库容性Ca^(2+)内流介导大鼠远端结肠平滑肌收缩

目的探讨库容性Ca2+内流(capac itative Ca2+entry,CCE)是否参与大鼠远端结肠平滑肌兴奋-收缩偶联过程。方法利用器官离体装置、张力换能器、Powerlab 4/25T数据采集分析系统测定远端结肠平滑肌的张力。结果毒胡萝卜素(thapsigargin,TG,10 nmol.L-1~1μmol.L-1)诱导结肠平滑肌条产生持续的张力性收缩,不同浓度TG所致的同步收缩反应张力不同。在无钙Krebs液(包含1 mmol.L-1EDTA)中使用TG将肌条培养35 m in后,再加入Ca2+2.5mmol.L-1,比未使用TG处理的肌条产生的收缩张力明显提高(99%±28%vs70%±8%)。且TG耗竭胞内钙库后再复钙所致的收缩效应,不受L型钙通道阻断剂verapam il影响,但可被SOC通道阻断剂La3+减弱。结论TG耗竭胞内钙库后再复钙诱导的大鼠远端结肠平滑肌收缩反应由CCE介导,提示CCE是提供大鼠远端结肠平滑肌收缩的激活信号Ca2+的来源之一,参与完成结肠平滑肌兴奋-收缩偶联过程。

川芎嗪对正常及高血压大鼠动脉平滑肌Ca^(2+)内流的动力学影响

本工作比较自发性高血压大鼠(SHR)和肾性高血压大鼠(RHR)及它们的对照动物WKY和Wistar大鼠主动脉和肠系膜动脉平滑肌Ca^(2+)内流及川芎嗪对Ca^(2+)内流的影响。结果表明高血压动物血管平滑肌(VSM)Ca^(2+)内流明显高于正常动物。体外给川芎嗪明显抑制高血压大鼠及对照动物VSMCa^(2+)内流;口饲川芎嗪,对正常动物的VSMCa^(2+)内流呈明显激活,而对高血压大鼠是明显抑制。 川芎嗪对正常及高血压动物血压无明显影响。

库容性Ca^(2+)内流参与ACh诱导的大鼠远端结肠平滑肌收缩

应用生物换能技术和Ca2+通道特异性阻断剂观察并记录大鼠离体远端结肠平滑肌收缩张力的变化,分析库容性 Ca2+内流(capacitative Ca2+ entry,CCE)是否与ACh诱导的离体远端结肠平滑肌收缩反应有关。结果表明,以无钙的Krebs 液灌流或应用EGTA螯合细胞外Ca2+后,高K+及ACh引起的远端结肠平滑肌收缩几乎完全消失。电压操纵性Ca2+通道阻断剂veiapamil也能减弱高K+及ACh引起的远端结肠平滑肌收缩,其减弱的程度分别为74％和41％。在无钙的Krebs液中, 5 μmol／L ACh可引起离体肠管瞬时性收缩,这是由肌质网(sarcoplasmic reticulum,SR)释放钙所致;然后加入10 μmol／L阿托品(atropine),并在此基础上恢复细胞外Ca2+(2．5 mmol／L),结肠平滑肌则出现持续性收缩,待收缩反应达峰值时,加入5μmol／L verapamil,收缩无明显变化,且该收缩反应对钙库操纵性通道(store-operated Ca2+ channel,SOCC)阻断剂La3+ 敏感,20,50和100 μmol／L的La3+使上述收缩张力分别降低15％,23％和36％,且呈浓度依赖性,但对Cd2+不敏感。研究结果提示,细胞外Ca2+内流对高K+及ACh介导的离体远端结肠平滑肌持续性收缩是必需的,由ACh诱导的远端结肠平滑肌收缩至少包括SR释放钙引起的短暂性收缩及受体操纵性Ca2+通道(receptor-operated Ca2+ channel,ROCC)、电压操纵性Ca2+通道(voltage-operated Ca2+ channel,VOCC)和CCE介导的胞外Ca2+内流等途径。这将从通道水平进一步分析消化管平滑肌收缩的机制和特征,亦将为预防和控制因胃肠动力紊乱所致的消化管疾病寻求有针对性的药物干预和治疗提供理论依据。

