尾状核区注射法建立Wistar大鼠C6胶质瘤模型的实验研究

目的探讨尾状核区注射法建立Wistar大鼠C6胶质瘤模型的技术要点及成瘤效果。方法立体定向辅助下将C6细胞接种于Wistar大鼠右侧尾状核区,建立C6细胞胶质瘤鼠模型。共建立15只模型鼠,分别于接种的第7、14、21天行头颅MRI检查,3周后分批灌杀动物行病理HE切片观察、S100及GFAP免疫组织化学检测,了解肿瘤的生长特性和病理特征。对照组5只Wistar大鼠接种同体积培养液,同样方法进行检测。结果用本法建立Wistar大鼠C6胶质瘤模型15只,成功率为100%。磁共振扫描显示接种第2周时10只大鼠有肿瘤生长,MR表现为T2高信号;第3周时全部有肿瘤生长,瘤周水肿明显。病理、免疫组织化学显示大鼠C6胶质瘤生长特性和病理特征与人脑胶质瘤相似。结论该方法建立的胶质瘤模型稳定是进行胶质瘤研究的较好模型。

磁共振示踪法定量测量大鼠C6胶质瘤模型细胞外间隙扩散参数

目的应用磁共振示踪技术定量比较了不同时期的大鼠C6胶质瘤的细胞外间隙扩散参数。并对影响细胞外间隙扩散的细胞外基质成分进行了分析。方法将示踪剂钆喷酸葡胺(gadolinium-diethylene triamine pentaacetic acid,Gd-DTPA)作为示踪剂导入大鼠脑细胞外间隙内,采用磁共振示踪法动态监测示踪剂在大鼠脑内的扩散与清除,利用已建立的数学模型,计算有效扩散系数(D*),清除速率常数(k’)和半衰期(thalf-life)。对细胞外基质的主要成分,如硫酸软骨素蛋白多糖(CSPGs)、腱生蛋白C、胶原蛋白IV型进行免疫组化和蛋白质印记分析。结果与10 d C6胶质瘤相比,20 d胶质瘤有效扩散系数((6.67±1.78)×10-5mm2/s vs.(1.26±0.27)×10-4mm2/s;t=4.265;P<0.01)及清除速率常数((7.67±2.29)×10-5mm2/s)vs.(1.46±0.36)×10-4mm2/s);t=3.87;P<0.05)减小,迂曲度增大((3.99±0.57)vs.(2.83±0.29);t=4.11;P<0.01)),半衰期延长((0.86±0.23 h)vs.(1.64±0.12 h);(t=5.91;P<0.01))。20 d胶质瘤的细胞外基质的硫酸软骨素蛋白糖((0.48±0.07)vs.(0.32±0.09);t=4.663;p<0.01)、腱生蛋白-C(0.29±0.04)vs.(0.58±0.11);t=6.50;P<0.01)和胶原蛋白IV型(0.24±0.07)vs.(0.33±0.06);t=3.81;P<0.05)的含量较10 d胶质瘤明显增加。结论随C6胶质瘤进展,细胞间隙扩散参数发生变化;细胞外基质的含量影响细胞外间隙扩散;我们相信本研究有助于我们更好地认识神经胶质瘤微环境,并将为经间质途径治疗神经胶质瘤提供参考。

9.4T磁共振弥散张量纤维束成像对SD大鼠C6胶质瘤模型肿瘤生长特点随时间变化的影像学分析

目的探讨9.4 T磁共振弥散张量纤维束成像(DTT)对SD大鼠C6胶质瘤模型皮质纤维束(CST)随着肿瘤发展所致的一系列影像学变化,并通过相关病理检验验证影像诊断中的意义。方法 1使用立体定向法对20只成年雄性的SD大鼠的右脑尾状核注入体积为10μl含106个的C6胶质瘤细胞悬浮液。2运用9.4 T行常规磁共振(MRI)、弥散张量成像(DTI)和DTT检查后,运用Function tool软件处理,得到各向异性分数图[纤维束重组成像(FA)]图和方向编码彩色图及双侧CST 3D纤维束重建图对肿瘤病灶区域及肿瘤周边水肿区及正常白质区进行FA值及平均弥散系数(MD)值测量,进行FA图像信号强度及对比度的分析,并且观察分析不同时期的SD大鼠C6脑胶质瘤对皮质脊髓束解剖关系的影响,然后行HE染色进行病理证实。结果所有SD大鼠C6脑胶质瘤模型均完成3D纤维束FA图像重建。测量的FA值在3个区域比较差异(肿瘤实质区、周围水肿带、正常脑白质区)均有统计学意义(P<0.05),水肿带和肿瘤实质区测量的FA值差异无统计学意义(P>0.05),而3个部位的测量的MD值差异有统计学意义(P<0.05),DTT显示随着时间的推移,脊髓纤维束容易受到脑肿瘤占位、浸润、瘤周水肿带等的影响,纤维束可出现破坏和移位。结论 9.4 T磁共振DTT能对不同时期SD大鼠C6胶质瘤模型做出直观观察,能较好显示皮质纤维束解剖关系的改变,病理上的改变也证实影像上的分析。

