全反式维甲酸诱导大鼠C6脑胶质瘤细胞凋亡的实验研究

目的:探讨全反式维甲酸对大鼠C6脑胶质瘤细胞的增殖抑制及其分子机制。方法:MTT法检测全反式维甲酸作用于大鼠C6脑胶质瘤细胞后,观察其对细胞增殖抑制率的影响。流式细胞仪观察肿瘤细胞周期及凋亡率的变化。电镜观察C6细胞超微结构变化。Western blot法在不同时间点对凋亡相关基因caspase-3活性蛋白产物的表达进行了检测。结果:MTT结果表明ATRA对C6细胞的抑制作用具有时间和浓度依赖性。流式细胞仪检测证明与对照组相比,处理组C6细胞发生G1期阻滞;S、G2期细胞比例下降;细胞出现亚二倍峰,凋亡比例明显增加。电镜下全反式维甲酸作用72h后处理组C6细胞呈凋亡改变:如核固缩、染色质趋边凝聚。Western blot检测发现,处理组出现了caspase-3蛋白活性裂解片段。结论:全反式维甲酸抑制C6脑胶质瘤细胞生长,全反式维甲酸抑制脑胶质瘤的作用机理可能至少通过改变细胞周期分布、诱导凋亡来实现。

大鼠C6脑胶质瘤动物实验模型的建立

目的 为脑胶质瘤的基础理论、临床治疗和药效学研究提供简便、经济、实用的大鼠C6脑胶质瘤动物实验模型。方法 采用自制大鼠脑固定架 ,固定后 ,于脑靶点接种C6胶质瘤细胞。观察动物行为状态和生存期 ,并对脑肿瘤进行形态学 ,细胞学和分子生物学相关指标的检测。结果 接种C6胶质瘤细胞后 ,动物进食量减少 ,体重下降 ,有的动物出现眶周出血 ,眼球突出 ,自身旋转 ,癫痫发作 ,偏瘫等症状 ,大约在 2至 3周内 ,动物大多死亡 ,病理解剖显示颅内肿瘤形成。结论 该方法建立的脑胶质瘤具有与人脑胶质瘤相似的特性 ,肿瘤形成时间短 ,存活期较稳定 ,可供脑胶质瘤基础理论、实验治疗和药效学研究的需要。

旁分泌形式作用的人AngiostatinK(1-3)抑制大鼠C6脑胶质瘤的研究

目的 :研究人AK(1 3) [AngiostatinKringle (1 3) ]对大鼠C6脑胶质瘤的抑瘤效应 .方法 :利用基因转染的方法获得重组人AK(1 3)基因的C6胶质瘤细胞 ;以细胞增殖试验及免疫组化等方法检测转染细胞株是否表达了具有生物活性的人AK(1 3) .正常大鼠C6脑胶质瘤模型作对照 ,研究转染细胞株在大鼠脑内的致瘤性 .脑组织切片进行Ⅷ因子染色 .结果 :大鼠C6胶质瘤细胞稳定表达的人AK(1 3) ,在体外明显抑制牛主动脉内皮细胞的增殖 ;在体内明显抑制了大鼠C6脑胶质瘤的生长 .试验组脑切片内仅见显微瘤灶 ,Ⅷ因子染色少见新生毛细血管 .结论 :旁分泌形式作用于大鼠C6脑胶质瘤内血管内皮细胞的人AK(1 3)可明显抑制肿瘤的血管生成 。