西洋参茎叶皂苷对大鼠心肌细胞Ca^(2+)内流的影响

目的 :研究西洋参茎叶皂苷 (PQS)对大鼠心肌细胞Ca2 + 内流的影响。方法 :应用钙离子荧光指示剂Fura 2 /AM检测。结果 :PQS(1.5mg/ml)和维拉帕米 (0 .5 μmol/L)对静息状态下心肌细胞内Ca2 + 浓度均无明显影响 ,但PQS使心肌细胞内Ca2 +浓度有下降趋势 ;两药可明显抑制高钾 (5 0mmol/L)引起的心肌细胞内Ca2 + 浓度的升高。结论 :PQS对心肌细胞电压依赖性钙通道有阻断作用。

去极化时Ca^(2+) 内流引起蛋白激酶C_α浆膜转位

为观察胞外Ca2 + 内流和肌浆网Ca2 + 释放两种来源的Ca2 + 对cPKCα转位激活的影响 ,揭示PKC在去极化 nAChR转录偶联中的作用 ,构建了pPKCα EGFP N1融合蛋白真核基因表达载体 .转染C2C1 2肌细胞后 ,采用激光共聚焦显微镜记录了KC1或咖啡因处理所引起的细胞Ca2 + 波变化及PKCα GFP融合蛋白在细胞内的分布 .结果提示 ,只有用KC1处理引起细胞膜去极化时 ,伴随Ca2 +内流 ,才能观察到PKCα GFP绿色荧光在细胞内发生的细胞浆至细胞膜分布变化 .然而 ,采用肌浆网Ca2 + 通道激动剂咖啡因刺激肌细胞 ,使肌浆网中Ca2 + 释放 ,未见PKCα GFP绿色荧光在浆、膜分布发生任何变化 .结果提示 ,去极化时外Ca2 + 内流可引起PKCα转位激活 ,肌浆网Ca2 + 释放对PKCα的转位激活没有影响 .

TNF-a对大鼠肾小球前小动脉平滑肌细胞Ca^(2+)内流的影响

目的:为探讨肿瘤坏死因子-a(TNF-a)对肾小球前小动脉平滑肌细胞Ca^(2+)内流的影响,以阐明TNF-a在肝肾综合征(HRS)发病中的作用。方法:通过对大鼠肾小球前小动脉平滑肌细胞(RASMC)的分离、培养,应用同位素方法检测在TNF-a作用下培养细胞的Ca^(2+)内流情况,研究在TNF-a作用下,蛋白激酶C(PKC)抑制剂对TNF-a诱导的RASMC Ca^(2+)内流作用的影响。结果:TNF-a增强RASMC的Ca^(2+)内流,作用时间长达60min,以后逐渐下降;Ca^(2+)通道阻断剂硝苯地平明显抑制了TNF-a促进Ca^(2+)内流的作用,硝苯地平添加组细胞内流的Ca^(2+)水平为2211.3±406.8cpm,未添加组为3326.2±315.2cpm,P<0.01;PKC抑制剂也明显抑制了TNF-a促进Ca^(2+)内流的作用。GFX添加组细胞内流的Ca^(2+)水平为2095.8±395.2cpm,未添加组为3326.4±315.2cpm,P<0.01。结论:TNF-a在HRS的发生中起到一定作用,其作用机制可能是通过促进肾小球前小动脉平滑肌细胞内Ca^(2+)水平增高而实现的。TNF-a可能是通过活化PKC后使在肾小球前小动脉平滑肌细胞膜上的Ca^(2+)通道开放,引起肾小球前小动脉平滑肌细胞内Ca^(2+)迅速上升,导致肾小球前小动脉平滑肌收缩,从而使肾血流量减少,肾小球滤过率下降,促使HRS发生。

谷氨酸对牛大脑中动脉平滑肌细胞胞浆静息Ca^(2+)和ATP触发的Ca^(2+)内流的影响

目的 观察谷氨酸对牛大脑中动脉平滑肌细胞有无直接的激动作用以及对ATP触发的Ca2 + 内流有无影响 ?方法 采用Fura 2荧光法测定胞浆内Ca2 + 变化技术 ,在培养的乳牛大脑中动脉平滑肌细胞上观察药物的作用。结果 谷氨酸 (10～ 2 0 0 μmol·L-1)不能增加或减少细胞胞浆静息游离Ca2 + 浓度 ([Ca2 + ]i)和ATP触发的Ca2 + 内流 (谷氨酸 :10～ 40 0 μmol·L-1)。结论 谷氨酸对大脑中动脉平滑肌细胞信息Ca2 + 水平和Ca2 + 内流均无直接的影响。

