新藤黄酸对CAL27细胞裸鼠移植瘤增殖及凋亡作用的研究

目的:探讨新藤黄酸(GNA)对CAL27细胞裸鼠移植瘤增殖及凋亡的影响。方法:将18只SPF级裸鼠随机分为对照组、GNA低剂量组及GNA高剂量组(n=6)。通过接种对数生长期的舌鳞癌CAL27细胞建立皮下裸鼠移植瘤模型,低及高剂量组裸鼠分别隔日静脉注射新藤黄酸8.0 mg/kg与16.0 mg/kg干预,对照组给予等量生理盐水。给药期间绘制肿瘤生长曲线,2周后处死裸鼠并取出肿瘤组织,计算抑瘤率。TUNEL法检测各组裸鼠移植瘤细胞凋亡;免疫组化法检测瘤体组织的AKT、Bcl-2与PI3K蛋白的表达水平;HE染色法检测新藤黄酸对正常组织器官的毒副作用。结果:GNA低及高剂量组裸鼠移植瘤生长缓慢,瘤重及瘤体积明显低于对照组(P<0.05),低和高剂量组抑瘤率分别为57.58%和83.68%。TUNEL结果表明,GNA低及高剂量组凋亡指数高于对照组;免疫组织化学结果表明,GNA低及高剂量组裸鼠肿瘤组织的AKT、Bcl-2及PI3K的表达显著低于对照组(P<0.05)。HE结果显示,GNA对正常组织器官无明显改变。结论:GNA可能通过调控肿瘤组织AKT、Bcl-2及PI3K等蛋白的表达,诱导CAL27细胞凋亡,抑制人舌鳞癌的发生发展,对正常组织器官无明显毒副作用。

斑蝥酸钠对人舌鳞癌CAL27细胞的抑制作用及机制研究

目的:探讨斑蝥酸钠(sodium cantharidate,SCA)对人舌鳞癌CAL27细胞的抑制作用及相关机制。方法:利用不同浓度SCA预处理CAL27细胞后,采用CCK-8法分析细胞活力,划痕实验和Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western印迹法检测SCA对CAL27细胞p53及其磷酸化位点Ser33、Ser37、Ser46蛋白、抑凋亡蛋白B淋巴细胞瘤2(BCL-2)、促凋亡蛋白BCL-2相关X蛋白(BAX)和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved caspase 3)蛋白表达的影响。采用Graphpad Prism 9.0软件包对数据进行统计学分析。结果:与空白对照组相比,斑蝥酸钠组CAL27细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低,细胞凋亡率显著升高(P<0.01),呈剂量依赖性。随着SCA浓度增加,p53及其磷酸化位点Ser33、37、46蛋白表达显著上调(P<0.05或P<0.01),BCL-2蛋白表达下调,BAX蛋白表达显著上调,BCL-2/BAX比值显著降低,cleaved caspase 3蛋白表达显著上调(P<0.05或P<0.01)。结论:SCA能抑制人舌鳞癌CAL27细胞增殖、迁移和侵袭,并可能通过调控p53蛋白的磷酸化修饰,经BCL-2/BAX-caspase-3信号通路,诱导细胞凋亡。

