HPLC-UV法检测EV71-CA16二价手足口病灭活疫苗原液相关抗原纯度的方法建立与评价

为建立一种准确可靠的高效液相色谱-紫外(HPLC-UV)方法,检测EV71-CA16二价手足口病(HFMD)灭活疫苗原液中的相关抗原,肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CA16)的纯度。本文采用Waters体积排阻色谱柱(SEC,UltrahydrogelTM 2507.8×300 mm,6μm),流动相为0.01 mol/L的PBS中再加入0.1 mol/L氯化钠溶液,等度洗脱,流速0.3 mL/min,检测波长280 nm,进样量50μL,柱温21℃,进行EV71与CA16病毒原液的纯度检测,并对该方法的检测限、拖尾因子、专属性、重复性及检测范围进行验证。结果显示,2种抗原的灵敏度溶液的信噪比(S/N)分别为37.053和47.710,均远大于3,各试样的拖尾因子均小于3;CA16原液和EV71原液经HPLC分离纯化后的目标抗原峰馏分经SDS-PAGE和Western-Blot特异性鉴定,结果显示,色谱峰样品组成分别为CA16和EV71的2种病毒衣壳的结构蛋白,表明本检测方法专属性高。不同浓度的EV71与CA16病毒抗原经多次检测后,各浓度条件下的峰面积百分比与保留时间的RSD均小于1%,重复性良好。不同抗原浓度批样品检测结果显示,CA16原液抗原浓度在89 U/mL~26398 U/mL之间,EV71原液抗原浓度在170 U/mL~9074 U/mL之间时,2种抗原溶液经多次检测统计显示峰面积百分比与保留时间的RSD均小于1%,本方法在该抗原浓度范围内准确可靠,适用于EV71-CA16二价手足口病灭活疫苗原液中病毒抗原纯度的检测。

不同形式CA16病毒颗粒的分离鉴定与免疫原性初步分析

目的:制备不同形式的CA16病毒颗粒,并对其免疫原性进行初步分析。方法:采用蔗糖密度梯度超速离心法和阴离子交换层析法,将CA16病毒进行分离纯化,收集相应组分,测定各组分抗原、蛋白含量,并进行SDS-PAGE、Western Blot、电镜鉴定。将分离到的不同病毒颗粒组分分别免疫小鼠,于0,14和28 d腹腔注射接种3次,末次免疫后14 d眼眶采血、分离血清。采用微量细胞病变抑制法检测血清中抗CA16病毒中和抗体效价。结果:CA16病毒液经超速离心和阴离子交换层析后,可分离得到2种形式的病毒颗粒:EP和FP。电镜下EP表现为空心颗粒、FP为实心颗粒。SDS-PAGE结果显示:EP可见VP0,VP1,VP3蛋白条带;FP可见VP1,VP2,VP4蛋白条带。EP,FP免疫小鼠后,均可诱导产生针对CA16病毒的中和抗体,但EP诱导产生的中和抗体效价远低于FP,两者间具有统计学差异。结论:体外培养的CA16病毒存在EP和FP 2种病毒颗粒形式,二者均具有免疫原性,但FP高于EP。

银翘藿朴汤对CA16病毒感染的支气管上皮细胞中诱导细胞自噬相关因子表达的影响

目的探讨银翘藿朴汤对CA16病毒感染的支气管上皮细胞中诱导细胞自噬相关因子表达的影响。方法银翘藿朴汤中药液195mg/ml对治疗组16HBE细胞预处理4h,随后将CA16病毒350μl接种至治疗组和对照组16HBE细胞培养基中,Western blot检测TLR7、MyD88、IRF7、IFN等蛋白的表达情况。结果治疗组TLR7、MyD88、IRF7及IFN蛋白水平分别为1.87±0.79、2.32±1.49、4.26±2.37、4.67±2.45,均高于对照组的0.57±0.21、0.69±0.31、1.76±0.69、1.59±0.50(P<0.05)。治疗组病毒VP1蛋白水平为0.31±0.05,低于对照组的0.62±0.05(P<0.05)。结论银翘藿朴汤可以激发机体免疫反应,抑制病毒复制,起到抗病毒作用。

