术前血清V-set和免疫球蛋白结构域4以及长链非编码核糖核酸SBF2反义RNA1与肾结石患者经皮肾镜取石术后急性肾损伤的关系

目的探讨术前血清V-set和免疫球蛋白结构域4(VSIG4)以及长链非编码核糖核酸(LncRNA)SBF2反义RNA1(SBF2-AS1)与肾结石患者经皮肾镜取石术后急性肾损伤(AKI)的关系。方法选择2020年1月—2022年12月本院收治的109例肾结石患者为研究对象。术前检测患者血清VSIG4水平以及LncRNA SBF2-AS1表达,术后记录AKI发生情况。采用多因素Logistic回归模型分析肾结石患者经皮肾镜取石术后发生AKI的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析VSIG4、LncRNA SBF2-AS1预测肾结石患者经皮肾镜取石术后发生AKI的价值。结果本研究中,术后发生AKI者16例。AKI组血清VSIG4水平低于非AKI组,LncRNA SBF2-AS1表达高于非AKI组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,术前高尿酸水平、术前高LncRNA SBF2-AS1表达、较长的手术时间、术中低血压是肾结石患者经皮肾镜取石术后发生AKI的危险因素(P<0.05),术前高VSIG4水平是保护因素(P<0.05)。术前血清VSIG4、LncRNA SBF2-AS1水平预测肾结石患者经皮肾镜术后发生AKI的曲线下面积分别为0.854、0.705,二者联合预测的曲线下面积为0.948,大于各指标单独预测(Z=1.995、2.958,P<0.05)。结论肾结石患者术前血清VSIG4水平降低、LncRNA SBF2-AS1表达增高与经皮肾镜取石术后AKI的发生有关,联合检测术前VSIG4、LncRNA SBF2-AS1可预测术后AKI的发生风险。

LncRNA ZEB1-AS1和LncRNA SOX2OT在糖尿病肾病患者中的表达及与肾功能的相关性研究

目的探究长链非编码RNA锌指E盒结合同源盒蛋白1反义链1(LncRNA ZEB1-AS1)和长链非编码RNA性别决定相关基因簇2重叠转录本(LncRNA SOX2OT)在糖尿病肾病(DN)患者中的表达及与肾功能的相关性。方法选取于2021年11月—2023年12月在武汉大学人民医院肾内科收治的DN患者106例为DN组,并根据24 h尿蛋白定量(24 h Upro)水平分为正常蛋白尿亚组43例(<30 mg)、微量蛋白尿亚组39例(30~<300 mg)、大量蛋白尿亚组24例(≥300 mg),另选取同期医院单纯糖尿病患者106例作对照组,检测患者血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平;Pearson法分析LncRNA ZEB1-AS1和LncRNA SOX2OT与肾功能指标的相关性;Logistic分析影响DN患者肾功能损伤的因素。结果DN组血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平低于对照组(t=11.471、10.257,P均<0.001)。血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT比较,正常尿蛋白亚组>微量尿蛋白亚组>大量尿蛋白亚组(F=58.720、117.722,P均<0.001),BUN、SCr、UA水平比较,正常尿蛋白亚组<微量尿蛋白亚组<大量尿蛋白亚组,差异均有统计学意义(F=122.493、595.589、53.178,P均<0.001);LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT分别与BUN、SCr、UA呈负相关(r=-0.487、-0.498、-0.521,-0.527、-0.515、-0.534,P均<0.001);Logistic回归分析显示,糖尿病病程长及高BUN、SCr、UA水平是影响DN患者肾功能损伤的危险因素[OR(95%CI)=1.672(1.128~2.479)、2.839(1.534~5.253)、2.754(1.512~5.017)、2.693(1.464~4.954)],高LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT是保护因素[OR(95%CI)=0.875(0.798~0.959)、0.898(0.832~0.969)]。结论血清LncRNA ZEB1-AS1、LncRNA SOX2OT水平与DN患者肾功能有关,可能是评估DN患者肾功能的潜在指标。

咪达唑仑通过调控LncRNA NR2F2-AS1对肾癌786-O细胞增殖、迁移及凋亡的影响

目的 探讨咪达唑仑对肾癌786-O细胞增殖、迁移及凋亡的影响及其可能作用机制。方法 体外培养人肾癌细胞786-O,随机分组:咪达唑仑0、20、40、60μmol/L组、si-NC组、si-核受体亚家族2组F成员反义RNA(NR2F2-AS)1组、咪达唑仑+pcDNA组、咪达唑仑+pcDNA-NR2F2-AS1组;CCK-8法、流式细胞术与Transwell实验分别检测细胞增殖、凋亡及迁移;实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测LncRNA NR2F2-AS1表达量;Western印迹检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关蛋白(Bax)表达量。结果 与咪达唑仑0μmol/L组比较,咪达唑仑20、40、60μmol/L组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Bax蛋白水平明显升高,迁移细胞数和Bcl-2蛋白水平明显降低,长链非编码(Lnc)RNA NR2F2-AS1表达量明显降低,且呈剂量依赖性(P<0.05);转染si-NR2F2-AS1可明显抑制细胞增殖及迁移,并可明显提高细胞凋亡率(P<0.05);与咪达唑仑+pcDNA组比较,咪达唑仑+pcDNA-NR2F2-AS1组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Bax蛋白水平明显降低,迁移细胞数和Bcl-2蛋白水平明显升高(P<0.05)。结论 咪达唑仑可通过抑制LncRNA NR2F2-AS1表达而减弱肾癌细胞增殖及迁移能力,并可诱导肾癌细胞凋亡。

