟 刘晓颖 王琦 《食品研究与开发》 CAS 2024年第9期67-74,共8页
为探讨东紫苏精油对小鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1/2成脂分化的作用及降脂机制,利用噻唑蓝[the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]法检测细胞成活率,以界定浓度的适宜范围;用油红O染色法对东紫苏精油... 为探讨东紫苏精油对小鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1/2成脂分化的作用及降脂机制,利用噻唑蓝[the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]法检测细胞成活率,以界定浓度的适宜范围;用油红O染色法对东紫苏精油作用后的细胞成脂分化作用进行分析;甘油磷酸氧化酶—过氧化物酶(glycerol phosphate oxidase-p-aminophenazone,GPO-PAP)法、胆固醇氧化酶、过氧化物酶和4-氨基安替比林苯酚(cholesterol oxidase,peroxidase and 4-aminoantipyrine phenol,COD-PAP)酶法检测东紫苏精油处理后细胞内甘油三酯、胆固醇含量的变化;荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和蛋白质印迹(western blot)分别检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxide proliferator-activated receptorγ,PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer-binding proteinsα,C/EBPα)、脂肪酸结合蛋白4(fatty acid-binding protein4,FABP4)mRNA和相关蛋白在成脂分化中的表达水平。结果表明:与空白对照组相比,高脂模型组的总胆固醇(total cholesterol,TC)和甘油三酯(triacylglyceride,TG)含量显著增加(P<0.05),小鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1/2中PPARγ、C/EBPα、FABP4 mRNA和蛋白表达明显增加。与高脂模型组相比,中剂量(50μg/mL)和高剂量(100μg/mL)精油组TC和TG含量明显下降,小鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1/2中PPARγ、C/EBPα、FABP4 mRNA和蛋白表达明显下降。试验结果表明,东紫苏精油可能通过调控PPARγ/C/EBPα/FABP4信号通路发挥对C3H10T1/2细胞成脂分化的抑制作用,达到减脂目的。 展开更多
关键词 东紫苏精油 间充质干细胞c3h10T1/2 成脂分化 降脂机制 信号通路
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Prdm14对C3H10T1/2细胞增殖及干性的影响
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作者 龙春兰 周宇 +4 位作者 易勤 谭彬 许皓 魏光辉 朱静 《检验医学与临床》 CAS 2023年第12期1665-1669,共5页
目的探讨PR结构域蛋白14(Prdm14)对C3H10T1/2细胞增殖及干性的影响。方法该实验分为空白对照组(正常C3H10T1/2细胞)、阴性对照组(感染慢病毒空载体的C3H10T1/2细胞)以及实验组(感染Prdm14慢病毒的C3H10T1/2细胞),分别采用实时荧光定量PC... 目的探讨PR结构域蛋白14(Prdm14)对C3H10T1/2细胞增殖及干性的影响。方法该实验分为空白对照组(正常C3H10T1/2细胞)、阴性对照组(感染慢病毒空载体的C3H10T1/2细胞)以及实验组(感染Prdm14慢病毒的C3H10T1/2细胞),分别采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(WB)检测Prdm14 mRNA及蛋白水平。采用CCK-8及细胞克隆形成实验检测C3H10T1/2细胞增殖情况;通过碱性磷酸酶(ALP)染色及活性测定,观察ALP活性情况;采用WB检测干性因子Sox2、Nanog、Oct4表达。结果与阴性对照组相比,实验组Prdm14 mRNA及蛋白水平均明显升高(P<0.05),ALP活性及细胞增殖能力增强(P<0.05),干性因子Sox2、Nanog蛋白水平均明显升高(P<0.05),Oct4蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论Prdm14可促进C3H10T1/2细胞增殖及干性因子表达。 展开更多
