腺病毒介导的人ING4基因诱导C6鼠胶质瘤细胞凋亡

目的:研究肿瘤抑制基因人ING4(inhibitor of growth family,member4)对C6鼠胶质瘤细胞的促凋亡作用。方法:将携有绿色荧光蛋白(GFP)腺病毒空载体Ad及重组腺病毒Ad-hING4-His(由本科室构建)分别感染C6细胞,RT-PCR法检测hING4的转录,Western-blotting法检测目的蛋白的表达。并观测hING4基因表达对C6胶质瘤细胞的作用,用MTT法绘制生长曲线,计算抑瘤率。再取重组腺病毒Ad-hING4-His及空腺病毒Ad作用后的C6细胞分别行激光共聚焦显微镜观察凋亡小体、透射电镜观察亚细胞结构的变化,抽提基因组DNA行琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪检测。结果:Ad-hING4-His感染C6细胞后,RT-PCR及Western-blotting结果提示有目的基因的转录和表达。hING4基因表达可以显著抑制C6细胞生长。激光共聚焦观察可见明显核断裂、透射电镜可见实验组细胞呈凋亡表现、基因组DNA电泳呈现梯形条带,流式细胞仪检测有明显AP峰,凋亡率达18.1%。结论:hING4可以通过促进细胞凋亡作用而显著抑制C6细胞的增殖和生长。

血管内皮生长因子反义RNA对C6鼠胶质瘤细胞体外作用的研究

目的探讨VEGF反义RNA对C6鼠胶质瘤细胞体外作用。方法用Lipofectamine介导的方法将VEGF反义eDNA转染入C6鼠胶质瘤细胞系,观察其对细胞增殖和凋亡的影响。结果在体外VEGF反义RNA可有效抑制C6鼠胶质瘤细胞内源性VEGFmRNA和VEGF蛋白的产生,但对细胞增殖和凋亡无明显影响。结论采用VEGF反义RNA可能成为抗血管形成肿瘤治疗的新策略之一。

IL-12家族亚基基因在大鼠C6胶质瘤细胞表达研究

目的:对大鼠C6胶质瘤细胞应用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,q PCR)法观察白细胞介素-12(Interleukin-12,IL-12)家族亚基基因的表达,为今后IL-12家族在脑胶质瘤方面研究奠定基础。方法:提取大鼠C6胶质瘤细胞RNA,反转录成c DNA,应用q PCR法观察IL-12家族亚基基因在大鼠C6胶质瘤细胞mRNA表达影响并进行比较分析。结果:在大鼠C6胶质瘤细胞中,IL-23a,IL-12a的表达丰度为高,EBI3,IL-27的表达丰度为中,IL-12b的表达丰度为低。结论:IL-12家族与胶质瘤发生、发展密切相关,其中IL-12、IL-23是最有潜力治疗脑胶质瘤的细胞因子,其研究进展将为脑胶质瘤的免疫治疗带来新思路。

体外柴胡皂苷元d对C_6大鼠神经胶质瘤细胞前列腺素E_2生成的影响

目的 观察柴胡皂苷元d(saikogenind ,SGD)对C6大鼠神经胶质瘤细胞体外前列腺素E2 (PGE2 )生成的影响。方法 用放射性免疫法测定细胞产生的PGE2 ,液体闪烁测量法测定14 C花生四烯酸 (AA)标记细胞释放14 C AA。结果 SGD在 1～ 2 0 μmol·L-1范围内 ,抑制由钙离子载体A2 3187诱发C6大鼠神经胶质瘤细胞前列腺素E2 (prostaglandinE2 ,PGE2 )释放 ,其IC50 为 3μmol·L-1,但对花生四烯酸 (arachi donicacid ,AA)释放无影响。SGD不影响细胞微粒体组分将AA转化为PGE2 。结论 SGD抑制由钙离子载体A2 3187诱发体外C6大鼠神经胶质瘤细胞PGE2 产生 ,但不抑制AA释放和直接抑制环氧脂酶 (cyclooxygenase ,COX)活性。

冰片联合顺铂对大鼠C6胶质细胞瘤的治疗作用

[目的]探讨冰片联合顺铂对大鼠C6胶质细胞瘤的治疗作用。[方法]建立大鼠C6胶质瘤细胞模型,于治疗组给予灌服冰片及静脉注射顺铂,21天后分析治疗组与对照组胶质瘤横截面积。[结果]治疗组脑胶质瘤的横截面面积明显小于对照各组(P<0.05)。[结论]冰片能增加血脑屏障对顺铂的通透性,从而提高顺铂对胶质细胞瘤的治疗作用。

