天心解郁方对抑郁模型大鼠的作用及大脑内CAMP/PKA/CREB/BDNF信号通路的影响

目的:探索天心解郁方对抑郁模型大鼠的作用及大脑内CAMP/PKA/CREB/BDNF信号通路的影响。方法:雄性SD大鼠80只,剔除后随机分为空白组、模型组、天心解郁组、西药组、疏肝组、温肾组和疏肝健脾组7组,每组10只。除空白组外,其余组别按照慢性利血平诱导抑郁模型的方法造模28 d,造模前30 min给药,分别灌胃给药饮用水、天心解郁水煎液、氟西汀溶液、路优泰溶液、巴戟天寡糖胶囊溶液、舒肝解郁胶囊溶液,给药28 d后对各组大鼠的体质量、行为学指标、血清学细胞因子、脑组织相关靶点进行检测。结果:造模28 d后,与模型组相比,天心解郁组旷场实验水平运动得分、垂直运动得分和总路程的增加(P<0.05),强迫游泳不动时间的缩短(P<0.001),且较温肾组、疏肝组、疏肝健脾组更明显。与模型组相比,天心解郁组和温肾组可以增加大鼠血清内的CAMP含量(P<0.001,P<0.01),其余组别则无明显变化(P>0.05)。与模型组相比,天心解郁组可以增加皮层内的PKA表达,促进海马内CREB、BDNF、ADRB2蛋白表达。与模型组相比,温肾组可以增加皮层内的PKA水平,其余组别无明显影响。结论:天心解郁方可能通过影响大脑内CAMP/PKA/CREB/BDNF信号通路,发挥抗抑郁作用,较单纯疏肝、温肾或疏肝健脾的方法,疗效更好,治疗靶点更多元化。

麦冬皂苷D调节cAMP/PKA/CREB信号通路对炎症性肠病大鼠炎性损伤的影响

目的:探究麦冬皂苷D调节cAMP/PKA/CREB信号通路对炎症性肠病(IBD)大鼠炎性损伤的影响。方法:将大鼠分为对照组、模型组、麦冬皂苷D低剂量组、麦冬皂苷D高剂量组和麦冬皂苷D高剂量+H-89(cAMP抑制剂)组。检测大鼠质量和大鼠结肠长度;酶联免疫吸附法检测血清IL-17、IL-6、IL-10、TNF-α、cAMP水平;流式细胞术检测大鼠外周血中Th17、Treg细胞比例;HE染色检测结肠组织病理损伤;Western blot检测大鼠结肠组织中Bax、Bcl-2以及cAMP/PKA/CREB信号通路相关蛋白表达。结果:治疗结束后,与对照组相比,模型组大鼠结肠组织显著损伤,体质量、结肠长度、血清IL-10、cAMP水平、外周血Treg细胞比例、结肠组织Bcl-2、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达显著降低,血清IL-17、IL-6、TNF-α水平、外周血中Th17比例和Th17/Treg比值、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05);与模型组相比,麦冬皂苷D低、高剂量组大鼠结肠组织显著减轻,体质量、结肠长度、血清IL-10、cAMP水平、外周血Treg细胞比例、结肠组织Bcl-2、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达显著升高,血清IL-17、IL-6、TNF-α水平、外周血中Th17比例和Th17/Treg比值、Bax蛋白表达显著降低(P<0.05);H-89可部分逆转麦冬皂苷D对炎症性肠病大鼠的治疗作用(P<0.05)。结论:麦冬皂苷D可降低IBD大鼠炎症反应和结肠组织损伤,可能是通过激活cAMP/PKA/CREB信号通路实现的。

优化新生脉散方调控β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路对心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响