大鼠C6脑胶质瘤血-脑屏障的硝酸镧示踪电镜研究

目的研究C6脑胶质瘤不同区域血-脑屏障(BBB)的超微结构特征及血-脑肿瘤屏障(BBTB)通透性增高的途径。方法运用成瘤3周SD大鼠C6脑胶质瘤动物模型,取肿瘤中心、肿瘤边缘、距肿瘤边界2mm以内及2mm以外的同侧大脑半球和对侧大脑半球脑皮质等五个部位的脑组织,采用外源性硝酸镧透射电镜示踪法,观察BBB/BBTB超微结构特征。结果La3+在肿瘤中心与边缘部充填并通过血管内皮细胞之紧密连接至血管腔外-脑间质裂隙内,距肿瘤边界2mm以内的同侧大脑半球脑组织也有La3+渗出至局部基底膜,而其它观察脑区La3+则完全封闭于血管腔内;各部位脑血管内皮细胞胞浆内均无La3+;BM呈线状连续,管腔内无瘤细胞。结论C6胶质瘤紧密连接开放导致BBTB通透性增高;C6胶质瘤诱导的屏障功能破坏随其至肿瘤距离的增加而减弱。

大鼠C6脑胶质瘤模型的实验研究

应用定向法将体外培养的大鼠C6胶质瘤细胞悬液 10 μl注入大鼠右脑尾状核 ,悬液内含 1%琼脂糖和 1× 10 6个C6细胞。接种后行一般和MRI检查 ,对 5组接种大鼠分别在第 10、15、2 0、2 5天和自然死亡前做主动脉多聚甲醛灌注固定 ,对脑组织和瘤体标本行HE染色。MRI结果表明 ,5 0只接种大鼠脑内均有肿瘤生长 ,远处和颅外转移率为 4%。所建C6脑胶质瘤模型生长稳定、大鼠生存时间易于判定 ,为脑胶质瘤化疗、放疗和基因治疗奠定了实验基础。

骨髓间充质干细胞在C6脑胶质瘤细胞微环境中瘤性转化的生物学分析

目的:探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)在C6脑胶质瘤细胞微环境中是否发生了生物学特性的改变。方法:全骨髓贴壁筛选法分离培养SD大鼠BMSCs,免疫荧光(immunofluorescence,IF)法检测BMSCs表面标志分子CD90+、CD105+、CD45-;活细胞荧光染料CM-Dil标记BMSCs(CM-Dil+BMSCs),流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测标记效率,台盼蓝染色法连续监测BMSCs死亡率;CM-Dil+BMSCs与C6脑胶质瘤细胞直接接触共培养为直接共培养组,BMSCs与C6脑胶质瘤细胞非接触共培养为间接共培养组,阳性对照组为C6脑胶质瘤细胞单独培养,阴性对照组为BMSCs单独培养,培养7 d后,IF法检测各组酸性胶质纤维蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、CD90、CD105表达情况;FCM分选实验组CM-dil+BMSCs和C6脑胶质瘤细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测各组GFAP、PTEN、Bcl-xl、CyclinD1、CD90、CD105基因的表达。结果:①培养至第3代的BMSCs 90%以上表达CD90、CD105且不表达CD45;②IF结果显示直接共培养组、间接共培养组BMSCs细胞表达GFAP水平较阴性对照组BMSCs均增高。③RT-qPCR结果显示直接共培养组、间接共培养组BMSCs细胞GFAP、PTEN、Bcl-xl、CyclinD1基因表达水平较阴性对照组BMSCs明显增高(P<0.05),且直接共培养组与间接共培养组比较无明显差异(P>0.05);同时,直接共培养组、间接共培养组BMSCs的CD90、CD105基因表达水平较阴性对照组BMSCs显著降低(P<0.05)。结论:BMSCs在C6脑胶质瘤细胞微环境中存在潜在瘤性转化的倾向。

冬凌草甲素诱导C6脑胶质瘤细胞凋亡的初步研究

目的:研究冬凌草甲素对大鼠C6脑胶质瘤细胞的抑制增殖及诱导凋亡的作用。方法:不同浓度的冬凌草甲素在不同的时间间隔内作用于C6脑胶质瘤细胞,用冬凌草甲素浓度时间生存曲线来测试冬凌草甲素对C6脑胶质瘤细胞的作用。用流式细胞技术来分析细胞周期的分布情况及凋亡细胞的百分数。结果:生存曲线结果证实冬凌草甲素诱导增殖抑制呈浓度依赖和时间依赖。Hochest 33258斑点染色及流式细胞技术揭示冬凌草甲素诱导C6脑胶质瘤细胞凋亡及抑制其进入细胞周期的G2/M相。结论:冬凌草甲素能够抑制C6脑胶质瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡。