缺氧诱导C6大鼠脑胶质瘤细胞亲环素A蛋白表达及其意义

为了探讨缺氧诱导C6大鼠脑胶质瘤细胞亲环素A(Cyclophilin A,CypA)表达水平的改变及其意义。本实验分别于正常(对照)及缺氧(缺氧组)环境培养C6细胞,利用蛋白印迹和RT-PCR技术检测CypA蛋白和mRNA的表达情况;在此基础上,利用RNA干扰技术和MTT技术检测抑制缺氧环境所诱导的CypA蛋白表达对C6细胞增殖的影响。结果显示:缺氧环境诱导C6细胞CypA mRNA和CypA蛋白表达上调,缺氧环境培养1h开始上调,12h达到顶峰;用CypA-siRNA干扰C6细胞CypA表达48h后,C6细胞CypA蛋白水平明显被抑制,细胞增殖能力较对照组显著下降(P<0.01)。本研究表明,缺氧可诱导C6细胞CypA表达水平上调,抑制CypA表达则可降低C6细胞的增殖能力。由此提示,CypA可作为胶质瘤治疗的新靶点。

姜黄素对高糖培养下大鼠神经胶质瘤细胞C6中p53、Siah-1和突触素蛋白表达的影响

目的:体外研究姜黄素对高糖培养下大鼠神经胶质瘤细胞C6中抑癌基因p53、E3泛素连接酶Siah-1和认知相关蛋白突触素(Synaptophysin)表达的影响。方法:采用CCK-8法检测10、20、30、40、50、60、70、80、90、100μmol/L姜黄素在高糖培养下作用C6细胞24、48 h后的细胞存活率。采用Western blot法和实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测作用24 h后正常对照组(无任何处理)、高糖培养组和姜黄素低、高浓度组(高糖+10、30μmol/L姜黄素)细胞中p53、Siah-1、Synaptophysin蛋白及mRNA的表达情况;另同法检测高糖培养下小干扰RNA(siRNA)沉默C6细胞中p53基因后对Siah-1蛋白及mRNA表达的影响。结果:姜黄素在10～40μmol/L浓度范围内对C6细胞存活率无明显影响,大于40μmol/L浓度后呈浓度依赖性降低细胞存活率。与正常对照组比较,高糖培养组C6细胞中p53、Siah-1蛋白及mRNA表达增强,Synaptophysin蛋白及mRNA表达减弱,差异均有统计学意义(P<0.05);与高糖培养组比较,姜黄素低、高浓度组C6细胞中p53、Siah-1蛋白及mRNA表达减弱,Synaptophysin蛋白及mRNA表达增强,差异均有统计学意义(P<0.05)。高糖培养下,沉默p53基因后的C6细胞中Siah-1蛋白及mRNA表达均明显减弱(P<0.05)。结论:高糖条件下,姜黄素可通过下调C6细胞中p53、Siah-1表达,进而上调Synaptophysin表达。

DL型丁胱亚磺酰亚胺对大鼠C_6神经胶质瘤细胞放射增敏效应研究

目的 研究有氧及乏氧状态下DL型丁胱亚磺酰亚胺(DL BSO)对大鼠C6神经胶质瘤细胞的放射增敏效应。方法 以60 Coγ射线为放射源 ,分有氧和乏氧状态下单纯照射组、加药照射组。采用细胞克隆形成方法观察DL BSO对神经胶质瘤细胞的放射增敏效应。结果 有氧状态下 ,DL BSO的放射增敏作用和药物作用时间有关。 0 1mmol·L-1DL BSO用药 2、6、12h ,未能观察到放射增敏作用 ,放射增敏作用仅在用药后 2 4、4 8h出现。乏氧状态下 ,0 1mmol·L-1DL BSO用药后 ,各时间点 (2～ 4 8h)均可见放射增敏效应。有氧、乏氧状态下不同浓度DL BSO的放射增敏作用和药物浓度有关。结论 DL BSO对有氧及乏氧状态下的大鼠C6神经胶质瘤细胞均有放射增敏作用。离体状态下 ,DL BSO主要表现出乏氧增敏作用 ,并呈现一定的时间、浓度依赖关系。

GDNF促进体外培养的大鼠C6胶质瘤细胞增殖的时效及量效关系的研究

目的观察外源性胶质细胞系源性神经营养因子（GDNF）促进大鼠C6胶质瘤细胞增殖的时效及量效关系，为深入研究GDNF对C6细胞的促增殖机制提供最佳的时效及量效作用点。方法将体外培养的C6细胞分为空白对照组、溶剂对照组和实验组（GDNF浓度分别为10、30、50、70、90μg／L，作用时间分别为12、24、48、72h），用MTT比色法检测不同浓度GDNF通过不同作用时间对C6细胞增殖情况的影响。结果浓度在50μg/L以上的GDNF作用24h后，C6细胞增殖水平升高，在48h时达到高峰而后趋于平稳或呈下降趋势，与对照组比差异有统计学意义。其中，70μg/LGDNF作用48h后，C6细胞的增殖率明显高于其他实验组。结论外源性GDNF促进体外培养的大鼠C6胶质瘤细胞增殖的最佳时效及量效作用点为浓度70μg/L、时间48h。