关键词 PR结构域蛋白14 c3h10T1/2细胞 增殖 干性
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Effects of anti-CD4 antibody treatment on calcium ions influx in peanut-sensitized C3H/HeJ mice
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作者 Junjuan Wang Cui Zhou +3 位作者 Shiwen Han Zainabu Majid Na Sun Huilian Che 《Food Science and Human Wellness》 SCIE CSCD 2023年第3期765-773,共9页
The precise mechanism underlying the effects of anti-CD4 antibody and calcium ions(Ca^(2+)) in peanut allergy remains unknown.C3 H/HeJ mice sensitized with peanut protein extract(PPE)were injected with anti-CD4 antibo... The precise mechanism underlying the effects of anti-CD4 antibody and calcium ions(Ca^(2+)) in peanut allergy remains unknown.C3 H/HeJ mice sensitized with peanut protein extract(PPE)were injected with anti-CD4 antibodies for 4 weeks.Stimulation with PPE increased the specific immunoglobulin E(IgE),cytokine,histamine,and mMcp-1 levels,upregulated decorin(Dcn)expression,induced Ca^(2+) inflow in the spleen,and augmented the expression of the transcription factors GATA-3 and Foxp3,which resulted in Th2 and Treg cell activation.Notably,the Ca^(2+) levels were positively correlated with the histamine,interleukin(IL)-4,IL-5,and IL-13 levels,and negatively correlated with IL-10 levels.However,administration of anti-CD4 antibodies markedly alleviated allergic symptoms,activated T cells,and reduced Ca^(2+) inflow,cytokine,histamine,mMcp-1,and the IgHG3,CXCLI2,MMP2 and FABP4 gene.Our results indicated that anti-CD4 antibodies can ameliorate PPE-induced allergy,which is probably related to the suppression of Ca^(2+) inflow,and inhibiting histamine,cytokine and IgHG3,CXCL12,MMP2,and FABP4,thus exerting a protective effect against PPEsensitized food allergy. 展开更多
关键词 Calcium ions Anti-CD4 c3h/HeJ mice PEANUT ALLERGY
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基于“C3H3”教育理念的“无机化学实验”教学探索
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作者 游姣 李姗珊 +2 位作者 凌辉搏 杜泽锋 江波 《现代盐化工》 2023年第5期146-148,共3页