TPX2在舌鳞状细胞癌组织中的表达及其对Cal27细胞增殖和凋亡的影响

目的研究Xklp2靶蛋白(targeting protein for xenopus kinesin-like protein2,TPX2)在舌鳞状细胞癌组织中的表达及意义,并探讨其在舌鳞癌细胞株Cal27增殖和凋亡过程中的作用。方法收集新鲜的舌鳞状细胞癌组织及其配对癌旁组织30例于液氮中保存,采用荧光定量PCR、免疫印迹western blot方法检测TPX2在舌鳞状细胞癌癌组织和癌旁组织中mRNA、蛋白水平的表达情况,分析TPX2表达水平与临床病理参数的相关性;进一步用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)敲低舌鳞状细胞癌细胞株Cal27细胞TPX2的表达量,以MTT法、流式细胞术和Western blot法分别检测细胞增殖、凋亡以及凋亡相关蛋白(cleaved caspase 3、caspase 3)表达水平的变化。结果在转录水平,TPX2在30例舌鳞状细胞癌患者癌组织中呈高表达状态,23例患者的癌组织TPX2的表达水平高于其对应的癌旁组织(t=3.254,P=0.002 9);在蛋白水平,TPX2在30例舌鳞状细胞癌患者癌组织中呈高表达状态,20例患者的癌组织TPX2的表达水平高于其对应的癌旁组织(t=2.862,P=0.007 7),且TPX2的高表达与舌鳞状细胞癌的T分期、淋巴结转移具有相关性;转染TPX2 siRNA 48 h可以抑制Cal27细胞增殖能力,增加凋亡细胞比例(F=342.9,P<0.000 1),同时上调Cleaved caspase 3(F=46.98,P=0.001 4)、Caspase 3(F=33.35,P=0.002 7)相关凋亡蛋白的表达。结论TPX2在舌鳞状细胞癌组织中呈高表达,干扰Cal27细胞中TPX2的表达可以抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,提示TPX2可能是舌鳞状细胞癌基因治疗的新靶点之一。

Syndecan1慢病毒干涉质粒的构建及其对舌鳞癌CAL27细胞增殖的影响

目的探讨RNA干扰Syndecan1基因对舌鳞癌CAL27细胞增殖的影响,阐明其作用机制。方法构建靶向基因Syndecan1的siRNA载体重组质粒pDSL-hpUGIP-Syndecan1-1834、pDSL-hpUGIP-Syndecan1-1588、pDSLhpUGIP-Syndecan1-544作为RNA干扰质粒组,同时设立阴性对照质粒组(pDSL-hpUGIP-control siRNA质粒);采用荧光定量PCR检测Syndecan1mRNA的表达水平和表达抑制率;采用细胞计数法检测CAL27细胞的增殖率。结果倒置荧光显微镜下观察,细胞感染率为90%。荧光定量PCR检测,RNA干扰组Syndecan1mRNA表达水平低于阴性对照组(P<0.01),平均抑制率为68.6%。细胞增殖率检测,与阴性对照组比较,RNA干扰质粒组细胞增殖率明显升高(P<0.01)。结论干扰Syndecan1可抑制该基因的转录,并促进CAL27细胞的增殖。

十字孢碱对口腔鳞状细胞癌CAL27细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨十字孢碱(staurosporine,ST)对人口腔鳞状细胞癌细胞株CAL27增殖和凋亡的影响及其机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度的ST对CAL27细胞增殖的抑制作用,DAPI荧光染色法观察不同浓度的ST对CAL27细胞凋亡的改变,流式细胞术检测不同浓度ST对CAL27细胞凋亡率和周期分布的影响;蛋白免疫印迹法检测不同浓度ST对CAL27细胞周期蛋白cyclin D1、Cdk4、Cdk6、p21表达的影响。结果 ST对CAL27细胞的增殖有明显抑制作用(P<0.05),抑制作用具有药物浓度依赖性。通过DAPT染色,ST能明显诱导细胞凋亡及凋亡形态改变。CAL27细胞出现Annexin V-FITC/PI流式细胞术观察发现与对照组相比,ST可诱导CAL27细胞凋亡率明显增加(P<0.05),并引起细胞周期阻滞于G2/M期(P<0.05)。蛋白免疫印迹法检测结果显示,经ST处理细胞后,cyclin D1、Cdk4和Cdk6蛋白表达明显降低,p21蛋白表达升高(P<0.05)。结论 ST可显著抑制口腔鳞状细胞癌CAL27细胞增殖并诱导其凋亡,其机制考虑是通过阻滞细胞周期于G2/M期,进而抑制肿瘤细胞生长并促进细胞凋亡。