半胱氨酰白三烯受体激动剂和拮抗剂对大鼠胶质瘤C6细胞分化的作用

目的:探讨半胱氨酰白三烯受体在大鼠胶质瘤C6细胞的分化中的作用。方法:以激动剂LTD4、CysLT1受体拮抗剂孟鲁司特以及分化诱导剂forskolin处理C6细胞,观察细胞形态及GFAP蛋白表达变化。结果:Forskolin(10μmol/L)可诱导C6细胞形态变化及GFAP蛋白表达(细胞分化),而LTD4(0.1～100 nmol/L)不能诱导这些变化;单用孟鲁斯特(1μmol/L)无明显作用,但与LTD4(100 nmol/L)合用可诱导C6细胞分化。结论:CysLT2受体可能参与调节大鼠胶质瘤C6细胞的分化。

葡萄籽原花青素对大鼠C6胶质瘤细胞活性氧线粒体去极化和STAT3、Bcl-2、P53P21表达的影响

目的:探讨葡萄籽原花青素(GSP)对大鼠C6胶质瘤细胞活性氧、线粒体去极化和STAT3、P53、P21、Bcl-2 mRNA表达的影响。方法:采用水溶性四唑盐-1(WST-1)法测定GSP干预后C6胶质瘤细胞系的细胞活力,采用ROS指示剂荧光二氯荧光素二乙酸酯(H2DCFDA)测定干预后C6胶质瘤细胞内ROS水平,采用线粒体膜电位指示剂5,50,6,60-四氯-1,10,3,30-四甲基苯并咪唑碳氰化物碘化物(JC-1)测定干预后C6细胞的线粒体去极化,采用定量PCR法检测GSP干预后C6细胞的STAT3、P53、P21、Bcl-2 mRNA表达。结果:GSP各浓度处理C6胶质瘤细胞去极化细胞百分比、STAT3、P53、P21mRNAbiaoda水平均高于空白组(0 mg/L)(P <0.05),WST-1检测OD值、DCF-MFI和Bcl-2 mRNA水平均低于空白组(0 mg/L)(P <0.05);50 mg/LGSP处理C6胶质瘤细胞去极化细胞百分比、STAT3、P53、P21 mRNA水平均高于25 mg/L(P <0.05),WST-1检测OD值、DCF-MFI和Bcl-2 mRNA水平均低于25 mg/L;75 mg/LGSP处理C6胶质瘤细胞去极化细胞百分比、STAT3、P53、P21 mRNA水平均高于25、50 mg/L(P <0.05),OD值、DCF-MFI和Bcl-2 mRNA水平均低于25、50 mg/L。结论:GSP可以降低C6胶质瘤细胞内ROS水平,诱导线粒体去极化,抑制Bcl-2表达,诱导P21、STAT3和P53表达,抑制胶质瘤细胞增殖效呈剂量依赖趋势。

悬浮法培养C6胶质瘤细胞系和该细胞系中脑肿瘤干细胞的分离

目的研究应用无血清培养基悬浮法培养C6胶质瘤细胞系的方法;并分离该细胞系中的脑肿瘤干细胞,观察其生长方式和分化特征。方法应用培养大鼠神经干细胞的培养基和培养方法,在无血清培养基中采用悬浮法培养大鼠C6胶质瘤细胞系;再将分离获得的悬浮生长的脑肿瘤干细胞接种于含血清培养基,观察其分化;应用有限稀释和单克隆形成实验确定该细胞系中肿瘤干细胞的比例。结果C6胶质瘤细胞系中有约1.18%的肿瘤细胞在无血清培养基中能够存活、增殖,形成自由漂浮的细胞球;这种细胞球具有人脑肿瘤干细胞球的特征,并可连续传代,若重新接种于含血清培养基中可重新贴壁分化,贴壁分化后细胞形态与直接在含血清培养基中培养的C6胶质瘤细胞系无明显差别。结论C6大鼠胶质瘤细胞系中含有比例较低的、具有增殖和分化能力脑肿瘤干细胞(约1.18%),该细胞系可在含生长因子的无血清培养基中悬浮生长,并维持细胞系。