目的 基于β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路探讨优化新生脉散方对心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响。方法 50只SD大鼠随机分为假手术组10只和手术组40只,采用左冠状动脉前降支结扎法建立心力衰竭大鼠模型。将成模大鼠随机分为模型组、卡托普利组和中药低、高剂量组,每组8只,给药组分别予相应药物灌胃4周。超声心动图测定大鼠左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS),测定心、肺质量并计算心、肺脏器系数,组织病理学观察心肌纤维化程度,ELISA测定血清N端脑利钠肽前体(NT-ProBNP)及心肌组织环磷酸腺苷(cAMP)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)含量,免疫组化检测心肌组织β1肾上腺素受体(β1-AR)、cAMP阳性表达,Western blot检测心肌组织β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路相关蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠LVEF、LVFS明显降低(P<0.01),心、肺脏器系数明显升高(P<0.01);心肌细胞数目减少、胶原容积分数升高、Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维占比增加(P<0.01),血清NT-ProBNP和心肌组织ColⅠ、ColⅢ含量明显升高,心肌组织cAMP含量明显降低(P<0.01),心肌组织β1-AR和cAMP阳性表达明显降低(P<0.01),β1-AR、腺苷酸环化酶(AC)1、cAMP、p-蛋白激酶A(PKA)、p-环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)蛋白表达明显降低,p-Smad2、ColⅠ、ColⅢ、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,给药组不同程度增加大鼠LVEF、LVFS,降低心、肺脏器系数;增加心肌细胞数目、减少胶原容积分数和Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维占比,下调血清NT-ProBNP和心肌组织ColⅠ、ColⅢ含量,上调cAMP含量,增加心肌组织β1-AR和cAMP阳性表达,上调β1-AR、AC1、cAMP、p-PKA、p-CREB蛋白表达,抑制p-Smad2、ColⅠ、ColⅢ、α-SMA蛋白表达,其中中药高剂量组和卡托普利组作用更明显(P<0.01,P<0.05)。结论 优化新生脉散方能减轻心力衰竭大鼠心肌纤维化程度,改善心肌肥厚和重构,增加左心室收缩力,其机制可能与激活β1-AR/cAMP/PKA/CREB信号通路有关。

基于cAMP/PKA/CREB/BDNF信号通路探讨柴胡加龙骨牡蛎汤抗抑郁的作用机制

目的:该研究基于环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/cAMP反应元件结合蛋白(CREB)/脑源性神经营养因子(BDNF)信号通路探究柴胡加龙骨牡蛎汤对慢性不可预见性温和应激(CUMS)法制备的大鼠抑郁模型的干预作用。方法:随机数字表法将60只SD大鼠分为正常组、模型组、柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组和氟西汀组。除正常组外,其他各组进行49 d的CUMS制备大鼠抑郁模型。第29天开始给药,柴胡加龙骨牡蛎汤组低、中、高剂量组分别给予柴胡龙骨牡蛎汤颗粒剂2.89、5.78、11.56 g·kg^(-1),氟西汀组给予盐酸氟西汀胶囊2.06 mg·kg^(-1)。旷场实验和强迫游泳实验观察大鼠行为学表现,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定大鼠海马组织5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)、cAMP水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠海马组织PKA、CREB、BDNF mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠海马组织PKA、BDNF蛋白表达水平;免疫组化法(IHC)检测CREB定位表达;苏木素-伊红(HE)染色和尼氏染色观察海马组织形态学的变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠强迫游泳不动时间显著增加(P<0.01);运动总距离、中央区停留时间、中央区进入总次数、中央区运动距离均显著降低(P<0.01),海马5-HT、NE、cAMP含量显著降低(P<0.01),PKA蛋白表达、BDNF蛋白表达和mRNA水平、CREB蛋白表达和mRNA水平显著降低(P<0.01);与模型组比较,柴胡加龙骨牡蛎汤给药组大鼠强迫游泳不动时间均显著降低(P<0.01),柴胡加龙骨牡蛎汤给药组大鼠运动总距离、中央区停留时间、中央区运动距离显著、央区进入次数明显增加(P<0.05,P<0.01),柴胡加龙骨牡蛎汤给药组海马5-HT含量、NE含量、cAMP含量明显增高(P<0.05,P<0.01),柴胡加龙骨牡蛎汤给药组海马PKA蛋白表达、CERB和BDNF的mRNA及蛋白表达都显著增加(P<0.01)。HE和尼氏染色显示海马神经元结构恢复。结论:柴胡加龙骨牡蛎汤调节抑郁大鼠海马单胺类神经递质5-HT、NE水平,激活cAMP/PKA/CREB/BDNF信号通路,上调BDNF表达,保护海马神经元的结构和功能,缓解大鼠焦虑、抑郁情绪。

中医药从“阴阳失调”理论调控cAMP/PKA信号通路治疗注意缺陷多动障碍的研究进展

注意缺陷多动障碍(attention deficit hyperactivity disorder,ADHD)难控制、易反复,严重损害儿童运动、情绪及学习生活。ADHD发病机制不明,涉及神经递质传递、神经炎症及氧化应激等,病机本质责之于“阴阳失调”。环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)/蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)信号通路的激活可诱导一系列蛋白底物磷酸化而参与运动及学习记忆的形成,并能促进神经递质合成,抑制促炎因子和活性氧(reactive oxygen species,ROS)的释放而改善ADHD的核心症状,且该通路失调所导致的能量代谢障碍、神经冲动传递异常与中医“阴阳失调”理论不谋而合。中医药通过干预cAMP/PKA信号通路恢复阴阳平衡对儿童ADHD的防治发挥了重要作用,并有效解决了精神类药品在儿童中使用受限的问题。基于ADHD中医药研究的日益增多,本文阐述了cAMP/PKA信号通路的结构、传导及其与ADHD机制、中医病机及辨证分型的关系,归纳了中药复方、单体及单味中药干预cAMP/PKA信号通路治疗ADHD的研究现状,旨在为ADHD的中药药理学研究提供依据,丰富ADHD“阴阳失调”的中医理论内涵,为ADHD的防治提供新见解、新方向。

