祝氏麻鸡(Gallus gallus)终端父本CAB39L基因克隆和生物信息学及组织表达分析

为了探究钙结合蛋白样39(calcium binding protein 39 like,CAB39L)的蛋白结构及其基因的组织表达规律,本研究以祝氏麻鸡(Gallus gallus)终端父本为试验材料,克隆CAB39L基因并进行生物信息学分析和组织表达分析。通过克隆获得CAB39L基因的CDS(conding sequence)全长序列,应用实时定量PCR检测CAB39L基因在祝氏麻鸡终端父本各组织中的表达水平。结果表明:祝氏麻鸡终端父本CAB39L基因的编码区长度为1005 bp,共编码334个氨基酸;与参考序列(索引号:NM_001006272)进行序列比对,存在两处同义突变(c.852G>T,c.874T>C)。物种间同源性分析显示,祝氏麻鸡终端父本CAB39L基因与原鸡(Gallus gallus)、雉鸡(Phasianus colchicus)、中国家鹅(Anser cygnoiders domesticus)、鸽(Columba livia)、人(Homo sapiens)、黑猩猩(Pan troglodytes)、家鼠(Mus musculus)、猴子(Macaca mulatta)、斑马鱼(Danio rerio)CAB39L基因的相似性分别为99.8%、97.5%、93.7%、92.6%、83.6%、83.6%、83.5%、82.5%、75.4%;系统进化树分析显示,祝氏麻鸡终端父本与原鸡的亲缘关系最近,其次是与雉鸡的亲缘关系比较近,与斑马鱼的亲缘关系最远,这表明CAB39L基因在禽类和非禽类之间有明显的遗传距离。CAB39L蛋白的等电点为7.69,为碱性蛋白;亲疏水性分析显示该多肽链氨基酸序列的平均亲疏水性为-0.320,为亲水蛋白;蛋白功能结构域预测结果显示该蛋白只含有Mo25结构域,且不属于跨膜蛋白和分泌蛋白。实时定量PCR结果显示,CAB39L基因在睾丸中的表达量最高,这表明CAB39L基因可能与公鸡睾丸组织的生长发育或功能有关,进而影响公鸡的生长情况。本研究结果为进一步研究鸡CAB39L基因的生物功能奠定了理论基础。

白血病相关基因MLAA-34在HeLa细胞中的抗凋亡作用

目的:研究白血病相关基因MLAA-34在He La细胞中的抗凋亡作用。方法:以HeLa细胞株为研究对象,构建MLAA-34重组慢病毒表达载体,建立了高表达MLAA-34的稳定转染Hela细胞株;应用As_2O_3诱导其凋亡,采用MTT法、平板克隆形成实验、流式细胞术分别检测细胞增殖能力、集落形成能力、凋亡及细胞周期分布的变化。结果:应用As_2O_3处理后,稳定转染MLAA-34的Hela细胞株的存活率明显高于对照组,其集落形成能力显著增加;MLAA-34基因高表达显著降低了HeLa细胞的凋亡率,同时相应的降低了G_2/M期细胞的比例。结论:白血病相关基因MLAA-34在HeLa细胞中具有抑制As_2O_3诱导的凋亡作用。

LKB1 depletion-mediated epithelial-mesenchymal transition induces fibroblast activation in lung fibrosis

The factors that determine fibrosis progression or normal tissue repair are largely unknown.We previously demonstrated that autophagy inhibition-mediated epithelial-mesenchymal transition(EMT)in human alveolar epithelial type Il(ATIl)cells augments local myofibroblast differentiation in pulmonary fibrosis by paracrine signaling.Here,we report that liver kinase B1(LKB1)inactivation in ATIl cells inhibits autophagy and induces EMT as a conse-quence.In IPF lungs,this is caused by the down-regulation of CAB39L,a key subunit within the LKB1 complex.3D co-cultures of ATIl cells and MRC5 lung fibroblasts coupled with RNA sequencing(RNA-seq)confirmed that paracrine signaling between LKB1-depleted ATIl cells and fibroblasts augmented myofibroblast differentiation.Together,these data suggest that reduced autophagy caused by LKB1 inhibition can induce EMT in ATIl cells and contribute to fibrosis via aberrant epithelial-fibroblast crosstalk.