蒿甲醚对大鼠原位脑胶质瘤抑瘤及抗血管生成的实验研究

目的探讨蒿甲醚是否在选择性地杀伤SD大鼠原位脑胶质瘤的同时还具有抑制血管生成的作用.方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度蒿甲醚对大鼠C6脑胶质瘤细胞株的生长抑制作用,计算半数抑制浓度(IC5)0;采用立体定位仪在48只SD大鼠大脑皮质层接种C6脑胶质瘤细胞(1×106个/μL),雌、雄各半;随机分为3组,每组8只.分别为空白对照组、阳性对照和实验组.在接种第3天后,实验组各组采用灌胃给药法连续给药10 d;于接种后的第20天解剖大鼠,经活体左心室灌注4%多聚甲醛,固定肿瘤的全脑标本.在大鼠脑部接种穿刺点做冠状切口,按垂直和水平方向测量肿瘤大小.肿瘤体积=a2bπ/6(a为肿瘤的短径,b为肿瘤的长径).采用免疫组化方法检测移植瘤组织微血管密度.结果实验组各组对SD大鼠原位脑胶质瘤的抑瘤率分别为:54.5%、61.0%、64.5%和69.8%,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);各实验组血管计数均明显少于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05、P<0.01).各实验组SD大鼠原位脑胶质瘤体积较空白对照组显著减小.结论在一定剂量范围内,口服蒿甲醚对SD大鼠脑部原位接种C6脑胶质瘤有明显的抑制作用;蒿甲醚抑制原位脑胶质瘤生长的机制之一可能是透过血脑屏障抑制脑胶质瘤血管生成.

蒿甲醚对SD大鼠原位脑胶质瘤的抑瘤实验

目的探讨蒿甲醚(Artemether)对SD大鼠原位脑胶质瘤的抑瘤作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度蒿甲醚对大鼠C6脑胶质瘤细胞株的生长抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50)。立体定位仪对48只(雌、雄各半)SD大鼠建立脑胶质瘤原位模型,随机分为6组:对照组;模型组,蒿甲醚33.3mg/(kg·d)、50.0mg/(kg·d)、66.6mg/(kg·d);联合用药组,蒿甲醚50.0mg/(kg·d)+硫酸亚铁1.5mg/(kg·d);阳性药对照组。采用灌胃给药法连续给予各组SD大鼠用药10天,对照组给予0.9%氯化钠溶液。肿瘤体积按a2bπз6(a为肿瘤的短径,b为肿瘤的长径)计算。全脑标本用4%多聚甲醛固定。肿瘤组织做病理观察。结果蒿甲醚抑制大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖,其抑制作用呈剂量和时间依赖性;模型组和联合用药组对SD大鼠原位脑胶质瘤的抑瘤率分别为:54.5%、61.0%、64.5%和69.8%;模型组组间比较,蒿甲醚66.6mg/(kg·d)用药组的抑瘤率明显高于蒿甲醚33.3mg/(kg·d)用药组;各实验组间比较,联合用药组的抑瘤率显著高于模型组33.3mg/(kg·d)。结论口服蒿甲醚对SD大鼠脑部原位接种C6脑胶质瘤有明显的抑瘤作用。

海带硫酸多糖对胶质瘤细胞增殖的抑制作用

目的探讨海带硫酸多糖(LPS)对大鼠胶质瘤细胞(C6)的体外生长及细胞周期的影响。方法以不同浓度的LPS处理C6细胞,用细胞计数法测定细胞增殖情况,流式细胞仪记录细胞周期的改变,用比色法测定谷胱甘肽-S-转移酶(GSTs)的含量变化。结果随着LPS浓度的增加与作用时间的延长,LPS使细胞增殖能力下降,细胞周期阻滞在G0/G1期,且LPS可以降低GSTs的活性。结论 LPS可明显抑制C6细胞的增殖,并通过阻滞细胞周期促进C6细胞凋亡;LPS还可抑制GSTs活性。

蒿甲醚抗SD大鼠原位脑胶质瘤血管生成的实验

目的探讨蒿甲醚(Artemether)抗SD大鼠原位脑胶质瘤血管生成作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度蒿甲醚对大鼠C6脑胶质瘤细胞株的生长抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50)。采用立体定位仪在SD大鼠大脑皮质层接种C6脑胶质瘤细胞(1×106/μl)40只,雌、雄各半;随机分为5组,每组8只。在接种第3天后,各组采用灌胃给药法连续给药10天。于接种后的第20天解剖大鼠,经活体左心室灌注4%多聚甲醛,固定肿瘤的全脑标本。在大鼠脑部接种穿刺点做冠状切口,按垂直和水平方向测量肿瘤大小。肿瘤体积=a2bπ?6(a为肿瘤的短径,b为肿瘤的长径)。全脑标本用4%多聚甲醛固定,肿瘤组织做病理观察,免疫组化方法检测移植瘤组织微血管密度。结果各实验组血管计数分别为Ⅰ组(39±4),Ⅱ组(29±6),Ⅲ组(12±8),Ⅳ组(10±5),生理盐水组为(52±7)。各实验组血管计数均明显少于生理盐水对照组,差异有统计学意义(分别P<0.05,P<0.01)。各实验组SD大鼠原位脑胶质瘤体积较对照组显著减小。结论在一定剂量范围内,蒿甲醚具有明显抑制SD大鼠原位脑胶质瘤血管生成作用;蒿甲醚抑制原位脑胶质瘤生长和转移的机制之一是透过血脑屏障抑制脑胶质瘤血管生成。