2017-2020年江门地区儿童手足口病流行病学特征及非EV71型非CA16型肠道病毒型别分析

目的:分析广东省江门市2017-2020年手足口病的流行特征,了解非EV71型非CA16型肠道病毒的分子流行病学特征,为本市进一步临床治疗和防控工作提供科学依据。方法:通过全国传染病报告信息管理系统收集2017-2020年本市手足口病患儿资料,收集整理2017-2020年本院信息系统报告的手足口病例及分析其流行特征,采用荧光RT-PCR法对疑似手足口病患者标本同时进行EV通用型、EV71型、CA16型检测,并选取EV71型和CA16阴性而EV通用型阳性的标本进行型别鉴定,设计5’非编码区特异性引物,RT-PCR扩增后进行序列测定,最后对核苷酸的同源性进行比对及确定病毒的型别。结果:2017-2020年江门市共报告HFMD总发病人数为31 709例,其中2017年报告病例数最高。4年内共采集了因怀疑手足口病到本院就诊患儿的2 587例标本,并同时进行EV通用型、EV71型、CA16型检测,总阳性1 263例,总阳性率为48.82%。阳性主要以托幼儿童和男患儿为主。其中EV71核酸阳性173例,占13.70%;CA16核酸阳性282例,占22.33%;其他EV核酸阳性808例,占63.97%。在2017-2020年中确定属于肠道病毒分型共87份,检出的非EV71型非CA16型的肠道病毒有6种型别,分别为CA6、CA10、CA4、CA12、CA5、CA8,其中CA6是占主要的,为70.11%,其次是CA10占13.79%。结论:江门市手足口病的分布呈现出人群差异、季节差异,非EV71型非CA16型的肠道病毒病原谱有六种,病毒型别以CA6为主。应持续进行病原学检测,掌握优势型别,为防控提供依据。

EV71与CA16双价灭活疫苗诱导小鼠免疫原性研究

目的评价EV71和CA16双价灭活疫苗免疫小鼠诱导的体液免疫和细胞免疫应答。方法分别应用EV71和CA16双价疫苗、EV71和CA16单价疫苗按单针、两针(0,14 d)的程序免疫小鼠,采用细胞病变法检测血清第1针免疫后21 d时中和抗体效价,应用LUMINEX液相芯片技术检测小鼠脾单个核细胞体外经抗原刺激分泌细胞因子的水平。结果双价疫苗与EV71单价疫苗单针、两针免疫相比,EV71中和抗体几何平均值相近(118.8∶84.0;159.5∶156.8,P>0.05)。双价疫苗与CA16单价疫苗单针免疫诱导的CA16中和抗体均为阴性;两针免疫CA16中和抗体几何平均值一致(30.0∶26.9,P>0.05)。加强免疫7 d后,小鼠脾MNC经EV71抗原刺激,双价疫苗较EV71单价疫苗诱导Th2类细胞因子IL-4、5、6、10和炎症因子TNF-α的分泌水平显著增高(P=0.020,P=0.027,P=0.038,P=0.019,P=0.026);MNC经CA16抗原刺激,双价疫苗与CA16单价疫苗相比诱导细胞因子水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论双价疫苗可诱导与单价疫苗相似的中和抗体应答水平,并可提高Th2类细胞因子应答,研究为EV71和CA16双价灭活疫苗的研发提供了实验依据。