无机化学是药学、药剂等本科专业学生的第一门关于化学的专业基础课,具有“承上启下”的作用。传统无机化学实验教学中,学生常常“照单抓药”,教学成效低,实验素养较差。基于此,在无机化学实验教学全过程贯穿“C3H3”教育理念,通过线上... 无机化学是药学、药剂等本科专业学生的第一门关于化学的专业基础课,具有“承上启下”的作用。传统无机化学实验教学中,学生常常“照单抓药”,教学成效低,实验素养较差。基于此,在无机化学实验教学全过程贯穿“C3H3”教育理念,通过线上线下混合教学方法,夯实学生实验基础、多方位培养学生科学思维,科学素养和科学能力,增强学生的安全意识和创新意识。 展开更多
关键词 c3h3”教育理念 无机化学实验 线上线下混合教学
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慈竹C3H基因克隆及其生物信息学分析 被引量:11
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作者 周美娟 胡尚连 +4 位作者 曹颖 卢学琴 任鹏 吴晓宇 李晓瑞 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期38-46,共9页
香豆酸-3-羟化酶(C3H)是调控植物木质素生物合成的关键酶,本文以慈竹为材料,利用RT-PCR技术克隆慈竹C3H基因,并对其进行生物信息学分析,为通过基因工程手段降低工业用竹木质素含量奠定基础。结果表明,该cDNA序列全长为1 581 bp,编码区为... 香豆酸-3-羟化酶(C3H)是调控植物木质素生物合成的关键酶,本文以慈竹为材料,利用RT-PCR技术克隆慈竹C3H基因,并对其进行生物信息学分析,为通过基因工程手段降低工业用竹木质素含量奠定基础。结果表明,该cDNA序列全长为1 581 bp,编码区为1 539 bp,编码512个氨基酸,蛋白分子量为58.33KD,等电点为9.09;氨基酸序列和结构分析显示C3H有一个保守区域,即P450结构域。系统进化分析表明,该基因与毛竹和水稻的C3H基因具有很高的同源性。慈竹与毛竹和水稻C3H基因编码蛋白为亲水性蛋白,这三种编码蛋白很可能定位在内质网(膜)上,其编码蛋白的二级结构及三级结构都含有丰富的α-螺旋和无规卷曲,β-转角和延伸链的含量较少,都含有2个相对保守的无序化区域。该基因已在GenBank上注册,基因序列登录号为JF693629,可能与慈竹木质素的生物合成有关。 展开更多
关键词 慈竹 c3h基因 克隆 生物信息学分析
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木质素生物合成中C3H/HCT的研究进展 被引量:19
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作者 王雪霞 薛永常 赵文超 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期650-653,共4页
木质素是由三种不同的木质素单体聚合而成的,其含量和单体组成与植物体的综合利用密切相关。木质素单体的生物合成途径涉及到许多酶的参与,C3H/HCT是发现较晚的两个酶,在从对-香豆酰辅酶A(p-coumaroyl CoA)到咖啡酰辅酶A(caffeoyl CoA)... 木质素是由三种不同的木质素单体聚合而成的,其含量和单体组成与植物体的综合利用密切相关。木质素单体的生物合成途径涉及到许多酶的参与,C3H/HCT是发现较晚的两个酶,在从对-香豆酰辅酶A(p-coumaroyl CoA)到咖啡酰辅酶A(caffeoyl CoA)的羟基化过程中起作用,是控制木质素H-单体与G/S-单体相互转化的关键酶。该文主要对C3H/HCT的研究进展及在木质素生物合成中的作用进行了阐述。 展开更多
关键词 c3h HCT 木质素生物合成
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小鼠胚胎间充质干细胞系C3H/10T1/2的多向分化潜能研究 被引量:4
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作者 王明科 邹仲敏 +5 位作者 粟永萍 罗成基 王军平 冉新泽 王涛 闫国和 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第21期2029-2033,共5页