MR弥散张量成像和灌注成像对鼠脑C6胶质瘤模型的量化分析

目的:探讨MR弥散张量成像和灌注成像在大鼠C6脑胶质瘤模型诊断中的意义。方法:构建大鼠C6脑胶质瘤模型,选择肿瘤最大层面分别获取Ktrans、Kep、Ve、MD和FA图。结果:Ktrans、Kep、Ve、MD和FA值在肿瘤区域、坏死区域和正常脑组织均存在统计学差异(P<0.001)。Ktrans值与Kep值呈高度正相关(肿瘤区域:0.932,P<0.001;坏死区域:0.921,P<0.00l;正常组织:0.071,P=0.676);扣除Ktrans值的影响,Kep值和Ve值呈负相关(肿瘤区域:-0.602,P<0.001;坏死区域:-0.617,P<0.001;正常组织:0.084,P=0.626);扣除Kep值的影响,Ktrans值和Ve值呈正相关(肿瘤区域:0.406,P=0.014;坏死区域:0.582,P<0.001;正常组织:0.275,P=0.105)。FA值和MD值呈现负相关(肿瘤区域:-0.898,P<0.001;坏死区域:-0.782,P<0.001;正常组织:-0.478,P=0.003)。结论:MR弥散张量成像和灌注成像有助于胶质瘤模型中肿瘤区域、坏死区域和正常脑组织的鉴别。

榄香烯和VEGF多克隆抗体联合应用对C_6胶质瘤增殖抑制作用的研究

目的:研究榄香烯和VEGF多克隆抗体联合应用对昆明小鼠皮下C6胶质瘤的抑制作用。方法:建立昆明小鼠皮下C6胶质瘤模型,将接种成瘤后的小鼠随机分成4组,每组8只,组给予生理盐水,组给予榄香烯,组给予VEGF多克隆抗体,组给予榄香烯和VEGF多克隆抗体;镜下观察肿瘤组织病理切片。流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡率。结果:实验组肿瘤标本见到较多的坏死灶,其中肿瘤细胞可见较多的核破裂,对照组肿瘤标本血管数量较实验组多,血管管壁增厚,内皮细胞增生。肿瘤组织坏死程度和血管的减少量组多于组和组。结论:榄香烯和VEGF多克隆抗体联合应用能更好抑制肿瘤组织的生长,具协同的作用。榄香烯和VEGF多克隆抗体均可促进细胞凋亡,联合应用具有协同效应。

肿瘤坏死因子-α基因治疗联合放疗抗大鼠胶质瘤C6细胞作用的实验研究

背景与目的:恶性胶质瘤预后差,有必要探索新方法提高疗效。本研究用Ad-rhTNF-α基因治疗联合放疗治疗大鼠皮下C6胶质瘤,评估其疗效和安全性。方法:基因工程技术构建Ad-rhTNF-α后,建立大鼠皮下胶质瘤模型,联合治疗组瘤内注射Ad-rhTNF-α,24h后行X线加速器放疗,各对照组作相应处理。放疗5天后处死所有大鼠进行形态学研究。结果:联合治疗组肿瘤体积最小,有丝分裂细胞数量最少,坏死区域最广,凋亡小体最为多见。联合治疗组外周血Th/Ts比值降低(P<0.05),NK细胞数量增多(P<0.05),体内免疫机制上调,效应细胞数量增多,免疫活性增强。各组体重与全血细胞分析的各项指标很接近。结论:Ad-rhTNF-α基因治疗放射联合治疗抗大鼠C6胶质瘤肿瘤作用明显优于单纯放疗和基因治疗,并且在目前剂量下是安全的。

冰片联合顺铂对大鼠C6胶质细胞瘤的治疗作用

[目的]探讨冰片联合顺铂对大鼠C6胶质细胞瘤的治疗作用。[方法]建立大鼠C6胶质瘤细胞模型,于治疗组给予灌服冰片及静脉注射顺铂,21天后分析治疗组与对照组胶质瘤横截面积。[结果]治疗组脑胶质瘤的横截面面积明显小于对照各组(P<0.05)。[结论]冰片能增加血脑屏障对顺铂的通透性,从而提高顺铂对胶质细胞瘤的治疗作用。

^1H-MRS在检测胶质瘤早期放疗反应中的应用

目的观察大鼠C6胶质瘤模型放疗前后氢质子磁共振波谱(1H-MRS)表现,探讨其在早期监测肿瘤治疗反应中的作用。方法建立SD大鼠C6胶质瘤模型,分为照射组(n=10)和未照射组(n=12),建模后第9天给予照射组荷瘤鼠单次大剂量外照射(15 Gy/次/野)。两组大鼠建模后均接受1H-MRS扫描,选择N-乙酰天冬氨酸(NAA)、胆碱(Cho)、乳酸(Lac)为检测肿瘤组织代谢的指标,同时行磁共振扫描(MRI)检测肿瘤体积的变化;连续观察建模后两组代谢物及体积变化,并对两组代谢指标变化与肿瘤体积变化行相关性分析。结果所有大鼠均成功种植肿瘤;未照射组随肿瘤体积增大,Cho、Lac浓度增加,NAA浓度减小,代谢物变化与体积变化呈显著相关性(Cho:r=0.958,P<0.001;Lac:r=0.989,P<0.001;NAA:r=-0.943,P<0.001);照射组放疗后1 d,Cho由3.37 mmol/kg降至2.0 mmol/kg(P<0.01)。放疗后3 d,Lac由2.34 mmol/kg降至1.59 mmol/kg(P<0.01),NAA较治疗前无显著改变(P>0.05),放疗后3 d肿瘤体积较治疗前增加31.4%(P<0.01),放疗后5 d体积开始减小,随后出现肿瘤生长抑制,各代谢指标继续下降且与体积变化呈相关趋势(Cho:r=0.696,P=0.304;Lac:r=0.911,P=0.089;NAA:r=-0.583,P=0.417),MRI检测的体积发生变化之前,1H-MRS检测的代谢物已经出现抑制性变化。结论1H-MRS可无创性获得胶质瘤放疗前后代谢物NAA、Cho、Lac变化信息,较早监测早期治疗反应,敏感性优于MRI,是一种有效的判断近期疗效的检查方法。