鼻咽癌组织中LncRNA CTBP1-AS2和miR-140-5p水平表达与放疗疗效及预后的关系研究

目的探讨鼻咽癌癌组织中长链非编码RNA羧基末端结合蛋白1反义RNA2(long non-coding RNA C-terminal binding protein 1 antisense RNA2,LncRNA CTBP1-AS2)、微小核糖核酸(microRNA,miR)-140-5p水平表达与放疗疗效及预后的关系。方法选取2018年3月~2020年3月于南通市肿瘤医院确诊的222例鼻咽癌患者为鼻咽癌组,记录患者临床资料,评估放疗疗效及预后,并分为生存组(n=194)和死亡组(n=28);另选取同期219例鼻咽炎患者为对照组。采用Pearson相关分析检验鼻咽癌患者中LncRNA CTBP1-AS2与miR-140-5p表达水平的相关性;采用Kaplan-Meier生存曲线分析鼻咽癌组织中LncRNA CTBP1-AS2,miR-140-5p表达水平与患者预后的关系;采用COX比例风险回归模型对鼻咽癌患者预后进行多因素分析。结果鼻咽癌组患者组织中LncRNA CTBP1-AS2表达水平(2.25±0.46)高于对照组(1.02±0.22),miR-140-5p表达水平(0.67±0.19)低于对照组(1.01±0.23),差异具有统计学意义(t=35.742,16.934,均P<0.001)。鼻咽癌患者中LncRNA CTBP1-AS2与miR-140-5p表达水平呈负相关(r=-0.624,P<0.001)。LncRNA CTBP1-AS2高表达的鼻咽癌患者放疗后总有效率(74.11%)和三年生存率(77.68%)低于低表达患者(93.64%,97.27%),差异具有统计学意义(χ^(2)=15.578,19.331,均P<0.001);miR-140-5p高表达患者放疗后总有效率(93.58%)和三年生存率(96.33%)显著高于低表达患者(74.34%,78.76%),差异具有统计学意义(χ^(2)=15.119,15.538,均P<0.001)。死亡组磁共振酰胺质子转移(amide proton transfer,APT)值(2.10±0.26)、放疗无效(85.71%)、LncRNA CTBP1-AS2高表达(89.29%)及miR-140-5p低表达(85.71%)患者比例高于生存组(1.82±0.31,6.19%,44.85%,45.88%),差异具有统计学意义(t/χ^(2)=4.551,108.127,19.331,15.538,均P<0.001)。LncRNA CTBP1-AS2表达水平为鼻咽癌患者三年内死亡的危险因素(HR=2.762,95%CI:1.510~5.051,P=0.001),miR-140-5p表达水平为鼻咽癌患者三年内死亡的保护因素(HR=0.817,95%CI:0.718~0.930,P=0.002)。结论鼻咽癌组织中LncRNA CTBP1-AS2高表达,miR-140-5p低表达,二者与放疗疗效及预后关系密切。

LncRNA FEZF1-AS1通过调控EZH2对肺间质细胞增殖、迁移及侵袭的作用

目的研究长链非编码RNA FEZ家族锌指1-反义RNA 1(lncRNA FEZF1-AS1)调控zeste同源物增强子2(EZH2)对肺间质细胞增殖、迁移、侵袭能力及上皮细胞-间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法将人肺腺癌细胞系A549分为对照组(control)和模型组[model,用转化生长因子β1(TGF-β1)20 ng/mL作用48 h,诱导成为肺间质细胞]。用Western blot检测细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(vimentin)的蛋白表达。RT-qPCR检测细胞中lncRNA FEZF1-AS1和EZH2基因表达。转染组细胞分为转染si NC组、si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组和si lncRNA FEZF1-AS1+OE EZH2组。CCK-8法检测细胞增殖、细胞划痕检测细胞迁移、Transwell小室法检测细胞侵袭;用Western blot检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、vimentin及EZH2的蛋白表达,用RNA免疫沉淀(RIP)测定FEZF1-AS1与EZH2的直接结合作用。结果与对照组比较,模型组E-cadherin的蛋白表达水平减少(P<0.05);N-cadherin及vimentin的蛋白表达水平升高(P<0.05);与对照组比较,模型组lncRNA FEZF1-AS1与EZH2基因的表达水平明显升高(P<0.05);与si NC组相比,si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组细胞增殖、迁移、侵袭能力降低,E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin、vimentin、EZH2蛋白表达降低(P<0.05);与si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组比较,si lncRNA FEZF1-AS1+OE EZHZ组细胞增殖、侵袭、迁移能力升高,E-cadherin蛋白表达降低,N-cadherin、vimentin、EZH2蛋白表达升高(P<0.05);RIP实验进一步证实了lncRNA FEZF1-AS1与EZH2具有结合作用。结论LncRNA FEZF1-AS1通过调控EZH2促进肺间质细胞增殖、侵袭、转移和EMT过程。