莫诺苷调节cAMP/PKA信号通路对帕金森病大鼠神经炎症的影响

目的探讨莫诺苷调节环磷腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)信号通路对帕金森病大鼠神经炎症的影响。方法将30只大鼠按照随机数字表法分为正常组、模型组和莫诺苷组,每组各10只。大鼠颈背部皮下注射鱼藤酮构建帕金森病大鼠模型。莫诺苷组灌胃莫诺苷180 mg·kg^(-1)·d^(-1),正常组和模型组灌胃等剂量0.9%氯化钠溶液,各组均每日1次,连续灌胃14 d。采用苏木精-伊红染色观察海马神经元组织学变化;各组大鼠腹腔注射0.5 mg/kg盐酸去水吗啡,诱发大鼠向左侧选择,记录大鼠旋转持续时间和旋转频率;以酶联免疫吸附试验测定脑组织中白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、cAMP和PKA水平;采用实时荧光定量PCR法测定cAMP/PKA mRNA表达;采用蛋白质印迹法测定cAMP/PKA蛋白表达。结果模型组和莫诺苷组大鼠旋转频率和持续时间均高(长)于正常组,莫诺苷组大鼠旋转频率和持续时间均低(短)于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组和莫诺苷组IL-1β、IL-6和TNF-α水平均高于正常组,莫诺苷组IL-1β、IL-6和TNF-α水平均低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组和莫诺苷组cAMP和PKA水平均低于正常组,莫诺苷组cAMP和PKA水平均高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组和莫诺苷组cAMP和PKA mRNA相对表达量均低于正常组,莫诺苷组cAMP和PKA mRNA相对表达量均高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组和莫诺苷组cAMP和PKA蛋白灰度值均低于正常组,莫诺苷组cAMP和PKA蛋白灰度值均高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论莫诺苷可减轻帕金森病大鼠神经炎症,其机制可能与激活cAMP/PKA信号通路有关。

电针对甲基苯丙胺戒断后抑郁小鼠海马水通道蛋白4及BDNF/TrkB/CREB信号通路的影响

目的观察电针对甲基苯丙胺(MTHE)戒断后抑郁小鼠海马水通道蛋白4(AQP4)及脑源性神经营养因子(BDNF)/酪氨酸蛋白激酶B(TrkB)/环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响,探讨电针改善MTHE戒断后抑郁潜在的作用机制。方法健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组和电针组,每组10只。模型组、电针组采用条件性位置偏爱实验(CPP)复制小鼠MTHE成瘾模式,自然戒断后制备戒断后小鼠抑郁模型。空白组、模型组、电针组不给予任何干预,电针组取“百会”、“大椎”穴给予电针干预,选用连续波,频率2 Hz,1次/d,15 min/次,连续治疗28 d。分别于戒断后和干预后对各组小鼠进行强迫游泳试验和开放旷场试验,Western blot法检测小鼠海马AQP4、BDNF、TrkB、CREB和p-CREB等蛋白表达情况,免疫荧光染色法检测小鼠海马AQP4表达情况,实时荧光定量PCR法检测小鼠海马AQP4 mRNA表达。结果造模后,与空白组比较,模型组、电针组CPP值均升高(均P<0.01),模型组、电针组CPP值差异无统计学意义(P>0.05)。戒断后,与空白组比较,模型组、电针组水中自主不动状态持续时间均增加(均P<0.01)、中央区活动持续时间均减少(均P<0.01),模型组与电针组差异无统计学意义(P>0.05);干预后,与空白组比较,模型组、电针组水中自主不动状态持续时间增加(P<0.01)、中央区活动持续时间减少(P<0.01),与模型组比较,电针组水中自主不动状态持续时间减少(P<0.01),中央区活动持续时间增加(P<0.01);干预后,与空白组比较,模型组、电针组AQP4、BDNF、TrkB、CREB、p-CREB蛋白表达均减少(均P<0.01),与模型组比较,电针组AQP4、BDNF、TrkB、CREB、p-CREB蛋白表达均增加(均P<0.01)。干预后,与空白组比较,模型组、电针组AQP4阳性减少(P<0.01),与模型组比较,电针组AQP4阳性表达增加(P<0.01)。干预后,与空白组比较,模型组、电针组AQP4 mRNA表达减少(P<0.01)。干预后,与模型组比较,电针组AQP4 mRNA表达增加(P<0.01)。结论电针可改善METH戒断后小鼠抑郁样行为,其作用机制可能与调控AQP4表达,以及BDNF/TrkB/CREB信号通路活性相关。