目的建立小鼠胚胎间充质干细胞系C3H/10T1/2细胞成肌、成脂、成内皮、成神经元分化的细胞实验模型。方法用化学诱导剂5-氮杂胞苷诱导C3H/10T1/2细胞成肌、成脂,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和碱性成纤维... 目的建立小鼠胚胎间充质干细胞系C3H/10T1/2细胞成肌、成脂、成内皮、成神经元分化的细胞实验模型。方法用化学诱导剂5-氮杂胞苷诱导C3H/10T1/2细胞成肌、成脂,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)联合诱导C3H/10T1/2细胞成内皮,bFGF、β-巯基乙醇(β-mercaptoethanol,β-ME)、DMSO诱导C3H/10T1/2细胞成神经元细胞分化。诱导期间应用细胞形态学观察、油红"O"染色、免疫细胞化学染色检测内皮细胞表面标志CD31和神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)对分化细胞进行鉴定。结果5-氮杂胞苷诱导C3H/10T1/210d后细胞变长,17d后可见明显肌管形成,15d少量细胞出现脂滴,25d油红"O"染色见细胞质大量红色脂滴;VEGF和bFGF诱导5d后细胞呈现"鹅卵石"样形态,8d后阳性表达CD31;bFGF、β-巯基乙醇和DMSO联合诱导3d后细胞胞体收缩,突起变长,15dNSE染色阳性。结论C3H/10T1/2细胞具有多向分化的潜能,可用作研究间充质干细胞生物学特性的模型。 展开更多
关键词 c3h/10T1/2 成肌分化 成脂分化 成内皮分化 成神经元分化
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二乙基亚硝胺诱发C3H/HeN小鼠肝癌模型的研究 被引量:8
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作者 寿旗扬 陈方明 +4 位作者 赵泓舒 满曼 张利棕 周卫民 陈民利 《浙江中医药大学学报》 CAS 2012年第5期543-546,共4页
[目的]建立C3H/HeN小鼠诱发性肝癌动物模型,为研究肝癌发病机理及开展肝癌药物治疗提供小鼠诱发性肝癌模型。[方法]取20只C3H/HeN小鼠作为模型组,每日喂予含30μg.mL-1二乙基亚硝胺(DEN)的饮水,连续23周后,观察其肝癌的发生情况。另取6... [目的]建立C3H/HeN小鼠诱发性肝癌动物模型,为研究肝癌发病机理及开展肝癌药物治疗提供小鼠诱发性肝癌模型。[方法]取20只C3H/HeN小鼠作为模型组,每日喂予含30μg.mL-1二乙基亚硝胺(DEN)的饮水,连续23周后,观察其肝癌的发生情况。另取6只C3H/HeN小鼠作为正常组。[结果]造模23周后,模型组小鼠血清中ALP、ALT、AST、TBIL、肝脏指数、结节数和γ-GT活力显著增加(P<0.01),小鼠体重、血清中TP、ALB、BUN、CREA和肝脏中TP含量显著降低(P<0.01),存活15只小鼠中有13只肉眼能观测到肝癌发生,肝癌发生率为86.67%,小鼠肝脏表面较多结节,体积增大,表面粗糙、色彩暗淡,多个大小不一的灰白色圆形结节,组织学类型为肝细胞癌,其中以梁状型和腺样型居多。[结论]应用DEN诱发的小鼠肝癌,与人肝癌的发生过程相似,是一种较为理想的诱发性肝癌动物模型,但具体实验方法需进一步改良和研究。 展开更多
关键词 c3h/HeN小鼠 二乙基亚硝胺 肝癌模型
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GF级和SPF级C3H/orlSlac小鼠部分生物学和血液指标的比较 被引量:1
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作者 吴艳秋 王俊风 +5 位作者 施美莲 高静华 符杰 孙宗国 赵立虎 徐平 《实验动物与比较医学》 CAS 2012年第1期64-69,共6页
目的测定和比较无菌(GF)级与SPF级C3H/orlSlac小鼠部分生物学和血液指标上的差异性。方法随机抽取28、56、112日龄GF及SPF级C3H/orlSlac小鼠三个年龄段各30只(早古各半),活体称重,眼眶采血,测定其体尺、血常规和生化值,依次... 目的测定和比较无菌(GF)级与SPF级C3H/orlSlac小鼠部分生物学和血液指标上的差异性。方法随机抽取28、56、112日龄GF及SPF级C3H/orlSlac小鼠三个年龄段各30只(早古各半),活体称重,眼眶采血,测定其体尺、血常规和生化值,依次剖取心、肝、脾、肺等主要脏器称其湿重。结果①体尺及脏器比较,28和56日龄时两个级别小鼠有较多指标存在显著或极显著差异(P〈0.05或P〈0.01);而112日龄时比较突出的是肠道指标,GF级显著高于SPF级,两者间有极显著性差异(P〈0.01).同等级不同性别之间的比较中,SPF级雌雄鼠间指标差异较多,GF级小鼠则差异较少。②血常规比较,56和112日龄在很多指标上存在差异,尤其112日龄时GF级小鼠的血常规指标值均明显低于SPF级,两级别绝大部分指标间都存在显著或极显著差异。③生化指标比较,随着年龄的增长,GF级和SPF级在免疫指标上存在极显著性差异(P〈0.01)。同等级不同性别之间的比较中,SPF级与GF级小鼠均存在大的差异。结论GF级和SPF级C3H/orlSlac小鼠在多项脏器重量、血液生化和血常规的指标上存在差异(P〈0.05,P〈0.01),免疫学指标两者间的差异极显著(P〈0.01)。性别对血液生化和血常规的指标也存在影响。 展开更多
