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CaMBP-10的cDNA克隆和表达及钙调素结合活性分析 被引量:8
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作者 祁倩 饶恩于 +3 位作者 王喆 刘华 凌启阆 李翠凤 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期451-456,共6页
采用RT PCR法 ,从中国大白菜中分离了编码CaMBP 1 0的cDNA克隆 .该cDNA全长 4 96bp ,编码 92个氨基酸 ,3′端含有 2 1 6bp的非编码区和poly A尾 .将此BP 1 0cDNA的成熟蛋白序列导入表达质粒pET1 5b并转化至大肠杆菌E .coliBL2 1 (DE3)co... 采用RT PCR法 ,从中国大白菜中分离了编码CaMBP 1 0的cDNA克隆 .该cDNA全长 4 96bp ,编码 92个氨基酸 ,3′端含有 2 1 6bp的非编码区和poly A尾 .将此BP 1 0cDNA的成熟蛋白序列导入表达质粒pET1 5b并转化至大肠杆菌E .coliBL2 1 (DE3)condonplus RIL进行表达 .以免疫印迹和钙调素结合分析法对重组BP 1 0进行鉴定 ,证明其保持了与天然BP 1 0相同的钙调素结合活性 .氨基酸和核苷酸序列分析结果显示 ,它与植物转脂蛋白高度同源 ,特别是含有 8个保守半胱氨酸 .BP 1 0与转脂蛋白之间具极为相似的理化性质如分子量、等电点、热稳定性等 .据此认为 ,CaMBP 1 0是转脂蛋白家族的新成员 ,Ca2 + 展开更多
关键词 cambp-10 非特异转脂蛋白(nsLTP) 钙调素(CaM) 钙调素结合蛋白(CaMBP) 结合活性
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豌豆质膜内源CDPK对植物转脂蛋白CaMBP-10的磷酸化及CaMBP-10对激酶自磷酸化的影响 被引量:2
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作者 赵玉龙 谢万钦 +3 位作者 胡文全 张映熠 张蕊 李翠凤 《中国科学(C辑)》 CSCD 北大核心 2009年第9期862-872,共11页
植物转脂蛋白(LTPs)是多基因编码的蛋白家族,广泛分布于高等植物.虽然LTPs的确切功能至今仍不完全清楚,但它参与植物生物、非生物胁迫反应以及它的抗性功能已成为近年来的研究热点.关于LTPs功能的调节机制目前几乎一无所知.最近,从白菜... 植物转脂蛋白(LTPs)是多基因编码的蛋白家族,广泛分布于高等植物.虽然LTPs的确切功能至今仍不完全清楚,但它参与植物生物、非生物胁迫反应以及它的抗性功能已成为近年来的研究热点.关于LTPs功能的调节机制目前几乎一无所知.最近,从白菜中分离的钙调素结合蛋白-10(CaMBP-10)被鉴定为植物转脂蛋白家族成员,并且,体外实验证明钙调素(CaM)调节其脂质结合活性.为了深入了解转脂蛋白功能的调节机制,本文研究了CaMBP-10的磷酸化作用,发现CaMBP-10可被豌豆质膜内源性蛋白激酶磷酸化,钙离子(Ca2+)能刺激磷酸化,钙螯合剂EGTA以及CaM拮抗剂W-7和TFP均能显著抑制磷酸化.免疫印迹分析最终确定该激酶为CDPK家族成员.构建突变体进一步研究了CaMBP-10的磷酸化位点,发现其位于蛋白的C-末端区域,并与已确定的CaM结合位点重合.同时,分析结果表明CaM能抑制CaMBP-10的磷酸化.反之,CaMBP-10的磷酸化又能阻断其与CaM的结合,显示出两种调节方式相互竞争的特点.为深入研究磷酸化作用对CaMBP-10脂质结合活性的影响,构建突变体(Ser83Asp,Ser85Asp)以模拟磷酸化状态.实验结果显示,磷酸化作用能显著增强CaMBP-10的脂质结合活性,而且突变体的脂质结合活性不受CaM的影响.采用胶内磷酸化测定法(in-gelkinaseassay)研究了激酶的自磷酸化特点以及CaMBP-10对激酶自磷酸化的影响,发现CaMBP-10能激活激酶的自磷酸化,激酶的自磷酸化又能促进其对底物的磷酸化作用.这样,激酶的自磷酸化与底物的磷酸化形成一种"正反馈环"的调节模式.综合研究结果,本文首次证明了LTP受CaM结合和CDPK磷酸化的双重调节.而且,CaM结合位点与磷酸化位点的重合预示可能存在特殊的调节机制,以协同应答胞内的Ca2+信号. 展开更多
关键词 植物转脂蛋白(LTP) 钙调素(CaM) 钙调素结合蛋白-10 (cambp-10) 磷酸化 自磷酸化 钙依赖性蛋白激酶 (CDPK)
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钙调素对钙调素结合蛋白-10和玉米非特异性脂转移蛋白与脂质结合活性的影响 被引量:6
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作者 谢万钦 赵立青 +3 位作者 白文艳 李振鹏 赵玉龙 李翠凤 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期679-684,共6页
荧光标记的脂质结合实验表明,钙调素结合蛋白-10(CaMBP-10)具有典型的植物非特异性脂质转移蛋白与脂质结合的特性。进一步实验研究了钙调素(calmodulin,CaM)对CaMBP-10和玉米nsLTP与脂质结合的活性的影响,结果显示无论在有钙和无钙条件... 荧光标记的脂质结合实验表明,钙调素结合蛋白-10(CaMBP-10)具有典型的植物非特异性脂质转移蛋白与脂质结合的特性。进一步实验研究了钙调素(calmodulin,CaM)对CaMBP-10和玉米nsLTP与脂质结合的活性的影响,结果显示无论在有钙和无钙条件下,CaM对两者的影响均有不同之处,W-7和TFP能消除CaM的影响。提示CaM不仅与CaMBP-10和玉米nsLTP特异性相互作用,而且对2种脂转移蛋白可能具有不同的调节机制。 展开更多
关键词 钙调素 脂转移蛋白 钙调素结合蛋白-10 脂质结合活性
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Effects of calmodulin and calmodulin binding protein BP-10 on phosphorylation of thylakoid membrane protein
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作者 李翠凤 向左云 +1 位作者 凌启阆 尚克进 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS 1998年第1期64-70,共7页
Light induced phosphorylation of endogenous thylakoid membrane protein can be inhibited markedly by a novel inhibitor CaMBP 10 which is discovered and isolated from plant. The inhibitory effect of BP 10 can be elimina... Light induced phosphorylation of endogenous thylakoid membrane protein can be inhibited markedly by a novel inhibitor CaMBP 10 which is discovered and isolated from plant. The inhibitory effect of BP 10 can be eliminated by addition of CaM. At the same time, the phosphorylation can also be inhibited by EGTA or CaM antagonists , such as TFP (trifluoperazine) and W 7 (N (6 aminohexyl) 5 chloro 1 naphthalene sulfonamide). This result implies that (i) Ca 2+ and CaM most likely participate in and regulate plant photosynthesis; (ii) the kinase that catalyzes thylakoid membrane protein phosphorylation can be regulated by Ca 2+ and CaM. However, the further experiments indicate that BP 10 has no effect on dephosphorylation of thylakoid phosphoproteins . 展开更多
关键词 CALMODULIN (CaM) CaMBP 10 THYLAKOID protein KINASE PHOSPHORYLATION
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