HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因联合诱导人宫颈癌Ca Ski细胞的凋亡

目的:观察HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因体外共转染,联合诱导人宫颈癌Ca Ski细胞凋亡的效应。方法:HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因的质粒载体分别以单独或联合的方式转染人宫颈癌Ca Ski细胞,随后利用RT-PCR技术检测细胞中HPV-16 E6癌基因的mRNA水平变化;Western blot分析细胞中抑癌蛋白p53水平的变化;流式细胞技术分析细胞凋亡情况。结果:经HPV-16 E6 siRNA和hIL-24转染后细胞后HPV E6癌基因的mRNA水平均下降,其中联合转染组显著下降(P<0.05);抑癌蛋白p53水平均增高,其中联合转染组显著增高,细胞凋亡率均升高,其中联合转染组显著升高(P<0.05)。结论:HPV-16 E6 siRNA与hIL-24基因分别转染宫颈癌Ca Ski细胞后,均能抑制Ca Ski细胞中HPV-16 E6癌基因的表达,使抑癌蛋白p53恢复活性,诱导宫颈癌Ca Ski细胞凋亡;两者联合则具有协同效应,能显著提高肿瘤细胞凋亡率。

植物内生菌16S rRNA基因扩增子高通量测序中降低宿主污染的方法

植物内生菌能够帮助植物生长,增强其抗逆性与抗病性,研究植物内生菌对了解植物入侵机制、保护生态环境与农业的健康发展具有重要意义。通过阅读相关文献,总结归纳了降低植物内生菌16S rRNA基因扩增子高通量测序(16S-seq)中宿主基因污染的4种方法,即:①寻找特异性错配引物用来扩增细菌16S rRNA基因;②添加特异性阻断物用来抑制宿主16S rRNA基因扩增,如PNA-PCR和LNA-RCR钳位技术;③在文库构建过程中剪切宿主细胞器的16S rRNA基因,如Cas-16S-seq方法;④改变PCR扩增流程,如巢式PCR技术。了解上述各种方法的特点,有助于在植物内生菌16S-seq中选择合适的方法,避免或者减少宿主基因的污染,更准确地进行植物内生细菌群落的研究。

美军Link-16数据链在近距空中支援作战中应用研究

近距空中支援作战在现代战争中的地位日益凸显,通过战术数据链网络为CAS任务提供高效的战场态势、指挥引导、空地协同等信息交互能力,能够缩短CAS任务从发起到打击所需时间、提高打击精度和效率,成为美军发展的重点的方向。本文以Link-16战术数据链为切入点,结合近距空中支援作战流程,对美军CAS作战中Link-16数据链的组网应用和信息交互进行研究。

硫铝酸盐矿物的电热-微波二次快速烧成

采用电预热然后用微波加热二次加热方法 ,快速烧成了 Ca4 Al6 SO1 6 ,Ca3Sr Al6 SO1 6 ,Ca3Ba Al6 SO1 6 等硫铝酸盐矿物。电预热温度 12 0 0～ 130 0℃ ,然后在微波炉中加热 1min30 s～ 2 min,试样 f- Ca O值可降至 0。 3种矿物中Ca4 Al6 SO1 6 最容易烧成 ,Ca3Sr Al6 SO1 6 最难烧成。掺入 Fe2 O3、Cr2 O3、Mn O2 等外加剂能促进硫铝酸盐矿物的烧成。XRD分析表明 。

土壤嗜铁细菌C19的筛选、分子鉴定及其对炭疽菌和镰刀菌的拮抗作用

利用LB液体培养基进行生物富集,采用CAS(Chrome Azurol S)检测平板法,从海南岛橡胶树等作物根际土壤中分离获得43个产嗜铁素细菌菌株。通过室内平板对峙培养法研究其中嗜铁能力较强的菌株C19对12个常见炭疽菌和镰刀菌的拮抗作用,结果表明,该菌株对Fusarium solani等9个菌株有不同程度的拮抗作用,显示该菌株具有较好的生防潜能。扩增菌株C19的16S rDNA序列,序列测定结果显示,该片段长度为1 525 bp,经Blastn搜索进行序列比对,该细菌为洋葱伯克霍尔德氏菌(Burkholderia cepacia)。

不同磷钙元素水平番茄营养液中细菌多样性

为研究不同磷钙元素水平番茄营养液中的细菌多样性,采用从营养液中直接提取微生物总DNA,并用细菌16SrDNA特异性引物进行PCR扩增、变性梯度凝胶电泳(DGGE)、克隆和测序等一系列分子生物学手段。结果表明,各种元素水平的番茄营养液,均有相似的条带,只是亮度上有些差异。与对照相比,各处理元素水平营养液中的细菌DGGE条带均有变化。对照DGGE的条带分布相对均匀,而其他样品的DGGE条带分布多不均匀。番茄营养液中的细菌类群主要包括:Proteobacteria(Alpha,Beta,Gamma和Unclassified),Bacteroidetes和Gram Positive Bacteria。磷钙元素水平对番茄营养液中的细菌多样性具有一定的影响。