关键词 GF级c3h/orlSlac小鼠 SPF级c3h/orlSlac小鼠 体尺 脏器重量 血常规 血液生化
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BPI-BD3融合抗菌肽修饰C3H10T1/2细胞对小鼠感染创面愈合的影响 被引量:6
11
作者 张欣然 刘翠 +3 位作者 钱智勇 徐红梅 郭希民 郭红延 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期722-726,共5页
目的观察p Adxsi-BPI-BD3转染C3H10T1/2细胞对小鼠感染创面愈合的影响。方法使用重组腺病毒载体p Adxsi-BPI-BD3转染C3H10T1/2细胞,并采用RT-PCR及Western blotting进行鉴定。取30只KM小鼠行直径1cm的全层皮肤缺损创面,并接种金黄色葡... 目的观察p Adxsi-BPI-BD3转染C3H10T1/2细胞对小鼠感染创面愈合的影响。方法使用重组腺病毒载体p Adxsi-BPI-BD3转染C3H10T1/2细胞,并采用RT-PCR及Western blotting进行鉴定。取30只KM小鼠行直径1cm的全层皮肤缺损创面,并接种金黄色葡萄球菌制造感染创面。造模后,随机均分为3组每组10只,T组尾静脉注射p Adxsi-BPIBD3转染后的C3H10T1/2细胞,C组注射未转染的C3H10T1/2细胞,N组注射等量PBS。通过大体观察、痂下细菌计数、测定创面残留面积、HE染色等来评价BPI-BD3修饰的C3H10T1/2的促愈效果。结果与其余两组相比,T组痂下菌量较少(P<0.05),且T组愈合较快,7、14d时,创面残留面积与其余两组相比差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果显示,与其余两组相比,T组炎症较轻、表皮生长较快。结论 BPI-BD3修饰的C3H10T1/2可以促进金黄色葡萄球菌所致的小鼠感染创面的愈合。 展开更多
关键词 c3h10T1/2细胞 Β防御素 杀菌/通透性增加蛋白 伤口感染
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BMP2具有诱导C3H10T1/2细胞成脂肪分化的能力 被引量:7
12
作者 谢在春 陈琼玉 +2 位作者 杨松海 孙奋勇 于永春 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期142-147,共6页
探讨骨形态发生蛋白2(BMP2)诱导鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1/2成脂肪分化能力,为临床脂肪代谢疾病的治疗提供理论基础.培养多潜能的间充质干细胞C3H10T1/2,用20μg/mlBMP2对其诱导一定时间后,RT-PCR检测是否存在BMP信号通路中关键分子BM... 探讨骨形态发生蛋白2(BMP2)诱导鼠胚胎间充质干细胞C3H10T1/2成脂肪分化能力,为临床脂肪代谢疾病的治疗提供理论基础.培养多潜能的间充质干细胞C3H10T1/2,用20μg/mlBMP2对其诱导一定时间后,RT-PCR检测是否存在BMP信号通路中关键分子BMP受体BMPRI,BMPRⅡ及Smad1/5/8的表达.Western印迹检测Smad蛋白及MAPK信号通路中p38磷酸化水平变化,QRT-PCR检测成脂肪标志基因aP2以及成脂肪相关转录因子PPARγ,C/EBPα,C/EBPβ表达水平,同时用油红O染色,观测C3H10T1/2细胞成脂肪分化情况.经BMP2诱导后,C3H10T1/2细胞成脂肪分化标志(油红O染色)显著增加,Smad蛋白及p38磷酸化水平有所上升,同时成脂肪标志基因aP2以及成脂肪相关转录因子PPARγ,C/EBPα,C/EBPβ表达水平各有一定程度提高.BMP2具有诱导C3H10T1/2细胞成脂肪分化能力,其成脂肪分化呈现对BMP2作用的时间依赖性. 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白 c3h10T1/2细胞 成脂分化
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NtC3H基因对烟草类黄酮及绿原酸合成的影响 被引量:9
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作者 李洋 唐雪冰 +3 位作者 李晓峰 李明 储昭辉 丁新华 《中国烟草科学》 CSCD 北大核心 2016年第1期8-13,共6页