柯萨奇病毒A组16型研究进展

柯萨奇病毒A组16型(CA16)是引起手足口病(HFMD)的主要病原体,与肠道病毒71型(EV71)交替或共同流行;特别是近年在西太平洋地区呈现流行强度高、重症和死亡人数多的特点,已成为该地区的重大公共卫生问题。研发安全有效的疫苗是控制HFMD流行的有效手段。由于EV71所致疾病在重症和死亡病例中所占比例高,对其疫苗研发得到了广泛关注,全病毒灭活疫苗已进入III期临床,有望即将应用于婴幼儿HFMD的防控。EV71疫苗的顺利研发随之也增加了对CA16疫苗研发的迫切性。近年来日本、新加坡以及中国台湾地区逐渐开始关注CA16相关的研究,我国也有多家企业开展CA16疫苗的研发。本文就CA16的病原学,流行病学,实验室诊断,治疗和预防等方面进行了综述。

小鼠在柯萨奇病毒A组16型活病毒免疫原性评价中的应用

目的评价小鼠在柯萨奇病毒A组16型（CA16）活病毒感染中免疫原性的应用，为减毒活疫苗研究提供实验数据。方法以不同剂量的CA16活病毒通过皮下、腹腔和肌肉途径接种不同年龄的ICR和BALB／C小鼠，采集初次免疫7d、21d、28d以及加强免疫7d后的血样：通过微量细胞病变中和法检测中和抗体效价，细胞因子ELISA检测试剂盒检测6种细胞因子含量。结果初次免疫后28d，肌肉、腹腔和皮下途径免疫的小鼠血清抗体阳转率分别为83．33％、40．00％和0．00％，抗体几何平均效价（GMT）分别为1：169、1：32和0；加强免疫后，肌肉、腹腔和皮下途径免疫的小鼠血清抗体阳转率均达100％，抗体GMT分别为1：813、l：609和1：32，肌肉和腹腔途径免疫的小鼠血清抗体GMT平均增长4．8倍和19．0倍；加强免疫7d的抗体阳转率达100％；明显高于初次免疫28d和21d；BALB／c小鼠与ICR小鼠相比，前者的中和抗体效价和抗体阳转率明显高于后者，而小鼠年龄对中和抗体效价和抗体阳转率的影响不显著（P〉0．05）；免疫剂量对中和抗体效价和抗体阳转率的影响显著（P〈0．05），高剂量病毒免疫小鼠后中和抗体效价和抗体阳转率明显比低剂量高（P〈0．05）；细胞因子检测结果显示加强免疫7d后的白细胞介素100L-10）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量与初次免疫7d的相比显著增加。结论BALB／c和ICR小鼠可做为CA16活病毒免疫原性评价的动物模型，以4～6周龄的BALB/c小鼠最为敏感。

菏泽市2013～2017年手足口病病毒学监测分析

目的探讨菏泽市2013~2017年手足口病流行病毒类型,为菏泽市手足口病疫情的防控和实施策略提供科学依据。方法 2013~2017年菏泽市各县区手足口病定点医疗单位收集的临床诊断病例的粪便或肛拭子标本,提取病毒核酸,应用实时荧光定量PCR进行病毒的核酸检测;用描述性流行病学方法分析流行病学特征。结果2013~2017年共收集样本2751份,其中阳性样本2294份,阳性率为83.39%;EV71阳性样本1111份,阳性率为40.39%;CA16阳性样本387份,阳性率为14.08%;其他肠道病毒阳性样本796分,阳性率为28.93%。2013年、2015年优势株为EV71;2014年优势株为CA16;2016、2017年以其他肠道病毒型为优势株。不同年龄组、性别、季节分布差异有显著性(P<0.05)。各年手足口病毒型别分布差异有统计学意义(P<0.05)。结论 2013~2017年菏泽市手足口病流行病毒类型从高到低分别是EV71、其他肠道病毒和CA16。EV71是引起重症病例的主要病原体。在高发季节前,应加强托幼机构及散居儿童的卫生健康教育和防控力度,提前做好低幼儿童的疫苗宣传及接种工作;强化手足口病监测力度。

