四川白鹅Calm1结构特征及其差异表达的研究

为阐明鹅Calm1基因结构特征及其表达规律。克隆四川白鹅Calm1基因编码区序列并进行生物信息学分析,应用实时荧光定量PCR技术检测鹅不同等级卵泡和不同组织中Calm1基因的相对表达量。鹅Calm1基因编码区序列全长为450 bp,编码149个氨基酸,其氨基酸序列与原鸡相似性为99%。鹅大脑中Calm1表达量显著高于其他组织(P<0.05)。Calm1在不同等级卵泡组织中均有表达,F2级卵泡中Calm1表达量是小白卵泡(Small white follicles,SWF)的1.76倍(P<0.05),且显著高于F5、F4、F3和F1级卵泡(P<0.05);在排卵后卵泡(Postovulatory follicle,POF)组织中,POF1级卵泡组织中Calm1表达量显著高于POF2、POF3和POF4级卵泡(P<0.05);卵巢组织中Calm1的表达量,是小白卵泡的1.75倍(P<0.05)。Calm1是高度保守、广泛表达的蛋白质,Calm1可能通过影响卵泡细胞增殖和类固醇激素合成来参与调控动物繁殖。

CALM1基因rs314448799位点突变对广西麻鸡产蛋量的遗传效应分析

为研究CALM1基因rs314448799及其相邻位点在广西麻鸡中的遗传效应,试验比较不同基因型个体之间产蛋量差异,并采用RT-qPCR技术检测CALM1基因在不同基因型个体卵巢、子宫组织中的表达水平。结果显示,四个位点中只有rs314448799位点与产蛋量显著相关,其中CC基因型个体的产蛋量最高,CT基因型个体的产蛋量次之,且均显著高于TT型(P<0.05)。通过定量分析发现,在卵巢中,rs314448799位点CC型和TT型个体的CALM1基因表达量差异不显著(P>0.05);但在子宫中,CC型个体的CALM1基因表达量显著高于TT型(P<0.05)。研究结果表明,通过对rs314448799位点上CC、CT、TT三种基因型个体的鉴定可对广西麻鸡高低产蛋量个体的筛选提供参考,同时也为广西麻鸡高产蛋量分子标记的开发提供理论依据。

CALM1基因及钙调素与骨关节炎

骨关节炎(OA)以进行性关节软骨丢失、骨赘形成等退行性变为主要特征。多功能受体蛋白钙调素(CaM)在真核细胞Ca^(2+)信号转导通路中发挥重要作用。关节软骨内Ca^(2+)-CaM信号对软骨细胞的分化形成具有重要作用;给予关节软骨适当的压力负荷刺激能诱导软骨基质合成增加,而这一反应似乎必须依赖于Ca^(2+)-CaM信号通路。软骨细胞内Ca^(2+)-CaM信号通路一旦发生异常,可能会引起软骨细胞分化形成、软骨细胞粘附能力、关节软骨修复及对压力负荷刺激的反应性等方面的异常,进而促进OA的发生、发展。近期研究表明,编码CaM的CaM基因之一CALM1的单核苷酸多态性与OA易感性相关,这一发现从基因和分子转录水平提示CaM及Ca^(2+)-CaM信号通路异常在OA发病机制中的作用。

广西麻鸡CALM1基因的克隆、序列分析和组织表达谱研究

为分析广西麻鸡CALM1基因的编码区序列及其表达规律,克隆了广西麻鸡CALM1基因编码区序列并进行生物信息学分析,应用实时荧光定量PCR技术检测产蛋期麻鸡在不同组织中CALM1基因的相对表达量。结果表明:广西麻鸡CALM1基因的编码区长度为450 bp,共编码149个氨基酸。与参考序列相比,起始密码子和终止密码子略有差异,不影响表达,另外存在2处错义突变(组氨酸突变为精氨酸,苏氨酸突变成为丙氨酸);物种间的同源性分析显示,广西麻鸡基因与原鸡(Gallus gallus)、普通猪(Susscrofa)、奶牛(Bos taurus)、裸鼹鼠(Heterocephalus glaber)、人类(Homo sapiens)、小鼠(Mus musculus)、黑猩猩(Pan troglodytes)、苏门答腊猩猩(Pongo abelii)、褐家鼠(Rattus norvegicus)的序列同源性分别为98.7%、89.4%、84.3%、89.8%、90.0%、86.7%、89.8%、90.0%、86.7%;进化树分析显示,广西麻鸡与原鸡亲缘关系最近,与奶牛和小鼠的亲缘关系最远。产蛋期CALM1的表达谱显示,CALM1基因在脑、胸肌、脾脏中高表达,在输卵管漏斗部和膨大部、心脏、腿肌、肺、肠中中度表达,而在皮肤、肝脏、卵巢、输卵管的峡部、子宫、肾脏低表达。研究结果为进一步研究鸡CALM1基因调控广西麻鸡繁殖功能奠定理论基础。