为验证Nt C3H是否参与烟草中类黄酮和绿原酸等次生代谢物质的合成,构建了p CXSN::Nt C3H超量表达载体,利用农杆菌介导的叶盘转化法将Nt C3H基因转入野生型烟草三生烟,并通过HPLC检测转基因烟草中绿原酸以及芦丁、山奈酚芸香苷等类黄酮... 为验证Nt C3H是否参与烟草中类黄酮和绿原酸等次生代谢物质的合成,构建了p CXSN::Nt C3H超量表达载体,利用农杆菌介导的叶盘转化法将Nt C3H基因转入野生型烟草三生烟,并通过HPLC检测转基因烟草中绿原酸以及芦丁、山奈酚芸香苷等类黄酮的含量变化。结果显示,与野生型三生烟草相比,转基因烟草叶片中绿原酸及芦丁的含量最高,分别提高了3.6倍和6.1倍,山奈酚芸香苷含量提高了24.6倍。研究结果证实了Nt C3H基因参与烟草中类黄酮和绿原酸等次生代谢物质的合成。 展开更多
关键词 烟草 Ntc3h基因 绿原酸 类黄酮
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盐酸法舒地尔对C3H10T1/2细胞增殖与成脂分化的影响 被引量:4
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作者 屈长青 常好才 +1 位作者 宫雯珺 姬云涛 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2013年第4期33-36,44,共5页
【目的】探讨Rho分子信号通路阻断剂盐酸法舒地尔(HA1077)对C3H10T1/2细胞体外增殖及成脂分化的影响。【方法】体外培养C3H10T1/2细胞株,用HA1077浓度梯度培养液(0(对照组),20,40,60,80,100μmol/L)对其进行处理,通过MTT比色法和油红O... 【目的】探讨Rho分子信号通路阻断剂盐酸法舒地尔(HA1077)对C3H10T1/2细胞体外增殖及成脂分化的影响。【方法】体外培养C3H10T1/2细胞株,用HA1077浓度梯度培养液(0(对照组),20,40,60,80,100μmol/L)对其进行处理,通过MTT比色法和油红O染色法分别检测C3H10T1/2细胞的增殖和分化情况。【结果】HA1077对C3H10T1/2细胞的体外增殖有一定的抑制作用,且呈现出一定的浓度依赖性。但HA1077可提高C3H10T1/2细胞的成脂分化效率,也呈浓度依赖性;且当HA1077浓度大于60μmol/L后,细胞成脂分化率与对照组差异极显著(P<0.01)。【结论】HA1077可抑制C3H10T1/2细胞的增殖,但同时可以促进其成脂分化。 展开更多
关键词 盐酸法舒地尔 c3h10T1 2 增殖 成脂分化
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反转录病毒载体介导Indian hedgehog信号蛋白在C3H10T1/2细胞中的表达及成骨诱导潜能 被引量:3
15
作者 邹沙沙 陈婷婷 +4 位作者 张玲玲 田汝辉 杨施 李铮 胡洪亮 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2012年第24期4381-4386,共6页
背景:目前大量研究证实Indian hedgehog(Ihh)信号通路在骨发育中发挥着重要的调控作用。目的:克隆Ihh重组反转录病毒载体,观察Ihh在C3H10T1/2细胞中的表达及其成骨诱导效果。方法:采用分子克隆技术将Ihh基因与增强型绿色荧光蛋白基因克... 背景:目前大量研究证实Indian hedgehog(Ihh)信号通路在骨发育中发挥着重要的调控作用。目的:克隆Ihh重组反转录病毒载体,观察Ihh在C3H10T1/2细胞中的表达及其成骨诱导效果。方法:采用分子克隆技术将Ihh基因与增强型绿色荧光蛋白基因克隆到反转录病毒载体pSFG上,包装出假病毒转染C3H10T1/2细胞,在共聚焦显微镜下观察其绿色荧光蛋白强度及转染效率。运用Western blot方法检测Ihh蛋白的表达,观察C3H10T1/2细胞形态学变化,碱性磷酸酶染色检测成骨活性。结果与结论:共聚焦显微镜下观察到大量的绿色荧光表达,Western blot检测结果显示Ihh基因及增强型绿色荧光蛋白基因在C3H10T1/2中呈显著共表达。在体外培养过程中,Ihh能诱导C3H10T1/2细胞形态学发生改变,增加碱性磷酸酶活性,提示Ihh具有诱导C3H10T1/2细胞向骨细胞分化的潜能。 展开更多
关键词 骨发育 IHH 反转录病毒 c3h10T1/2 成骨
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多用途基因捕获C3H/10T1/2细胞阳性克隆库的构建及鉴定 被引量:4
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作者 王明科 邹仲敏 +1 位作者 罗成基 粟永萍 《第四军医大学学报》 北大核心 2008年第6期508-512,共5页