2022—2023年新冠疫情期间及疫情后手足口病流行病学及分型分析

目的对比了解2022—2023年新冠疫情期间及疫情后广州市和佛山市手足口病流行病学及非肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)非柯萨奇病毒A组16型(Coxsaekievirus group A 16,CA16)病毒的分子流行病学特征,为治疗和防控提供依据。方法运用荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对2022—2023年疑似手足口病患者标本同时进行肠道病毒(enterovirus,EV)通用型、EV71、CA16检测,并选取EV71和CA16是阴性而EV通用型是阳性的标本进行型别鉴定,设计5′非编码区(UTR)引物,RT-PCR扩增后进行序列测定,序列用BLAST程序进行序列的EV型别确定。结果2022年,同时进行EV通用型、EV71、CA163种病毒检测的疑似手足口病例标本共362份,总阳性47份,阳性率为12.98%;其中EV71阳性0份;CA16阳性5份,占1.38%;非EV71非CA16的EV阳性标本42份,占11.60%。2023年,同时进行EV通用型、EV71、CA163种病毒检测的疑似手足口病标本有297份,总阳性100份,阳性率为33.67%,全年没有检出EV71,CA16全年检出率为2.36%(7/297),非EV71非CA16的EV阳性率为31.31%(93/297)。51份非EV71非CA16阳性标本的序列分析表明,2022—2023检出的非EV71非CA16的EV有9种型别,分别为:CA6、CA10、CA4、CA2、CA8、柯萨奇病毒B组5型(CB5)、CB2、CB3、埃可病毒30型(E30),其中CA6占主要,为27.45%(14/51),其次是CA10,占15.69%(8/51)。结论新冠疫情结束后的2023年比疫情期间的2022年EV阳性率高。2022—2023年手足口病主要以非EV71非CA16为主,序列分析表明非EV71非CA16病毒中以CA6和CA10为主,应加强对CA6、CA10为主要非EV71非CA16病毒进行研究及监测。

手足口病CA16型VP1亚单位疫苗的构建制备及免疫原性初步分析

目的制备CA16型VP1蛋白疫苗并进行免疫原性初步分析，为手足VI病CA16疫苗的深入研究提供资料。方法利用RT—PCR技术获得CA16VP1基因，克隆到载体pFastBacHTA，与BacmidDNA重组，转染Si9昆虫细胞，重组CA16VP1蛋白与AI（OH），佐剂混合制备重组CA16VP1蛋白疫苗，腹腔免疫BALB／c小鼠，2次免疫后进行免疫效果初步评价。结果用间接免疫荧光、SDS—PAGE和Westernblot法，证明重组CA16VP1蛋白在昆虫细胞St9中得到表达，用ELISA和微量中和法检测到免疫小鼠血清有特异IgG和中和抗体产生，最佳免疫抗原剂量为20μg，其特异IgG效价为1：1600，中和抗体效价为1：250；通过淋巴细胞增殖试验和细胞因子测定，证明诱导T细胞应答，诱发Th1／Th2型免疫应答。结论CA16VP1基因克隆成功，并在Sf9昆虫细胞中获得表达，构建的重组CA16VP1亚单位疫苗具有诱导特异性细胞免疫和体液免疫应答的能力，为今后研制手足口病CA16疫苗奠定了基础。