温阳通窍中药复方含药血清对C6脑胶质瘤细胞增殖影响的实验研究

[目的]观察温阳通窍中药复方含药血清对C6脑胶质瘤细胞增殖的影响。[方法]采用MTT法测定样品对体外培养的肿瘤细胞生长的抑制作用,并在药物代谢不同时间(2 h,4 h,6 h)检测不同剂量的温阳通窍中药复方对C6脑胶质瘤细胞的抑制作用,同时进行空白组对照比较。[结果]温阳通窍中药复方对C6细胞的IC50值约为30.29μg/m L,细胞毒效果欠佳。10%血清浓度下,药物代谢2、4、6 h后,高、低剂量组对C6脑胶质瘤细胞的抑制率分别为30.22%、21.6%、28.3%和32.87%、9.86%、47.98%。[结论]温阳通窍中药复方对C6脑胶质瘤细胞的增殖具有一定抑制作用,但其抑瘤作用不存在时间与剂量依赖关系,这一结果或许与药物在体内代谢、次生活性产物的出现相关。

大鼠C6脑胶质瘤MR灌注成像初探

目的 建立大鼠C6脑胶质瘤模型 ,初步探讨磁共振灌注成像 (MRPWI)用于实验性脑胶质瘤研究的可行性。材料与方法 15只荷瘤大鼠随机分成三组 ,每组 5只。用立体定向技术将C6细胞接种在大鼠的右侧尾状核建立模型。MRPWI对比剂剂量分别为 0 .2mmol/kg体重 (第一组 )、0 .4mmol/kg体重 (第二组 )和 0 .6mmol/kg体重(第三组 )。根据PWI时间 信号强度曲线计算rCBV、SRRmax、QrCBV和QSRRmax值。结果 三组大鼠肿瘤组织rCBV和SRRmax值皆大于正常脑组织 (P <0 .0 1)。三组大鼠QrCBV分别为 1.77± 0 .12 (第一组 )、2 .0 7± 0 .17(第二组 )和 1.36±0 .10 (第三组 ) ,第二组大于第一组 (P <0 .0 1) ,第三组小于第一组 (P <0 .0 1)。三组大鼠QSRRmax分别为 1.4 8± 0 .2 5(第一组 )、1.6 9± 0 .18(第二组 )和 1.18± 0 .0 6 (第三组 ) ,第三组小于第一组 (P <0 .0 5 ) ,然而第二组与第一组之间无显著性差异。结论 MRPWI可用作研究大鼠C6脑胶质瘤 ,其中对比剂剂量以 0 .2～ 0 .

氯化三乙基锡对体外培养大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨氯化三乙基锡(TETC)对体外培养大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法采用MTT法检测0.5,1.0和2.0μmol/L TETC对体外培养大鼠C6脑胶质瘤细胞作用24 h和48 h后细胞增殖的影响、HE染色细胞形态学观察0.5,1.0和2.0μmol/L TETC对体外培养大鼠C6脑胶质瘤细胞作用48 h后细胞增殖和形态学变化。采用透射电镜观察0.5,1.0和2.0μmol/LTETC作用C6细胞48 h后的超微形态学变化。采用荧光原位末端标记方法检测细胞凋亡。结果MTT法及HE染色细胞形态学观察均显示0.5,1.0和2.0μmol/L TETC在体外均可抑制C6细胞增殖,C6细胞增殖率存在着剂量依赖性和时间依赖性降低趋势;HE染色和透射电镜可观察到C6细胞凋亡的形态学变化。荧光原位末端标记方法检测到细胞凋亡率存在剂量依赖性上升趋势。结论TETC可抑制体外培养大鼠C6胶质瘤细胞增殖,其机制可能主要与C6细胞凋亡有关。