蛋白酪氨酸激酶抑制剂对脑血管平滑肌细胞Ca^(2+)池操纵性Ca^(2+)内流的影响

目的 研究蛋白酪氨酸激酶和蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂对牛脑血管平滑肌细胞 (CSMC)Ca2 + 池操纵性Ca2 + 内流的影响。方法 采用培养的CSMC ,在生物荧光双波长影像分析系统用Fura 2 /Am荧光探针测定单个细胞内游离Ca2 + 浓度。结果 (1)蛋白酪氨酸激酶抑制剂 (genistein ,2 5 ,5 ,10 μmol·L-1)能浓度依赖性降低内皮素 1(ET 1,10 -7mol·L-1)刺激引起的CSMCCa2 + 内流 ,抑制率分别为5 6%± 2 .9%、2 5 6%± 3 9%、48 9%± 3 7% ;蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂 (vanadate ,2 ,4,8μmol·L-1)能浓度依赖性升高CPA刺激引起的CSMCCa2 + 内流 ,增加比率分别为8 2 %± 3 9%、18 8%± 4 9%、46 6%± 6 9% ;(2 ) genistein(2 5 ,5 ,10 μmol·L-1)能浓度依赖性降低ATP(10 μmol·L-1)刺激引起的CSMCCa2 + 内流 ,抑制率分别为 6 7%±2 6%、2 4 6%± 6 5 %、5 1 3 %± 6 9% ;vanadate (2 ,4,8μmol·L-1)能浓度依赖性升高ATP刺激引起的CSMCCa2 +内流 ,增加比率分别为 4 8%± 2 0 %、2 8 5 %± 4 6%、49 6%± 3 3 % ;(3 ) genistein (2 5 ,5 ,10 μmol·L-1)能浓度依赖性降低环匹阿尼酸 (Cyclopiazonicacid ,CPA ,10 μmol·L-1)刺激引起的CSMCCa2 + 内流 ,抑制率分别为 6 5 %± 3 0 %、2 2 5 %± 5 2 %、

TGF-β参与细胞内钙池操纵性Ca^(2+)内流调节FGF23的释放

为了研究TGF-β是否通过细胞内钙池操纵性Ca^(2+)内流来调节FGF23的释放,通过TGF-β处理大鼠骨肉瘤细胞利用荧光定量PCR技术检测细胞内FGF23和Orai1基因的表达。结果表明,与正常对照组细胞比较,TGF-β处理组FGF23与Orai1的基因表达水平显著升高,并且Orai1和NF-κB的抑制剂能够拮抗TGF-β的作用。表明TGF-β通过NF-κB/Orai1调节FGF23的释放,为进一步治疗慢性肾病等疾病提供依据。

呋喃苯胺酸对大鼠平滑肌α_肾上腺素受体触发Ca^(2+)内流的影响

Ｃｌ－通道与受体调控Ｃａ２＋内流关系近年受到重视。已有资料表明Ｃｌ－通道开放参与介导α１－肾上腺素受体触发Ｃａ２＋内流，但对血管平滑肌Ｃｌ－通道作用未有一致看法。有报道认为Ｃｌ－通道开放形成的内向Ｃｌ－电流介导经电压依赖性Ｃａ２＋通道（ＶＤ－ＣＣｓ）...

Fura—2荧光测定眼镜蛇心脏毒引起细胞胞浆Ca^(2+)浓度的变化

用Fura—2荧光技术直接测定眼镜蛇心脏毒(CTX)对大鼠泪腺细胞胞浆Ca^(2+)浓度的影响。在无Ca^(2+)的介液下,CTX可使胞浆Ca^(2+)浓度升高;随之加入1mmol/L CaCl_2可使胞浆Ca^(2+)浓度进一步升高。表明CTX能引起胞内Ca^(2+)释放和胞外Ca^(2+)内流。8mmol/L CaCl_2能阻断CTX升高胞浆Ca^(2+)浓度的作用。