不同CA16流行株的相关生物学和VP1基因的分子生物学研究

目的对柯萨奇病毒A组16型（CA16）病毒株进行生物学特征与基因背景研究，为CA16病原和疫苗的进一步研究奠定基础。方法从咽拭子标本中分离出CA16病毒；通过中和鉴别试验和RT—PCR对病毒进行分子生物学鉴定；病毒的VPl基因序列测定后，与其他CA16序列进行比较，绘制种系发育树，确定病毒基因型；测定病毒滴度，观察病毒在Vero细胞上的噬斑形态；攻击乳鼠分析病毒的致病性。结果从手足口病患者咽拭子标本中分离到6株病毒，采用肠道病毒通用引物可以从病毒感染细胞中扩增出约150bp大小的目的产物带；采用CA16特异性引物可以从病毒感染细胞中扩增出210bp大小的目的产物带。而采用EV71特异性引物未见特异性扩增条带。噬斑分析发现，6株病毒在Vero细胞上接种96h后均能出现清晰的噬斑，其中BJ-3噬斑直径为4—5mm，BJ-5噬斑直径约为3mm，BJ-1、BJ-2、BJ4、BJ-6噬斑直径为1．5～2mm；除BJ-3噬斑边缘模糊外，其余5株噬斑边缘整齐。该6株病毒均可被人CA16抗体阳性血清中和。在Vero细胞上连续传5代，滴度均在7．0LgcCID50／ml左右。基于VPI基因序列的种系发育分析结果显示，BJ-2、BJ-4、BJ-5属于C1亚型，BJ-1、BJ-3、BJ-6属于C3亚型，该6株病毒核苷酸同源性达90％以上，氨基酸同源性达99％以上。乳鼠攻击试验结果显示，BJ-3和BJ-5攻击后第4～5天乳鼠开始发病，后肢出现明显的麻痹、瘫痪症状，至第6～7天全部死亡，正常对照组和其他病毒组直至攻击后第14天均无异常。结论不同CA16病毒株的生物学特性有所不同，基因背景相近，致病性明显不同，需进一步了解中国流行的CA16病毒株的致病特点，为疫苗的研发提供直接依据。

西安地区2011年儿童手足口病病原学分析

目的对西安地区2011年手足口病病原学进行分析，为手足口病的临床诊断、治疗及防治提供科学依据。方法采集2011年1月～6月555例（其中男性347例，女性208例，年龄范围8个月～6岁，平均年龄2．6岁）西安市儿童医院临床诊断为手足口病患儿咽拭子标本，采用实时荧光RT—PCR方法检测肠道病毒通用型（EV）、肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A组16型（CA16）。结果56例重症患者其中45例由肠道病毒71型（EV71）引起，占重症病例的80．4％（45／56），4例由柯萨奇病毒A组16型（CA16）引起，占重症病例的7．1％（4／56）。肠道病毒71型（EV71）阳性率与柯萨奇病毒A组16型（CA16）阳性率差异有统计学显著性意义（χ^2=273．4，P〈0．0001）。结论西安地区2011年手足口病病原学以肠道病毒71型（EV71）为主，与2010年相比肠道病毒71型（EV71）感染有上升趋势，且高发于3岁以下儿童组，重症患者与2010年相同，主要由肠道病毒71型（EV71）引起。

手足病病原体流行特征分析及临床意义

目的分析我区院2010年1月至2012年1月的手足口病的流行病学特征,探索其流行规律,为有效制定预防控制策略提供依据。方法收集流行期到我区院就诊的手足口病患儿97例作为研究对象,其中重症12例,同时收集同期的疱疹性咽炎患儿50例作对照,结合临床诊断进行比较分析。结果手足口病患者的97份便标本中,阳性检出率为91.8%（89/97）;疱疹性咽炎患儿50例中,阳性率为68.0%（34/50）;手足口病重症病例EV71阳性率为91.7%（11/12）。结论我区院的手足口病毒以EV71和CA16为主,重症病例主要由EV71引起。手足口病以4-7个月为发病高峰季节。发病率最高的年龄段为1～4岁。

887例手足口病患儿血清抗体及白细胞计数结果分析

目的了解我院手足口病患儿血清抗体及白细胞变化的情况。方法回顾性分析我院2013年10月至2014年2月887例手足口病患儿血清柯萨奇病毒A16型(CA16)、肠道病毒71型(EV71)抗体和白细胞检测结果。结果 887例标本抗体总阳性率为58.9%,其中CA16和EV71两种抗体均阳性的占28.4%,CA16抗体阳性占53.1%,EV71抗体阳性占34.2%,两者存在显著性差异;病毒抗体阳性标本中白细胞增高(>10×109),占46.4%,抗体阳性白细胞增高(>20×109)39例,占16.1%,其中CA16和EV71两种抗体均阳性的有26例,占66.7%,且均为重症手足口病,两种抗体均阳性与单独一种抗体阳性引起的白细胞增高存在显著性差异。结论对于CA16和EV71两种抗体均阳性且白细胞增高(>20×109)的手足口病患者,应及时干预,防止病情向重症发展。