大鼠C6脑胶质细胞移植瘤肿瘤模型动态生长核磁共振表现

目的:建立大鼠C6脑胶质瘤模型。在不同时段以磁共振平扫、增强扫描、DWI和MRS多种技术对大鼠脑组织进行扫描成像分析,动态观察接种后大鼠脑组织内胶质瘤的生长情况,测量肿瘤体积变化,细胞的凋亡情况以及肿瘤细胞密集区域,无创性检测活体组织器官能量代谢、生化改变和特定化合物定量分析。建立大鼠C6脑胶质瘤模型MRI肿瘤动态生长数据库。方法:建立大鼠C6脑胶质瘤模型。大鼠接种C6脑胶质瘤细胞的不同时段(接种前、接种后第7天、第14天、第21天)在活体无创状态下,在不同时段分别运用MRI常规、增强扫描,DWI和MRS多种技术对大鼠脑组织进行扫描成像分析,建立大鼠C6脑胶质瘤模型MRI肿瘤动态生长数据库,最后将大鼠处死取脑组织进行肉眼、病理和电镜验证。结果:肿瘤体积生长第14天与第7天均值比是5.010 0±0.450 0倍,第21天与7天均值比是17.990 0±0.910 0倍,解剖肉眼、病理、电镜均可见肿瘤及肿瘤细胞。正常脑组织DWI弥散成像ADC值测定,平均值(B=1 000)420.183 3±75.598 0)明显低于各时间肿瘤组,接种肿瘤后7、14、21天ADC均值为738.598 0±219.568 0、660.645 0±105.322 0、551.366 7±103.578 0均高于正常脑组织,ADC均值T检验正常脑组织与7天及14天肿瘤组比,P值<0.05,有显著差异。肿瘤生长的第14、21天ADC值不断的降低。大鼠C6脑胶质瘤移植瘤模型接种不同时间MRS测定cho/NAA均值,正常脑在第1、7、14、21天在0.5左右,而接种后的大鼠C6脑胶质瘤7、14、21天测定cho/NAA均值为5.532 0±4.066 4、6.560 0±3.440 0、8.938 0±4.079 4,随着肿瘤的长大比值均值在不断加大。结论:磁共振平扫、增强扫描、DWI和MRS多种技术对大鼠脑组织进行扫描成像分析,能在无创情况下动态观察接种后大鼠脑组织内胶质瘤的生长情况,测量肿瘤体积变化,细胞的凋亡情况以及肿瘤细胞密集区域,无创性检测活体组织器官能量代谢、生化改变和特定化合物定量分析。