目的:以10T1/2细胞为间充质干细胞模型,构建用于间充质干细胞分化及恶性转化分子机制等研究的基因捕获阳性克隆库.方法:Dra I线性化逆转录病毒基因捕获载体ROSAFARY后,与pIRES2-EGFP用脂质体共转染phoenix细胞,LacZ染色证明转染... 目的:以10T1/2细胞为间充质干细胞模型,构建用于间充质干细胞分化及恶性转化分子机制等研究的基因捕获阳性克隆库.方法:Dra I线性化逆转录病毒基因捕获载体ROSAFARY后,与pIRES2-EGFP用脂质体共转染phoenix细胞,LacZ染色证明转染成功后收集病毒上清感染10T1/2细胞.经潮霉素筛选获得阳性克隆,为排除假阳性克隆用LacZ部分片段PCR进行鉴定.结果:ROSAFARY脂质体转染phoenix细胞后48h,GFP指示的转染效率约为20%~30%,LacZ染色有大约10%的阳性率.150mg/L潮霉素筛选病毒感染的10T1/2细胞,挑取药物抗性克隆,PCR鉴定后获得43个阳性克隆,LacZ染色5个为捕获基因高表达细胞克隆.结论:基因捕获技术建立非胚胎干细胞的克隆是可行的,成功建立的基因捕获阳性克隆库为应用基因捕获技术揭示成体干细胞分化及恶性转化分子机制奠定了基础. 展开更多
关键词 基因捕获 c3h/10T1/2细胞 聚合酶链反应R β-半乳糖苷酶类
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热休克蛋白70在心理应激诱发的C3H/HeJ雌鼠乳腺癌中的表达 被引量:5
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作者 亓晓丽 朱熊兆 +1 位作者 姚树桥 张新明 《中国行为医学科学》 CSCD 2004年第3期244-246,共3页
目的探讨热休克蛋白 70 (Heatshockprotein70 ,Hsp70 )在心理应激诱发的乳腺癌中的表达、作用及可能的机制。方法动物随机分为实验组 ( 2 1只 )和对照组 ( 14只 ) ,对实验组小鼠给予饮水冲突和限制应激 ,以建立心理应激的动物模型 ,然... 目的探讨热休克蛋白 70 (Heatshockprotein70 ,Hsp70 )在心理应激诱发的乳腺癌中的表达、作用及可能的机制。方法动物随机分为实验组 ( 2 1只 )和对照组 ( 14只 ) ,对实验组小鼠给予饮水冲突和限制应激 ,以建立心理应激的动物模型 ,然后比较实验组和对照组的乳腺癌发病率、皮质酮水平和Hsp70的表达水平。 结果 ( 1)实验组的乳腺癌发病率 ( 71.4% )明显高于对照组的发病率 ( 2 1.4% ) (P <0 .0 5 ) ;( 2 )实验组血浆皮质酮水平 ( 161.5 1± 162 .82 ) μg/ml明显高于对照组 ( 10 .63± 8.3 7) μg/ml( P <0 .0 1) ;( 3 )实验组Hsp70的阳性细胞数目 ( 12 .47± 11.63 )显著高于对照组 ( 3 .16± 1.77) ( P <0 .0 1)。结论心理应激促进了Hsp70在C3H/HeJ雌鼠乳腺组织中的表达 ,Hsp70的过度表达和乳腺癌的发生密切相关。 展开更多
关键词 热休克蛋白70 心理应激 c3h HeJ 雌鼠 乳腺癌 肿瘤 细胞凋亡
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杨树木质素合成酶c3h基因的克隆及其序列分析 被引量:7
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作者 聂会忠 薛永常 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期889-894,共6页
根据CYP98A3(GenBank登录号为AY064170)cDNA序列保守区设计引物,从正在分化的2年生‘欧美杨107’次生木质部提取的总RNA经RT-PCR扩增出一基因片段,然后与pMD20-T载体连接。重组质粒经限制性内切酶酶切、特异引物PCR扩增和测序鉴定。结... 根据CYP98A3(GenBank登录号为AY064170)cDNA序列保守区设计引物,从正在分化的2年生‘欧美杨107’次生木质部提取的总RNA经RT-PCR扩增出一基因片段,然后与pMD20-T载体连接。重组质粒经限制性内切酶酶切、特异引物PCR扩增和测序鉴定。结果表明,扩增片段长度为994bp,其中包含一个长为495bp的开放阅读框,编码的氨基酸序列(登录号为CAP47423)与NCBI中AY064170的CYP98A3编码氨基酸序列的相似性为91%,初步断定其为CYP98A3家族中的一员,其cNDA序列GenBank登录号为AM920690。参照国内外已发表的部分植物的c3h基因序列,构建了c3h的遗传进化树,分析了不同植物c3h的遗传进化关系。 展开更多
关键词 杨树 木质素 c3h基因 进化