TFP刺激裂殖酵母细胞钙离子内流的质膜效应

ＴＦＰ（１０－１００μｍｏｌ／Ｌ）可引起裂殖酵母（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）胞外Ｃａ２＋内流，ＴＦＰ浓度不同，促进Ｃａ２＋内流程度也不一样，５０μｍｏｌ／ＬＴＦＰ的促进作用最大。并且ＴＦＰ浓度越大，Ｃａ２＋内流出现峰值也越早，１０、２０、５０、１００μｍｏｌ／ＬＴＦＰ处理后，胞内总钙出现峰值时间分别为４５、４５、３０、１５分钟。胞外Ｈ＋浓度也会对ＴＦＰ引起的Ｃａ２＋内流产生不同影响，缓冲液的ｐＨ值为６．０时最有利于ＴＦＰ引起胞内Ｃａ２＋含量增加，碱性条件下ＴＦＰ的效果最不明显。由ＴＦＰ引起的Ｃａ２＋内流增加要比单一地增加外钙浓度效果好得多，ＴＦＰ在１０μｍｏｌ／Ｌ浓度的外钙条件下引起的胞内钙含量数值比１０００μｍｏｌ／Ｌ的外钙条件而无ＴＦＰＴ所引起的胞内钙含量还要高５３．９％。缓冲液中加入０．８％的钙离子通道阻断剂ＬａＣ１３或溶液中无葡萄糖的存在，ＴＦＰ的促进作用消失，说明ＴＦＰ促进Ｃａ２＋内流是通过钙离子通道来完成的并需要能量参与。

TRPM2信号通路在缺血性脑卒中研究进展

缺血性脑卒中是一种复杂的神经系统疾病,致死和致残率极高〔1〕。脑卒中的病理学特点主要是围绕缺血导致的一系列生化级联反应及后期很长一段时间的恢复。其过程复杂,首先脑组织缺血缺氧引起能量衰竭和腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)耗尽,而后大量的谷氨酸被释放到神经突触间隙,这些谷氨酸通过α-氨基-3-羟基-5-甲基-4-异恶唑丙酸(AMPA)和N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体介导大量的Ca^(2+)内流,细胞内Ca^(2+)超载将激活促凋亡信号通路和活性氧(ROS)物质的分泌,这无疑加重了脑组织的继发性损伤〔2〕。

温度感受相关的TRP蛋白家族研究进展

机体通过感受器接受各种环境刺激 ,经感觉神经将信息传到大脑皮层感觉区 ,产生相应的感觉。然而 ,机体内的中枢或末梢感受器是如何感受各种刺激的还所知甚少。近年来对瞬时感受器电位 (transientreceptorpotential,TRP)蛋白家族的研究提供了探索关于温度感知机构的新线索 ,对揭开感觉机构的生物学机制具有重要而深远的意义。本文主要以与温度感受相关的TRP蛋白质家族为中心 。

Cl^-通道在内皮素-1引起的血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的 研究Cl-通道在内皮素 1(endothelin 1,ET 1)引起的血管平滑肌细胞增殖中的作用 ,并探讨其可能的作用机制。方法 通过细胞计数和3H TdR参入实验 ,并结合fura 2 /AM荧光测定胞浆游离Ca2 + 浓度 ([Ca2 + ]i)等技术 ,观察了Cl-通道阻断剂对ET 1引起的 [Ca2 + ]i 变化及血管平滑肌细胞增殖的影响。结果 Cl-通道阻断剂DIDS可呈浓度依赖性地抑制 10nmol·L-1ET 1引起的血管平滑肌细胞增殖 ,其它Cl-通道阻断剂如IAA 94、NPPB、SITS、DPC和速尿均无此作用 ,DIDS也能抑制 10nmol·L-1ET 1引起的内流相 [Ca2 + ]i 升高 ,而对ET 1引起的Ca2 + 释放无影响 ;预先将细胞与 1μmol·L-1nifedipine作用后 ,3μmol·L-1DIDS对 10nmol·L-1ET 1引起的内流相 [Ca2 + ]i 升高及血管平滑肌细胞增殖不再有效 ,将细胞与 10 μmol·L-1SK&F96 36 5预孵后 ,DIDS却能进一步抑制ET 1的上述作用 ;3μmol·L-1DIDS对 30mmol·L-1KCl引起的胞浆[Ca2 + ]i升高无影响。结论 DIDS可通过阻断Cl-通道来抑制ET 1因促发Cl-通道开放经电压依赖性钙通道的Ca2 +内流及细胞增殖 ,DIDS敏感的Cl-通道可能在ET 1促发的Ca2 +