柯萨奇病毒A16型灭活疫苗保护效果研究

目的:研究柯萨奇病毒A 16型候选疫苗株(CA 16-KM)经灭活后免疫小鼠,对病毒攻击的保护效果。方法:用Vero细胞进行CA 16-KM株培养,病毒收获后经浓缩、蔗糖密度梯度离心进行纯化及β-丙内酯灭活,用酶联免疫吸附法(ELISA法)对灭活后的CA 16-KM病毒液进行抗原含量的测定并在Vero细胞上盲传3代对灭活后CA 16-KM毒株的残余毒力进行检测。灭活后的病毒加入氢氧化铝佐剂(质量浓度为1 mg·mL^(-1)),经离心及PBS重悬,制成实验性灭活疫苗。分别于第0天和第14天经肌肉注射免疫8周龄ICR母鼠,对照组用等体积PBS代替。分娩后24 h内的新生乳鼠用100 LD_(50)的CA 16强毒株(CA16-CC)经颅内注射进行攻毒,攻毒后连续21 d观察其临床症状,研究该灭活疫苗对新生乳鼠的保护效果。结果:经β-丙内酯灭活后的CA 16-KM在Vero细胞上盲传3代均无细胞病变效应(CPE)出现,灭活后的CA 16-KM抗原含量为320 EU·mL^(-1)。经注射实验性疫苗的乳鼠攻毒后全部存活,表明CA 16-KM株制备的灭活疫苗诱导的免疫反应可对新生乳鼠产生100%的保护作用。结论:β-丙内酯对CA 16-KM毒株的灭活效果较好;CA 16-KM疫苗候选株灭活后具有良好的免疫原性,可以保护新生乳鼠抵抗CA 16病毒的攻击,也许是研制CA 16灭活疫苗的理想毒株。

新型冠状病毒肺炎疫情发生前及疫情期间广州市手足口病肠道病毒的流行病学及型别分析

目的对比了解新型冠状病毒肺炎(COVID-19)发生前及疫情期间广州市手足口病肠道病毒的分子流行病学特征。方法 2019年1月至2021年12月, 采集到于广州市妇女儿童医疗中心就诊的手足口病住院或门诊疑似患儿的标本共73 740份, 其中2019年10 243份, 2020年24 568份, 2021年38 929份。采用实时荧光定量聚合酶链反应进行肠道病毒通用型、肠道病毒71型(enterovirus 71, EV71)、柯萨奇病毒A组(Coxsackie virus A group, CA)16检测, 并选取EV71和CA16双阴性而肠道病毒通用型为阳性的标本进行型别鉴定。结果 2019年10 243份同时进行肠道病毒通用型、EV71、CA16检测的手足口病标本中, 肠道病毒通用型阳性6 590份(64.34%), EV71阳性37份(0.36%), CA16阳性1 107份(10.81%), 非EV71非CA16肠道病毒阳性5 446份(53.17%)。2020年1 450份同时进行肠道病毒通用型、EV71、CA16检测的手足口病标本中, 肠道病毒通用型阳性476份(32.83%), EV71阳性1份(0.07%, 10月检测到), CA16阳性22份(1.52%), 非EV71非CA16肠道病毒阳性453份(31.24%);仅进行肠道病毒通用型检测的23 118份标本中, 阳性1 450份(6.27%)。2021年2 572份同时进行肠道病毒通用型、EV71、CA16检测的手足口病标本中, 肠道病毒通用型阳性1 155份(44.91%), EV71全年未检出, CA16阳性219份(8.51%), 非EV71非CA16肠道病毒阳性936份(36.39%);仅进行肠道病毒通用型检测的36 357份标本中, 阳性5 938份(16.33%)。非EV71非CA16肠道病毒的序列分析确定有14种型别, 其中CA6和CA10占44.14%(49/111)。结论 COVID-19疫情期间的2020年和2021年的肠道病毒阳性率低于疫情前的2019年。2019年至2021年手足口病的病原体以非EV71非CA16肠道病毒中的CA6和CA10为主。