lncRNA DSCAM-AS1通过miR-144-5p/IRS2轴对甲状腺乳头状癌细胞的影响

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)唐氏综合征细胞黏附分子反义1(DSCAM-AS1)通过微小RNA(miR)-144-5p/胰岛素受体底物2(IRS2)轴促进甲状腺乳头状癌(PTC)细胞生长和侵袭的作用。方法:将PTC细胞株TPC-1随机分为对照组(Control组,完全培养基正常培养)、si-NC组(转染si-NC)、si-DSCAM-AS1组(转染si-DSCAM-AS1)、si-DSCAM-AS1+inhibitor NC组(si-DSCAM-AS1与inhibitor NC共转染)、si-DSCAM-AS1+miR-144-5p inhibitor组(si-DSCAM-AS1与miR-144-5p inhibitor共转染)。RT-qPCR法检测DSCAM-AS1、miR-144-5p和IRS2 mRNA的表达;CCK-8法检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞的侵袭能力;Western blot检测IRS2蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验验证靶向关系。结果:与Control组相比,si-DSCAM-AS1组TPC-1细胞DSCAM-AS1表达、吸光度(A450)值、细胞侵袭数目、IRS2表达显著降低(P<0.05),miR-144-5p表达显著升高(P<0.05)。与si-DSCAM-AS1组相比,si-DSCAM-AS1+miR-144-5p inhibitor组A450值、细胞侵袭数目、IRS2表达显著升高(P<0.05),miR-144-5p表达显著降低(P<0.05)。DSCAM-AS1靶向负调控miR-144-5p表达,miR-144-5p靶向负调控IRS2表达。结论:沉默DSCAM-AS1可能通过上调miR-144-5p来抑制IRS2蛋白的表达,从而抑制PTC细胞生长和侵袭。

LncRNA HAND2-AS1在宫颈癌患者血清中的表达及临床意义

目的探究长链非编码RNA(LncRNA)心脏和神经嵴衍生物表达转录本2反义序列1(HAND2-AS1)在宫颈癌患者血清中的表达及其临床意义。方法选取2019年1月至2020年6月焦作市妇幼保健院收治的50例宫颈癌患者作为宫颈癌组,并根据中位lncRNA HAND-AS1表达值分为lncRNA HAND-AS1高表达组和lncRNA HAND-AS1低表达组,每组25例;选取同期确诊的50例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者作为CIN组和50例健康体检者作为健康对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应技术和电化学发光法检测各组研究对象血清lncRNA HAND2-AS1表达水平,以及癌抗原125(CA125)和鳞状细胞癌相关抗原(SCC)水平,分析其与患者临床特征和预后的关系。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA HAND2-AS1、CA125、SCC联合检测对宫颈癌的临床诊断效能。结果宫颈癌组患者血清LncRNA HAND2-AS1表达水平均明显低于CIN组和健康对照组,其表达水平与宫颈癌患者肿瘤长径、宫颈浸润深度、国际妇产科联盟(FIGO)分期和淋巴结转移明显相关,差异均有统计学意义(P<0.05)。lncRNA HAND2-AS1单独诊断宫颈癌的ROC曲线下面积为0.861(95%可信区间0.792~0.930),HAND2-AS1、CA125、SCC联合诊断宫颈癌的ROC曲线下面积为0.912(95%可信区间0.908~0.952),诊断效能明显高于单指标检测,差异均有统计学意义(P<0.05)。lncRNA HAND-AS1高表达组患者3年生存率明显高于lncRNA HAND-AS1低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。LncRNA HAND2-AS1、CA125、SCC、FIGO分期、淋巴结转移与宫颈癌患者预后相关,差异均有统计学意义(P<0.05);FIGO分期、SCC是影响宫颈癌患者预后的独立危险因素,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论LncRNA HAND2-AS1在宫颈癌患者血清中低表达,并与患者肿瘤长径、宫颈浸润深度、FIGO分期、淋巴结转移均明显相关;检测血清lncRNA HAND2-AS1对宫颈癌的诊断及预后评估具有一定价值。

lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA在胃癌组织中的表达及临床意义

目的:探究胃癌(GC)组织中长链非编码RNA HOXC反义RNA1(lncRNA HOXC-AS1)、胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2(IGF2BP2)mRNA表达水平与患者临床病理特征及术后5年内生存的关系。方法:选取我院2015年5月至2018年4月收治的GC患者139例,手术收集GC组织及癌旁组织。荧光定量PCR法检测lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达。对GC患者进行术后随访5年,记录GC患者生存情况,分为生存组88例,死亡组51例。比较GC组织和癌旁组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平、不同临床病理特征患者GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达情况、生存组和死亡组临床病理特征和GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平。分析GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平的相关性、GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达情况与术后5年生存的关系、影响GC患者术后5年内生存的危险因素。结果:与癌旁组织相比,GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平均显著升高(P<0.05);GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平呈正相关(P<0.05);GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平与淋巴结转移、TNM分期、肿瘤分化程度相关(P<0.05);lncRNA HOXC-AS1高表达组、IGF2BP2 mRNA高表达组患者术后5年总生存率分别显著低于lncRNA HOXC-AS1低表达组、IGF2BP2 mRNA低表达组(P<0.05);生存组和死亡组淋巴结转移、TNM分期、肿瘤分化程度比较差异有统计学意义(P<0.05);死亡组患者GC组织中lncRNA HOXC-AS1和IGF2BP2 mRNA表达水平显著高于生存组(P<0.05);TNM分期为III期、肿瘤低分化、lncRNA HOXC-AS1高表达、IGF2BP2 mRNA高表达是影响GC患者术后5年内生存的独立危险因素(P<0.05)。结论:GC患者癌组织中lncRNA HOXC-AS1及IGF2BP2 mRNA表达水平均显著升高,且术后5年内死亡的GC患者较存活患者更高,二者与淋巴结转移、TNM分期、肿瘤分化程度密切相关,二者高表达是影响GC患者术后5年内生存的独立危险因素。

宫颈癌患者lncRNA HAND2-AS1表达及其对宫颈癌Caski细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的探讨宫颈癌患者血清长链非编码RNA(lncRNA)心脏和神经嵴衍生物表达转录本2反义序列1(HAND2-AS1)表达的临床意义,分析lncRNA HAND2-AS1对宫颈癌Caski细胞增殖、侵袭和迁移的影响机制。方法采用基因表达交互分析(GEPIA)数据库分析lncRNA HAND2-AS1在宫颈癌组织和正常宫颈组织中的表达情况。选取2019年1月—2021年12月焦作市妇幼保健院宫颈癌患者48例(宫颈癌组)、宫颈上皮内瘤变(CIN)患者48例(CIN组)和健康体检者48名(正常对照组)。收集其中14例宫颈癌患者术后癌组织和癌旁组织(距癌组织边缘>2 cm)样本,同时收集所有研究对象血清样本和临床资料,检测lncRNA HAND2-AS1相对表达量。将宫颈癌细胞系Caski按转染质粒的不同分为过表达组(转染pcDNA3.1-HAND2-AS1)和阴性对照组(转染pcDNA3.1-NC)、干扰组(转染si-HAND2-AS1)和干扰对照组(转染si-NC)。采用CCK-8实验、Transwell实验和划痕实验检测细胞的增殖、侵袭和迁移能力,采用免疫印迹法检测细胞内磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)的表达情况。结果GEPIA数据库分析结果显示,宫颈癌组织lncRNA HAND2-AS1表达显著低于正常宫颈上皮组织(P<0.05)。14例宫颈癌患者癌组织lncRNA HAND2-AS1相对表达量显著低于癌旁组织(P=0.001)。宫颈癌组血清lncRNA HAND2-AS1相对表达量显著低于CIN组和正常对照组(P<0.001),CIN组与正常对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。不同肿瘤大小、国际妇产科学联合会(FIGO)分期和有无淋巴转移的宫颈癌患者之间血清lncRNA HAND2-AS1相对表达量差异均有统计学意义(P<0.05)。过表达组lncRNA HAND2-AS1相对表达量显著高于阴性对照组(P<0.01),细胞增殖活性、侵袭细胞数、划痕愈合率和p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达量均低于阴性对照组(P<0.05)。干扰组lncRNA HAND2-AS1相对表达量显著低于干扰对照组(P<0.001),细胞增殖活性、侵袭细胞数、划痕愈合率和p-PI3K、p-Akt蛋白相对表达量均显著高于干扰对照组(P<0.05)。过表达组与阴性对照组之间、干扰组与干扰对照组之间PI3K和Akt蛋白相对表达量差异均无统计学意义(P>0.05)。结论宫颈癌患者血清lncRNA HAND2-AS1呈低表达,且与病情严重程度有关。lncRNA HAND2-AS1可能通过调控PI3K/Akt信号通路影响宫颈癌细胞的增殖、侵袭和迁移。

