人重组C5a对微血管内皮细胞表达组织因子的影响

目的研究人重组C5a（human—recombinant C5a，rh—C5a）对人肺微血管内皮细胞（human pulmonary microvascular endothelial cells，HPMECs）表达组织因子（tissue factor，TF）的影响。方法用不同浓度（100、200、300μg／L）的rh—C5a刺激HPMECs 8h和同一浓度（200μg／L）的rh—C5a刺激HPMECs 4、8、12h。采用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测TF基因和蛋白表达情况。选取刺激浓度为200μg／L，作用时间为8h组进行C5a反义肽R4干预，相同的方法检测TF基因和蛋白表达并用免疫组织化学方法定性检测NF—κB p65变化。结果正常的HPMECs基本不表达TF，rh—C5a刺激后，TF mRNA和蛋白开始表达，刺激的12h内呈现出时效和量效关系（P〈0．05）。用C5a反义肽R4干预后，TF mRNA水平降至未干预组的68％（P〈0．05），蛋白表达也有下降。免疫组织化学示p65在胞浆内明显增加并有部分人核。结论在刺激的12h内，C5a对HPMECs表达TF存在时间-浓度的依赖关系，机制可能是C5a与其受体结合后，通过细胞信号转导途径活化NF—κB，从而调节基因和蛋白的表达。