小牛血清去蛋白注射液治疗脑血管病作用的研究进展

缺血性脑血管病（ICVD）的主要发病机制为缺血瀑布机制，涉及到自由基、能量耗竭、兴奋性氨基酸、钙离子超载等诸多方面的问题：自由基能通过损伤大分子物质导致缺血性脑损伤，也能通过信号转导途径损伤脑组织，脑缺血时，超氧化物歧化酶（SOD）表达下调，清除自由基能力下降，使脑组织收到损伤；与缺血性脑损害有关的兴奋性氨基酸主要为谷氨酸，谷氨酸刺激N-甲基-D-天冬氨酸受体过度兴奋，导致Ca^2＋大量内流，激活Ca^2＋依赖性蛋白酶，引起细胞骨架破坏、自由基损伤、离子平衡紊乱等；当脑缺血时，Ca^2＋平衡遭到破坏，大量Ca^2＋内流引起Ca^2＋超载。

自发性高血压大鼠左心室流出道自发慢反应电位去极离子流初步分析

目的研究高血压大鼠左室流出道自发性慢反应电位0相和4相去极离子流。方法利用自发性高血压大鼠(SHR)的离体心脏,常规玻璃微电极细胞内记录方法和离子通道阻断剂,观测最大舒张电位(MDP)、0相除极幅度(APA)、0相最大除极速度(Vmax)、4相自动除极速度(VDD)、复极50%(APD50)和90%(APD90)的时间以及自发放电频率(RPF)。结果(1)1·2mmol/L河豚毒(TTX)使APA和Vmax与给药前相比有所减小(P<0·05),VDD和RPF明显减慢(P<0·01);(2)1·0μmol/L维拉帕米(VER)可使该慢电位的APA、Vmax、VDD明显减小,RPF减慢(P<0·01);APD、APD90延长(P<0·05);(3)2mmol/L4-氨基吡啶(4-AP)使该慢电位的MDP的绝对值、APA、Vmax减小,VDD和RPF加快,与给药前相比有显著差异(P<0·01);(4)1·5mmol/L CsCl作用6min时,VDD和RPF明显降低(P<0·05),10min时恢复。结论(1)左心室流出道的自发慢电位0相主要去极离子流除Ca2+内流外,还有少量Na+内流。(2)4相去极离子流中,除Ca2+、Na+的内流和Ik衰减外,If电流可能也起部分作用。

N-乙酰半胱氨酸抗谷氨酸诱导海马神经元损伤的研究

目的 观察N-乙酰半胱氨酸(N- acetylcysteine,NAC)对不同浓度谷氨酸(Glutamte,Glu)诱导海马神经元损伤的影响,探讨其作用机制,评价毒性作用。方法 采用台盼蓝活细胞拒染与TUNEL法比较不同浓度NAC预处理3d给药与细胞毒性暴露后快速给药对10 0μmol/ L、5 0 0μm ol/ L Glu诱导体外培养海马神经元损伤的影响,并与MK- 80 1比较;利用激光扫描共聚焦显微镜(L SCM)观测细胞内Ca2 + 浓度变化;采用台盼蓝活细胞拒染、原子力显微镜(AFM)及细胞内酯酶活性判定方法评价NAC毒性。结果 NAC可降低10 0μmol/ L Glu诱导的海马神经元死亡率,以预处理组为佳,1m mol/ L NAC预处理保护效果类似于10μmol/ L MK - 80 1;NAC对5 0 0μm ol/ L Glu诱导的海马神经元损伤无保护作用。1mm ol/ L NAC预处理抑制Glu诱导的神经元Ca2 + 内流。经10 0 mmol/ L NAC作用的细胞虽然形态完整,但台盼蓝染色蓝染,失去对Glu毒性的反应性;AFM扫描见神经元细胞膜皱缩;培养基Ca2 +经Fluo- 3(AM)标记后L SCM下无激发荧光。结论 NAC对轻度Glu细胞毒性损伤有保护作用,预防性用药效果更优越。认为抑制Glu诱导的神经元Ca2 +内流为其保护机制之一。