大鼠C6脑胶质瘤血-瘤屏障的HRP示踪电镜研究

目的研究C6脑胶质瘤不同区域BBB的通透性改变及超微结构特征。方法运用中晚期SD大鼠C6脑胶质瘤动物模型,以肿瘤中心、肿瘤边缘、邻近肿瘤脑组织(BAT)、远隔肿瘤脑组织(BDT)和正常脑组织(NBT)为研究热点区,采用外源性辣根过氧化物酶(HRP)酶组化光镜、示踪透射电镜观察脑血管内皮细胞(BMECs)紧密连接(TJs)和胞饮的改变。结果光镜观察肿瘤区HRP在血管腔及管壁周围弥散存在,而非肿瘤区则呈线状排列于血管内皮腔面;电镜示HRP在肿瘤中心与边缘部充填并通过BMECs之TJs至血管腔外-脑间质裂隙内,BAT有HRP渗出至局部基底膜(BM),而NBT和BDT则完全封闭于血管腔内;肿瘤BMECs胞浆内吞饮囊泡数显著高于非肿瘤组(P<0.05),但两者几乎均无充填HRP的囊泡(P>0.05)。结论TJs开放是C6脑胶质瘤血-瘤屏障(BTB)通透性增高的结构基础和物质血管外渗的主要途径,胞饮作用甚微;C6胶质瘤诱导的屏障功能破坏随肿瘤距离的增加而减弱。

SD大鼠C6脑胶质瘤伽玛刀干预前后VEGF的表达变化

目的通过对C6大鼠脑胶质瘤的伽玛刀治疗,检测伽玛刀治疗前后VEGF的变化,探讨伽玛刀治疗胶质瘤作用机制。方法 50只SD大鼠,采用立体定向法对40只SD大鼠进行动物造模,10只作为正常对照组,14 d后对其中20只进行伽玛刀治疗作为治疗组,20只作为肿瘤对照组。伽玛刀治疗后7 d,对所有大鼠处死并应用免疫组化法检测VEGF并进行统计学分析。结果 VEGF在正常大鼠基本没有表达,在肿瘤对照组大鼠中表达增强,伽玛刀照射组VEGF的表达降低。结论伽玛射线可降低大鼠C6脑胶质瘤VEGF表达。

内皮抑制素治疗大鼠C6脑胶质瘤的实验研究

目的 :观察内皮抑制素对大鼠脑胶质瘤的治疗作用 ,并探讨治疗剂量的选择。方法 :建立大鼠脑胶质瘤模型后第 15天 ,以 5mg Kg·d、10mg Kg·d和 2 0mg Kg·d 3种剂量内皮抑制素皮下注射治疗 7d ,用磁共振成像观察肿瘤体积的变化。结果 :治疗结束时 ,3种剂量的肿瘤生长抑制率分别为 2 8.2 9± 3.4 1%、5 3.77± 7.0 8%和 5 9.4 6±3.2 0 % ,5mg剂量组与 10mg和 2 0mg组间有显著统计学差异 ,而 10mg组与 2 0mg组间差异无显著性。结论 :内皮抑制素对胶质瘤有治疗作用 ,治疗剂量应选择 10mg Kg·d。