三穗鸭蛋壳品质关联基因CALM1突变位点SNPs的鉴定与分析

钙调蛋白(calmodulin,CaM)是钙信号的主要介质,可以调节许多与神经功能相关的过程,能介导Ca2+与细胞功能的外部信号的关键信使。本文以114只三穗鸭DNA为模板,通过PCR直接测序法,分析基因突变对三穗鸭蛋壳品质的影响。结果表明:从三穗鸭CALM1基因6对特异性引物中共发现3个突变SNPs位点,分别位于第2内含子g.21554634A>G、第3内含子g.21554954T>C和第4内含子g.21558072A>T,多态性分析均属于中度多态(0.50>P>0.25),卡方(χ^2)检验结果显示各位点基因型分布未偏离Hardy-Weinberg平衡。在关联性分析中3个位点对蛋壳厚度、蛋壳强度和蛋重都达到了一定的影响,对蛋壳强度达到了极显著的影响。因此,可通过筛选3个位点的AA、TT和AA基因型来提高蛋壳的强度,减少在运输过程的损失。

Calm1基因敲除小鼠脑蛋白质组学特点及临床意义

目的探究钙调蛋白Calm1基因表达改变对小鼠脑组织蛋白表达谱的影响,挖掘与Calm1有密切靶向关系的功能蛋白及信号通路,并分析Calm1在神经系统疾病中的临床意义。方法PCR产物法初步鉴定小鼠基因型。提取野生型(WT,A组)、Calm1敲除杂合型(HE,B组)、Calm1敲除纯和型(HO,C组)小鼠脑组织的总蛋白,利用TMT标记蛋白质定量技术筛选出差异蛋白质(DEPs),再利用生物信息学技术对DEPs进行注释、富集和分析。结果C-A组脑组织中共鉴别出54个DEPs,其中23个上调,31个下调;C-B组鉴别出35个DEPs,其中19个上调,16个下调。GO分析显示,C-A组及其上调和下调的DEPs分别显著富集到多巴胺生物合成过程、蛋白质折叠和三羧酸代谢过程等条目。C-B组及其上调和下调的DEPs分别显著富集到线粒体内膜、突触结构组成、ATP代谢过程等条目。KEGG分析显示,C-A组及其上调和下调的DEPs分别显著富集到多巴胺能突触、坏死性凋亡、柠檬酸(TCA)循环等通路。C-B组及其上调和下调的DEPs分别显著富到神经退行性变途径-多种疾病、肌萎缩侧索硬化症、帕金森病等通路。STRING分析发现C-A组DEPs“Hsp90ab1”、C-B组DEPs“Cox4i1”关联度最高。结论Calm1敲除后显著改变脑组织中蛋白质表达特征并影响多条与神经退行性疾病关系密切的信号通路,这表明钙调蛋白异常表达在神经系统疾病的发病中起到重要作用。

CALM1在食管鳞癌细胞及组织水平中的表达

目的研究钙调蛋白1(camodulin1,CALM1)在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中的表达及临床意义,观察CALM1对食管鳞状细胞癌KYSE150细胞迁移、侵袭能力的影响。方法运用免疫组织化学(SP)法检测食管鳞癌患者组织中CALM1的阳性表达情况。运用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测CALM1在3种食管鳞癌细胞系中的本底表达量。运用CRISPR-cas9技术敲除KYSE150细胞系的CALM1基因,构建CALM1 sgRNA表达载体,实验分两组:NC组(阴性对照病毒感染的细胞组)、KO组(CALM1基因sgRNA慢病毒感染的细胞组)。运用细胞划痕实验及细胞侵袭实验检测CALM1对KYSE150迁移、侵袭能力的影响。结果食管鳞状细胞癌组织CALM1阳性表达率显著高于癌旁正常组织(P<0.01),且其表达与T分期和病理分级有关(P<0.05);但与患者性别、年龄、肿瘤大小、病理分型以及淋巴结转移差异无统计学意义(P>0.05)。CALM1在KYSE150食管癌细胞系中本底表达量最高,在Eca109、TE-1中表达量相同。与对照组相比,CALM1敲除的实验组中食管鳞状细胞癌细胞的迁移、侵袭能力明显受抑制(P<0.05)。结论CALM1阳性表达情况与食管鳞状细胞癌T分期和病理分级有关,CALM1在食管鳞状细胞癌中对肿瘤细胞的侵袭、迁移能力有促进作用。

CALM1基因遗传多态性与骨关节炎的荟萃分析

目的检验CALM1基因遗传多态性与骨关节炎(OA)的相关性。方法对2015年6月之前发表的关于CALM1基因与OA的文献进行检索、收集和整理,采用荟萃分析的手段对CALM1的单核苷酸多态性位点(SNP)与OA进行分析。结果本研究在4个团队的4份独立样本(包括患者1 591例和健康对照1 523例)中对CALM1核心启动子区SNP rs12885713进行分析。结果发现,在亚洲人群中rs12885713与OA存在显著的相关性(P=0.02)。结论本次分析显示至少在亚洲人群中,CALM1很可能参与了OA的发生发展过程。