柯萨奇病毒A组16型中和抗体检测方法的实验室评价

目的评价柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CA16)中和抗体检测方法于不同实验室内和实验室间的可重复性。方法参照WHO脊髓灰质炎病毒中和抗体检测方法,建立CA16中和抗体检测方法和实验标准;收集22份血清样品,对CA16 A基因型毒株G10及B基因型毒株W190、33、203、P11和CS02毒株独立进行CA16中和抗体有效检测实验,评价所建立的检测方法于A^G实验室内和实验室间的可重复性;分别于A、B、C、D和E实验室比较G10毒株与W190、33、203、P11和CS02毒株对CA16中和抗体检测结果的影响。结果在各实验室内,有17/22份血清样品的变异系数(variable coefficient,CV)在0~11.4%之间,表明该检测方法在同一实验室内具有较好的可重复性;在实验室间,除3份低效价血清和1份效价过高血清外,其余血清样品的几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)最大差异倍数均在3.0倍以内,实验室间检测差异在可接受范围内;W190、33、203、P11和CS02毒株与G10毒株检测结果趋势相近。在同一实验室内,W190和33毒株与G10毒株的检测结果差异无统计学意义;203、P11和CS02毒株的检测结果均低于G10毒株,差异有统计学意义,表明B基因型毒株与A基因型毒株生物学活性存在一定差异。结论以G10毒株检测CA16中和抗体的方法在各协作实验室可得到良好应用,有利于CA16中和抗体检测的标准化,但适用性需进一步评估和验证。

EV71、CA16和肠道病毒通用型三重荧光RT-PCR检测技术的建立

目的建立-种可以同时检测EV71、CA16和肠道病毒通用型的三重荧光RT-PCR检测方法,为手足口病监测与应急诊断提供高通量快速检测技术.方法分别在VP1和5’ UTR基因保守区设计EV71、CA16和肠道病毒通用型的特异性检测引物以及Taqman探针,建立并评估三重荧光RT-PCR技术的特异性和敏感性,并对91份疑似手足口病患儿临床标本进行核酸检测与效果验证.结果建立的三重荧光RT-PCR技术可同时对EV71、CA16和肠道病毒通用型进行特异性检测区分,敏感性均可达到0.1TCID50/mL,从核酸提取至完成检测仅需2～3h.91份疑似手足口病患儿临床标本采用三重荧光RT-PCR方法检测,EV71、CA16和其他型别肠道病毒的检出率分别为30.77%、9.89%和5.49%;荧光RT-PCR方法的检出率高于培养分离法.结论建立的三重荧光RT-PCR技术能同时准确分型EV71、CA16和其他型别肠道病毒.

氯仿抽提纯化CA 16病毒最优条件的筛选

目的筛选氯仿抽提纯化柯萨奇病毒A组16型(Coxsakievirus A 16,CA16)的最优条件。方法根据《中国药典》三部(2015版)的相关要求,选择病毒感染性滴度、残余蛋白、残余牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)、残余卡那霉素及残余氯仿含量等指标,分析氯仿抽提的不同条件及超滤浓缩对纯化产物质量指标的影响。将CA16浓缩病毒液与氯仿按不同体积比进行一抽多洗纯化,分析不同比例氯仿对纯化效果的影响;将CA16超滤浓缩病毒液分别用不同浓度的PBS洗涤,以评价不同离子浓度的PBS洗涤对纯化病毒纯化液质量指标的影响。结果不同浓度的PBS洗涤液、病毒液与氯仿体积比对纯化液病毒感染性滴度均无明显影响,病毒回收率平均为81.7%;随着PBS洗涤次数的增多,洗液中的杂蛋白逐渐减少,氯仿比例及PBS离子浓度对蛋白去除率影响不明显,蛋白去除率均大于82%(82.69%~93.6%),平均去除率88.37%;不同氯仿比例、不同PBS浓度及不同洗涤次数对残余卡那霉素含量无明显影响,结果均低于30 ng/mL,经超滤浓缩后,其含量低于3.0 ng/mL;氯仿抽提纯化残余BSA的去除率可达68.87%,若结合超滤浓缩工艺,残余BSA的去除率可达94.74%;超滤浓缩后纯化病毒液残余氯仿去除率可达98%以上,最终纯化液残余氯仿含量小于6μg/mL。结论氯仿抽提方法结合超滤浓缩可得到符合要求的CA16病毒实验性疫苗。