肉桂醛对口腔鳞状细胞癌细胞CAL27增殖和迁移的影响

目的探讨不同浓度肉桂醛在体外二维条件下对口腔鳞状细胞癌(简称鳞癌)细胞CAL27的增殖、迁移、侵袭、凋亡和上皮间充质转化的影响。方法通过CCK8实验检测肉桂醛对口腔鳞癌细胞CAL27增殖性的抑制作用;通过划痕实验检测肉桂醛对CAL27的迁移能力是否具有抑制作用;通过transwell小室侵袭实验检测肉桂醛对CAL27的侵袭能力是否具有抑制作用;通过流式细胞术检测肉桂醛对CAL27的凋亡是否具有促进作用;通过Western blot实验检测肉桂醛对CAL27的上皮间充质转化是否产生影响。结果CCK8显示,经肉桂醛处理的实验组呈作用时间和药物浓度依赖性抑制CAL27细胞的增殖;细胞划痕和transwell小室侵袭实验表明,与对照组相比,肉桂醛处理组能够呈剂量依赖性抑制细胞迁移和侵袭能力;流式细胞术显示,肉桂醛呈剂量依赖性促进细胞CAL27凋亡;Western blot表明,肉桂醛呈剂量依赖性抑制CAL27细胞Vimentin、Snail表达,促进E-cadherin表达。结论经肉桂醛处理的实验组在体外二维条件下呈剂量依赖性抑制口腔鳞癌细胞CAL27的增殖、迁移和侵袭并促进其凋亡。肉桂醛通过影响上皮间充质转化过程从而对CAL27的迁移能力产生抑制作用。

尼古丁对舌鳞状细胞癌Cal27细胞的生物学影响

目的:探讨吸烟对舌鳞癌患者Cal27细胞系的影响。方法:将舌鳞癌Cal27细胞传代培养,将对数生长期细胞分为空白对照组、尼古丁组及7型烟碱乙酰胆碱受体(7nAChR)抑制组。空白对照组不作任何处理,尼古丁组用尼古丁连续处理细胞1周,7nAChR抑制组给予尼古丁及7nAChR抑制剂α-银环蛇毒素(-BTX)处理细胞1周。采用电子显微镜观察空白对照组及尼古丁组细胞形态;采用CCK-8试剂盒检测空白对照组及尼古丁组细胞增殖力;细胞划痕实验检测空白对照组及尼古丁组细胞迁移能力;Transwell小室检测空白对照组及尼古丁组细胞侵袭能力;免疫印迹实验测定尼古丁组、空白对照组及7nAChR抑制组细胞Wnt信号通路蛋白相对表达水平。采用SPSS 20.0软件包对数据进行统计学分析。结果:Cal27细胞形态为不规则多角形,体积较大,周围可见伪足伸展,在细胞培养基上呈铺路石样排列。空白对照组、尼古丁组及7nAChR抑制组Cal27细胞形态无显著差异。孵育96 h后,尼古丁组细胞数显著大于空白对照组及7nAChR抑制组(P<0.05);相同时间内尼古丁组细胞划痕愈合程度显著大于空白对照组与7nAChR抑制组(P<0.05);相同时间内,尼古丁组穿过小室细胞数显著大于空白对照组及7nAChR抑制组(P<0.05);尼古丁组细胞β-catenin、c-Myc、p-GSK3β及Ror2等Wnt通路蛋白相对表达水平显著高于空白对照组及7nAChR抑制组细胞(P<0.05)。结论:尼古丁可通过激活Wnt信号通路,提高舌鳞癌Cal27细胞增殖、迁移及侵袭能力。