基于cAMP/PKA/CREB信号通路探讨醒脑益髓汤对血管性痴呆大鼠海马神经元的影响

目的探讨醒脑益髓汤对血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡及环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)信号通路的影响。方法随机选取10只SD大鼠作为假手术组,取50只SD大鼠采用双侧颈总动脉永久结扎法建立血管性痴呆模型。将造模成功大鼠随机分为模型组、多奈哌齐组及醒脑益髓汤低、中、高剂量组,每组10只。假手术组和模型组给予生理盐水灌胃,多奈哌齐组给予0.45 mg/mL的多奈哌齐溶液灌胃,醒脑益髓汤低、中、高剂量组分别给予0.98 g/mL、1.96 g/mL、3.92 g/mL的醒脑益髓汤灌胃,均1次/d,连续30 d。定位航行实验和空间探索实验观察大鼠行为学改变,TUNEL法检测海马CA1神经元凋亡情况,ELISA法检测海马组织中cAMP及脑源性神经营养因子(BDNF)含量,Western blot法检测海马组织中PKA和CREB表达情况。结果与假手术组比较,模型组大鼠穿越平台所在象限次数和穿过第Ⅲ象限次数均明显减少(P均<0.05),发现平台并爬上平台时间明显延长(P<0.05),第Ⅲ象限游泳时间明显缩短(P<0.05),海马CA1神经元凋亡细胞明显增加,海马组织中cAMP、BDNF含量和PKA、CREB蛋白表达量均明显降低(P均<0.05);与模型组比较,多奈哌齐组及醒脑益髓汤各组大鼠穿越平台所在象限次数和穿过第Ⅲ象限次数均明显增加(P均<0.05),发现平台并爬上平台时间明显缩短(P均<0.05),第Ⅲ象限游泳时间明显延长(P均<0.05),海马CA1神经元凋亡细胞明显减少,海马组织中cAMP、BDNF含量和PKA、CREB蛋白表达量均明显升高(P均<0.05);醒脑益髓汤中剂量组各指标改善更明显,与醒脑益髓汤高、低剂量组比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论醒脑益髓汤可以改善血管性痴呆大鼠的学习记忆能力,其机制可能与调控cAMP/PKA/CREB信号通路关键因子的表达,减少神经元凋亡有关。

特立帕肽通过cAMP/PKA/CREB信号通路调控高糖微环境下的成骨细胞分化

目的探讨特立帕肽对高糖微环境下小鼠胚胎成骨细胞(MC3T3-E1)分化的影响及作用机制。方法将MC3T3-E1细胞分为正常糖组(NG,5.5 mmol/L葡萄糖)、NG+特立帕肽组(5.5 mmol/L葡萄糖+10 nmol/L特立帕肽)、高糖组(HG,25 mmol/L葡萄糖)、HG+特立帕肽组(25 mmol/L葡萄糖+10 nmol/L特立帕肽)和HG+特立帕肽+PKA抑制剂组(25 mmol/L葡萄糖+10 nmol/L特立帕肽+20μmol/L H-89)。CCK-8法检测细胞增殖;ELISA实验检测各组cAMP水平;试剂盒检测碱性磷酸酶(ALP)活性;茜素红染色检测细胞矿化结节生成情况;鬼笔环肽染色后观察细胞骨架;Real-time PCR检测细胞中PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达水平。结果各组细胞增殖能力差异无统计学意义(P>0.05)。与NG组相比,NG+特立帕肽组细胞cAMP水平升高(P<0.05),ALP活性增强(P<0.05),茜素红矿化结节生成能力增强(P<0.05),细胞骨架清晰程度有所提升,PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达上调(P<0.05);与NG组相比,HG组的上述检测结果则呈减弱趋势。与HG组相比,HG+特立帕肽组细胞cAMP水平上升(P<0.05),ALP活性增强(P<0.05),茜素红矿化结节生成能力增强(P<0.05),细胞骨架清晰程度有所提升,PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达上调(P<0.05)。与HG+特立帕肽组相比,HG+特立帕肽+H-89组细胞cAMP水平下降(P<0.05),ALP活性减弱(P<0.05),茜素红矿化结节生成能力减弱(P<0.05),细胞骨架清晰程度下降,PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达下调(P<0.05)。结论特立帕肽可通过激活cAMP/PKA/CREB信号通路有效改善高糖微环境对MC3T3-E1细胞分化的抑制作用。

