CD88在人类肿瘤中的表达和意义

过敏毒素C5a是补体激活后C5蛋白裂解后产生的一种炎性反应驱化因子。C5a通过与其受体(CD88)结合而发挥作用,C5a与CD88结合后在多种炎症反应过程中发挥重要作用被人们熟知。然而,近年来发现许多肿瘤中存在补体系统的激活及多种补体相关促炎分子(如CD88等)在患者血清中明显升高,且在多种肿瘤的发生发展中发挥着重要的生物学作用。关于CD88在肿瘤中的功能作用及意义尚未得到系统的总结和评述,本综述将重点介绍CD88在人类肿瘤中的表达情况和意义,并阐述了其在肿瘤治疗中作为重要靶点的研究进展。

人C5a过敏毒素拮抗剂的分子设计及其活性检测

目的 :从蛋白质结构与功能的关系出发 ,探讨C5aR与其配体的C5a的结合位。方法 :按分子设计理论 ,采用亲水性方案寻找C5aR胞外区高亲水性区域 ,Fmoc方案人工合成C5aR第 9～ 30位氨基酸基序 (P2 2肽 ) ,经高效液相色谱纯化 ,毛细管电泳鉴定。结果 :合成多肽 (P2 2 )的纯度为 95 19% ,每次缩合的平均效率为 99 78% ;能与anti C5aRMcAb(S5 1,Serotic公司 )有效地结合 ,酶联OD490极显著高于同浓度对照多肽C2 0 ;还可被配体rh C5a( 10ng ml)明显抑制而降低其酶联OD值 (P <0 0 5 ) ,此外 10ng mlP2 2还可抑制rhC5a所致U937细胞胞浆Ca2 + 升高 (P <0 0 1)。结论 :从C5aR分子中寻找C5a结合位基序 ,可拮抗C5a的过敏毒素作用 。

小鼠抗人C5aR短肽(9～30)单克隆抗体制备及鉴定

目的获得有生物功能的小鼠抗人 C5 a R短肽单克隆抗体。方法对 C5 a受体 (CD88)二级结构和 B细胞表位进行分析研究 ,采用 Fmoc方案固相合成 C5 a R N-端第 9～ 30位氨基酸残基的 2 2 -肽 ,以此为抗原免疫 Balb/ c小鼠。结果建立了 1株小鼠抗人 C5 a R短肽杂交瘤细胞系 E3,其平均染色体数目为 10 2条 ,所分泌抗体为 Ig G1,κ型 ,腹水抗体效价为 1×10 - 4 ～ 1× 10 - 6 ,可识别 U 937、人脐静脉内皮细胞 (VEC)和 PMN等表达 C5 a R细胞。 E3单抗的亲和常数 Ka=2 .5× 10 5 ,其结合表位为 C5 a R第 15～ 2 1位氨基酸基序 D1 5 DKDTL2 0 D。结论 B细胞表位多肽具有免疫原性 ,可制作单克隆抗体 ,为 C5 a-C5 a R相互作用的研究以及 AL I、ARDS等 C5 a相关疾病的研究提供实验材料。

中和C5a过敏毒素的分子设计研究(英文)

目的 从蛋白质结构与功能的关系出发，探讨Ｃ５ａＲ与其配体Ｃ５ａ的结合位。方法 按分子设计理论，采用亲水性方案寻打Ｃ５ａ胞外区高亲水性区域，Ｆｍｏｃ方案人工合成Ｃ５ａ第９～３０位氨基酸基序（Ｐ２２肽），经高压液相色谱纯化，毛细管电泳鉴定。结果合成多肽（Ｐ２２）的纯度为９５．１９％，每次缩合的平均效率为９９．７８％；能与ａｎｔｉ－Ｃ５ａＲ ＭｃＡｂ（Ｓ５／Ⅰ，Ｓｅｒｏｔｉｃ公司）有效地结合。

补体C5a受体拮抗剂体外筛选平台的建立

目的建立稳定的补体C5a受体(C5aR)拮抗剂筛选平台。方法采集人外周静脉抗凝血,与不同浓度C5a、脂多糖及PMX-53孵育10～30 min。通过流式细胞术检测中性粒细胞表面CD11b的表达,溶菌酶检测试剂盒观察中性粒细胞分泌溶菌酶的能力变化,罗丹明-123检测中性粒细胞呼吸爆发的变化,ELISA检测细胞上清液中白细胞介素(IL)-8的表达变化,Western Blotting检测胞外信号调节激酶(ERK)、蛋白激酶B(AKB或AKT)含量及其磷酸化水平的变化,考察补体C5a刺激及使用阳性药物PMX-53后对各生化指标的影响。结果 C5a刺激人外周血可增强中性粒细胞CD11b的表达,促进溶菌酶释放和IL-8的分泌,激发呼吸爆发,上调ERK、AKT的含量和磷酸化水平,阳性药物PMX-53则能显著抑制C5a的上述生物学效应。结论成功建立C5aR拮抗剂人全血体外筛选平台,为C5aR拮抗剂筛选及功能研究奠定了基础。

免疫组化及原位杂交检测人肺组织中的C5a受体

目的 检测正常人肺组织细胞上C5aR的表达和分布 ,阐明急性肺损伤、ARDS等病理发生过程中C5aR可能的作用。方法 以小鼠抗人C5aR短肽单克隆抗体作为检测抗体 ,对人肺组织细胞作免疫组织化学ABC染色 ;pUC1 9 C5aR质粒经BamHⅠ和HindⅢ双酶切 ,得到 91 0bp的片段 ,地高辛标记制作原位杂交的探针 ,对肺血管内皮细胞作原位杂交检测。结果 发现肺血管内皮细胞有C5aRmRNA。肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞、肺泡平滑肌细胞、血管内皮细胞以及巨噬细胞上均有C5aR表达。结论 C5a作为前炎症因子 ,与肺组织细胞上C5aR作用后 ,可能会介导急性肺损伤、ARDS等疾病的发生 ,说明这些疾病可能与C5a有关。

血脂代谢紊乱与外周血白细胞C5a受体表达的关系

探讨血脂代谢紊乱与外周血白细胞C5a受体表达的关系。方法高脂血症患者60人,同期正常对照30人,测定血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、脂蛋白(a)、氧化低密度脂蛋白(oxLDL)等脂代谢指标以及补体C3、C4,使用流式细胞仪检测外周血白细胞C5a受体,分析脂代谢异常以及补体C3、C4水平与C5a受体表达的关系。结果高脂血症组总胆固醇、甘油三脂、LDL-C、oxLDL、脂蛋白(a)、补体C3、C4等较对照组明显升高;高脂血症组CD88阳性淋巴细胞、单核细胞、粒细胞平均荧光强度有升高趋势(3.05±0.91比2.964±0.76、4.90±1.33比4 58±1.13、13.87±4.77比13.604±3.54).但差异无统计学意义(P>0.05);直线相关分析,CD88阳性单核细胞及粒细胞平均荧光强度与脂蛋白(a)正相关,CD88阳性单核细胞及粒细胞平均荧光强度与oxLDL亦呈正相关,与总胆固醇、甘油三脂、LDL-C、HDL-C、补体C3和C4不相关;偏相关分析及多元回归显示oxLDL是CD88阳性单核细胞及粒细胞平均荧光强度的独立预测因素。结论oxLDL可能影响外周血白细胞C5a受体的表达。