敲减lncRNA BAIAP2-AS1对胶质瘤细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制

目的探讨敲减长链非编码RNA(lncRNA)BAIAP2反义RNA 1(BAIAP2-AS1)对胶质瘤细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制。方法体外传代培养胶质瘤细胞系A172、LN229、U251及正常人星形胶质细胞系NHA。取传3代、对数生长期细胞,采用RT-qPCR法检测各细胞中微小RNA-491-5p(miR-491-5p)、BAIAP2-AS1、O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)mRNA表达,选择lncRNA BAIAP2-AS1、miR-491-5p、MGMT mRNA相对表达量变化较显著的胶质瘤细胞进行后续实验。取上述胶质瘤细胞,随机分为空白对照组、BAIAP2-AS1 shRNA组、NC shRNA组、BAIAP2-AS1 shRNA+miR-491-5p inhibitor组、BAIAP2-AS1 shRNA+NC inhibitor组,BAIAP2-AS1 shRNA组、NC shRNA组分别转染BAIAP2-AS1 shRNA、NC shRNA,BAIAP2-AS1 shRNA+miR-491-5p inhibitor组、BAIAP2-AS1shRNA+NC inhibitor组分别转染BAIAP2-AS1 shRNA与miR-491-5p inhibitor、BAIAP2-AS1 shRNA与NC inhibitor,空白对照组不予转染。转染48 h,收集细胞,采用MTT法检测细胞活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用细胞划痕实验检测细胞迁移率,采用RT-qPCR法检测BAIAP2-AS1、miR-491-5p、MGMT mRNA表达。采用StarBase在线数据库预测miR-491-5p与BAIAP2-AS1、MGMT的互补位点,并采用双荧光素酶报告基因实验验证其靶向调控关系。结果与NHA细胞比较,A172、LN229、U251细胞lncRNA BAIAP2-AS1、MGMT mRNA相对表达量较高,miR-491-5p相对表达量较低(P均<0.05)。以U251细胞lncRNA BAIAP2-AS1、MGMT mRNA相对表达量较高,miR-491-5p相对表达量较低,故以U251细胞进行后续实验。与空白组、NC shRNA组比较,BAIAP2-AS1 shRNA组细胞活性、细胞迁移率、BAIAP2-AS1、MGMT表达显著降低(P均<0.05),细胞凋亡率及miR-491-5p表达显著升高(P均<0.05);与BAIAP2-AS1 shRNA组、BAIAP2-AS1 shRNA+inhibitor NC组比较,BAIAP2-AS1 shRNA+miR-491-5p inhibitor组细胞活性、细胞迁移率、MGMT表达显著增加(P均<0.05),细胞凋亡率及miR-491-5p表达显著降低(P均<0.05)。经StarBase在线数据库预测和双荧光素酶报告基因实验验证,BAIAP2-AS1可靶向调控miR-491-5p表达、miR-491-5p可靶向调控MGMT表达。结论敲减BAIAP2-AS1可通过调节miR-491-5p/MGMT轴抑制胶质瘤细胞增殖、迁移并促进其凋亡。

长链非编码RNA alpha-2-巨球蛋白反义RNA 1靶向微小RNA-106b-5p调控氧化型低密度脂蛋白诱导的人脑微血管内皮细胞损伤

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)alpha-2-巨球蛋白反义RNA 1(A2M-AS1)靶向微小RNA(miR)-106b-5p对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脑微血管内皮细胞损伤的影响。方法用ox-LDL诱导人脑微血管内皮细胞设为ox-LDL组,正常培养细胞为对照(Ctrl)组;A2M-AS1过表达(pcDNA-A2M-AS1组)、空载体(pcDNA组)、miR-106b-5p抑制剂(anti-miR-106b-5p组)、阴性对照(anti-miR-NC组)、pcDNA-A2M-AS1与对照mimic NC(miR-NC组)、pcDNA-A2M-AS1与miR-106b-5p模拟物(miR-106b-5p mimics组)转染细胞后加ox-LDL处理,n=9;Real-time PCR检测A2M-AS1与miR-106b-5p表达;试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)水平;流式细胞术及TUNEL法检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测A2M-AS1与miR-106b-5p靶向关系;Western blotting检测Bcl-2和Bax蛋白表达量。结果与Ctrl组比较,ox-LDL组A2M-AS1表达水平、SOD和CAT活性、Bcl-2蛋白水平降低,miR-106b-5p表达水平、MDA水平、凋亡率、Bax蛋白水平升高(P<0.05);过表达A2M-AS1或干扰miR-106b-5p降低ox-LDL诱导细胞后MDA水平、凋亡率与Bax蛋白水平,升高SOD、CAT活性和Bcl-2蛋白水平(P<0.05);A2M-AS1靶向miR-106b-5p;上调miR-106b-5p逆转过表达lncRNA A2M-AS1对ox-LDL诱导的人脑微血管内皮细胞损伤的作用。结论A2M-AS1通过靶向miR-106b-5p减轻ox-LDL诱导的人脑微血管内皮细胞损伤。

LncRNA ZEB2-AS1调控miR-574-3p/ZEB1轴对卵巢癌细胞迁移及侵袭的影响

目的探讨长链非编码核糖核酸(LncRNA)锌指E盒结合同源盒蛋白2反义RNA(LncRNA ZEB2-AS)1对卵巢癌细胞迁移、侵袭的影响及可能的作用机制。方法体外培养人卵巢癌细胞(SKOV3、SW626、A2780)和正常人卵巢上皮细胞(HOSEpiC),实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中ZEB2-AS1、miR-574-3p和锌指E盒结合蛋白(ZEB)1的水平。取对数生长期的SW626细胞,分为对照组、pcDNA3.1-NC组、pcDNA3.1-ZEB2-AS1组、si-NC组、si-ZEB2-AS1组、si-ZEB2-AS1+inhibitor-NC组、si-ZEB2-AS1+miR-574-3p inhibitor组。qRT-PCR检测细胞中ZEB2-AS1、miR-574-3p表达,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western印迹检测细胞ZEB1和迁移、侵袭相关蛋白的表达;双荧光素酶报告基因检测验证ZEB1与miR-574-3p的靶向关系。结果与正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC相比,人卵巢癌SKOV3、SW626、A2780细胞中ZEB2-AS1、ZEB1水平明显升高,miR-574-3p水平明显降低(P<0.05),且SW626细胞中ZEB2-AS1表达水平最高。转染后,与对照组相比,pcDNA3.1-ZEB2-AS1组细胞增殖、迁移和侵袭能力及ZEB1、N-钙黏蛋白(cadherin)、波形蛋白(VIM)、基质金属蛋白酶(MMP)-9表达明显升高,E-cadherin表达明显降低(P<0.05);si-ZEB2-AS1组细胞增殖、迁移和侵袭能力及ZEB1、N-cadherin、VIM、MMP-9表达明显降低,E-cadherin表达明显增加(P<0.05)。与si-ZEB2-AS1组相比,si-ZEB2-AS1+miR-574-3p inhibitor组细胞增殖、迁移和侵袭能力及ZEB1、N-cadherin、VIM、MMP-9表达明显升高,E-cadherin表达明显降低(P<0.05)。双荧光素酶结果显示,高表达miR-574-3p可明显抑制ZEB1 WT的荧光素酶活性(P<0.05)。结论在卵巢癌中,LncRNA ZEB2-AS1过表达可能通过下调miR-574-3p,上调ZEB1的表达,进而诱导上皮-间质转化(EMT),促进卵巢癌细胞的迁移与侵袭。