TH287对口腔鳞状细胞癌CAL27细胞增殖和迁移的抑制作用

目的: TH287作为MutT同系物1(MutT homolog1,MTH1)蛋白的抑制剂,可有效抑制癌细胞中过表达的MTH1蛋白,从而解除对下游凋亡相关蛋白半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶3 (cysteinyl aspartate-specific protease-3,Caspase-3)介导细胞凋亡的抑制作用。本研究旨在检测TH287对口腔鳞状细胞癌CAL27细胞增殖性和迁移性的抑制作用。方法:通过噻唑蓝(methyl thiazol tetrazolium,MTT)法检测TH287对口腔鳞状细胞癌CAL27细胞增殖性的抑制作用并确定药物最适浓度;通过流式细胞术检测TH287对CAL27细胞凋亡的促进作用;通过Western blot实验检测TH287对MTH1蛋白表达的抑制作用;通过划痕实验和Transwell迁移实验检测TH287对CAL27细胞迁移性的抑制作用。结果: TH287有效地抑制了CAL27细胞的增殖性,其最适浓度为 100μmol/L 。TH287同时也促进CAL27细胞发生凋亡并抑制MTH1蛋白的表达。除此之外,CAL27细胞的迁移性也受到了抑制。结论: TH287可以抑制CAL27细胞的增殖并促进其凋亡。与此同时,CAL27细胞的迁移性也明显受到抑制。TH287对CAL27细胞增殖性和迁移性的抑制作用可能与MTH1蛋白表达受到抑制有关。因此,TH287可能成为口腔鳞状细胞癌靶点治疗的新药物。

地榆皂苷Ⅱ对人舌鳞癌细胞CAL27增殖能力的影响

目的:探讨地榆皂苷Ⅱ对人舌鳞癌细胞CAL27增殖抑制能力的影响。方法:设立空白对照组、地榆皂苷Ⅱ模型组、紫杉醇阳性对照组,采用CCK-8法检测两种药物不同浓度及作用时间对人舌鳞癌细胞CAL27增殖能力的影响。结果:CCK-8法结果显示,两种药物作用24 h后,随着药物浓度增大,地榆皂苷Ⅱ对细胞增殖抑制作用呈现升高趋势,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.001);药物作用时间48 h后,抑制作用与24 h相比有所降低,但也呈现一定的量效关系,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:地榆皂苷Ⅱ对人舌鳞癌细胞CAL27的增殖能力具有抑制作用。

芍药苷对舌鳞癌CAL27细胞的抑制作用及机制探讨

目的:探讨不同浓度芍药苷(paeoniflorin,PF)对舌鳞癌CAL27细胞的体外抑制作用及可能的作用机制。方法:通过CCK-8法及克隆形成实验,研究PF对CAL27细胞增殖能力、克隆形成能力的影响。采用划痕实验及Transwell法,检测PF对CAL27细胞迁移和侵袭能力的影响。采用Hoechst33342染色,观察PF对CAL27细胞凋亡的影响。采用蛋白质免疫印迹(Western blot),研究PF对NF-κB通路及EMT相关蛋白表达的影响。通过一氧化氮检测试剂盒,检测PF对CAL27细胞NO产生量的影响。采用SPSS 27.0软件包对数据进行统计学分析。结果:PF在体外条件下对CAL27细胞的增殖、迁移及侵袭有抑制作用,且其抑制效应呈浓度依赖性。此外,PF促进CAL27细胞发生凋亡。PF可抑制NF-κB通路活化,降低P-P65表达,进而降低i NOS及MMP-9表达,抑制NO生成;同时抑制Vimentin表达,促进E-cadherin表达,最终抑制上皮-间质转化(EMT)。结论:PF抑制CAL27细胞增殖、迁移及侵袭,可能通过抑制NF-κB通路活化、抑制EMT而发挥抗癌作用。

miR-19a过表达对口腔鳞癌细胞CAL27增殖和迁移的影响及其机制研究

目的探究miR-19a对口腔鳞癌细胞增殖和迁移的影响,进一步探究其机制与GRK6介导的PKC表达变化是否有关。方法脂质体法向CAL27细胞分别转染miR-19a模拟物(mimic组)和对照随机序列(对照组),RT-PCR检测miR-19a水平,MTT法检测增殖能力,划痕实验检验CAL27各组细胞迁移能力。通过蛋白免疫印迹法检测GRK6和PKC的表达。结果转染后的CAL27细胞株miR-19a表达明显增加(P<0.05);与阴性对照组相比,miR-19a过表达的CAL27细胞增殖能力明显增强(P<0.05);划痕实验结果显示miR-19a过表达增强了CAL27细胞的迁移能力;与阴性对照组相比,miR-19a过表达组的GRK6蛋白水平下降,而PKC蛋白含量升高(均P<0.05)。结论miR-19a具有增强CAL27细胞增殖和迁移能力的作用,其机制可能与GRK6介导的PKC表达变化有关。