缺锌对大鼠海马和皮层cAMP/PKA-CREB-BDNF信号转导通路的影响

目的观察缺锌对生长期大鼠海马和皮层cAMP/PKA-CREB-BDNF信号转导通路的影响。方法将Wistar大鼠随机分为足锌组(ZA)、对喂组(PF)和缺锌组(ZD),ZA组和PF组喂饲足锌饲料(30mg/kg),ZD组喂饲缺锌饲料(1.5mg/kg)。饲养一个月后处死动物,取海马和皮层,放免法测定cAMP含量;应用PepTag检测系统测定PKA活性;RT-PCR法检测CREB、BDNFmRNA的表达水平。结果ZD组大鼠海马和皮层中cAMP含量明显高于ZA组,同时皮层cAMP含量还显著高于PF组;与ZA组、PF组比较,ZD组大鼠海马和皮层PKA活性均明显降低,同时CREB、BDNFmRNA表达水平下调。结论大鼠海马和皮层cAMP/PKA-CREB-BDNF通路中多种信号分子的表达异常,可能是缺锌导致认知损伤的重要机制之一。

丙泊酚调控cAMP/PKA-CREB-BDNF通路对大鼠神经元凋亡、坐骨神经阻滞效果的影响

目的分析丙泊酚调控脊髓环磷酸腺苷/蛋白激酶A-磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白-脑源性神经营养因子(cAMP/PKA-CREB-BDNF)通路对大鼠神经元凋亡、坐骨神经阻滞效果的影响。方法选取40只SPF级Wistar雄性大鼠,其中对照组、假手术组、低剂量组、高剂量组各10只,空白组不做任何处理,假手术组进行手术处理和0.9%氯化钠溶液注射,低剂量组在假手术的基础上注射丙泊酚10 mg/kg;高剂量组注射丙泊酚30 mg/kg。结果与空白组相比,假手术组、低剂量组、高剂量组SOD活性降低(P<0.05);MDA含量、海马神经元凋亡率、各时间点MPE、MPE均升高以及cAMP、PKA、CREB、BDNF表达均降低(P<0.05)。与假手术组相比,低剂量组、高剂量组MDA含量降低(P<0.05);SOD活性、海马神经元凋亡率、各时间点MPE以及10、20、30、60、90、120 min时间点MPE均升高、150、180 min时间点MPE均降低(P<0.05);cAMP、PKA、CREB、BDNF表达均降低(P<0.05)。与低剂量组相比,高剂量组MDA含量降低(P<0.05);SOD活性、海马神经元凋亡率、各时间点MPE以及150、180min时间点EPT均升高;10、20、30、60、90、120 min时间点EPT均降低,(P<0.05);cAMP、PKA、CREB、BDNF表达均降低(P<0.05)。结论丙泊酚能够增强坐骨神经阻滞效果,降低神经元凋亡率,起保护作用可能与丙泊酚调控cAMP/PKA-CREB-BDNF通路有关。

cAMP/PKA⁃pCREB信号通路在早期康复训练改善脑卒中患者神经功能中的作用

目的研究环腺苷酸(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)⁃磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(pCREB)信号通路在早期康复训练改善脑卒中患者神经功能中的作用。方法将缺血性脑卒中患者分为进行早期康复训练的观察组、常规康复训练的对照组,干预前及干预后1周时采用简易智能精神状态检查量表(MMSE)、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)、Fugl⁃Meyer运动功能量表(FMA)、Berg平衡量表(BBS)评价神经功能,检测血清cAMP、PKA、肿瘤坏死因子⁃α(TNF⁃α)、白介素⁃1β(IL⁃1β)、白介素⁃6(IL⁃6)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化力(TAOC)、B淋巴细胞瘤⁃2(Bcl⁃2)、Bcl⁃2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶⁃3(Caspase⁃3)含量及外周血pCREB表达水平。结果两组干预后的MMSE、MoCA、FMA、BBS评分均高于组内干预前且观察组高于对照组,差异有统计学意义(t=5.099、3.778、2.658、3.502,P<0.05),血清cAMP、PKA及外周血pCREB表达水平均高于组内干预前且观察组高于对照组,差异有统计学意义(t=3.858、3.958、8.815,P<0.05),血清TNF⁃α、IL⁃1β、IL⁃6含量均低于组内干预前且观察组低于对照组,差异有统计学意义(t=10.338、9.395、5.936,P<0.05),血清MDA含量低于组内干预前且观察组低于对照组、SOD及TAOC含量高于组内干预前且观察组高于对照组,差异有统计学意义(t=5.272、3.714、4.753,P<0.05),血清Bax及Caspase⁃3均低于组内干预前且观察组低于对照组,Bcl⁃2含量高于组内干预前且观察组高于对照组,差异有统计学意义(t=18.669、11.346、9.903,P<0.05)。结论早期康复训练改善脑卒中患者神经功能的作用与激活cAMP/PKA⁃pCREB信号通路并抑制炎症反应、氧化应激、细胞凋亡有关。