柯萨奇病毒A16型灭活疫苗保护效果研究

目的:研究柯萨奇病毒A 16型候选疫苗株(CA 16-KM)经灭活后免疫小鼠,对病毒攻击的保护效果。方法:用Vero细胞进行CA 16-KM株培养,病毒收获后经浓缩、蔗糖密度梯度离心进行纯化及β-丙内酯灭活,用酶联免疫吸附法(ELISA法)对灭活后的CA 16-KM病毒液进行抗原含量的测定并在Vero细胞上盲传3代对灭活后CA 16-KM毒株的残余毒力进行检测。灭活后的病毒加入氢氧化铝佐剂(质量浓度为1 mg·mL^(-1)),经离心及PBS重悬,制成实验性灭活疫苗。分别于第0天和第14天经肌肉注射免疫8周龄ICR母鼠,对照组用等体积PBS代替。分娩后24 h内的新生乳鼠用100 LD_(50)的CA 16强毒株(CA16-CC)经颅内注射进行攻毒,攻毒后连续21 d观察其临床症状,研究该灭活疫苗对新生乳鼠的保护效果。结果:经β-丙内酯灭活后的CA 16-KM在Vero细胞上盲传3代均无细胞病变效应(CPE)出现,灭活后的CA 16-KM抗原含量为320 EU·mL^(-1)。经注射实验性疫苗的乳鼠攻毒后全部存活,表明CA 16-KM株制备的灭活疫苗诱导的免疫反应可对新生乳鼠产生100%的保护作用。结论:β-丙内酯对CA 16-KM毒株的灭活效果较好;CA 16-KM疫苗候选株灭活后具有良好的免疫原性,可以保护新生乳鼠抵抗CA 16病毒的攻击,也许是研制CA 16灭活疫苗的理想毒株。

2015年鄂尔多斯市手足口病病原学监测结果分析

目的分析鄂尔多斯市2015年手足口病病原学监测结果,探寻手足口病流行特点和变化规律,为预防和控制手足口病提供有力依据。方法采取real-time PCR法对手足口病咽拭子监测样本进行肠道病毒通用型EV-U、CA16型和EV71型核酸检测分析。结果 304例手足口病咽拭子监测样本中,EV-U阳性率为35.53%（108/304）,其中CA16型、EV71型和肠道病毒其他亚型核酸阳性率分别为30.56%（33/108）、9.26%（10/108）和60.19%（65/108）;手足口病发病高峰为5月-7月（75.93%）;发病人群以1岁-3岁婴幼儿为主（62.96%）;男、女性别比为1.40∶1;鄂托克旗和杭锦旗的发病率较高,分别为56.00%和53.13%。结论鄂尔多斯市2015年手足口病主要以肠道病毒其他亚型为主,夏季是高发期,婴幼儿为高危人群,男性感染比例略大。今后应加强对3岁以下婴幼儿的监测管理和预防教育。

液相芯片检测3种发热伴出疹病毒方法的建立

目的建立一种能同时检测发热伴出疹症候群中的肠道病毒71(EV71)、柯萨奇病毒A组16(CA16)和麻疹病毒(MV)的高通量液相芯片检测方法。方法针对EV71、CA16和MV全基因组序列,分别设计特异性引物和探针,经多重PCR扩增并用生物素标记相应的基因片段,建立EV71、CA16和MV高通量核酸液相芯片检测方法。并对该方法灵敏度、特异度进行验证。结果液相芯片检测方法对EV71、CA16和MV的检测结果与多重PCR的检测结果一致。该方法能同时完成对其中任何1种及3种病毒的检测,特异性好,灵敏度最低可达2.14pg/μl。结论该方法用于3种发热伴出疹症候群病毒的检测具有较高的灵敏度和特异性,可用于EV71、CA16和MV的实验室检测。

MBR和CAS工艺污泥在贫营养培养条件下的微生物群落结构研究

采用聚合酶链式-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术,研究了膜生物反应器(MBR)和传统活性污泥工艺(CAS)反应器中微生物在贫营养条件下的总细菌群落结构.结果表明,在培养过程中,污泥的微生物种群经历了一个比较明显的变化过程,且以CAS污泥微生物种群的变化更为明显,演替过程中既有原始优势种群的消亡,又有新的优势种群的增强,故优势种群的功能地位处于动态变化中.两种污泥的来源、工艺进水水质和运行条件的不同造成了活性污泥中菌群结构的差异.两种污泥中主要存在的优势菌种大部分为未经培养菌种(uncultured bacterium)、弓形杆菌属(Arcobacter)、假单胞菌属(Pseudomonas)、芽孢杆菌属(Bacillus)、γ-变形菌纲(gamma proteobacterium)细菌等,此外,亦存在一些病原性微生物,如Arcobacter属、Serratia属和Klebsiella属等.

实时荧光PCR技术在手足口病实验诊断中的应用探讨

目的:研究分析实时荧光pCr技术在手足口病实验诊断中的应用价值。方法:针对本院2013年5月至2016年1月收治的疑似手足口病患儿378例进行研究分析,并采集粪便标本,进一步针对肠道病毒通用型以及Ca-16(柯萨奇病毒16型)和eV-71(肠道病毒71型)进行鉴别诊断和分析。结果:本次研究收集的378份粪便标本经过实时荧光pCr检测采用通用型试剂盒阳性检出例数为319份(阳性检出率为84.39%),其中有58例患儿是eV-71感染(占18.18%),Ca-16感染患儿有132例(占41.38%)。结论:调查分析发现,Ca-16和eV-71肠道病毒是导致手足口病发生的主要病原体,并且本地区以Ca-16占主导。实时荧光pCr技术用于手足口病实验诊断具有重要的应用价值。