热疗对Cal27细胞Id-1、HSF1表达的影响

目的 :探讨热疗对人舌癌Cal27细胞中Id-1、HSF1基因表达水平的影响,以及对Cal27细胞增殖、迁徙的影响。方法:采用实时荧光定量PCR检测43℃、1 h热疗对Cal27细胞Id-1、HSF1基因表达的影响;CCK-8实验和划痕实验检测Cal27细胞增殖活性、迁徙能力的变化。应用SPSS19.0软件包对数据进行统计学分析。结果:热疗后Id-1的m RNA表达水平降低,HSF1的m RNA表达水平升高;热疗后2 h,实验组Cal27细胞增殖活性显著降低(P<0.05);热疗可以显著抑制Cal27细胞的迁徙能力(P<0.05)。结论:热疗可抑制Cal27细胞的增殖活性、迁徙能力,降低Id-1的表达,升高HSF1的表达。

Met激酶抑制剂BMS-777607对舌鳞癌细胞CAL27增殖、凋亡的影响

目的:探讨Met激酶抑制剂BMS-777607对人舌鳞状细胞癌(鳞癌)CAL27细胞增殖、凋亡的影响。方法:采用MTT、克隆形成实验及EdU细胞成像实验,检测BMS-777607对CAL27细胞增殖的影响。通过Heochst33342染色,观察BMS-777607对CAL27细胞的凋亡形态变化。采用JC-1染色,检测BMS-777607对CAL27细胞线粒体膜电位变化。采用Western免疫印迹检测BMS-777607对CAL27细胞中增殖蛋白Akt、p-Akt,凋亡相关蛋白Bcl-2、Cleaved caspase-3、Bax、Parp表达的影响。采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析。结果:BMS-777607抑制CAL27细胞增殖,促进其凋亡,呈浓度依赖性(P<0.05)。BMS-777607抑制Bcl-2、p-Akt表达,促进Bax、Cleaved caspase-3、Parp蛋白表达(P<0.05)。结论:BMS-777607能够抑制CAL27细胞增殖并促进其凋亡。

舌鳞癌Cal27裸鼠移植瘤模型的建立及其意义

目的为抑癌药物的临床研究建立人舌鳞癌动物模型.通过模拟与人体内环境及生物学特性相似的动物模型,观察肿瘤细胞的生物学、病理学行为及转移情况.方法选4～6周BALB/C-nu裸鼠,将体外培养的人舌鳞癌Cal27细胞接种于裸鼠右腋皮下,观察裸鼠体质量、皮下成瘤情况、肿瘤体积;待裸鼠体质量下降至原体质量的25%时,用颈椎脱臼法处死裸鼠,剥离瘤体组织进行解剖学观察及病理学观察.结果实验裸鼠在接种Cal27细胞第7～12 d后右腋下出现肿瘤,接种浓度为每只0.1 m L约2×10^6个细胞,成瘤率为86.7%.HE染色示肿瘤组织呈典型鳞癌表现;淋巴结及主要脏器未见转移.结论成功建立舌鳞癌Cal27裸鼠移植瘤模型.此动物模型能较客观地反映人舌鳞癌的生物学行为,为进行抑癌药物的临床研究与治疗打下良好基础.

敲低circ0001273抑制口腔鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭的研究

目的探讨circ_0001273对口腔鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭的作用,为口腔鳞癌的靶向治疗研究提供相关的研究基础。方法收集12例临床诊断为口腔鳞癌患者肿瘤标本及癌旁组织,qRT⁃PCR检测circ_0001273、circ_0018569和circ_0027152的表达,选取在癌及癌旁组织中表达差异最大的circ_0001273;在UM1及CAL27两种口腔鳞癌细胞株中使用siRNA敲低circ_0001273,以MTS、Transwell实验分别检测对UM1及CAL27细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果circ_0001273在12例口腔鳞癌组织中表达异常升高(P<0.05),在UM1及CAL27细胞中敲低circ_0001273后,UM1及CAL27细胞的增殖、迁移及侵袭能力均显著下降(P<0.05)。结论敲低circ_0001273可以抑制口腔鳞癌的增殖、迁移及侵袭。