三氧化二砷治疗大鼠C6脑胶质瘤的研究

目的：研究三氧化二砷（As2O3）体内外抑制脑胶质瘤生长的作用。方法：将不同浓度As2O3（1，2，4，6，8μmol·L^-1）加入体外培养的C6脑胶质瘤，MTT法检测体外细胞增殖率，PCNA染色检测细胞增殖活性、TUNEL法检测原位细胞凋亡和Western印迹检测Bcl-2蛋白表达水平。另将大鼠C6胶质瘤细胞（5×10^5个／15μL）种植于雄性SD大鼠右侧尾状核（模型组、治疗组各10只），治疗组荷载C6脑胶质瘤鼠用前面筛选的浓度（1mmol·L^-1）实施肿瘤原位治疗，对照组仪注入生理盐水，观察动物一般情况、生存期、MRI动态变化及病理改变。结果：与模型组和低浓度组相比，中、高浓度治疗组C6细胞增殖明显下降（P〈0．01），TUNEL法表明细胞凋亡指数上升（P〈0．01）；Western印迹显示凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达水平呈下降趋势。模型组动物均于3周内死亡（17．8±0．92）d；治疗组8只动物死于24～36（32．1±1．35）d；余2只第120天时处死。治疗组MRI检查：4周时扫描的4只动物，1只瘤体有缩小，另3只瘤体变化不大；8～12周时，残存2只动物，1只瘤灶基本消失，1只残存小瘤灶。结论：As2O3具有体内外抑制脑恶性胶质瘤生长的作用，有可能成为临床治疗胶质瘤的候选化疗药物之一。

大鼠C6脑胶质瘤MR扩散加权成像及灌注成像与组织学对照研究

目的对大鼠脑胶质瘤MR扩散加权成像(DWI)及灌注成像(PWI)的实验研究,探讨两者在肿瘤生长及血管生成中的诊断价值。方法对36只颅内种植C6胶质瘤细胞的雌性Wistar大鼠分别于种植后1～4周行MRT1WI、T2WI、DWI、PWI及增强T1WI检查。处死后行脑组织HE及CD34免疫组织化学(简称免疫组化)染色。结果种植后3～4周,肿瘤实质区及肿瘤周围区表观扩散系数(ADC)值与种植后1～2周及对侧脑白质相比,差异均具有统计学意义(P<0.01)。胶质瘤实质区的ADC值随镜下肿瘤组织细胞构成比增加而降低,呈明显的负相关(r=-0.682,P<0.01)。种植后2～4周,肿瘤实质部分最大局部脑血容量(rCBVmax)与种植后1周及对侧脑白质相比,差异均具有统计学意义(P<0.01)。种植后1～2周,肿瘤周围区出现宿主血管rCBVmax值的增高,以种植后1周最为显著(t=3.88,P<0.01)。肿瘤实质区的rCBVmax值与CD34免疫组化微血管密度(MVD)计数值间具有显著的正相关(r=0.716,P<0.01)。结论DWIC6胶质瘤肿瘤实质区ADC值的减低与肿瘤恶性程度有关;C6胶质瘤的PWI肿瘤实质区rCBVmax值与组织学MVD值间具有显著的相关性,可作为1种活体评价肿瘤微血管的指标。肿瘤周围区rCBVmax值可对肿瘤的新生血管与正常脑组织原有血管扩张的鉴别有帮助。

阿霉素控释剂对大鼠C6脑胶质瘤治疗的研究

目的 探讨自制阿霉素控释剂在体内、外释药效果及对大鼠C6胶质瘤动物模型的治疗作用。方法 应用荧光光谱法检测阿霉素控制剂在人工脑脊液及 18只正常家兔脑内药物释放的情况 ;检测阿霉素控释剂对 10只脑内荷瘤SD大鼠生存期的影响以及不同给药方式 (局部或腹腔给药 )对 30只SD大鼠皮下接种肿瘤生长的抑制作用。结果 阿霉素控释剂在人工脑脊液和兔脑内可持续释放达 10d以上 ;局部控释化疗可明显延长脑内荷瘤大鼠的生存期 ,实验组中位生存时间为 31d。局部阿霉素控释化疗对于皮下肿瘤有明显抑制效应 ,与腹腔注射等量阿霉素化疗组相比 ,差异有非常显著性 (P <0 .0 1)。结论 控释化疗在避免系统化疗全身毒性的同时 ,增加肿瘤局部药物浓度 。