HPPH光动力学治疗大鼠C6脑胶质瘤肿瘤生长实验研究的磁共振表现

目的:以不同剂量新型光敏剂HPPH光动力学疗法治疗大鼠C6脑胶质细胞瘤模型,通过磁共振平扫及增强扫描来测定各组肿瘤的大小,绘出生长曲线,选择最佳的治疗剂量并与传统HPD-PDT(血卟啉光动力学疗法)作对比,并以病理、电镜检查作验证。方法:建立大鼠C6脑胶质细胞瘤模型建立,设立对照组(肿瘤未治疗组、单注射HPPH 0.45mg/kg组、单注射HPD5mg/kg组、单波长667nm激光照射组、单波长630nm激光照射组),光动力学治疗组(HPPH-PDT各组(0.15、0.30、0.45mg/kg组)、HpD-PDT 5mg/kg组)。单注射HPPH 0.45mg/kg组、HPPH-PDT组和单注射HPD 5mg/kg组、HpD-PDT组自尾静脉推注入光敏剂,光动力学组注光敏剂18h后照激光。以波长667nm的半导体激光照射HPPH-PDT组和单667nm激光照射组肿瘤,功率密度200mW/cm2,每光斑照射20min,能量密度为240J/cm2;以波长630nm的半导体激光照射HpDPDT组及单630nm激光照射组肿瘤,功率密度200mW/cm2,每光斑照射20min,能量密度为240J/cm2。肉眼观察鼠行为变化,以磁共振平扫及增强扫描测量治疗前、治疗后第7、14天或对照组肿瘤生长第7、14、21天肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,于PDT后14天或对照组肿瘤生长21天鼠脑,磁共振增强扫描测量后处死鼠,取脑组织作病理、电镜检查。结果:大鼠PDT治疗后,光动力学治疗组疗效较好的鼠,未出现异常表现,而对照组及光动力学治疗疗效较差组出现大鼠消瘦、萎靡或偏瘫、视盲。所有鼠均未出现皮肤红斑、水肿等光毒性反应。磁共振增强扫描测定肿瘤生长不同时间体积,并绘出肿瘤生长曲线。光动力学治疗前及治疗后14天肿瘤体积比(P14/P0),即肿瘤生长第21天与7天比(T21/T7),HPPH 0.15、0.30、0.45mg/kg-PDT组、HPD5mg/kg-PDT组值为4.43±4.80、0.37±0.25、0.71±0.42、8.31±1.56;对照组单注药HPPH 0.45mg/kg组、单注药HPD5mg/kg组、单激光667nm照射组、单激光630nm照射组、未治疗肿瘤组为17.01±0.36、16.66±0.31、18.37±0.47、17.66±0.04、20.24±1.75。T检验治疗组与对照组有显著及非常显著差别(P值<0.050、0.001),治疗组中HPPH各组疗效优于HPD5mg/kg-PDT组,T检验有显著差异(P值<0.050)HPPH-PDT组中HPPH 0.3mg/kg-PDT组、HPPH 0.45mg/kg-PDT组疗效接近,T检验无显著差别(P值>0.050),但明显优于HPPH0.15mg/kg-PDT组,T检验有显著差异,(P值<0.050)各对照组间无明显差异(P值>0.050)。病理检查正常脑组织仅见神经元细胞及胶质细胞;而接种C6胶质细胞瘤后大鼠脑可见大片密集成巢状生长,色深、大小不一、有核分裂的肿瘤细胞,随着肿瘤生长时间的增加,肿瘤细胞的密度加大。未光动力学治疗对照组的病理表现与上相同。光动力治疗后可见肿瘤细胞变性、色变淡、细胞密度减少,脑组织水肿及毛细血管扩张,程度与光敏剂HPPH的剂量有关,HPPH 0.15mg/kg-PDT较差一些、而HPPH 0.3mg/kg-PDT、HPPH 0.45mg/kg-PDT较明显、有的只有少量的肿瘤细胞,仅可见正常脑神经元细胞及胶质细胞,而HPD-PDT后的脑肿瘤细胞变性程度较HPPH-PDT更差一些,标本中仍可见较多的肿瘤细胞。电镜变化:大鼠正常脑可见神经元细胞及有髓鞘轴突及无鞘轴突。大鼠C6脑胶质细胞移植瘤未治疗对照组:均是活的肿瘤细胞,细胞体积大,细胞膜、核膜完整,核大,有核仁,有核切迹。大鼠C6脑胶质细胞移植瘤光动力学治疗组出现不同程度细胞凋亡及凋亡坏死的表现,核固缩,染色质边集的凋亡细胞,凋亡小体,细胞质空泡变性,线粒体空泡变性,细胞膜、核膜破裂。随着剂量增加,肿瘤细胞凋亡、坏死程度增加。HPPH 0.15mg/kg-PDT早期凋亡肿瘤细胞多见,有较多有活性肿瘤细胞;0.30mg/kg及0.45mg/kg HPPH-PDT组肿瘤凋亡及坏死程度增加。程度相似,但边缘脑组织有少许神经元固缩,程度0.45mg/kg HPPH-PDT组大于0.30mg/kg HPPH-PDT组。HPD-PDT组也是以早期凋亡肿瘤细胞多见,有较多有活性的肿瘤细胞,肿瘤的凋亡程度较HPPH 0.15mg/kg-PDT差。结论:磁共振增强扫描成像分析,能在无创情况下动态观察大鼠接种C6胶质瘤脑组织内肿瘤的生长情况,测量肿瘤肿块大小。HPPH-PDT能治疗大鼠脑C6胶质瘤,疗效优于HPD-PDT,HPPH 0.3mg/kg为HPPH-PDT最佳光敏剂剂量。