IL-22/IL-22RA1通路在口腔鳞状细胞癌恶性进展中的作用及其机制

目的:探讨IL-22/IL-22受体A1(IL-22RA1)通路在口腔鳞状细胞癌(OSCC)恶性进展中的作用及其机制。方法:利用GEO数据库和免疫组化法分析IL-22RA1在OSCC组织及配对癌旁组织中的表达水平,采用组织芯片免疫组化法检测并分析IL-22RA1表达水平与OSCC患者临床病理特征的关系,通过EBI ArrayExpress数据库分析IL-22RA1表达水平与患者预后的关系。采用免疫荧光法检测IL-22和IL-22RA1在OSCC组织中表达水平并分析两者间的相关性。用RNA干扰技术敲减OSCC细胞WSU-HN4和CAL27的IL-22RA1表达,用q PCR法验证敲减效率。采用克隆形成实验、Transwell小室法分别检测IL-22对阴性对照(si NC)组和IL-22RA1敲减(siIL-22RA1)组OSCC细胞克隆形成及迁移能力的影响,WB法检测IL-22对OSCC细胞IL-22RA1表达水平及STAT1、STAT3和ERK1/2磷酸化水平的影响。结果:OSCC组织中IL-22RA1 mRNA的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05)。IL-22RA1表达水平与OSCC患者的肿瘤大小(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.01)及预后不良(P<0.05)有关联。OSCC组织中的IL-22和IL-22RA1表达水平无明显关联,IL-22对OSCC细胞IL-22RA1表达无影响(均P>0.05)。IL-22可显著增强OSCC细胞的克隆形成和迁移能力(均P<0.01),并可激活OSCC细胞的STAT1、STAT3及ERK1/2信号分子;敲减OSCC细胞的IL-22RA1后,IL-22则无法发挥上述作用。结论:IL-22/IL-22RA1可通过调控细胞增殖和迁移促进OSCC的生长和转移,其下游机制可能是激活ERK1/2-STAT1/3信号通路。

维生素C逆转口腔鳞状细胞癌顺铂耐药的作用

目的:探讨维生素C(vitamin C,VC)逆转口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC或口腔鳞癌)顺铂(cisplatin,DDP)耐药的作用及其机制。方法:选用体外培养的人口腔鳞癌CAL27细胞,用浓度梯度递增法筛选出耐DDP的CAL27/DDP细胞株,用平板克隆形成实验、CCK-8、划痕愈合实验、Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术分别检测单独应用DDP以及联合VC对CAL27/DDP细胞克隆形成、细胞增殖、迁移和凋亡的影响,Wester blotting分别检测CAL27、CAL27/DDP和VC处理后CAL27/DDP细胞中P-gp蛋白的表达变化。结果:DDP对CAL27/DDP细胞的IC50比CAL27细胞显著上升(P<0.05),CAL27/DDP细胞对DDP耐药;联合VC后,DDP对CAL27/DDP细胞的IC50比DDP单用时显著降低(P<0.05)。DDP联合VC能显著抑制CAL27/DDP细胞的迁移能力(P<0.01),同时提高细胞的凋亡率(P<0.01)。CAL27/DDP细胞中P-gp蛋白表达水平相对CAL27细胞升高(P<0.05),在VC干预后其表达水平下降(P<0.05)。结论:VC可逆转口腔鳞癌细胞DDP耐药,此种逆转作用是通过抑制P-gp蛋白表达实现的。

