实验动物CAR杆菌16SrRNA基因PCR监测方法的建立

目的建立CAR杆菌的PCR监测方法 ,筛查国内部分实验动物样本中CAR杆菌携带状况。方法利用CAR杆菌的特有16SrRNA基因序列片段267bp设计引物,通过从日本实验动物中央研究所获取的CAR标准株DNA,建立实验动物CAR杆菌16SrRNA基因PCR监测方法。结果利用建立的CAR杆菌16SrRNA基因PCR监测方法对国内455份实验动物样本进行筛查,未检出CAR杆菌感染。结论建立了敏感性好,特异性高的实验动物CAR杆菌PCR监测方法 ,未见动物携带CAR杆菌。

PCR技术在小鼠CAR杆菌检测中的初步应用

目的 建立有效的CAR杆菌（Cilia-associated respiratory bacillus）PCR检测方法,并进行初步应用.方法 针对NCBI公布的CAR杆菌序列,选取大小合适的序列,合成质粒,并设计特异性引物,对实际样品进行检测,扩增出的阳性片段进行测序,验证该方法的可靠性.结果 成功建立了CAR杆菌的PCR检测方法,初步应用验证了该方法的可靠性.结论 该方法的建立为实验动物CAR杆菌的检测奠定基础.

实验动物CAR杆菌PCR监测方法的建立

CAR杆菌(cilia-associated respiratory bacillus)是目前尚未分类的、一种实验啮齿类和兔类的呼吸道感染细菌。CAR杆菌体外培养困难,因为CAR杆菌不能在无细胞培养基上生长,给CAR杆菌的检测带来了困难。目前国际上公认的检测方法有PCR,免疫组化和组织病理学以及血清学方法;PCR方法是目前针对CAR杆菌最迅速和特异的一种诊断方法。本研究利用CAR杆菌的特有16SrRNA基因序列,通过从日本实验动物中央研究所获取的CAR标准株DNA,建立CAR杆菌的PCR监测方法。特异性实验证明,不能在金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、嗜肺巴斯德杆菌,大肠杆菌中扩增出CAR杆菌特有的16SrRNA基因267bp片段。经过标准DNA作为对照,证明建立的方法切实有效。并对国内约400只大小鼠进行筛查,经过筛查发现,未见CAR杆菌感染。

实验动物CAR杆菌病

CAR杆菌(cilia-associated respiratory bacillus)是目前尚未分类的、一种实验啮齿类和兔类的呼吸道感染细菌。“CAR”由ganaway1985年首次提出并使用,因该细菌未被分类鉴定并命名,所以一直沿用至今。CAR杆菌可以导致无症状的慢性呼吸道疾病,严重影响用于呼吸道相关疾病研究的动物实验结果。在欧美许多国家和企业都将其列为实验动物必需排除的病原菌之一。目前我国尚未将CAR杆菌列为实验动物必需检测的项目,对该菌的研究处于一个基本空白的状态,缺乏病原学、流行病学的相关资料以及有效的检测方法。

TAXONOMIC STATUS OF CAR BACILLUS BASED ON THE SMALL SUBUNIT RIBOSOMAL RNA SEQUENCES

In an attempt to identify the taxonomic relationship between CAR bacillus and other bacteria, the SSU rRNA gene sequences of two CAR bacillus strains, CBM and CBR isolated from mice and rats respectively were used in the present studies. The SSU rRNA gene sequences, approximately 1. 5 kb in size amplified from genomic DNAs from both strains, were determined and 96. 8% homologies were found to exist between them. Those sequences were aligned to most eubacteria with a computer search showing high homology with those of Flavobacter/Flexibacter species especially closed to Fx. sancti and Fv. ferrugineum.Phylogenetic analysis indicated that CAR bacillus belongs to a species close to Fx. sancti and Fv. ferrugineum subdivision.