苏尼特绵羊垂体季节性发情关键miRNA及其靶基因验证

为研究绵羊季节性发情性状相关分子调控机制,基于实验室前期不同光照下苏尼特绵羊垂体的转录组测序结果分析,筛选出与季节性发情相关的重要候选基因及其调控元件ARHGEF9-Novel_307、CACNB3-Novel_181、PBX1-Novel_387,为了进一步明确这些候选基因及其元件的功能,本研究通过荧光定量PCR(RT-qPCR)和生物信息学分析探讨其与绵羊季节性发情的关系。以饲养于不同光照羊舍中经双侧卵巢切除+雌二醇皮下注射(OVX+E2)处理的苏尼特绵羊为研究对象,采集垂体、下丘脑、子宫、心、肝、脾、肺和肾等组织进行研究。结果显示,ARHGEF9、CACNB3、PBX1和Novel_307、Novel_181、Novel_387均在垂体中表达。CACNB3、PBX1和Novel_307在短光照处理21 d(SP21)垂体组织中的表达显著高于长光照处理21 d(LP21),ARHGEF9、Novel_181、Novel_387在SP21垂体组织中的表达显著低于LP21,和转录组测序结果趋势相同。ARHGEF9-Novel_307、CACNB3-Novel_181、PBX1-Novel_387之间存在表达负相关性,与miRNA-mRNA整合分析结果一致;蛋白互作网络分析(PPI)表明,ARHGEF9、CACNB3、PBX1蛋白与DIO2、DIO3、TSHB等季节性发情标志蛋白存在关联性。综上所述,ARHGEF9、CACNB3、PBX1可能参与苏尼特羊季节性发情性状的形成,且Novel_307、Novel_181、Novel_387与候选基因之间存在负相关,可能调控候选基因的表达。