广叶绣球菌多糖对免疫低下小鼠海马组织cAMP-PKA-CREB-BDNF信号通路的影响

分别灌胃环磷酰胺所致免疫低下小鼠广叶绣球菌(Sparassis latifolia)多糖(SCPs,低、中、高剂量分别为100、200、400 mg·kg;),观察小鼠海马组织形态变化,检测5-羟色胺(5-hydroxytryptamine, 5-HT)、色氨酸羟化酶(tryptophan hydroxylase 2,TPH2)和环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate, cAMP)含量,测定细胞因子和cAMP-PKA-CREB-BDNF信号通路基因mRNA表达量、cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein, CREB)和磷酸化CREB(phosphorylated CREB, p-CREB)蛋白表达量,探讨SCPs对海马组织损伤的干预作用。结果表明:SCPs使免疫低下小鼠海马组织神经细胞数量增多,细胞间隙缩小,结构更为完整。与模型组相比,SCPs各剂量组5-HT和TPH2含量、中和高剂量组cAMP含量极显著增加;SCPs各剂量组TNF-α、中和高剂量组IL-1β mRNA表达量显著降低,SCPs中和高剂量组5-HT;受体、高剂量组蛋白激酶A和脑源性神经营养因子基因mRNA表达量显著增加;SCPs高剂量组CREB蛋白、各剂量组p-CREB蛋白表达量显著提高。研究结果为揭示广叶绣球菌多糖对海马组织保护作用的机制提供参考。

豨莶草总黄酮对癫痫大鼠海马神经元损伤及CREB/BDNF信号通路的影响

目的探究豨莶草总黄酮对癫痫大鼠海马神经元的保护作用及对环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)/脑源性神经营养因子(BDNF)信号通路的影响。方法将SD大鼠随机分成5组:对照组、模型组及豨莶草总黄酮低、中、高剂量组。除对照组外,其余各组均采用锂-毛果芸香碱诱导构建癫痫持续状态(SE)大鼠模型。造模成功后,豨莶草总黄酮低、中、高剂量组大鼠给予5、10、20 mg/kg的剂量连续4 w灌胃治疗。治疗结束后,根据Racine分级标准对各组大鼠行为学进行评估;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测海马组织中白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察海马组织病理变化;TUNEL染色检测海马神经元细胞凋亡情况;Western印迹法检测海马组织中CREB、p-CREB、BDNF蛋白表达水平。结果对照组海马组织结构正常,模型组神经元损伤明显,豨莶草各剂量组神经元损伤减轻,以高剂量组最为明显。与对照组相比,模型组大鼠行为学评分、神经元凋亡率、IL-6、IL-1β、TNF-α、MDA及BDNF蛋白表达水平显著升高(P<0.05),SOD、GSH-Px、p-CREB蛋白水平显著降低(P<0.05)。与模型组相比,豨莶草总黄酮各剂量组行为学评分、神经元凋亡率、IL-6、IL-1β、TNF-α、MDA水平显著降低(P<0.05),SOD、GSH-Px、p-CREB和BDNF蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论豨莶草总黄酮可减轻SE大鼠的炎症反应和氧化应激,抑制神经元凋亡,可能与激活CREB/BDNF信号通路有关。

补骨脂甲素介导cAMP/PKA/CREB信号通路调控促进骨髓MSC成骨分化作用研究

目的:观察补骨脂甲素不同剂量单体对大鼠骨髓间充质干细胞PKA、CREB mRNA及蛋白表达的影响,探讨补肾中药防治骨质疏松症的分子生物学机制。方法:以成骨转化诱导液组作为阳性对照组,小牛血清组为空白对照组,用高、中、低3种剂量补骨脂甲素对大鼠骨髓间充质干细胞分别干预6、9、12 d。ELISA法检测第6、9、12天,大鼠骨髓间充质干细胞ALP蛋白含量;ELISA法及qRT-PCR法检测第9天大鼠骨髓间充质干细胞PKA、CREB mRNA及蛋白表达。结果:各用药组均能提高大鼠骨髓间充质干细胞ALP蛋白表达,第9天达到峰值。补骨脂甲素能够上调PKA、CREB mRNA及蛋白表达,补骨脂甲素高剂量组效果最显著。结论:补骨脂甲素能够促进大鼠骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞,其作用机制可能与cAMP/PKA/CREB信号通路的活化有关。