抗肿瘤新药乙烷硒啉对人舌鳞状细胞癌细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨新型有机硒化合物乙烷硒啉(BBSKE)对人舌癌CAL27细胞株生长和增殖的影响。方法:分别采用体外细胞实验MTT、Hoechst 33258免疫荧光染色、Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术、Transwell小室实验检测2、5、10、20μmol/L(含1‰DMSO)的BBSKE对CAL27细胞增殖、细胞周期及迁移的影响,并设置溶剂对照组和正常对照组。结果:5、10、20μmol/L的BBSKE作用CAL27细胞后,其增殖抑制率较对照组明显增加(P<0.01),且随作用时间的延长而增加。Hoechst 33258免疫荧光染色结果显示5、10μmol/L BBSKE组相比对照组细胞出现凋亡形态改变。Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术分析结果显示与对照组相比,2、5、10、20μmol/L BBSKE组CAL27细胞G2/M期比率呈梯度增加(P<0.01),细胞周期被阻滞于G2/M期(P<0.01)。Transwell小室实验结果显示,CAL27细胞的迁移数量在2、5、10、20μmol/L BBSKE组相比对照组明显减少(P<0.01),且迁移细胞数与药物浓度呈反比。结论:BBSKE对CAL27细胞具有增殖抑制作用,其机制可能是通过引起细胞周期阻滞于G2/M期而诱导细胞凋亡,并且抑制细胞迁移,提示BBSKE可作为舌鳞状细胞癌患者化疗治疗的备选药物。

沉默RalBP1抑制口腔癌细胞增殖、侵袭、间质转化及炎症因子水平

目的:探讨沉默RalBP1对口腔癌细胞CAL27增殖、凋亡、侵袭、间质转化及炎症因子水平的影响。方法:CAL27细胞分别转染3个不同序列(RalBP1-shRNA1、RalBP1-shRNA2及RalBP1-shRNA3),RT-PCR检测RalBP1 mRNA表达,Western blot检测RalBP1蛋白表达,筛选最佳沉默序列进行后续实验;Western blot检测增殖相关蛋白的表达;EdU检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移;Transwell检测细胞侵袭;Western blot检测间质转化标志物表达;ELISA检测炎症因子含量;RT-PCR检测炎症因子mRNA表达。结果:与shRNA-NC组相比,RalBP1-shRNA1组RalBP1 mRNA及蛋白表达降低最为显著,因此后续实验选用RalBP1-shRNA1组作为沉默组;与shRNA-NC组相比,Ki67、Survivin表达降低,p21表达升高,EdU染色阳性细胞数显著减少,凋亡率显著升高,侵袭细胞数显著减少,划痕闭合率显著降低,VEGF、N-cad、FN表达显著降低,IL-6、IL-1β、iNOS含量及相应mRNA表达显著降低。结论:沉默RalBP1可抑制口腔癌细胞CAL27增殖、侵袭、间质转化,促进其凋亡,改善炎症因子释放,抑制口腔癌发生发展。

MiR-375增加肿瘤坏死因子对人口腔鳞癌细胞杀伤活性及机制研究

目的探讨micro RNA-375(mi R-375)对肿瘤坏死因子(TNF-α)杀伤人口腔鳞癌细胞生物效应的影响。方法将人口腔鳞癌细胞Cal27用mi R-375模拟物转染后用TNF-α治疗,采用MTT法检测治疗后Cal27细胞的增殖情况;通过流式细胞术检测Cal27细胞治疗后的凋亡情况;通过流式细胞术检测Cal27细胞内DNA的含量,测定凋亡特征性sub G1期的细胞比值;定量PCR法检测治疗后Cal27细胞抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl、c IAP2、c FLIPL的表达。结果 mi R-375+TNF-α组对Cal27细胞增殖的抑制率为(37.8±5.2)%,凋亡率为(20.5±3.8)%,TNF-α组分别为(6.2±2.7)%、(1.0±0.3)%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);mi R-375+TNF-α组,Cal27细胞的c IAP2、c FLIPL表达较TNF-α组显著下降(2.15±0.16比6.87±0.42、1.54±0.10比3.98±0.25)(P<0.05),Bcl-2,Bcl-xl表达不变。结论 mi R-375降低c IAP2、c FLIPL的表达,提高人口腔鳞癌Cal27细胞对TNF-α的敏感性,提高凋亡率。