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Islet-1在乙酰化调控网络中特异性辅助C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化 被引量:4
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作者 林建萍 田杰 +4 位作者 刘官信 鲁荣 刘建平 智深深 朱静 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2012年第4期363-368,共6页
目的筛选并分析转染Islet-1慢病毒载体的C3H10T1/2细胞转化为心肌样细胞过程中与Islet-1相互作用的组蛋白乙酰化酶(HATs)和组蛋白去乙酰化酶(HDACs),明确Islet-1在C3H10T1/2细胞分化为心肌样细胞乙酰化调控网络中的关键枢纽作用。方法... 目的筛选并分析转染Islet-1慢病毒载体的C3H10T1/2细胞转化为心肌样细胞过程中与Islet-1相互作用的组蛋白乙酰化酶(HATs)和组蛋白去乙酰化酶(HDACs),明确Islet-1在C3H10T1/2细胞分化为心肌样细胞乙酰化调控网络中的关键枢纽作用。方法培养转染Islet-1慢病毒载体的C3H10T1/2细胞,观察细胞形态。免疫荧光和免疫印迹检测Islet-1的表达部位和最高表达时间点。免疫共沉淀与Islet-1结合的蛋白。免疫印迹验证Islet-1相互作用的HATs和HDACs。结果诱导组细胞形态出现心肌样细胞改变。各组Islet-1主要在胞质表达。诱导组Islet-1表达量在诱导后3周最高(0.782±0.015)。诱导组Islet-1表达量显著高于空白对照组和C3H10组(分别为0.819±0.026,0.127±0.006和0.126±0.001)(P<0.05),免疫共沉淀技术可行。与Islet-1相互作用的HATs和HDACs有GCN5、P300/CBP和HDAC4。结论 Islet-1与GCN5、P300/CBP和HDAC4相互作用特异性辅助C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化。 展开更多
关键词 c3h10T1/2细胞 Islet-1 心肌样细胞 组蛋白乙酰化
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骨形态发生蛋白2诱导C3H10T1/2细胞成骨分化中长链非编码RNA的作用 被引量:4
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作者 程晨 高艳 +1 位作者 李静 潘秋辉 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第20期3223-3229,共7页
背景:人类长链非编码RNA是现今的研究热点,已有研究报道其在肿瘤发生中的作用机制,但其在成骨分化方面的机制并不明确。目的:观察人类长链非编码RNA在经骨形态发生蛋白2诱导小鼠C3H10T1/2细胞成骨分化中的作用,并探讨其分子机制。方法:... 背景:人类长链非编码RNA是现今的研究热点,已有研究报道其在肿瘤发生中的作用机制,但其在成骨分化方面的机制并不明确。目的:观察人类长链非编码RNA在经骨形态发生蛋白2诱导小鼠C3H10T1/2细胞成骨分化中的作用,并探讨其分子机制。方法:首先进行碱性磷酸酶染色和成骨指标基因检测。对C3H10T1/2细胞在骨形态发生蛋白2诱导下的成骨分化过程长链非编码RNA表达变化进行芯片分析。采用高通量测序比较骨形态发生蛋白2诱导组和未经骨形态发生蛋白2诱导组的表达变化,筛选出表达下降的基因。过表达相应长链非编码RNA后观察对骨形态发生蛋白2诱导成骨分化的影响。结果与结论:骨形态发生蛋白2诱导C3H10T1/2细胞导致碱性磷酸酶活性增加。骨形态发生蛋白2诱导72 h后,碱性磷酸酶、Id1、骨钙素、Runx2、sp7表达上升(P<0.05)。未诱导C3H10T1/2细胞与骨形态发生蛋白2诱导细胞芯片杂交后结果比较,下降达1.5倍的长链非编码RNAs有24条,其中只有AK035085有内含子。与未过表达AK035085的对照组相比,骨形态发生蛋白2诱导72 h后AK035085过表达的C3H10T1/2细胞碱性磷酸酶、Id1、骨钙素、Runx2、sp7表达均下降(P<0.05)。提示骨形态发生蛋白2可刺激C3H10T1/2细胞发生成骨分化,AK035085可能对C3H10T1/2细胞的成骨分化存在抑制作用。 展开更多
关键词 组织构建 骨组织工程 长链非编码RNA c3h10T12细胞 骨形态发生蛋白2 成骨分化 国家自然科学基金
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