MiR-1-3p通过抑制CAPRIN1调控胰腺癌发生发展

目的:探讨miR-1-3p在胰腺癌发生发展中的分子机制。方法:以MIA-PaCa-2,SW 1990为研究目标,通过qRT-PCR技术检测miR-1-3p的表达量,利用TargetScan和miRDB数据库预测miR-1-3p的下游靶基因及结合位点,并通过构建双荧光素酶报告基因,进一步确认miR-1-3p与靶基因的结合。利用CCK8细胞增殖实验及平板克隆形成实验检测过表达miR-1-3p及敲低CAPRIN1对细胞增殖的作用;利用流式检测细胞周期;利用蛋白质免疫印迹方法检测miR-1-3p对CAPRIN1及其下游基因的影响;通过流式来确认,过表达miR-1-3p及敲减CAPRIN1基因对细胞周期的影响。结果:miR-1-3p在胰腺癌细胞MIA-PaCa-2,SW 1990中低表达;miR-1-3p直接与CAPRIN1的3'-untranslated region(3'-UTR)结合;过表达miR-1-3p或抑制CAPRIN1基因的表达可明显抑制胰腺癌细胞的增殖能力,同时也产生细胞周期阻滞。结论:miR-1-3p通过抑制CAPRIN1基因表达,而产生细胞周期阻滞进而抑制胰腺癌细胞的增殖能力。

脑胶质瘤组织中细胞周期相关蛋白表达情况及对细胞活性的影响

目的探讨脑胶质瘤组织中细胞周期相关蛋白(CAPRIN1)表达情况及对细胞活性的影响.方法选取2016年6月至2017年12月间在本院行手术切除的脑胶质瘤组织34份,同期因外伤死亡尸检的正常脑组织标本3份,免疫组化法检测CAPRIN1表达水平.取对数期人胶质瘤细胞GOS-3分为3组:空白对照组(常规培养,不做任何处理)、阴性对照组(转染pEGFP-N1空载体质粒)、观察组(转染pEGFP-N1-CAPRIN1质粒).CCK-8法、Transwell小室检测细胞增殖、迁移能力;Western blot法检测AKT、p-AKT、CyclinD1蛋白表达水平.结果脑胶质瘤组织中CAPRIN1表达水平明显高于正常脑组织,差异有统计学意义(P<0.01);不同脑肿瘤分级组织中CAPRIN1表达水平间差异有统计学意义(P<0.01),随着分级的增加CAPRIN1表达水平逐渐提升.培养12h、24 h时3组GOS-3细胞增殖水平间差异无统计学意义(P>0.05);培养48 h、72 h、96 h时观察组细胞增殖水平间明显高于阴性对照组、空白对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05).Transwell细胞迁移实验显示,观察组的迁移细胞数明显多于空白对照组、阴性对照组,差异均有统计学意义(均P<0.01);空白对照组与阴性对照组之间差异无统计学意义(P>0.05).观察组p-AKT蛋白相对表达量明显高于空白对照组、阴性对照组,差异均有统计学意义(均P<0.01);观察组CyclinD1蛋白相对表达量明显高于空白对照组、阴性对照组,差异均有统计学意义(均P<0.01).AKT蛋白表达水平在3组间差异无统计学意义(P>0.05).结论CAPRIN1在脑胶质瘤组织中表达随恶性程度的增加而提升;上调CAPRIN1表达可明显提升脑胶质瘤细胞的增殖、迁移能力,可能与激活AKT信号通路和CyclinD1蛋白有关.

胃癌细胞活性与细胞周期相关蛋白表达相关性分析

目的探讨胃癌细胞活性与细胞周期相关蛋白(CAPRIN1)表达的关系.方法通过p EGFP-5X-3质粒转染人胃癌细胞SGC-7901,将上调CAPRIN1的表达设为研究组(转染p GEX-5X-3-CAPRIN1质粒),同时设置阴性对照组(转染p EGFP-5X-3空载体质粒)、空白对照组(常规培养).CCK-8法、Transwell小室检测细胞活性;Western blot法检测p-Akt、Cyclin D1蛋白表达水平.结果转染48 h后,与阴性对照组和空白对照组比较,研究组SGC-7901细胞CAPRIN1mRNA和蛋白表达水平明显升高,差异具有统计学意义(P <0.05);SGC-7901细胞CAPRIN1mRNA和蛋白表达水平在空白对照组与阴性对照组之间比较差异无统计学意义(P> 0.05).培养96 h,SGC-7901细胞增殖水平呈上升趋势,在培养48、72、96 h时,与阴性对照组和空白对照组比较,研究组SGC-7901细胞增殖水平明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05).研究组的迁移SGC-7901细胞数为(604.17±58.09)个,明显多于阴性对照组的(316.92±38.78)个、空白对照组的(311.75±40.51)个,差异具有统计学意义(P<0.01).与阴性对照组和空白对照组比较,研究组SGC-7901细胞中p-Akt、Cyclin D1蛋白表达水平明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01).结论上调CAPRIN1的表达可明显提升胃癌细胞的增殖、迁移能力,可能与激活Akt信号通路和Cyclin D1蛋白有关.

超声微泡介导Caprin⁃1⁃KO转染对人肝癌HepG2细胞增殖、周期及cyclinD1、cyclinD2表达的影响

目的构建筛选最优Caprin⁃1敲除质粒并探讨超声微泡介导其转染对人肝癌HepG2细胞中cyclinD1、cyclinD2的表达及细胞增殖、周期的影响。方法构建Caprin⁃1敲除质粒KO⁃1、KO⁃2,测序鉴定重组质粒,将目的质粒转染入人肝癌HepG2细胞,超声转染条件利用前期研究成果,免疫印迹法(WB)筛选最优质粒,实时荧光定量PCR(qPCR)检测抑制Caprin⁃1表达后cyclinD1及cyclinD2表达情况,细胞增殖实验(CCK⁃8法)及流式细胞术(FCM)检测抑制Caprin⁃1表达对细胞增殖与周期的影响。结果设计Caprin⁃1敲除质粒Caprin⁃1⁃KO⁃1、Caprin⁃1⁃KO⁃2引物序列,提取质粒经过电泳及测序,鉴定质粒构建成功。转染目的质粒后,KO⁃2组Caprin⁃1表达显著降低,与阴性对照组(NC)、KO⁃1组比较,差异有统计学意义(P<0.05);且抑制Caprin⁃1表达明显抑制HepG2细胞的增殖,阻滞了细胞周期,cyclinD1,cyclinD2表达均明显下调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论超声微泡介导Caprin⁃1⁃KO转染人肝癌HepG2细胞,Caprin⁃1⁃KO对人肝癌HepG2细胞增殖有抑制作用并使细胞周期发生阻滞,cyclinD1及cyclinD2表达下降,为进一步研究Caprin⁃1在肝癌发病机理中的作用提供思路。