HPPH光动力学治疗大鼠C6脑胶质瘤实验研究的磁共振波谱技术MRS的变化

目的：是研究不同剂量新型叶绿素光敏剂HPPH光动力学疗法治疗大鼠C6脑胶质细胞移植瘤模型,以磁共振波谱技术（MRS）无创观察不同时间的变化、评价疗效及选择光敏剂HPPH最佳剂量并与常规光敏剂血卟啉衍化物（HPD）光动力学治疗及对照组作对比。方法：建立大鼠C6脑胶质细胞瘤模型,设立对照组（空白对照组、单注射HPPH0.45mg/kg组、单注射HPD5mg/kg组、单波长667nm激光照射组、单波长630nm激光照射组）、HPPH-PDT各组（HPPH0.15、0.30、0.45mg/kg组）、HPD-PDT5mg/kg组。单注射HPPH组、HPPH-PDT组和单注HPD组、HPD-PDT组自尾静脉推注入光敏剂,光动力学治疗组注光敏剂后18小时进行激光照射.HPPH-PDT各组和单667nm激光照射组肿瘤以波长667nm的半导体激光照射,功率密度200mW/cm2,每光斑照射20min,能量密度为240J/cm2;HPD-PDT组及单630nm激光照射组肿瘤以波长630nm的半导体激光照射,功率密度200mW/cm2,每光斑照射20min,能量密度为240J/cm2。以磁共振平扫、增强扫描及磁共振波谱技术（MRS）观察光动力学治疗组及对照组肿瘤不同时间的变化,光动力学治疗前、治疗后7、14天（P0、P7、P14天水）;接种后第7、14、21天;（T7、T14、T21天）。于PDT后14天或肿瘤生长第21天磁共振扫描后处死鼠,取脑组织作病理检查。结果：本文观察大鼠C6脑胶质瘤模型接种不同时间段波谱cho/NAA均值,正常脑cho/NAA均值在第1、7、14、21天测定在0.5左右,而接种后的大鼠C6脑胶质瘤及未光动力学治疗各组7、14、21天测定波谱cho/NAA均值为5.532±4.066-5.574±3.382、6.488±2.169-6.744±3.685、8.684±5.42-8.938±4.08,随着肿瘤的长大该均值在不断加大。正常脑与移植瘤未光动力学治疗各对照组波谱cho/NAA值T-检验,P值小于0.05或0.001有显著或非常显著差异。而移植瘤未光动力学治疗各对照组、各时间组间P〉0.05,各组间无显著差异。光动力学治疗组cho/NAA均值HPPH 0.30、0.45、0.15mg/kg-PDT、HPD-PDT为0.832±0.334、0.818±0.166、6.912±3.81、7.456±3.33,前两组明显小于后两组,疗效优于后两组,后两组,前者小于后者,疗效又优于后者。总的HPPH-PDT疗效优于HPD-PDT。T检验前两组HPPH0.30、0.45mg/kg-PDT组间比P〉0.05无显者差别,与正常脑比P〉0.05无显著差别,且接近正常脑值,与对照未治疗组比P值〈0.05有显著差别,与后两组HPPH0.15mg/kg-PDT、HPD-PDT比P值〈0.05有显著差异,后两组间比P〉0.05无显者差别。以磁共振增强扫描测定各组肿瘤体积,P14/P0（光动力学治疗后14,与光动力学治疗前）HPPH0.15、0.30、0.45mg/kgPDT组、HPD5mg/kg-PDT组值为4.43±4.8、0.37±0.25、0.71±0.42、8.31±1.56;对照组T21/T7（肿瘤生长21天与肿瘤生长第7天比）单注药HPPH0.45mg/kg组、单注药HPD5mg/kg组、单激光670nm照射组、单激光630nm照射组、未治疗肿瘤组为17.01±0.36、16.66±0.31、18.37±0.47、17.66±0.04、20.24±1.75。第21天病理表现,正常脑组织仅见神经元细胞及胶质细胞量;而接种C6胶质细胞瘤后大鼠脑可见大片密集成巢状生长,色深、大小不一、有核分裂的肿瘤细胞,随着肿瘤生长时间的增加,肿瘤细胞的密度加大。未光动力学治疗组的病理表现与上相同。光动力治疗后可见肿瘤细胞变性、色变淡、细胞密度减少,脑组织水肿及毛细血管扩张,程度与光敏剂HPPH的剂量有关,HPPH0.15mg/kg-PDT较差一些、而HPPH0.3、0.45mg/kg-PDT较明显、有的只有少量的肿瘤细胞,仅可见正常脑神经元细胞及胶质细胞;而HPD-PDT后的脑肿瘤细胞变性程度较HPPH-PDT更差一些,标本中仍可见较多的肿瘤细胞。结论：磁共振平扫、增强、MRS技术对大鼠脑组织进行扫描分析,能在无创情况下动态观察接种C6脑胶质瘤后及光动力学治疗后大鼠脑组织内胶质瘤的生长情况,能了解病变的能量代谢、生化改变,并对特定化合物进行定量分析。HPPH-PDT能治疗大鼠C6脑胶质瘤移植瘤,剂量以HPPH0.30mg/kg较佳。HPPH-PDT疗效优于HPD-PDT。