咪达唑仑调节cAMP/PKA/CREB通路对乳腺癌细胞的影响

目的 探讨咪达唑仑对乳腺癌MDA-MD-231细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其对环磷酸腺苷(cyclicadenosine monophosphate,c AMP)/蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)/cAMP反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)信号通路的调节作用。方法 体外培养MDA-MD-231细胞并分为对照组、咪达唑仑L组、咪达唑仑M组、咪达唑仑H组和咪达唑仑H+Sp-cAMPS组,咪达唑仑L组、咪达唑仑M组、咪达唑仑H组分别用5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L咪达唑仑处理细胞,咪达唑仑H+Sp-cAMPS组加入20μmol/L咪达唑仑+10μmol/L Sp-cAMPS处理细胞。3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT]法检测细胞的增殖能力;细胞划痕试验检测迁移能力;Transwell试验测定细胞的侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测c AMP的表达水平;蛋白免疫印迹(Western blot)技术验证磷酸化(p-)PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达。结果 与对照组比较,咪达唑仑L组、咪达唑仑M组、咪达唑仑H组细胞呈现凋亡现象,凋亡率显著提高,细胞的增殖、迁移和侵袭能力及c AMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达水平显著下降(P<0.05);与咪达唑仑H组比较,咪达唑仑H+Sp-cAMPS组细胞生长状态良好,凋亡率显著降低,细胞的增殖、迁移和侵袭能力及cAMP、p-PKA/PKA、p-CREB/CREB蛋白表达水平显著提高(P<0.05)。结论 咪达唑仑可通过抑制cAMP/PKA/CREB信号通路的激活抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

基于PKA/CREB/GLP-1信号通路探讨加味葛根芩连汤对糖尿病db/db小鼠胰腺损伤的影响

目的观察加味葛根芩连汤对2型糖尿病db/db小鼠胰腺损伤的影响,基于PKA/CREB/GLP-1信号通路探讨其治疗糖尿病胰腺损伤的作用机制。方法将50只db/db小鼠随机分为模型组、二甲双胍组和加味葛根芩连汤高、中、低剂量组,每组10只。另取10只m/m小鼠作为空白组。加味葛根芩连汤高、中、低剂量组分别予加味葛根芩连汤31.9、19.1、6.4 g/kg灌胃,二甲双胍组予二甲双胍0.2 g/kg灌胃,空白组和模型组予蒸馏水灌胃,连续12周。给药结束后检测小鼠空腹血糖(FBG),进行口服葡萄糖耐量试验,检测小鼠糖化血红蛋白(HbA1c)含量,TUNEL法检测胰腺组织细胞凋亡情况,RT-qPCR检测胰腺组织G蛋白偶联胆汁酸受体5(TGR5)、蛋白激酶A(PKA)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、前蛋白转化酶1/3(PC1/3)、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)mRNA表达,免疫组化法检测胰腺组织TGR5、PKA、p-PKA、CREB、p-CREB、PC1/3、GLP-1蛋白表达,免疫荧光染色检测胰腺组织TGR5/GLP-1、神经源性分化因子1(NeuroD1)/GLP-1共表达。结果与空白组比较,模型组小鼠FBG、HbA1c含量显著升高(P<0.01),口服葡萄糖耐量显著降低;胰腺组织细胞凋亡率显著升高(P<0.01),TGR5、PKA、CREB、PC1/3、GLP-1 mRNA表达显著降低(P<0.01),TGR5、PKA、p-PKA、CREB、p-CREB、PC1/3、GLP-1蛋白表达显著降低(P<0.01),TGR5/GLP-1、NeuroD1/GLP-1共表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,二甲双胍组和加味葛根芩连汤高、中剂量组小鼠FBG、HbA1c含量显著降低(P<0.01,P<0.05),口服葡萄糖耐量升高(P<0.01);各给药组小鼠胰腺组织细胞凋亡率显著降低(P<0.01),二甲双胍组和加味葛根芩连汤高、中剂量组小鼠胰腺组织TGR5、PKA、CREB、PC1/3、GLP-1 mRNA表达显著升高(P<0.01),TGR5/GLP-1、NeuroD1/GLP-1共表达显著升高(P<0.01),二甲双胍组和加味葛根芩连汤高剂量组胰腺组织TGR5、PKA、p-PKA、CREB、p-CREB、PC1/3、GLP-1蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论加味葛根芩连汤可能通过激活TGR5调节PKA/CREB/GLP-1信号通路,恢复db/db小鼠胰岛功能,改善胰腺损伤。