溃疡性结肠炎患者血清LncRNA Mirt2和LncRNA IFNG-AS1表达水平及与预后相关性研究

目的探讨长链非编码RNA心肌梗死相关转录本2(long non-coding RNA myocardial infarction-related transcript 2,LncRNA Mirt2)、长链非编码RNA干扰素γ-反义RNA1(long non-coding RNA interferonγ-antisense RNA 1,LncRNA IFNG-AS1)在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者血清中表达情况及与UC患者预后相关性。方法选择2018年12月~2021年1月南京市浦口区中医院(南京市中医院浦口分院)收治的193例UC患者作为观察对象,其中缓解期85例,活动期108例。根据患者预后情况分为复发组(n=78)和未复发组(n=115),另选取同期190例健康体检者作为对照组。采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测血清LncRNA Mirt2和LncRNA IFNG-AS1表达水平,Pearson法分析UC患者血清LncRNA Mirt2和LncRNA IFNG-AS1表达水平相关性及LncRNA Mirt2和LncRNA IFNG-AS1与C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、白细胞介素-6(interleukin-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的相关性;ROC曲线分析血清LncRNA Mirt2和LncRNA IFNG-AS1对复发UC的诊断价值。结果与对照组比较,缓解期组与活动期组UC患者血清LncRNA Mirt2(0.92±0.10,0.71±0.08vs 1.07±0.12)表达水平降低,LncRNA IFNG-AS1(1.63±0.25,2.27±0.42 vs 1.01±0.14)表达水平及CRP(13.42±4.71mg/L,25.38±6.29 mg/L vs 4.32±1.27 mg/L),IL-6(8.31±2.35pg/ml,16.55±4.52 pg/mlvs 2.87±0.78 pg/ml),TNF-α(15.38±4.29 pg/ml,28.94±6.37 pg/ml vs 8.42±1.63 pg/ml)水平升高,差异具有统计学意义(t=10.064~44.632,均P<0.001);与缓解期组相比,活动期组UC患者血清LncRNA Mirt2表达水平降低,LncRNA IFNG-AS1表达水平及CRP,IL-6,TNF-α水平升高,差异具有统计学意义(t=12.420~16.844,均P<0.001);与轻度组比较,中、重度组UC患者血清LncRNA Mirt2(0.69±0.08,0.58±0.05 vs 0.81±0.06)表达水平降低,LncRNA IFNG-AS1(2.25±0.48,2.83±0.25 vs 1.90±0.31)表达水平升高,差异有统计意义(t=3.890~17.225,均P<0.001);与中度组比较,重度组UC患者血清LncRNA Mirt2表达水平降低,LncRNA IFNG-AS1表达水平升高,差异具有统计学意义(t=6.184,5.957,均P<0.001)。相关性分析显示,UC患者血清LncRNA Mirt2表达水平与CRP,IL-6和TNF-α呈负相关(r=-0.623,-0.605,-0.571,均P<0.001),LncRNA IFNG-AS1表达水平与CRP,IL-6和TNF-α呈正相关(r=0.457,0.531,0.497,均P<0.001)。与未复发组比较,复发组UC患者血清LncRNA Mirt2(0.70±0.08 vs 0.87±0.11)表达水平显著降低,LncRNA IFNG-AS1(2.38±0.41 vs 1.72±0.28)表达水平显著升高(t=11.706,13.294,均P<0.001);血清LncRNA Mirt2,LncRNA IFNG-AS1联合诊断复发UC的曲线下面积为0.931(95%CI:0.886~0.963),敏感度和特异度分别为87.18%,86.96%;阳性预测值、阴性预测值和准确度分别为81.93%,90.91%和87.05%。结论UC患者血清LncRNA Mirt2表达水平降低、LncRNA IFNG-AS1表达水平升高,与炎症水平和患者预后有关,可作为反映UC患者病情与预后的标志物。