泉州市2017—2020年手足口病病原学监测结果

目的对泉州市手足口病(HFMD)实验室监测结果进行分析,掌握HFMD病原学变化情况,为防控提供依据。方法对2017—2020年各县(市、区)哨点医院送检的2083份院内首次就诊的手足口病例咽拭子标本,用荧光定量RTPCR方法进行肠道病毒核酸检测并分析数据。结果2083份咽拭子标本中多种肠道病毒(HEV)总阳性率为80.5%;肠道病毒病原分型结果显示EV71占4.9%,CA16占22.0%,非EV71、非CA16占73.1%;阳性数在5~6月和8~10月形成高峰;以<5岁的儿童为主(91.4%);男女比例2.0:1。结论2017—2020年泉州市HFMD非EV71非CA16肠道病毒占比较高。应加强对肠道病毒其他型别的监测,及时发现病原转变,为防控提供依据。

2011年武汉及周边城市手足口病病原学及流行病学研究

目的了解武汉市及周边城市2011年4月至2012年3月手足口病的病原学及流行病学特征,为本地区手足口病的防治提供依据。方法采集手足口病患者咽拭子标本,采用实时荧光定量PCR方法检测肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CA16)的核酸。结果 2011年4月至2012年3月共收集手足口病咽拭子标本1844例,其中EV71阳性372例,阳性率为20.2%;CA16阳性460例,阳性率为24.9%;EV71和CA16双阳性38例,阳性率为2.1%。在病例收集期间,武汉及周边城市暴发的手足口病有2个高峰期,第1个高峰期为2011年5～7月春末夏初季节,EV71亚型为主要病原体;第2个高峰期为2011年9～12月秋末冬初季节,CA16病毒为主要病原体;发病患者集中于1～3岁儿童,且男性明显多于女性;散居儿童人数明显多于幼托儿童;EV71亚型患者发热、中枢神经系统(呕吐、肢颤、嗜睡和惊厥)症状所占比例要显著高于CA16亚型。结论 2011年武汉市及周边城市2个手足口病高峰期的主要病原体分别是由EV71和CA16亚型引起的,及早了解手足口病病原体的构成及流行病学特征,对于其防控具有重要意义。

2010年深圳市手足口病的病原学检测分析

目的:了解深圳市2010年手足口病的病原学情况,为手足口病的控制和治疗提供实验室依据。方法:采集手足口病病例粪便标本,提取标本中的病毒核酸,采用RT-PCR方法,检测肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16型(CA16)的核酸。结果:2010年共检测1238例手足口病例,其中重症病例122例。所有病例中,EV71阳性率为43.29%,CA16阳性率为11.14%;重症病例中,EV71阳性率75.4%,CA16阳性率仅1.63%;死亡病例均为EV71阳性。5月份病例数最多;城乡结合部为重症病例高发区。3岁以下儿童为手足口病重症高发年龄段。结论:EV71和CA16是引起深圳市手足口病的主要病原体,其中EV71是引起重症病例的最主要原因,必须加强对EV71引起的手足口病病例的监测和治疗。

唐山市2009年手足口病病原学检测分析

近年来,手足口病（HFMD）疫情不断上升,多数病例通常症状较轻,根据典型的皮疹或疱疹即可做出诊断,但对于重症病例、临床诊断不明以及聚集病例,进行实验室病原学鉴别诊断具有重要的意义。为掌握河北省唐山市手足口病病原学分布及其特点,