姜黄素对鼻咽癌C666-1细胞增殖的抑制作用及其可能机制

目的:观察姜黄素对鼻咽癌细胞株C666-1增殖及凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。方法:0、10、25、50及100μmol/L姜黄素作用24 h或50μmol/L姜黄素不同时间(0、6、12及24 h)后,CCK-8法检测C666-1细胞的增殖情况,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blotting检测不同浓度姜黄素作用24 h后细胞内AMPK、S6K1及S6蛋白磷酸化情况。结果:与0μmol/L组比,50、100μmol/L姜黄素作用24 h后,对C666-1细胞增殖的抑制作用显著增强[(38.33±6.53)%、(21.14±5.36)%vs(100±0.00)%,均P<0.05];50μmol/L姜黄素作用6、12、24 h后,对C666-1细胞增殖的抑制作用显著增强[(49.6±5.67)%、(47.7±6.65)%、(46.86±9.4)%vs(100±0.00)%,均P<0.05]。50、100μmol/L姜黄素作用后细胞的凋亡率显著增加[(43±12.53)%、(48±8.54)%vs(2.87±1.03)%,均P<0.05],50μmol/L姜黄素作用12、24 h后,细胞凋亡率随作用时间延长而增加[(35.33±5.86)%、(47.33±13.01)%vs(4.33±3.21)%,均P<0.05]。50、100μmol/L姜黄素可促进细胞内AMPK磷酸化,抑制其下游mTOR信号通路中S6K及S6蛋白的磷酸化活化[(3.87±1.38)、(0.19±0.16)、(0.39±0.24)vs 1;(4.34±1.34)、(0.059±0.043)、(0.11±0.095)vs 1,均P<0.05]。结论:姜黄素可显著抑制鼻咽癌C666-1细胞增殖和诱导细胞凋亡,其机制可能与影响AMPK、S6K1及S6蛋白磷酸化有关。

鼻咽癌C666-1细胞中EBV miRNA的表达情况及其功能研究

目的观察鼻咽癌C666-1细胞中EB病毒(EBV)所编码的44个miRNA的表达情况(即BART、BHRT家族的表达情况)及BART-15对EBV的即刻早期基因(BZLF-1)表达的影响。方法培养C666-1细胞,取对数生长期的细胞,提取RNA,采用polyA加尾PCR法对EBV miRNA进行扩增,观察BHRF和BART家族的表达情况。将BART-15抑制剂转染C666-1细胞,转染成功后,用real-time PCR法检测BZLF-1的表达。结果在EBV编码的44个miRNA中,BHRF家族的表达普遍低于BART家族。BART-15抑制剂转染C666-1细胞后,转染率为77.0%,BART-15的表达降低了87%。抑制C666-1细胞中BART-15的表达后,BZLF-1的表达增高了2.54倍。结论鼻咽癌C666-1细胞中EBV的miRNA表达谱存在家族性差异,其中的BART-15可能直接或间接作用于EBV的BZLF-1,影响EBV的感染状态。

叶黄素对鼻咽癌C666-1细胞的抑制作用及其机制

目的:研究叶黄素对鼻咽癌C666-1细胞的抑制作用及其机制。方法:以0(空白对照)、20、40、80、160 mg/L的叶黄素培养C666-1细胞0、12、24、48 h,以CCK-8法测定细胞增殖率,以TUNEL法测定细胞凋亡率,以Western blot法测定细胞腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)和m TOR通路中核糖体蛋白S6激酶(S6K)、S6蛋白的磷酸化程度。结果:与空白对照比较,80、160 mg/L叶黄素作用48 h及160 mg/L叶黄素作用12、24、48 h的细胞增殖率均降低(P<0.05);80、160 mg/L叶黄素作用48 h及160 mg/L叶黄素作用24、48 h的细胞凋亡率增加(P<0.05);80、160 mg/L叶黄素作用48 h的细胞内磷酸化AMPK增加,磷酸化S6K、S6蛋白减少(P<0.05)。结论:叶黄素能有效抑制C666-1细胞增殖,可能通过促进AMPK磷酸化,抑制S6K、S6蛋白磷酸化诱导其凋亡。

二甲双胍对鼻咽癌细胞C666-1放射敏感性的影响

目的研究二甲双胍对人鼻咽癌细胞C666-1是否具有放射增敏作用,并探讨其作用机制。方法细胞计数试剂盒(CCK-8)检测不同浓度二甲双胍(0、1、2、4、8、16、32和64 mmol/L)对鼻咽癌细胞C666-1增殖的影响。将对数生长期的鼻咽癌细胞分为对照组(Con组)、二甲双胍组(Met组)、放疗组(IR组)和放疗联合二甲双胍组(IR+Met组)。细胞平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,拟合存活曲线,并计算放射增敏比(SER);碘化丙啶(PI)染色法检测细胞周期时相分布;蛋白质印迹法检测Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2和Bax凋亡相关蛋白表达水平。结果各浓度二甲双胍预处理24和48 h后的细胞增殖率均低于对照组,差异有统计学意义,F=404.934,P<0.001;F=523.843,P<0.001。浓度-时间因素交互作用分析结果显示,二甲双胍对C666-1细胞增殖的抑制作用呈时间-剂量依赖性,F=4.561,P=0.001。C666-1细胞SER_(D0)=1.452,SER_(Dq)=1.302, IR+Met组存活分数(SF)低于IR组(F=1.413,P=0.020),二甲双胍对C666-1细胞有放射增敏作用。IR+Met组与Met组和IR组比较,G_(2)/M期细胞比例增加,F_(1R+Met)=1.318,P=0.003。放疗后12 h Caspase-3和Bcl-2以及放疗后24 h Caspase-3和Caspase-9蛋白表达经放疗和二甲双胍交互作用结果显示差异有统计学意义,均P<0.05;放疗后12和24 h,IR+Met组与Met组和IR组比较,Caspase-3和Caspase-9表达水平上调(均P<0.01), Bcl-2/Bax表达水平降低(均P<0.05),提示细胞凋亡增多。结论二甲双胍对鼻咽癌C666-1细胞具有放射增敏作用,其作用机制可能通过影响Bcl-2/Bax/Caspase-9/Caspase-3细胞凋亡信号通路,从而促进细胞凋亡。

鼻咽癌细胞系抗失巢凋亡特性的研究

目的:探讨鼻咽癌细胞系的抗失巢凋亡特性。方法:采用鼻咽癌细胞系CNE-2、C666-1、TW03以及正常鼻咽上皮细胞系NP69作为正常对照,用软琼脂实验、悬浮培养等方法诱导失巢凋亡,并用AnnexinV-PI双染色流式细胞计观察凋亡情况。结果:鼻咽癌细胞株CNE-2、C666-1、TW03均具有抵抗失巢凋亡的特性。3种鼻咽癌细胞均能在软琼脂上形成集落,并在培养24h后即可出现,1周内形成的集落速度较快。悬浮培养的鼻咽癌细胞同样出现细胞集落,而NP69细胞未见细胞集落出现。悬浮培养的鼻咽癌细胞在培养48h后凋亡率并没有升高。而NP69细胞则出现了凋亡。结论:鼻咽癌细胞系CNE-2、C666-1、TW03均具有抵抗失巢凋亡的特性。