HPPH光动力学治疗大鼠C6脑胶质瘤实验研究的磁共振弥散成像DWI的表现

目的：研究不同剂量新型叶绿素光敏剂HPPH光动力学疗法治疗大鼠C6脑胶质细胞移植瘤模型,无创观察磁共振波谱技术（DWI）变化、评价疗效及选择光敏剂HPPH最佳治疗剂量并与常规光敏剂血卟啉衍化物（HPD）光动力学治疗及对照组作对比。方法：建立大鼠C 6脑胶质瘤移植瘤模型,以不同剂量新型叶绿素光敏剂HPPH（0.15、0.3、0.45mg/kg）光动力学治疗,尾静脉注药后18h,以波长667nm激光照射大鼠脑肿瘤,照射功率密度200mW/cm2,照射时间20min,能量密度240J/cm2,于治疗前、治疗后7、14天（P0、P7、P14）,即肿瘤接种后第7、14、21天（T7、T14、T21天）,以磁共振平扫、增强扫描及弥散技术（DWI）无创测定肿瘤大小及ADC值。并与HPD-PDT、正常脑、对照组（未治疗、单注药、单照激光）肿瘤组的ADC值作对比。最后以病理验证。结果：ADC均值正常脑在406.01±53.59-436.25±50.23间,未治疗脑肿瘤组均值T7天、T14天、T21天分别为738±219.57、660.65±105.32、551.37±103.58,由于肿瘤长大,肿瘤细胞数的增加使弥散成像ADC值下降。各单注药、单激光对照组的变化同未治疗空白组规律相似。T检验,各未光动力学治疗对照组间比P值〉0.05无明显差异,与正常脑比P值〈0.05有显著差异。光动力学治疗组P0组与未治疗对照组相似ADC均值在609.78-705.96之间;P7天,ADC均值由于治疗后脑组织的水肿均有升高,以HPPH0.30、0.45mg/kg-PDT组均值上升较多（782.2±95.6、779.01±291.1）,其次HPPH 0.15mg/kg-PDT组（765.22±110.13）,HPD-PDT组降低一些（644.13±94.17）;P14天,ADC均值明显下降,由于肿瘤细胞光动力学治疗后的凋亡、死亡,ADC均值下降,HPPH0.30、0.45mg/kg-PDT组435.86±46.04、429.34±70.05接近正常脑值;HPPH 0.15mg/kg-PDT组稍高619.98±93.49,HPD-PDT组550.13±94.48,这两组由于肿瘤细胞的凋亡死亡较差,有较多的肿瘤细胞存在,影响弥散值,HPPH0.15mg/kg-PDT组ADC值高于HPD-PDT组,肿瘤细胞较后者少。各组ADC值T检验,光动力学治疗组间HPPH0.30、0.45mg/kg-PDT两组比P〉0.05无显著差别,上两组与HPPH0.15mg/kg-PDT、HPD5mg/kg-PDT,P值〈0.05有显著的差别,与正常脑比P值〉0.05无显著差异,与未光动力学治疗对照组比P值〈0.05有显著差别;HPPH 0.15mg/kg-PDT、HPD5mg/kg-PDT二组间比,P值〉0.05无显著差别,上两组与正常脑比,P值〈0.05有显著差异,与未光动力学治疗对照组比,P值〉0.05无显著差别。以磁共振增强测定各组肿瘤体积,P14/、P0HPPH0.15、0.30、0.45mg/kg-PDT组、HPD5mg/kg-PDT组均值为4.43±4.8、0.37±0.25、0.71±0.42、8.31±1.56;对照组T21/T7单注药HPPH0.45mg/kg组,单注药HPD5mg/kg组、单670nm激光照射组、单630nm激光照射组、未治疗肿瘤组为17.01±0.36、16.66±0.31、18.37±0.47、17.66±0.04、20.24±1.75.大鼠脑接种肿瘤第21天病理表现正常脑组织仅见神经元细胞及胶质细胞;而接种C6胶质细胞瘤后大鼠脑可见大片密集成巢状生长,色深、大小不一、有核分裂的肿瘤细胞,随着肿瘤生长时间的增加,肿瘤细胞的密度加大。未光动力学治疗组的病理表现与上相同。光动力治疗后可见肿瘤细胞变性、色变淡、细胞密度减少,脑组织水肿及毛细血管扩张,程度与光敏剂HPPH的剂量有关,HPPH 0.15mg/kgPDT较差一些、而HPPH 0.30、0.45mg/kg-PDT较明显、有的只有少量的肿瘤细胞,仅可见正常脑神经元细胞及胶质细胞;而HPD-PDT后的脑肿瘤细胞变性程度较HPPH-PDT更差一些,标本中仍可见较多的肿瘤细胞。结论：磁共振增强、DWI技术能在无创情况下动态观察接种C6脑胶质瘤后大鼠脑组织内胶质瘤的生长情况,了解肿瘤细胞的凋亡情况以及肿瘤细胞密集区域,测量肿瘤肿块大小。HPPH-PDT能治疗大鼠C6脑胶质瘤移植瘤,光敏剂剂量以HPPH 0.30mg/kg较佳。HPPH-PDT疗效优于HPD-PDT。