清解止抽口服液对抽动障碍大鼠AC/cAMP/PKA信号通路的影响

目的:探讨清解止抽口服液对抽动障碍(TD)大鼠AC/cAMP/PKA信号通路的影响。方法:40只SD大鼠随机抽取30只腹腔注射亚氨基二丙腈(iminodipropionitrile,IDPN)7 d造模成TD大鼠,将30只TD大鼠随机分为B、C、D组,未造模处理的SD大鼠为A组。随后进行药物治疗,其中A组和B组灌胃灭菌蒸馏水,C组灌胃氟哌啶(haloperidol),D组灌胃清解止抽口服液,持续14 d。记录大鼠造模7 d和灌胃7、14 d的体质量、刻板行为评分、运动行为评分。治疗14 d后取大鼠纹状体检测DRD1、DRD2、AC、cAMP、PKA含量。结果:灌胃14 d,C、D组运动行为、刻板行为评分均低于B组(P<0.05)。B、C、D组大鼠纹状体中DRD1、DRD2、AC、cAMP、PKA含量均低于A组(P<0.05)。C、D组大鼠纹状体中DRD1、DRD2、AC、cAMP、PKA含量均高于B组(P<0.05)。C、D组大鼠纹状体中DRD1、DRD2、AC、cAMP、PKA含量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:清解止抽口服液能够明显改善TD模型大鼠的运动行为和刻板行为,调节AC/cAMP/PKA信号通路代谢。

白藜芦醇影响SIRT-1/CREB/BDNF信号通路表达的研究进展

母对白藜芦醇以及SIRT-1/CREB/BDNF信号通路进行介绍,分析现存研究中白藜芦醇与SIRT-1/CREB/BDNF信号通路之间存在的关系,进一步探讨白藜芦醇发挥神经保护作用是否与SIRT-1/CREB/BDNF信号通路有关。

黄芪甲苷通过影响NogoA/NgR和cAMP/PKA通路改善APP/PS1转基因小鼠认知功能

目的:观察黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ, AST Ⅳ)对阿尔茨海默病(Alzheimer disease, AD)模型小鼠认知功能障碍和病理改变的影响,并探讨可能的调控机制。方法:将APP/PS1转基因(APPswe/PSEN1d E9)小鼠随机分为AD+AST Ⅳ组和AD组,并以C57BL/6野生型(wild-type, WT)小鼠作为对照组(WT组),灌胃治疗两个月(n=8)。应用Morris水迷宫和Y迷宫实验评价小鼠空间认知功能(n=8),尼氏染色检测神经元数量与形态,免疫荧光染色观察神经元核抗原(neuronal nuclear antigen, NeuN)和β-淀粉样蛋白(amyloid β-protein, Aβ)水平(n=4),Western blot法检测全脑组织中神经突生长抑制因子A(neurite outgrowth inhibitor A, NogoA)、Nogo-66受体(Nogo-66 receptor, NgR)、p75神经营养因子受体(p75 neurotrophin receptor, p75NTR)、含富亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域蛋白1(leucine rich repeat and immunoglobin-like domain-containing protein-1, LINGO-1)、环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate, cAMP)和蛋白激酶A(protein kinase A, PKA)的表达(n=4)。结果:AST Ⅳ能够显著缓解APP/PS1小鼠的认知功能障碍,提高其学习、记忆和探索功能。与WT组相比,APP/PS1小鼠大脑皮质区和海马区Aβ沉积增加(P<0.01),尼氏小体丢失严重(P<0.05或P<0.01),神经元数量减少(P<0.05);而AST Ⅳ可以显著减少Aβ沉积(P<0.05),减少尼氏小体丢失(P<0.05),增加神经元数量(P<0.05)。与WT组相比,APP/PS1小鼠脑组织NogoA、NgR、p75NTR和LINGO-1表达显著增加(P<0.05或P<0.01),cAMP和PKA表达显著减少(P<0.05或P<0.01);而AST Ⅳ可以显著抑制NogoA、NgR、p75NTR和LINGO-1表达(P<0.05或P<0.01),增加cAMP和PKA表达(P<0.05)。结论:AST Ⅳ通过抑制NogoA及NgR/p75NTR/LINGO-1受体复合物的表达,并上调cAMP/PKA通路,减少APP/PS1小鼠脑组织中Aβ沉积,减轻神经元损伤,从而改善认知功能和缓解学习障碍。