腺病毒介导的cox-2反义RNA对食管癌细胞株生长的影响

目的 :构建表达人环氧化酶 2 (cyclooxygenase 2 ,cox 2 )反义RNA的腺病毒载体 ,研究其对人食管癌细胞生长的影响。方法 :把人cox 2基因的cDNA片段反向克隆于穿梭质粒 pHCMVSP1A的CMV启动子之下 ,获得 pAd AShcox 2 ,通过脂质体与pJM17共转染 2 93细胞 ,经同源重组产生编码cox 2反义RNA的重组腺病毒———Ad AShcox 2。PCR鉴定为阳性克隆并大量扩增 ,转染食管癌细胞EC970 6 ,用生长细胞计数 ,3 H TdR掺入及免疫细胞化学的方法 ,研究对食管癌细胞生长、cox 2表达、DNA合成的影响。结果 :成功构建编码cox 2反义RNA的重组腺病毒Ad AShcox 2 ,病毒感染EC970 6后 ,cox 2表达降低 ,3 H TdR掺入量减少 ,与对照组比较P <0 .0 0 1;同时发现食管癌细胞的生长受抑制。结论 :减少cox 2的表达可能是治疗食管癌的一种新途经。

腺病毒介导的cox-2反义RNA对食管癌细胞株DNA和蛋白质合成的影响

目的:构建表达人cox-2反义RNA的腺病毒载体,研究其对人食管癌细胞株DNA和蛋白质合成的影响.方法:把人cox-2的cDNA片段反向克隆于穿梭质粒pHCMVSP1A的CMV启动子之下,获得pAd-AShcox-2,通过脂质体与pJM17共转染293细胞,经同源重组产生编码cox-2反义RNA的重组腺病毒--Ad-AShcox-2.经PCR的方法鉴定为阳性克隆并大量扩增、纯化,转染食管癌细胞EC9706,采用生长细胞计数,免疫细胞化学、3H-TdR、3H-Leucine掺入法,研究对食管癌细胞生长、DNA及蛋白质合成的影响.结果:成功构建并扩增、纯化得到编码cox-2反义RNA的重组腺病毒Ad-AShcox-2,滴度达0.86×1012PFU/ml;Ad-AShcox-2感染肿瘤细胞后,cox-2表达水平明显降低,3H-TdR、3H-Leucine掺入量明显减少,与对照组在48h、72h、96h比较有显著性差异(q48h=16.36及16.36,q72h=39.07及19.90,q96h=54.80及30.33;P<0.001);同时发现食管癌细胞的生长明显受抑制.结论:表达cox-2反义RNA重组腺病毒感染人食管癌细胞后可降低cox-2表达水平,使DNA合成降低、蛋白质合成减少,且抑制食管癌细胞生长、增生,提示抑制cox-2的表达可能是治疗食管癌的一种新途经.

长链非编码RNA SBF2-AS1通过miR-372-3p/CDK6轴调控肝癌细胞侵袭及增殖

目的探讨长链非编码RNA SET结合因子2反义RNA1(lnc RNA SBF2-AS1)调控mi R-372-3p/细胞分裂蛋白激酶6(CDK6)轴对肝癌细胞侵袭及增殖的影响。方法以Bel7402和SK-hep1细胞为研究对象,上调或下调SBF2-AS1、miR-372-3p及CDK6表达水平,实时荧光定量PCR及Western blot检测细胞中miR-372-3p及CDK6表达水平。双荧光素酶报告基因实验分别验证SBF2-AS1和miR-372-3p、miR-372-3p和CDK6靶向关系。CCK-8、集落形成实验、Transwell、细胞周期实验及流式细胞术分析细胞增殖、集落形成、迁移/侵袭能力、细胞周期活动及凋亡。结果SBF2-AS1在肝癌细胞中高表达(P<0.05)。敲降SBF2-AS1后,Bel7402和SK-hep1细胞侵袭、增殖能力降低(P<0.05)。敲降miR-372-3p后,Bel7402细胞侵袭、增殖能力升高,同时敲降SBF2-AS1后,可反转上述效应(P<0.05)。miR-372-3p靶向CDK6并抑制后者的表达,过表达SFB2-AS1,可反转上述效应(P<0.05)。过表达CDK6,可以逆转过表达miR-372-3p对Bel7402细胞侵袭及增殖的抑制。结论lncRNA SBF2-AS1通过miR-372-3p正向调控CDK6的表达,改变肝癌细胞的周期活动,影响肝癌细胞的增殖、侵袭能力。