诺帝对大鼠C6脑胶质瘤的诱导分化治疗作用及对信号转导分子STAT3和p-STAT3蛋白表达的影响

目的研究诺帝对大鼠C6脑胶质瘤GFAP、Vimentin及信号传导和转录激活因子3(STAT3)和酪氨酸磷酸化STAT3(pSTAT3)表达水平影响,探讨恶性胶质瘤发生机制及诺帝诱导分化作用的分子机制。方法立体定向接种法将C6胶质瘤细胞悬液接种于雄性Wistar大鼠右脑尾状核,采用本室专利方法合成的抗胶质瘤新药诺帝(27和54mg/kg体重腹腔注射)作为治疗方法,观察移植瘤病理组织学和超微结构变化,检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和vimentin两种分化标志物的表达,并观测细胞信号转导分子STAT3及其磷酸化状态pSTAT3蛋白表达水平。结果诺帝治疗组的抑瘤率分别为79.83%～97.74%,移植瘤体积明显减小,肿瘤无论在形态上还是免疫表型上均呈现诱导分化现象,GFAP表达增强,而vimentin表达降低,STAT3和pSTAT3平均光密度值也减低。结论诺帝对C6细胞的原位移植瘤具有诱导分化治疗作用,抑制STAT3表达及其酪氨酸磷酸化活性从而上调GFAP表达可能是其诱导分化治疗作用的机制之一。

大鼠C6脑胶质瘤生长的动态观察和MR灌注成像可行性研究

目的研究大鼠C6脑胶质瘤的生长规律,初步探讨其MR灌注成像研究的可行性。方法立体定向技术将C6细胞接种在13只SD大鼠的右侧尾状核建立模型。MR增强扫描动态观察第一组8只大鼠的肿瘤生长状况。在瘤龄第17 d,对笫二组5只荷瘤大鼠进行磁共振灌注成像(MR PWI)检查,根据时间-信号曲线计算为相对脑血容量(rCBV)和最大信号下降百分比(SRRmax)值。结果第一组大鼠生存期为23.5±3.93 d。肿瘤最大径随瘤龄增长呈线性增大,体积呈指数规律增大,濒死前肿瘤的最大径为9.19±236 mm,体积为515.66±303.33 mm3。第二组大鼠皆成功进行了MR PWI检查,肿瘤组织和正常脑组织rCBV分别为179.04±46.02和87.04±23.00,SRRmax分别为39.91％±6.80％和24.11％±6.36％,肿瘤组织和正常脑组织有显著性差异(P<0.01)。结论大鼠C6脑胶质瘤肿瘤生长有规律性,可用作MR PWI研究。

槲皮素血浆代谢物抗大鼠C6脑胶质瘤细胞的作用

目的:考察槲皮素大鼠血浆中的代谢物对大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖与凋亡的作用。方法:将槲皮素血浆代谢产物槲皮素、槲皮苷和异鼠李素分别与C6胶质瘤细胞共培养24 h后,LDH活性法检测代谢产物对C6脑胶质瘤细胞的毒性作用,流式细胞仪检测C6胶质瘤细胞凋亡与线粒体膜电位变化。结果:槲皮素和异鼠李素对大鼠C6胶质瘤细胞有显著的细胞毒性作用,均能显著诱导C6胶质瘤凋亡(P<0.05),槲皮素显著降低线粒体膜电位(P<0.05)。结论:槲皮素血浆中的槲皮素甲基化代谢产物是主要的抗肿瘤活性成分,而槲皮素苷类代谢产物抗肿瘤活性较弱,为槲皮素及其靶向制剂进一步应用于脑胶质瘤的治疗提供参考依据。

C6脑胶质瘤血管通透性增高及其机制的实验研究

胶质瘤赖以生存的大量新生血管不同于正常脑血管，其内皮屏障功能不完善，但大多化疗药物仍不能通过肿瘤血管，在瘤内达到有效治疗浓度。所以提出血-瘤屏障（Blood-tumor barrier，BTB）。研究表明：紧密连接（tight junction，TJ）是保持血脑屏障（BBB）完整性的重要因素，主要由跨膜蛋白和胞质附着蛋白两种成分组成。