肺癌骨转移患者血清lncRNA MALAT1和lncRNA A2M-AS1表达水平及临床价值

目的探究肺癌骨转移患者血清非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1(lncRNA MALAT1)和非编码RNAα-2-巨球蛋白反义RNA 1(lncRNA A2M-AS1)表达水平及临床价值。方法选取2021年9月至2022年9月在哈励逊国际和平医院经过病理学检查确诊为肺癌的164例患者为肺癌组,其中经骨骼ECT检查发现84例者骨转移为骨转移组,80例无骨转移者为无骨转移组。同期选取80例肺部良性疾病患者为对照组。采用qRT-PCR法检测血清lncRNA MALAT1和lncRNA A2M-AS1表达水平;Pearson法分析lncRNA MALAT1和lncRNA A2M-AS1表达的相关性;ROC曲线分析lncRNA MALAT1和lncRNA A2M-AS1对肺癌骨转移的诊断价值。结果与对照组相比,肺癌组血清中lncRNA MALAT1表达水平显著升高(P<0.001),lncRNA A2M-AS1表达水平显著降低(P<0.001)。与无骨转移组相比,骨转移组血清中lncRNA MALAT1表达水平显著升高(P<0.001),lncRNA A2M-AS1表达水平显著降低(P<0.001)。相关性分析显示,肺癌骨转移患者血清中lncRNA MALAT1和lncRNA A2M-AS1表达水平呈负相关(r=-0.369,P<0.001)。lncRNA MALAT1和lncRNA A2M-AS1联合诊断肺癌骨转移的AUC高于两者单独诊断(P<0.05)。结论肺癌骨转移患者血清中lncRNA MALAT1表达水平显著升高,lncRNA A2M-AS1表达水平显著降低,两者联合对肺癌骨转移具有一定的诊断价值。

环氧合酶-2反义RNA在不同时间点对人食管癌细胞系生长的影响

背景:环氧合酶（COX）-2在人食管癌细胞系EC9706中高度表达,COX-2反义RNA能抑剂EC9706细胞的生长增殖。目的:探讨COX-2反义RNA在不同时间点对EC9706细胞生长的影响。方法:培养293细胞,扩增、纯化编码COX-2反义RNA的重组腺病毒Ad-AShcox-2,转染EC9706细胞,在不同时间点进行活细胞计数和3H-胸腺嘧啶核苷（TdR）掺入量测定。结果:扩增、纯化获得编码COX-2反义RNA的重组腺病毒Ad-AShcox-2,滴度为1.2×10^（12）PFU/ml。Ad-AShcox-2转染EC9706细胞后,在24h、48h、72h和96h时对细胞生长的抑制率分别为8.60％、24.33％、50.21％和75.26％。Ad-AShcox-2组EC9706细胞的3H-TdR掺入量从24h起开始减少,72～96h时达最低,与对照组相比有显著差异（P<0.001）。结论:COX-2反义RNA重组腺病毒感染人食管癌细胞后,从24h起开始对癌细胞产生抑制作用,72～96h时寸抑制作用最为明显。

腺病毒介导BTEB2反义RNA对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的 构建携带反义锌指转录因子 2 (basictranscriptionelementbindingprotein 2 ,BTEB2 )基因的重组腺病毒载体并研究BTEB2反义RNA对平滑肌细胞 (vascularsmoothmusclecell,VSMC)增殖的影响。方法 从培养的大鼠VSMC中提取总RNA ,通过RT PCR制备BTEB2cDNA ,将其反向克隆至腺病毒载体 ,构建携带反义BTEB2基因的重组腺病毒Ad .ASBTEB2 ;用Ad .ASBTEB2转染VSMC ,通过RT -PCR检测BTEB2反义RNA在VSMC中的表达 ;经免疫印迹法分析BTEB2反义RNA对BTEB2蛋白质表达的抑制作用 ;通过MTT比色法和流式细胞仪分别检测BTEB2反义RNA对VSMC增殖及细胞周期的影响。结果 构建的重组腺病毒载体经鉴定正确 ,其滴度为 5× 10 9/ml ;VSMC被重组腺病毒感染后 ,可检测到BTEB2反义RNA的表达 ;Ad .ASBTEB2转染可明显抑制VSMC的BTEB2蛋白表达及血清诱导的VSMC增殖 ,使VSMC出现明显的G0 /G1期阻滞。结论 成功构建了携带反义BTEB2基因的重组腺病毒载体 ;重组腺病可在VSMC中表达BTEB2反义RNA ;

腺相关病毒载体介导的PLB基因反义RNA对大鼠心肌细胞肌浆网Ca^(2+)-ATPase活性和[Ca^(2+)]i的作用

目的:探讨腺相关病毒载体介导的磷酸受纳蛋白(PLB)反义RNA对肌浆网Ca2+-ATPase活性以及细胞内钙浓度([Ca2+]i)的作用。方法:构建PLB反义RNA的重组腺相关病毒载体(rAAV-asPLB)和携带报告基因LacZ的重组腺相关病毒载体(rAAV-LacZ)。分别转染培养的大鼠心肌细胞,测定PLBmRNA和蛋白质表达,检测肌浆网Ca2+-ATPase活性和[Ca2+]i。结果:RT-PCR和Westernblotting显示,感染rAAV-asPLB的心肌细胞的PLBmRNA和蛋白质表达低于正常对照和感染rAAV-LacZ组;而Ca2+-ATPase活性大于正常对照和感染rAAV-LacZ组。激光共聚焦显微镜检测显示,静息状态时,rAAV-asPLB感染组[Ca2+]i降低;异丙肾上腺素刺激后,各组[Ca2+]i均升高,但是rAAV-asPLB感染组[Ca2+]i变化幅度大。结论:腺相关病毒介导的PLB反义RNA对大鼠心肌细胞PLB表达具有抑制作用,增强Ca2+-ATPase活性,降低静息状态的[Ca2+]i,增加异丙肾上腺素刺激后[Ca2+]i的变化幅度。